细胞因子诱导的杀伤细胞与肿瘤浸润淋巴细胞体外细胞毒活性比较

目的比较用多种细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)与癌性胸水中肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)的细胞毒活性,为临床应用提供依据。方法用不同的细胞因子分别诱导培养CIK和癌性胸水TIL,按常规法计数细胞增殖量,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测其细胞毒活性。结果诱导培养14d后,CIK细胞毒活性为(76.65±16.78)%,增殖倍数为520±102;TIL细胞毒活性为(55.31±11.02)%,增殖倍数为182±78。结论CIK细胞对K562细胞的细胞毒活性在14d时达峰值,而TIL细胞在21d时才达峰值,且CIK细胞毒活性明显高于TIL细胞,增殖细胞数量也比TIL细胞高。CIK可替代TIL细胞进行胸腔注射治疗癌性胸水。     

乳腺癌浸润淋巴细胞的细胞毒活性研究

目的 研究乳腺癌的肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)细胞毒活性。方法 采用生物技术提取乳腺癌的肿瘤浸润淋巴细胞。经过一定时间诱导培养．在7天、14天、21天、28天和35天分别检测TIL对K562细胞的细胞毒活性。结果 TIL对K562细胞的细胞毒活性4—5周时细胞毒活性最强。结论 临床可在乳腺癌TIL诱导培养4—5周时进行临床应用，可取得最佳疗效。     

癌性胸水肿瘤浸润淋巴细胞的杀伤细胞活性研究

用生物技术提取癌性胸水中的肿瘤浸润淋巴细胞和相应的肿瘤细胞,经过一定时间诱导培养后,在7,14,21和28d分别检测TIL对自身肿瘤细胞和K562细胞的杀伤活性。结果显示TIL对自身肿瘤细胞和K562细胞的杀伤活性无显著性差异,三周时杀伤活性最强。提示临床可在TIL诱导培养三周时进行临床应用,并可取得最佳疗效。     

细胞因子诱导的杀伤细胞治疗肿瘤的研究进展

肿瘤的过继细胞治疗是肿瘤生物治疗中最活跃的研究领域之一,细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)在肿瘤的治疗中逐渐成为焦点。CIK细胞是一群异质性细胞群,由多种细胞因子共同作用诱导而来,因其强大的增殖活性和杀瘤活性,非MHC限制性及低毒副作用等优点,自发现就得到了广泛的关注。目前CIK细胞已经用于恶性肿瘤的治疗,并有望成为恶性肿瘤综合治疗的新方向。本文就CIK的表型、扩增、抗肿瘤作用机制、临床应用和副作用等方面的进展作一综述。     

乳腺癌浸润淋巴细胞的细胞毒活性研究

目的 研究乳腺癌的肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)细胞毒活性。方法 采用生物技术提取乳腺癌的肿瘤浸润淋巴细胞，经过一定时间诱导培养，在7天、14天、21天、28天和35天分别检测TIL对K562细胞的细胞毒活性。结果 TIL对K562细胞的细胞毒活性4～5周时细胞毒活性最强。结论 临床可在乳腺癌TIL诱导培养4～5周时进行临床应用，可取得最佳疗效。     

树突状细胞联合细胞因子诱导的杀伤细胞治疗肿瘤的护理

目的 探讨树突状细胞（DC）联合细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）治疗恶性肿瘤的护理方法.方法 收集本院肿瘤生物治疗中心2009年12月至2010年3月收治的144例患者,用血细胞分离机获取患者自身外周血单个核细胞60ml,体外分离和单独培养树突状细胞和细胞因子诱导的杀伤细胞后,用带有虑过网的输血器进行静脉回输.注意单采前、单采中、单采后、回输时、回输后的护理.结果 144例恶 性肿瘤患者治疗中有20例（13.8%）出现发热、胸闷心慌等不良反应,及时对症治疗与护理后好转,未出现严重不良反应.结论 树突状细胞联合细胞因子诱导的杀伤细胞回输有助于延长患者生存期,改善患者的生存质量,在整个治疗过程中加强各个环节的护理对提高疗效十分重要.     

细胞因子诱导的杀伤细胞

正常人或患者外周血，骨髓单个核细胞/淋巴细胞中定期加入γ-干扰素（IFN-γ），白细胞介素-1（IL-1），白细胞介素-2（IL-2），抗CD3抗体（CD3mAb)经2-4周的诱导可获得大量的新型肿瘤杀伤细胞-细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokine-induced killer,CIK)，增殖旺盛及肿瘤杀伤活性高，包含大量CD3^ CD56^ 细胞，有关基础及临床研究证明，CIK细胞较细胞毒性T淋巴细胞（CTL），淋巴细胞因子活化的杀伤细胞（lymphokine-activted killer,LAK)，肿瘤细胞浸润的淋巴细胞（tumer infiltrating-lym-phocyte,TIL）更适用于肿瘤的生物治疗，本文就CIK细胞的来源与生物学特征，对肿瘤细胞的杀伤及临床应用进行综述。     

LDH释放法检测肿瘤患者PBMC和CIK细胞的细胞毒活性

目的建立检测细胞毒活性的乳酸脱氢酶（LDH）测定法，了解肿瘤患者外周血单个核细胞（PBMC）和细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）的抗肿瘤活性，为肿瘤的免疫细胞治疗提供参考。方法采集肿瘤患者和健康成人外周血，常规分离PBMC，体外进行CIK的培养，用LDH释放法分别检测PBMC和CIK对肿瘤细胞K562的细胞毒活性。结果肿瘤患者PBMC对K562的杀伤活力比正常人显著降低（P〈0．05）。经多种细胞因子诱导培养7～10d后，健康人和肿瘤患者的CIK对K562的杀伤活力都有显著提高（P〈0．01），肿瘤患者CIK杀伤活力接近于健康人。结论肿瘤患者PBMC细胞毒活性显著降低，但经诱导培养成CIK后则显著提高。用LDH释放法检测肿瘤病人CIK细胞毒活力，有助于CIK疗法适应病人的选择及个体疗效观察。     

细胞因子诱导的杀伤细胞抗肿瘤机制及应用

摘要： 细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)是一群体外诱导的以CD3⁺CD56⁺ T细胞为主的异质细胞群,具有效应CD8⁺ T细胞的TCR特异性和非MHC限制性抗肿瘤活性的特点。采用荷瘤小鼠模型进行CIK临床前研究,结果表明CIK对实体肿瘤和血液系统肿瘤均有明显的抗肿瘤效应。临床研究证实CIK可用于治疗多种恶性肿瘤,显著延长患者的生存期且无毒副作用。用免疫学与基因工程方法增强CIK疗法的特异性和细胞毒活性,寻求其疗效判断的生物学标志及CIK治疗的纳入与排除标准是目前研究的热点。     

树突细胞联合细胞因子诱导的杀伤细胞对耐药K562细胞的体外杀伤作用

目的研究细胞因子诱导的杀伤(CIK)细胞与同源树突细胞(DC)共培养后CIK细胞的增殖活性及表型的变化,并观察其对K562、K562/ADM细胞毒作用的影响。方法采集健康供者外周血单个核细胞(MNC)用于诱导培养CIK细胞及成熟DC,将成熟DC和CIK细胞混合培养,用MTT法检测DCCIK共培养细胞杀伤K562细胞及其耐药株的活性。结果在2.5～20.0效靶比范围内,CIK细胞对K562和K562/ADM细胞的杀伤率分别为(20.0±1.2)%～(61.1±2.2)%和(17.5±2.1)%～(45.2±3.3)%;DCCIK共培养细胞对K562和K562/ADM细胞的杀伤率分别为(25.2±2.3)%～(70.9±4.1)%和(22.4±2.7)%～(62.3±5.0)%。CIK细胞对K562敏感株和耐药株杀伤率的差异无统计学意义,DCCIK细胞对敏感株和耐药株的杀伤作用差异亦无统计学意义;DCCIK细胞对K562和K562/ADM细胞的杀伤活性均高于单纯CIK细胞组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论DC与CIK共培养细胞的增殖活性和细胞毒活性高于CIK细胞。     

Pseudomonas aeruginosa injection enhanced antitumor cytotoxicity of cytokine-induced killer cells derived from cord blood

Cord blood (CB) is becoming an extensive source of cytokine-induced killer cells. It had been used in several clinical settings and proven to be efficacious and safe. Therefore, we investigated the possibility of combining CIK cells derived from cord blood (CB-CIK) and Pseudomonas aeruginosa injection (PA-MSHA) in order to enhance the cytotoxicity of CB-CIK cells against tumors. Compared with the CB-CIK cells, the PA-MSHA-treated CB-CIK cells demonstrated with increased proliferation rates, higher expression of activated cell surface marker CD28 and lower expression of inhibited cell surface markers PD-1 and CTLA-4. Furthermore, PA-MSHA-treated CB-CIK cells exhibited more effectively for secreting pro-inflammatory cytokine such as IFN-γ and expressing high levels of TLR2, TLR4 and TLR6. The expression of CD107a was higher in the CD3⁺CD56⁺ subset of PA-MSHA-treated CB-CIK cells. Our results indicate that the PA-MSHA-treated CB-CIK cells exhibited a more potent in cytotoxic activity against tumor cells. Thus, PA-MSHA enhanced the antitumor ability of CB-CIK cells.     

树突状细胞与细胞因子诱导的杀伤细胞共培养联合化疗对肺腺癌体外杀伤作用

目的 通过恶性胸腔积液获取成熟树突状细胞(DC),探讨恶性胸腔积液来源的DC与细胞因子诱导杀伤细胞(CIK)共培养对CIK细胞的作用及两者共培养后联合奥沙利铂(L-OHP)对肺腺癌的体外杀伤作用.方法 收集20例非小细胞肺癌(NSCLC)患者的胸腔积液,每例收集800～1 000 ml,双层聚蔗糖(Ficoll)密度梯度离心获得DC前体细胞,体外诱导培养收获成熟DC;分离健康人外周血单个核细胞(PBMC),体外培养获得CIK细胞;DC与CIK细胞共培养;流式细胞仪鉴定表型;MTT法检测对肺腺癌的体外杀伤作用.结果 ①恶性胸腔积液中存在DC前体细胞,经体外细胞因子诱导培养后可获得成熟的DC,培养9天的DC表面标志物CD80、CD83、CD86及MHC-Ⅱ类分子HLA-DR与第0天比较明显增高,分别为(56.61±7.01) % vs (14.38±5.16)%,(58.85±7.05)% vs (18.49±9.43)%、(60.27±13.94)% vs (20.39±6.67)%、(70.97±8.96)% vs (41.36±8.57)%(均P＜0.01).②培养14天后,DC与CIK细胞共培养较单独CIK培养中CD3+/CD56+、CD3+、CD4+、CD8+细胞明显增多(均P＜0.01);对肺腺癌细胞杀伤作用明显增强(P＜0.01).③DC与CIK细胞共培养联合L-OHP治疗对肺腺癌细胞的杀伤率明显高于单独治疗(P＜0.01).结论 胸腔积液来源的DC前体细胞在体外诱导培养可获得功能正常的成熟DC,与CIK细胞共培养后促进CIK细胞增殖、增强其杀伤作用;两者共培养后联合L-OHP具有协同作用,对肺腺癌在体外有明显的抑制作用,为肺癌综合治疗提供了一定的理论基础.     

树突细胞与细胞因子诱导的杀伤细胞共培养增强其体内外抗肿瘤活性

目的探讨与树突细胞(DC)共培养能否增强正常人细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)的体内外抗瘤活性.方法分别按照常规方法从正常人外周血单个核细胞诱导DC和CIK细胞,将NB4白血病细胞冻融物(LCL)冲击或未冲击的DC与CIK细胞共培养(LCL-DC+CIK、DC+CIK),以CIK细胞单独培养作为对照.用流式细胞术分析细胞表型,酶联免疫斑点法(ELISPOT)测定分泌IFN-γ的细胞数,51Cr释放实验测定体外细胞毒活性,同时用NB4细胞系建立荷瘤裸鼠模型研究其体内抗肿瘤活性和归巢情况.结果在培养第15天, LCL-DC+CIK与CIK细胞单独培养相比,增殖速率明显提高 [(18.2±2.1)倍vs(11.6±2.3)倍, P<0.05],CD3+CD56+ 表达水平也明显提高 [(51.05±2.63)% vs(30.18±1.45)%, P<0.05],分泌IFN-γ的细胞数量明显增高 [(86.33±5.51)/104细胞 vs(44.61±3.05)/104细胞, P<0.05],同时LCL-DC+CIK对NB4、K562、KG1a的体外细胞毒活性增强.体内实验显示与单独培养CIK细胞相比,LCL-DC+CIK细胞共培养后,可明显抑制接种瘤细胞裸鼠的成瘤率,提高裸鼠的长期无瘤存活率(100% vs 66.7%, P<0.05),以DiI标记的LCL-DC+CIK细胞在接种后7 d内可在脾脏、淋巴结及肿瘤局部被检测到.LCL-DC+CIK与DC+CIK细胞在抗瘤效应上没有明显差异.结论与DC共培养可使CIK细胞获得更高的增殖速率和更强的体内外抗肿瘤活性,可以作为一种临床有效的抗白血病免疫治疗策略.     

Selection of gene-marked tumor infiltrating lymphocytes from post-treatment biopsies: a case study

Patients with malignant melanoma have been treated with interleukin-2 (IL-2) and tumor-infiltrating lymphocytes (TIL) marked by retroviral gene transduction. The retroviral vector contained a gene coding for the bacterial enzyme neomycin phosphotransferase, such that transduced TIL expressing the enzyme could survive otherwise toxic concentrations of the neomycin analogue G418. For 1 patient, who exhibited a complete regression of cancer after treatment with TIL, lymphocytes from post-treatment blood and tumor biopsies were cultured in IL-2, and transduced TIL were recovered by G418 selection. Analysis of T-cell receptor heterogeneity indicated that the transduced TIL recovered from the tumor biopsy were different from TIL that were kept strictly in vitro and selected in G418. The selection process required weeks in culture, during which time control cultures changed radically in subset composition, so there was also a simultaneous selection for long-term in vitro growth advantage. It cannot be certain that the TIL subsets preferentially recovered from the tumor biopsy corresponded to those that mediated complete elimination of tumor in this patient.     

细胞因子诱导杀伤细胞过继免疫治疗血液系统恶性肿瘤的研究进展

细胞因子诱导杀伤(CIK)细胞具有T淋巴细胞与自然杀伤(NK)细胞的表型及功能特征.其体外培养细胞扩殖率高、不受主要组织相容性复合物(MHC)限制,在体外对血液系统恶性肿瘤细胞有显著的细胞毒性.这些特性均使得CIK细胞过继免疫治疗抗血液系统恶性肿瘤活性逐步成为相关研究的热点.多项临床试验结果表明,CIK细胞过继免疫治疗在血液系统恶性肿瘤患者中具有可行性及有效性;通过CIK细胞过继免疫治疗结合标准治疗方案已被证实在抗血液系统恶性肿瘤中发挥协同作用.CIK细胞过继免疫治疗在血液系统恶性肿瘤的治疗中能够提高患者完全缓解(CR)率、延长生存时间并提高生活质量.笔者拟就CIK细胞过继免疫治疗血液系统恶性肿瘤的相关研究进展进行综述.     

NK细胞对骨髓瘤RPMI 8226细胞的体外杀伤活性

目的:探讨NK细胞对骨髓瘤RPMI 8226细胞的体外杀伤活性.方法:分离纯化NK细胞,LDH法检测不同效靶比时NK细胞对RPMI 8226细胞的杀伤活性,并以K562细胞为对照.同时用甲基纤维素克隆形成试验观察效靶比为20:1时细胞克隆形成率.结果:NK细胞对K562、RPMI 8226细胞的杀伤活性随着效靶比升高而增强,在同一效靶比,NK细胞对K562、RPM1 8226细胞的杀伤活性组间比较差异均有统计学意义.NK细胞对K562细胞克隆形成抑制率为(63.48±6.78)%,对RPMI 8226细胞克隆形成抑制率为(23.71±2.39)%,差异有显著统计学意义.结论:NK细胞可杀伤骨髓瘤RPMI 8226细胞,但为低度敏感.     

细胞因子诱导杀伤细胞／自然杀伤细胞培养过程中CD16及CD11a的表达变化

背景:由于细胞因子诱导杀伤细胞、自然杀伤细胞上表达的CD16和CD11a均与其介导的抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用和直接接触杀伤的抗肿瘤效应密切相关.因此了解两种细胞扩增过程中这两种分子表达的强弱,对根据免疫效应细胞的最终用途决定两种细胞的最佳收获时机具有重要意义.目的:了解细胞因子诱导杀伤细胞和自然杀伤细胞在培养过程中的CD16和CD11a表达的变化规律.设计、时间及地点:细胞移植免疫学动态观察,于2006-09/2008-03在中山大学附属第二医院完成.材料:脐血来自本院健康足月妊娠产妇.方法:采用Ficoll-Hypaque法分离脐血单个核细胞,接种于含体积分数为0.15胎牛血清的IMDM,双抗生素青、链霉素各1×105U/L24孔培养板中,在培养体系中加入白细胞介素2、白细胞介素7、白细胞介素15、干细胞因子及FLT3L制备细胞因子诱导杀伤细胞和自然杀伤细胞,每隔3天半量换液及全量补充上述细胞因子.主要观察指标:流式细胞仪榆测CD3+CD56+细胞因子诱导杀伤细胞以及CD3-CD56+自然杀伤细胞在4周培养过程中CD16和CD11a表达的变化.结果:CD16在细胞因子诱导杀伤细胞、自然杀伤细胞上的表达随着培养时间的延长逐渐增加,在两类细胞上均在培养的第4周达到最高峰,分别为(55.99±3.90)%和(7.86±1.66)%,但CD16存自然杀伤细胞上表达比例较低,整个培养过程中自然杀伤细胞上CD16的均数表达没有超过8%.CD11a在细胞因子诱导杀伤细胞培养的第3周,自然杀伤细胞培养的第2周达到最高峰,分别为(49.32±6.32)%和(82.31±11.33)%,之后逐渐出现下降,到培养第4周几乎消失.结论:CD16和CD11a在细胞因子诱导杀伤细胞和自然杀伤细胞上的表达随培养时间呈动态变化,使用单克隆抗体联合细胞因予诱导杀伤细胞介导的抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用效应时,细胞的收获期可在细胞培养的第4周,利用细胞因子诱导杀伤细胞和自然杀伤细胞的直接杀伤效应进行细胞过继免疫,那么收获细胞的时间以细胞培养的第3周为宜.     

肿瘤浸润淋巴细胞的生物学功能及其在肝细胞癌中的意义

目前,肝细胞癌(HCC)患者的存活率低,复发率高,临床治疗效果不佳.随着HCC免疫治疗研究的不断进展,肿瘤浸润淋巴细胞(TILs)成为研究热点.TILs是在肿瘤中发挥免疫应答及调控作用的特殊淋巴细胞,既可发挥抗肿瘤效应,又可促进肿瘤免疫逃逸,其抗肿瘤效应是各淋巴细胞间相互作用的结果.TILs的类型和密度都影响着患者的预...