NKG2D配体在耐药鼻咽癌细胞的表达及其对NK细胞杀伤活性的影响

目的 探讨NKG2D的主要活化性配体在鼻咽癌亲本细胞CNE2和多药耐药细胞CNE2/DDP的表达及其对自然杀伤(NK)细胞杀伤活性的影响.方法 流式细胞仪检测NKG2D的主要活化性配体MHC-Ⅰ类链相关蛋白A和B(MICA、MICB)、UL16结合蛋白1-3(ULBP1、ULBP2、ULBP3)在CNE2、CNE2/DDP细胞的表达情况;PCR-SSP法检测CNE2、CNE2/DDP细胞HLA-A、B、Cw分型和NK细胞KIR分型;LDH释放法测定5例健康者的NK细胞在不同效靶比时对CNE2、CNE2/DDP细胞的杀伤活性;效靶比20∶1时观察不同单抗对NK细胞杀伤CNE2、CNE2/DDP细胞活性的阻断作用.结果 CNE2、CNE2/DDP细胞HLA分型为A2,24,B18,35,Cw4,7;5例健康者的NK细胞表达KIR2DL1,KIR2DL3,KIR3DL1,KIR3DL2与CNE2、CNE2/DDP细胞表面的HLA-I类分子之间存在错配.CNE2、CNE2/DDP细胞均表达NKG2D的配体MICA、MICB、ULBP2,均不表达ULBP1、ULBP3;CNE2细胞MICA、MICB的表达率与CNE2/DDP细胞相比差异有统计学意义(P＜0.01).效靶比5∶1、10∶1、20∶1、30∶1时NK细胞对CNE2、CNE2/DDP细胞的杀伤活性分别是(10.50±2.17)%、(4.98±0.95)%;(27.68±1.47)%、(15.48±2.10)%;(36.99±3.13)%、(28.46±4.30)%;(55.00±2.20)%、(40.95±2.21)%.在各效靶比时NK细胞对CNE2细胞的杀伤活性与CNE2/DDP细胞相比差异有统计学意义(P＜0.01);效靶比20∶1时anti-MICA、anti-MICB、anti-ULBP2单抗可明显抑制NK细胞对CNE2、CNE2/DDP细胞的杀伤活性,与阻断前相比差异有统计学意义(P＜0.05);anti-ULBP1、anti-ULBP3单抗不能阻断NK细胞对CNE2、CNE2/DDP细胞的杀伤活性.结论 NKG2D的主要活化性配体MICA、MICB在CNE2、CNE2/DDP细胞的表达差异与NK细胞的杀伤活性有关,肿瘤细胞在发生多药耐药的同时获得了免疫逃避能力.     

IL2、IL15对NK细胞KIR3DL1、NKG2D表达的影响

目的研究细胞因子IL-2、IL-15对人外周血来源的自然杀伤细胞（Nature Killer,NK）细胞表面功能相关分子杀伤细胞免疫球蛋白样受体（Killer Cell Immnoglobulin-like Receptor,KIR3DL1）、NKG2D表达的影响。方法采用miniMACS免疫磁珠从外周血单个核细胞（PBMNC）分选得到纯化的NK细胞,在IL2、IL15作用下培养15d,检测培养前后在不同效靶比下对靶细胞（K562）的杀伤作用变化,之后流式细胞仪检测培养前后NK细胞KIR3DL1、NKG2D表达变化;结果经IL2、IL15培养15d后的NK细胞对K562细胞的杀伤率在不同效靶比下均较培养前增强（P〈0.01）;同时NK细胞KIR3DL1表达下降约10%（P〈0.05）,NKG2D在培养前后均高表达（99%）;结论经IL2和IL15长期体外培养后,KIR3DL1表达轻微下调,是NK细胞杀伤功能增强的原因之一。     

NK细胞免疫编辑后的人鼻咽癌细胞株CNE2 HLA Ⅰ类分子和MICA/MICB的表达及其对NK细胞杀伤活性的影响

目的: 探讨自然杀伤(NK)细胞与表达NKG2D配体的人鼻咽癌细胞株CNE2混合培养24 h时CNE2细胞表面HLA Ⅰ类分子及MHC Ⅰ类链相关分子(MICA/MICB)的变化及编辑前、后的CNE2细胞对NK细胞杀伤敏感性的差异. 方法:PCR-SSP法检测NK细胞KIR分型,流式细胞仪检测编辑前的CNE2细胞(单纯培养的CNE2细胞),编辑后的CNE2细胞(NK细胞与CNE2细胞10∶ 1混合培养24 h)表面HLA Ⅰ类分子及MHC Ⅰ类链相关分子(MICA/MICB)的表达情况,LDH释放法测定3例健康者的NK细胞在不同效靶比时对编辑前、后的CNE2细胞的杀伤活性. 结果:编辑前、后的CNE2细胞表面MICA/MICB的表达率分别为(88.67±2.81)%和(34.53±3.15)%,两者相比差异有统计学意义(P＜0.01);编辑前、后的CNE2细胞表面HLA Ⅰ类分子表达率分别为(99.77±0.12)%和(97.80±0.87)%,两者相比差异无统计学意义(P＞0.05). NK细胞对编辑前、后的CNE2细胞的杀伤活性在效靶比10∶ 1时分别为(26.96±1.47)%和(6.60±0.86)%,两者相比差异有统计学意义(P＜0.01);效靶比20∶ 1时分别为(35.74±3.59)%和(11.57±2.02)%,两者相比差异有统计学意义(P＜0.01). 结论: CNE2细胞与NK细胞持续性接触24 h,CNE2细胞表面HLA Ⅰ类分子表达无改变,MICA/MICB表达下调,导致编辑后的CNE2细胞激发NK细胞杀伤活性下降. 本研究初步证明了NK细胞对编辑后的肿瘤细胞杀伤活性下降的分子基础,同时为我们如何提高NK细胞的杀伤活性提供了新的干预的靶点.     

NK细胞与K562细胞之间相互免疫编辑作用及其对NK细胞杀伤活性的影响

目的：探讨NK细胞与K562细胞混合培养前、后其杀伤活性的变化及分子机制。方法：流式细胞仪检测NK细胞与K562细胞混合培养前、后细胞表面相应分子的变化,LDH释放法测定效靶比20∶1时NK细胞对K562细胞的杀伤活性。结果：相互编辑前,K562细胞表面MICA/MICB的表达率为(79.90±0.87)%,NK细胞表面NKG2D、KIR2DL1和KIR3DL1的表达率分别为(98.27±0.67)%、(45.70±1.22)%和(35.60± 1.35)%。相互编辑后,K562细胞表面MICA/MICB和NK细胞表面NKG2D的表达率分别为（35.56±1.01）和（34.67±3.88）%,均明显低于编辑前（Ｐ=0.000）;NK细胞表面KIR2DL1和KIR3DL1的表达率分别为（47.20±1.08）%和（34.03±1.20）%,与编辑前比较差异均无显著性(Ｐ>0.05)。效靶比20∶1时,NK细胞对编辑后的K562细胞的杀伤活性为(24.07±0.58)%,编辑后的NK细胞对K562细胞的杀伤活性为(16.95±2.00)%,均明显低于编辑前NK细胞对K562细胞的杀伤活性［(54.03±3.46)%］(Ｐ＝0.000)。结论: NK细胞与K562细胞持续性接触后,双方发生了相互免疫编辑作用;NK细胞的杀伤活性下降,其分子机制是细胞表面相应的配受体发生了变化。     

NK细胞免疫编辑后的人鼻咽癌细胞株CNE2 HLA I类分子和MICA/MICB的表达及其对NK细胞杀伤活性的影响

目的：探讨自然杀伤（NK）细胞与表达NKG2D配体的人鼻咽癌细胞株CNE2混合培养24h时CNE2细胞表面HLAI类分子及MHCI类链相关分子（MICA/MICB）的变化及编辑前、后的CNE2细胞对NK细胞杀伤敏感性的差异.方法：PCR-SSP法检测NK细胞KIR分型,流式细胞仪检测编辑前的CNE2细胞（单纯培养的CNE2细胞）,编辑后的CNE2细胞（NK细胞与CNE2细胞10∶1混合培养24h）表面HLAI类分子及MHCI类链相关分子（MICA/MICB）的表达情况,LDH释放法测定3例健康者的NK细胞在不同效靶比时对编辑前、后的CNE2细胞的杀伤活性.结果：编辑前、后的CNE2细胞表面MICA/MICB的表达率分别为（88.67±2.81）%和（34.53±3.15）%,两者相比差异有统计学意义（P〈0.01）;编辑前、后的CNE2细胞表面HLAI类分子表达率分别为（99.77±0.12）%和（97.80±0.87）%,两者相比差异无统计学意义（P〉0.05）.NK细胞对编辑前、后的CNE2细胞的杀伤活性在效靶比10∶1时分别为（26.96±1.47）%和（6.60±0.86）%,两者相比差异有统计学意义（P〈0.01）;效靶比20∶1时分别为（35.74±3.59）%和（11.57±2.02）%,两者相比差异有统计学意义（P〈0.01）.结论：CNE2细胞与NK细胞持续性接触24h,CNE2细胞表面HLAI类分子表达无改变,MI-CA/MICB表达下调,导致编辑后的CNE2细胞激发NK细胞杀伤活性下降.本研究初步证明了NK细胞对编辑后的肿瘤细胞杀伤活性下降的分子基础,同时为我们如何提高NK细胞的杀伤活性提供了新的干预的靶点.     

体外抗体功能修饰抑制性KIR对人NK细胞的影响

目的:检测抗体封闭抑制性受体KIR2DL1和KIR2DL2/2DL3对人NK细胞功能的影响.方法:应用Rosettesep人NK分选试剂盒分选外周血NK细胞,观察抗体封闭KIR2DL1和KIR2 DL2/2DL3受体后,NK细胞对不同白血病细胞(人肿瘤细胞株NB4、Raji和K-562)及同种异体的成熟树突状细胞(DC)的杀伤活性;检测混合淋巴细胞反应中NK细胞对T淋巴细胞增殖的影响;检测细胞因子TGF-β1的表达水平.结果:任何一个抗体封闭KIR后,NK细胞杀伤NB4细胞活性均增强,并与抗体浓度呈现量效关系(P＜0.05),2个抗体联用能增强NK细胞的杀伤活性;对Raji细胞的杀伤活性则改变较小;NK细胞对K-562细胞具有很强的杀伤活性,但经抗体封闭后,这种活性并没有提高.经抗体封闭KIR后,NK细胞对成熟DC的杀伤活性明显增强,并与抗体浓度呈现量效关系(2.20%±1.10% vs 37.59%±5.06%),各组间比较差异有统计学意义(P＜0.05).经抗体封闭后的NK细胞在混合淋巴细胞反应中能明显提高对T细胞的增殖抑制(77.85%±8.31% vs 43.05%±5.95%,P＜0.05),上清液中细胞因子TGF-β1的含量增加.结论:以抗体修饰抑制性KIR受体有助于提高NK细胞杀伤肿瘤及同种异体成熟DC的能力,活化的NK细胞通过分泌TGF-β1,抑制T细胞的增殖、活化.     

扩增的NK细胞对胃癌细胞的杀伤作用及其机制

目的：探讨扩增的自然杀伤（NK）细胞对胃癌细胞的杀伤作用,阐明其作用机制。方法：提取和分离15例胃癌患者外周血单个核细胞（PBMCs）。观察扩增前后NK细胞形态表现,检测扩增前后NK细胞百分比,计算扩增后NK细胞扩增倍数,检测扩增前后NK细胞对胃癌细胞的杀伤作用,流式细胞术检测NK细胞表面活化性受体NKG2D和DNAM-1以及抑制性受体KIR2DL1和KIR3DL1的表达百分比。结果：扩增前NK细胞呈圆形,细胞体积比较小,细胞呈散在分布,扩增后NK细胞体积明显增大,细胞呈不规则形态。扩增后NK细胞百分比明显高于扩增前（P<0.01）,扩增后NK细胞数是扩增前的（596±152）倍。在效靶比为5∶1时,扩增后NK细胞对胃癌细胞的杀伤活性明显强于扩增前（P<0.01）。扩增后NK细胞表面活化性受体NKG2D和DNAM-1表达百分比明显高于扩增前（P<0.01）。扩增后NK细胞表面抑制性受体KIR2DL1和KIR3DL1表达百分比明显低于扩增前（P<0.05）。结论：扩增后NK细胞对胃癌细胞杀伤作用明显强于扩增前,其机制可能与扩增后NK细胞表面活化性受体表达升高和抑制性受体表达降低有关联。     

CD34~+CD38~-KG1a白血病干细胞对同种异体自然杀伤细胞的抵抗作用及其机制

目的探讨CD34~+CD38~-KG1a白血病干细胞抵抗同种异体自然杀伤(NK)细胞杀伤作用的机制。方法采用免疫磁珠法(MACS)分选CD34~+CD38~-KG1a细胞和4例健康个体外周血中NK细胞,并采用流式细胞术检测纯度;乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测NK细胞在不同效靶比(5∶1,10∶1,20∶1)下对K562和CD34~+CD38~-KG1a细胞的杀伤作用;聚合酶链式反应-序列特异性引物法分析NK细胞KIR和CD34~+CD38~-KG1a细胞HLA-Ⅰ基因分型;流式细胞术检测K562和CD34~+CD38~-KG1a细胞表面主要组织相容性复合体(MHC)-I类链相关分子A/B、人巨细胞病毒UL16结合蛋白(ULBP) 1～3和人类白细胞抗原(HLA)-Ⅰ类分子的表达。结果分选的CD34~+CD38~--KG1a细胞和NK细胞纯度分别为(94. 25±2. 16)%、(91. 70±2. 05)%。NK细胞在各效靶比下对CD34~+CD38~-KG1a细胞的杀伤率均低于K562细胞(P <0. 05)。4例健康个体NK细胞KIR基因型为KIR2DL1、KIR2DL3、KIR3DL1和KIR3DL2,CD34~+CD38~-KG1a细胞HLA-Ⅰ基因型为A30、30,B51、78,Cw4、16。K562细胞高表达NKG2D配体,CD34~+CD38~-KG1a细胞几乎不表达NKG2D配体,CD34~+CD38~-KG1a细胞中NKG2D配体表达率显著低于K562细胞(P <0. 05); K562细胞中几乎不表达HLA-Ⅰ,CD34~+CD38~-KG1a细胞高表达HLA-Ⅰ,CD34~+CD38~-KG1a细胞中HLA-Ⅰ的表达率显著高于K562细胞(P <0. 05)。结论 CD34~+CD38~-KG1a细胞明显抵抗同种异体NK细胞的杀伤作用,其机制可能与高表达HLA-Ⅰ分子和低表达NK2D配体有关。     

麦考酚酸体外对肝脏自然杀伤细胞活性及其受体表达的影响

目的 探讨麦考酚酸(MPA)对肝脏自然杀伤(NK)细胞活性的影响及其机制.方法 分离C57BL/6小鼠肝脏NK细胞,用不同浓度MPA处理24 h后,3H-TdR释放法检测NK细胞杀伤活性,ELISA法检测培养上清IFN-γ,IL-2,IL-10含量,流式细胞术检测NK细胞受体NKG2D,NKG2A,Ly49A的表达情况.结果 不同浓度MPA处理后肝脏NK细胞杀伤活性较正常对照明显降低(P＜0.01),IFN-γ,IL-2分泌量降低,而IL-10分泌量增高,NK细胞活化性受体NKG2D和抑制性受体Ly49A的表达下调,抑制性受体NKG2A的表达上调,高浓度的MPA作用后结果更明显.结论 MPA通过下调肝脏NK细胞活化性受体NKG2D并上调抑制性受体NKG2A而抑制肝脏NK细胞活性并影响细胞因子的分泌.     

原发性肝癌患者外周血自然杀伤细胞受体NKG2D的表达及意义

目的 探讨原发性肝癌患者外周血自然杀伤(NK)细胞受体NKG2D表达的变化,并分析其对NK细胞杀伤活性的影响.方法 用流式细胞仪分析20例原发性肝癌、23例乙型肝炎后肝硬化、20例慢性乙型肝炎及20名健康者的外周血NK细胞数量及其NKG2D的表达情况,并用酶标仪检测各组样本NK细胞的细胞毒活性.结果 原发性肝癌患者的NK细胞杀伤率、NK细胞NKG2D的表达率(中位数)、NKG2D+NK细胞数(中位数)、NK细胞中NKG2D的表达水平(中位数)及NK细胞数[(25±7)%、6%、0.7×107/L、15、(1.1±0.6)×108/L]均明显低于正常组[(63±7)%、36%、8.3×107/L、116、(27±1.1)×108/L]和乙肝组[(41±8)%、16%、2.8×107/L,49、(1.9±1.1)×108/L],差异均有统计学意义(均P＜0.05);与肝硬化组[(29±10)%、7%、0.6×107/L、29、(1.5±1.2)×108/L]比较也略低,但只有NK细胞NKG2D的表达水平两组差异有统计学意义(P＜0.05),其余两组间差异均无统计学意义(均P＞0.05).NK细胞的活性与NK细胞数、NK细胞NKG2D的表达率、NKG2D+NK细胞数、NK细胞NKG2D的表达水平均呈正相关关系(r=0.657、0.770、0.927、0.734,均P＜0.01).结论 原发性肝癌患者外周血NK细胞活性及其细胞表面NKG2D的表达明显降低,NKG2D的表达与NK细胞的活性密切相关,提高NK细胞表面NKG2D的表达水平可为原发性肝癌的过继免疫治疗开创新的思路.     

细胞因子诱导的自然杀伤细胞培养体系的评价

目的:评价采用γ-干扰素(IFN-7)、白介素-2(IL-2)、抗 CD3 单抗 3 因子对外周血来源的 CIK 细胞培养的效果.方珐:采集17例实体肿瘤患者的外周血,分离单个核细胞培养,于培养第 1 天加入重组人IFN-Y,第2天加入抗人 CD3 单抗、重组人IL-2,隔天半量换培养液并添加人重组IL-2以维持其浓度...     

吗啡对自然杀伤细胞活性的影响

疼痛是与实际或潜在的组织损伤相关联的不愉快的感觉和情绪体验,或用这类组织损伤的词汇来描述的自觉症状。吗啡作为中枢阿片类镇痛药的代表,广泛应用于不同类型的镇痛,并且作为全身麻醉的补充。自然杀伤细胞-NK细胞,特有的无须经过特异性抗原提呈,即可识别和杀死肿瘤细胞,在肿瘤免疫和预防肿瘤转移中有着重要的作用。     

脑啡肽对小鼠NK细胞杀伤活性的增强作用

自然杀伤细胞(NK细胞)是体内细胞免疫功能的组成部份,在某些肿瘤和病原微生物感染中,起到免疫监视的作用。NK细胞能识别多种抗原,并有直接杀伤靶细胞的能力。因而NK细胞的杀伤作用与肿瘤的发生,发展,转移及预后均有直接关系。 阿片肽作为神经介质,它们是否参与调节NK细胞的杀伤功能,是近年来人们感兴趣的研究问题,有研究者提到亮氨酸脑啡呔(leucine enkephalin,LENK)和甲硫氨酸脑啡呔(methionine enkephalin,     

Role of natural killer T cells in Graves’ disease

Objective To explore the role of natural killer T (NK T) cells in the pathogenesis of Graves’ disease.Methods NK T cell deficient mice and wild BALB/c mice were immunized with cells expressing TSH receptor once every two weeks 6 times. Two weeks after the final immunization, the mice were killed and serum thyroxine levels, anti-TSH receptor antibodies and thyroid pathological changes were examined.Results The mean levels of TT 4 and TRAb in the immunized NK T cell deficient group were slightly elevated but significantly different from those of the non-immunized control group, while comparable to those in the immunized wild group. There were no significant changes of the activity levels of TSAb or TSBAb in the immunized NK T cell deficient mice compared to those in immunized wild control mice. Thyroids from immunized NK T cell deficient mice showed mild hypertrophy of some follicles as compared with non-immunized control mice. This change was comparable to immunized wild control mice.Conclusion NK T cells may not be involved in the pathogenesis of Graves’ disease.     

自然杀伤T细胞与子宫内膜异位症分期的关系

摘要：目的探讨自然杀伤T细胞(NKT)在子宫内膜异位症(EMT)发病机制的作用及其与分期的关系。方法Ⅰ~Ⅳ期EMT患者
各15例,采用流式细胞术检测其外周血及腹腔积液内NKT含量,用ELISA法检查细胞因子IFN-γ及IL-4的含量,并选取同龄段
的20例健康志愿者作为对照。结果与对照组比较,Ⅰ~Ⅳ期EMT患者外周血NKT、IFN-γ及IL-4均明显降低,且外周血及腹腔
积液内以上三者的含量均呈现Ⅰ>Ⅱ>Ⅲ>Ⅳ的关系,两组间的含量存在统计学差异（P<0.05）。Spearman 相关性分析显示,
NKT、IFN-γ及IL-4当中任意一个因素均与Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ及Ⅳ的任意一期呈显著负相关性（r均大于0.06,P均小于0.05）。结论NKT
及其细胞因子IFN-γ及IL-4在EMT发病机制当中具有重要作用,并且与EMT的分期密切相关,可能是该病的一组保护性因素。
     

浸润巨噬细胞、自然杀伤细胞与甲状腺自身免疫

作者用 APAAP 法对37例甲状腺标本作免疫组化研究,结果发现在桥本甲状腺炎(HT)与非毒性甲状腺肿(NTG)间浸润单个核细胞中 Ki-M8~+细胞比例差异显著(p<0.05),而 NKH-1~+细胞比例差异不显著.在 HT 与 Graves 病(GD)间以及 GD 与 NTG 间,无论是 Ki-M8~+细胞抑或 NKH-1~+细胞比例差异均不显著.Ki-M8~+细胞浸润程度与滤泡细胞 HLA-DR 抗原表达成正相关.Ki-M8~+及 NKH-1~+细胞多呈散在浸润,在有破坏的 HT 甲状腺滤泡中常见 NKH-1~+细胞,作者认为是自然杀伤细胞攻击甲状腺滤泡的证据之一.     

小鼠脾脏NK细胞的辐射效应

用~(125)I—UdR释放法检测了不同剂量(0. 025～18Gy)X线全身照射后24h小鼠脾脏NK细胞活性。发现高剂量辐射(4～18Gy)时,NK细胞活性降低,低剂量辐射(0. 025～0. 5Gy)时,NK细胞活性增高。根据全脾细胞数量随照射剂量增加发生的急剧变化,进一步验证了NK细胞具有相对辐射抗性。基于本实验结果,提出了低剂量辐射对NK细胞活性可能具有辐射刺激作用。     

蜕膜自然杀伤细胞的表型及功能变化

目的：通过比较蜕膜自然杀伤细胞（dNK细胞）与外周血NK细胞（pNK细胞）的表型及功能变化,探讨dNK细胞特殊的表型和功能与母胎界面免疫耐受调节机制的关系.方法：收集晚孕胎膜组织及外周血,流式细胞术检测dNK细胞与pNK细胞表型的差异;免疫磁珠分选dNK细胞与pNK细胞,乳酸脱氢酶法测定其对K562的自然杀伤活性.结果：dNK细胞表面CD16的表达明显低于pNK细胞（P＜0.01）,NKG2A的表达明显高于pNK细胞（P＜0.01）,NKG2D的表达低于pNK细胞（P＜0.05）;dNK细胞对K562的自然杀伤活性明显低于pNK细胞（P＜0.01）.结论：dNK细胞特殊的表型和功能可能是维持母胎界面免疫耐受的重要因素.     

Distribution of natural killer cell receptors in HIV infected individuals

Natural killer （NK） cells are bone marrow derived, large granular lymphocytes, comprising approximately 10% to 20% of the mononuclear cell fraction in normal peripheral blood. They form a part of the first line defense mechanism against tumoural and viral spreading^1-4 Unlike T and B cells, NK cells do not require gene rearrangement for assembly of their receptor genes; rather, NK cells discriminate potential target cells based on the levels of self major histocompatibility complex （MHC） class I expression on such cells^5.6 There are two kinds of NK cell receptors^2.7.8 Inhibitory receptors recognize MHC class I molecules and deliver a downregulatory signal that inactivates the lytic machinery of NK cells. Stimulatory receptors expressed by NK cells deliver an activation signal.