Expression of Lung Surfactant Proteins SP-B and SP-C and Their Regulatory Factors in Fetal Lung of GDM Rats

This study investigated the expression of lung surfactant proteins (SP-B and SP-C), and regulatory factors [forkhead box A2 (FOXA2) and nitrolyogenic FOXA2 (N-FOXA2)] in the fetal lung of rats with gestational diabetes mellitus (GDM) in order to study the mechanism of pulmonary dysplasia. The rat GDM model was established by using streptozotocin intraperitoneally in the first stage of pregnancy. There were 10 rats in the GDM group, and 10 healthy rats in normal control group without any treatment. Fetal lungs of two groups were taken at day 21 of pregnancy. Blood glucose levels of maternal rats and fetal rats were measured by Roche blood glucose meter. The histological changes in the fetal lung were observed under the light microscope in both groups. The SP-B, SP-C and FOXA2 were determined in the fetal lung of two groups immunohistochemically. The expression levels of SP-B, SP-C, total FOXA2, FOXA2 in nucleus (n-FOXA2), N-FOXA2 proteins were detected by Western blotting, and the relative expression levels of SP-B, SP-C, FOXA2 mRNA in the fetal lung of two groups were detected by RTPCR. The results showed that blood glucose levels of maternal rats and fetal rats in GDM group were higher than those in control group. The light microscope revealed fetal lung development retardation in GDM group. The expression of SP-B and SP-C in GDM group was significantly reduced as compared with control group (P<0.05). As compared with control group, the n-FOXA2 expression was significantly decreased in the fetal lung tissue, and N-FOXA2 was significantly increased in control group (P<0.05), but there was no significant changes in the total FOXA2 (P>0.05). It was concluded that GDM can cause fetal lung development and maturation disorders, and FOXA2 in fetal lung tissue decreases while nitrocellulose FOXA2 increases.     

SP-B、SP-C对肺表面活性物质功能的影响

目的　探讨肺表面活性物质相关蛋白B、C(SP -B、SP -C)对肺表面活性物质功能影响。方法　将不含有SP -A、SP -D的肺表面活性物质脂质部分和脂质部分加入SP -B和 (或 )SP -C配制成实验液体。用气泡型表面张力计测定最小表面张力 (γmin)。向未成熟胎兔气道内注入实验液体后进行人工通气 ,测定潮气量。结果　脂质部分加入SP -B和SP -C后γmin明显下降至 (2 .1± 0 .8)mN/m ,并明显增加动物的潮气量至2 5 .3ml/kg± 3.9ml/kg。结论　SP -B、SP -C协同可增加肺表面活性物质的功能。     

肺表面活性蛋白A、B在内毒素性急性肺损伤时变化的研究

目的：探讨内毒素性急性肺损伤(ALI)肺表面活性蛋白A和B(SP—A，SP—B)表达的变化及其机制。方法：用内毒素脂多糖(LPS)制备Wistar大鼠ALI模型，分加采用ELISA、免疫组化和反转录聚合酶链反应(RT—PCR)方法动态观察LPS致伤后不同时间点肺组织TNF-α，SP—A和SP—B蛋白和mRNA表达的变化。结果：肺组织TNF—α蛋白含量和髓过氯化物酶(MPO)活性分别于LPS致大鼠ALI后0．5h和1h时显著高于对照组(P＜0．01，2h时达高峰；肺内SP—B阳性Ⅱ型肺泡上皮细胞数量减少，染色变浅，SP—B蛋白表达逐渐减弱，其灰度值于LPS致伤后2h时显著高于对照组(P＜0．01)；肺组织SP—A和SP—BmRNA的表达不同程度减弱，2h时明显弱于对照组(P＜0．05)，分别于8h和4h时达最低水平。结论：LPS致大鼠ALI时沸组织SP—A和SP—BmRNA的表达减弱，SP—B蛋白含量减少，这可能与多形核粒细胞在肺内的聚集和TNF—α水平的增加有关。     

大鼠肺鳞癌中DFF45和Bcl-2蛋白的表达及其意义

目的 :探讨DNA裂解因子 (DFF4 5 )和凋亡抑制基因bcl 2的蛋白产物在大鼠肺鳞癌癌变转化过程中的变化及其关系。方法 :Wistar大鼠 6 0只 ,其中 5 0只用化学致癌物 3 甲基胆蒽 (MCA)及二乙基亚硝胺 (DEN)碘油溶液于左肺叶支气管灌注诱发大鼠肺鳞状细胞癌 ,10只作为对照。应用免疫组织化学SP法检测DFF4 5和bcl 2蛋白在癌变过程中的变化。结果 :对照组大鼠支气管粘膜上皮细胞区、癌前病变区与肺鳞癌区中 ,DFF4 5蛋白的阳性率逐渐升高 ,分别为 2 0 .0 0 % (2 / 10 )、4 3.75 % (7/ 16 )、5 8.82 % (2 0 / 34) ,肺鳞癌区与对照组大鼠支气管粘膜上皮细胞区相比 ,DFF4 5蛋白阳性率的差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ;bcl 2蛋白的阳性率分别为 :0 ,31.2 5 % (5 / 16 ) ,4 7.0 6 % (16 / 34) ,对照组大鼠支气管粘膜上皮细胞区分别与癌前病变区、肺鳞癌区比较差异均有显著性 (P <0 .0 5 )。在大鼠肺鳞癌中 ,DFF4 5与bcl 2呈显著正相关 (Pearson列联系数 =0 .5 872 ,P <0 .0 1)。结论 :bcl 2基因的过表达可能抑制了DFF4 5的裂解 ,协同促进了大鼠肺鳞癌的发生发展。     

胎儿宫内生长受限相关临床因素的分析

目的探讨胎儿宫内生长受限(FGR)的相关临床因素。方法对134例胎儿宫内生长受限孕妇的临床资料进行回顾性分析。结果与胎儿宫内生长受限相关的临床因素为重度妊娠高血压综合征、心肺疾病、胎盘及脐带异常、双胎、羊水过少等。其发生率明显高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.01)。乡村居民及无产前检查组胎儿宫内生长受限率明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。胎儿宫内生长受限、新生儿窒息、死亡和死胎、死产及新生儿发病率亦明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论重度妊娠高血压综合征、心肺疾病、胎盘及脐带异常、双胎、羊水过少等是影响胎儿宫内生长受限的主要临床因素。居住环境及产前监测亦是影响胎儿宫内生长受限发生的重要临床因素。胎儿宫内生长受限是围生期新生儿发病率及死亡的重要原因。     

表皮生长因子和地塞米松对胎鼠肺表面活性物质蛋白表达的影响

目的:比较表皮生长因子(EGF)和地塞米松(DX)对胎鼠肺表面活性物质蛋白(SP)-A、B、C表达的影响。方法:采用SD大鼠21只,在妊娠15天分别静脉注射DX(DX组)、EGF(EGF组)和生理盐水组,每组7只。于妊娠18d和21d处死妊娠鼠取胎肺。采用westernblot检测胎肺SP-A、SP-B、SP-C的表达。结果:Westernblot检测显示,早产鼠胎肺SP-B蛋白表达在EGF和DX组比对照组增加,差异具有明显的显著性(P<0.05),但EGF组和DX组比较,差异无明显的显著性(P>0.05)。结论:EGF和DX均可促进胎鼠肺SP-B的表达。     

围产期缺血缺氧对新生大鼠肺表面活性蛋白A、B基因表达的影响

目的：研究围产期缺血缺氧对新生大鼠肺表面活性蛋白A、B（SP－A，SP－B）基因表达的影响，探讨产期缺血缺氧新生大鼠肺损伤机制。方法；通过结扎孕鼠一侧子宫角血管（其另一侧宫内胎鼠作为对照），建立围产期缺血缺氧动物模型。采用RT－PCR半定量分析法观察不同程度缺血缺氧新生大鼠肺组织SP－A，SP－B,mRNA的表达。结果：正常21d胎鼠肺组织SP－A，SP－BmRNA已的明显的表达，宫内缺血缺氧20min时，新生大鼠肺组织SP－A，SP－B mRNA表达减弱，并随缺血缺氧时间的延长而逐渐加生。结论：围产期缺血缺氧致新生大鼠SP－A，SP－B mRNA表达减弱可能是新生大鼠肺损伤的重要机制。     

胎鼠肺细胞的分离纯化及原代培养

目的 建立一套可靠的胎鼠肺细胞分离、纯化和培养技术，用于体外研究肺发育和早产儿肺部疾病。方法 采用胰酶和胶原酶消化19d胎鼠肺组织块，经差速离心和反复贴壁法，分离、纯化胎鼠肺泡Ⅱ型细胞(AECⅡ)和肺成纤维细胞(LF)，并进行原代培养。用细胞角蛋白(cytokeratin)和波形蛋白(vimentin)免疫细胞化学染色和透射电镜对所分离的细胞进行鉴定。结果 该方法所得细胞产量大、纯度高。免疫细胞化学鉴定，AECⅡ细胞cytoker—atin染色阳性，vimentin染色阴性，LF则相反。透射电镜观察AECⅡ，可见细胞内板层小体。结论 该方法是一种可靠的胎鼠肺细胞的分离纯化培养技术，可用于体外研究肺发育与早产儿肺部疾病。     

大鼠肺癌前病变及其γ—谷氨酰转肽酶表达的研究

用3-甲基胆蒽(3-MC)诱发大鼠肺癌前病变,并观察癌变过程中γ-谷氨酰转肽酸(GGT)的组织化学反应。结果支气管内1次灌注3-MC(3mg/100g体重)30d后,大鼠小支气管上皮不典型增生、腺样增生与腺癌及鳞癌的发生率分别为88.2％、70.6％及17.7％,60d的发生率分别为83.3％、23.5％及38.9％,且上述病变均呈GGT染色阳性反应,提示GGT可作为肺癌前病变的标志酶之一。     

重组人促红细胞生成素对成年大鼠高氧肺损伤Bax和Bcl-2蛋白表达的影响

目的探讨重组人促红细胞生成素（rHuEPO）对成年大鼠高氧肺损伤Bax和Bcl-2蛋白表达的影响。方法健康成年雄性SD大鼠48只,随机分为6组,每组8只。对照组吸入空气,设为0 h组;其余5组置入动物实验氧舱吸入100%浓度氧气,分为24 h组、48 h组、72 h组、96 h组和rHuEPO干预组。rHuEPO干预组吸氧时间为96 h,并每日予以rHuEPO1000 U/kg腹腔内注射。颈动脉采血行动脉血气分析,计算氧合指数,测定左肺湿干重比值（W/D）及支气管肺泡灌洗液（BALF）中TNF-α、IL-1β水平,免疫组化及Western blot方法检测肺组织Bax和Bcl-2蛋白表达,并观察肺组织病理学改变。结果随高氧暴露时间延长,大鼠氧合指数逐渐下降,96 h达到最低值;左肺W/D值逐渐增加,96 h达到高峰;BALF中TNF-α、IL-1β水平逐渐增高,48 h达到高峰,此后开始下降;肺组织中Bax蛋白表达逐渐增多,Bcl-2蛋白表达逐渐减少。rHuEPO干预组与96 h组比较,氧合指数增加,左肺W/D值下降,BALF中TNF-α、IL-1β水平下降,Bax蛋白表达减少,Bcl-2蛋白表达增加。结论 rHuEPO能够下调肺组织Bax蛋白表达,上调Bcl-2蛋白表达,抑制肺泡上皮细胞凋亡,从而一定程度上减轻高氧所致成年大鼠急性肺损伤。     

超声多普勒检测UA及MCA血流参数预测胎儿FGR

目的:探讨超声多普勒检测UA及MCA血流参数预测胎儿FGR的价值,从而寻找出具有高敏性和特异性的早期检测方法。方法:选择接受胎儿系统超声检查的晚孕孕妇300例,都积极进行彩色多普勒超声诊断,与胎儿预后临床验证。结果:胎儿UA、MCA血流S/D、RI值随妊娠周数的增加而下降,对比差异有统计学意义(P<0.05)。预测胎儿生长受限12例,全部得到了临床分娩认证,预测有效率为100.0%。结论:超声多普勒检测UA及MCA血流参数为预测FGR提供了一条新途径,为临床早期发现并积极干预FGR提供了较为可靠的指标和标准,值得推广应用。     

急性肺损伤大鼠肺组织中颗粒溶素的表达

目的在内毒素（LPS）诱导的急性肺损伤（ALI）大鼠模型中,观察颗粒溶素在不同时期的表达,探讨其在革兰阴性菌感染所致的ALI的细胞免疫中的地位和作用。方法采用36只健康Wistar大鼠,随机分为对照组（NS组）和实验组（LPS组）,每组18只。LPS组腹腔注射LPS 4 mg/kg制造ALI模型,NS组注射等量生理盐水。注药后6、18及30 h取材,行肺组织湿/干重比（W/D）分析,观察肺组织病理改变,以及免疫组织化学法检测肺组织颗粒溶素的表达。结果 ALI大鼠肺组织W/D比值显著高于NS组（P〈0.05）;病理显示LPS组肺组织受损,出血、渗出明显,达到ALI诊断标准;LPS组各时点肺组织颗粒溶素表达较NS组有不同程度增加。结论颗粒溶素可能参与ALI的炎症过程,有助于病原体的清除,在防治感染性因素所致ALI中有可能发挥一定的作用。     

Protein Expression in Silica Dust-induced Transdifferentiated Rats Lung Fibroblasts

Objective To analyze the expression of different proteins in free silica-induced transdifferentiated rat lung fibroblasts.Methods Rat lung fibroblasts and alveolar macrophages were cultured.A transdifferentiation model of rat lung fibroblasts was established.Free silica was used as a stimulator for rat lung fibroblasts.Changes in α-SMA were detected by immunohistochemistry and Western blot,respectively.Protein of lung fibroblasts was extracted and analyzed by two-dimensional electrophoresis(2-DE).Results Six protein spots were identified by mass spectrometry,including glyceraldehyde 3-phosphate-dehydrogenase,peroxiredoxin 5,heterogeneous nuclear ribonucleoprotein A2,transgelin 2,keratin K6 and vimentin.Conclusion Some proteins are changed in free silica-induced transdifferentiaed rat lung fibroblasts.     

急性肺损伤大鼠肝X受体表达的变化

目的 观察急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织内肝X受体(LXRs)的表达情况,探讨其在ALI炎症调控过程中的可能作用. 方法 将50只雄性SD大鼠随机分为5组:对照组、LPS处理后1h组、2h组、4h组和8h组.用LPS静脉注射复制大鼠ALI模型,分别在LPS处理1h、2h、4h、8h后处死大鼠,用RT-PCR与Western印迹检测LXRs表达水平,同时测定动脉血气和肺组织湿/干比值(W/D weight ratio). 结果 与对照组小鼠相比,LPS处理组大鼠肺组织W/D较对照组均显著升高;动脉血氧饱和度均显著降低;LXRα/β mRNA的表达在LPS处理2h时开始下降,在2h、4h和8h时差异有显著性;而LXRα/β蛋白的表达在LPS处理4h时开始下降,在4h和8h时差异有显著性. 结论 脂多糖(LPS)所致的ALI大鼠肺组织内LXRs表达显著减少,表明LXRs可能参与了ALI炎症反应的调控.     

E-cadherin和PTEN在人肺癌组织中的表达及意义

目的 探讨E-钙黏蛋白（E-cadherin）和PTEN在人肺癌组织中的表达及意义.方法应用免疫组织化学SP法检测99例肺癌组织中E-cadherin和PTEN的表达状况.结果1）肺癌组中E-cadherin和PTEN的总阳性率分别为63.6%和62.6%.2）E-cadherin表达在小细胞癌组和细支气管肺泡癌组间比较,差异有显著性（P＜0.05）.3）在无淋巴结转移组和淋巴结转移组,E-cadherin和PTEN的阳性表达率分别为75.6%、75.6%和53.7%、51.9%,组间比较,差异均有显著性（P＜0.05）.4）E-cadherin和PTEN阳性表达率在Ⅰ、Ⅱ期分别为68.2%和67%,高于Ⅲ、Ⅳ期病例中的表达27.3%,差异均有显著性（P＜0.01）.5）E-cadherin阳性表达与PTEN阳性表达呈正相关.结论肺癌中E-cad-herin和PTEN的低表达在肺癌的发生、恶性演进过程中可能起作用.     

Expression of Peroxiredoxins and Pulmonary Surfactant Protein A Induced by Silica in Rat Lung Tissue

正Silicosis is one of the most serious occupational diseases in China and dates back to centuries ago.In this study,we successfully established a rat model of silicosis by intratracheal silica injection for28 days and determined hydroxyproline levels to evaluate collagen metabolism in lung homogenates.Oxidative stress status was evaluated by detecting catalase and glutathione peroxidase activities.     

大鼠胰腺癌和非癌胰腺组织DNA损伤修复蛋白表达及意义

目的 建立SD(sprague-dawely)大鼠胰腺癌模型,研究胰腺癌发生过程中DNA损伤修复蛋白(MGMT,ERCC1,hMSH2,hMLH1)表达水平及其意义.方法 将二甲基苯葬总(dimethylbenzanthracene,DMBA)直接置入胰腺实质内(A组+B组),B组每周腹腔注射曲古霉素A(trichostatin,TSA)1μg,A组和B组鼠于3～5个月内处死,对照组(C组)于第5个月处死;肉眼榆查及HE染色观察胰腺痛发生情况,MGMT、ERCC1、hMSH2和hMLH1染色方法 均为EnVisionTM免疫组化法.结果 (1)A组3～5个月癌发生率为48.7%(18/37),17例为胰腺导管腺癌,1例为纤维肉瘤;B组3～5个月癌发生率为33.3%(12/36),11例为胰腺导管腺癌,1例为纤维肉瘤;A组胰腺肿瘤最大径均值大于B组(P＜0.05);C组胰腺及A组、B组胰腺外主要脏器均无明显病理改变.(2)A组+B组胰腺导管腺癌组织MGMT、ERCC1、hMSH2和hMLH1表达阳性率明显低于A组+B组非癌胰腺组织(P＜0.01或P＜0.05),A组胰腺导管腺癌MGMT、ERCC1、hMSH2和hMLH1表达阳性率与A组非癌胰腺组织比较无明显差异(P＞0.05),B组胰腺导管腺癌MGMT、ERCC1、hMSH2和hMLH1表达阳性率均较明显低于B组非癌胰腺组织(P≤0.05);C组胰腺组织4种修复蛋白均阳性表达;A组或B组非癌胰腺组织MGMT、ERCC1、hMSH2和hMLH1阴性表达者胰腺导管上皮均呈轻至重度不典型增生.结论 较大剂量DMBA置入胰实质内可在短期内获得较高的胰腺癌发生率,TSA能干预胰腺癌的发生和生长;在DMBA诱导胰腺癌发生发展过程中DNA损伤修复蛋白失活起较重要作用.     

补充肺表面活性剂后胃液误吸大鼠的肺弹性及组织学变化

目的：观察胃液误吸后补充肺表面活性剂对肺组织形态的作用。方法：在定压式人工呼吸下，经气管给大鼠肺内注入胃液，造成误吸。将大鼠随机分为４组：Ｇ组仅接受人工呼吸；Ｎ组在误吸后３ｍｉｎ时接受肺冲洗；ＳⅠ组、ＳⅡ组分别于误吸后３ｍｉｎ、６０ｍｉｎ时接受肺冲洗，然后补充肺表面活性剂。结果：Ｇ组呈轻重不一的肺内病理性改变，严重区域表现为肺泡壁增厚、肺泡内充满炎性细胞和血浆成分；Ｎ组呈广泛的肺泡萎陷，形成肺水肿；ＳⅠ组及ＳⅡ组的肺泡形成及大小基本保持正常。结论：应用肺冲洗结合肺表面活性剂替代疗法可以防治误吸后的肺损伤。     

Fabp4在3种病理性妊娠患者胎盘组织中的表达及意义

目的 探讨脂肪酸结合蛋白(Fabp4)基因及其蛋白在胎儿生长受限(FGR)、妊娠期糖尿病(GDM)、妊娠期高血压疾病(PIH)这3种病理性妊娠患者胎盘组织中的表达及意义.方法 采用免疫组织化学的方法检测Fabp4蛋白在3种病理性妊娠患者胎盘组织中的表达差异,采用荧光实施定量PCR的方法对Fabp4的mRNA在3种病理性妊娠患者胎盘组织中的表达进行相关性分析.结果 免疫细胞化学检测发现在这3种病理性妊娠患者的胎盘中,Fabp4的蛋白表达明显高于正常组的胎盘.而通过实时定量检测发现Fabp4的mRNA表达水平在3种病理性妊娠患者胎盘中也高于正常组,其中胎儿生长受限组的mRNA表达水平明显高于正常组,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 Fabp4蛋白和mRNA在FGR、GDM、PIH这3种病理性妊娠患者胎盘中的表达均升高,提示Fabp4可能与这3种病理性妊娠有重要关系.     

大鼠肺缺血再灌注损伤时CXCL9因子的表达

目的探讨大鼠肺缺血再灌注损伤时CXCL9因子的表达和中介素1-53（IMD1—53）对其的影响。方法建立大鼠在体肺缺血再灌注模型。将72只健康的Wistar大鼠随机分为3组：假手术组（c组）、缺血再灌注组（IR组）、中介素1—53组（IMD组）。每组取缺血45min、再灌注60min、再灌注120min时点各8只大鼠留取血浆及右肺组织。ELISA法检测血浆中CXCL9的含量,组织学评价肺组织损伤。结果IMD组血浆中CXCL9因子的表达均低于IR组,组织学变化显示预先给予IMD1—53可减轻肺缺血再灌注损伤。结论IMD1—53对肺缺血再灌注损伤有保护作用,其作用机制可能为减少趋化因子CXCL9因子的表达。