槲皮素诱导人白血病细胞K562的凋亡

目的:研究槲皮素对人白血病细胞株K562增殖抑制和诱导凋亡作用. 方法:四氮甲唑蓝(MTT)观察细胞的生长状况,应用彗星分析法、TUNEL技术和流式细胞仪检测细胞凋亡. 结果:槲皮素在(1～8)×10-5 mol/L浓度范围内能明显抑制K562细胞的增殖,并具有时间和浓度依赖性,8×10-5 mol/L槲皮素作用72 h的K562细胞株A值最低;彗星分析法显示经槲皮素作用的K562细胞出现长的彗尾条带;原位细胞凋亡可见细胞变小,核固缩为一个或多个染色质团块;流式细胞仪检测细胞凋亡主要发生在G1/S期. 结论:槲皮素在体外一定浓度范围内能抑制K562细胞增殖,诱导凋亡.     

维生素K2对K562细胞生长抑制作用的实验研究

目的:研究维生素K2(VK2)对慢性粒细胞白血病急性变细胞株K562细胞的生长抑制作用及其机制。方法:采用形态学检测VK2作用后的细胞形态改变,MTT方法检测VK2对K562细胞的生长抑制作用,流式细胞仪Annexin-VFITC/PI分析细胞凋亡,PI染色分析细胞周期变化,RT-PCR技术检测抗凋亡基因bcl-2、促凋亡基因bax的表达。结果:经VK2作用后细胞出现明显的形态学改变:细胞变小,核固缩,核染色质聚集边挤于核膜内侧呈新月形以及典型凋亡小体形成等;MTT结果显示VK2对K562细胞有明显的抑制作用,作用72 h半数抑制浓度为25.1μmol.L-1;流式细胞仪检测结果显示随着VK2浓度的增加凋亡率逐渐增高(P<0.05),随着作用时间的延长凋亡率也逐渐增高(P<0.05);VK2作用72 h,S期细胞逐渐减少(r=-0.99,P<0.05),G0/G1期细胞逐渐增加(r=1.00),细胞被阻滞在G0/G1期;随着VK2浓度的增高抗凋亡基因bcl-2表达明显下调,而促凋亡基因bax表达无明显差异。结论:VK2通过诱导K562细胞凋亡抑制其增殖,并呈浓度和时间依赖性;抗凋亡基因bcl-2下调可能是VK2诱导K562细胞发生凋亡的机制之一。     

Bcl-2反义核酸增强青蒿琥酯诱导K562细胞凋亡

目的:研究bcl-2反义核酸增强青蒿琥酯对人慢性粒细胞白血病K562细胞株诱导凋亡效应. 方法:合成bcl-2反义核酸(ASON)导入K562细胞,应用Western blot法检测bcl-2蛋白的表达,TUNEL技术、流式细胞仪法(FCM法)检测细胞凋亡. 结果:bcl-2反义核酸(ASON)能明显抑制bcl-2蛋白的表达. 青蒿琥酯在1～7 mg/L浓度范围内能分别明显抑制K562细胞的增殖,并具有时间和浓度依赖性, 7 mg/L青蒿琥酯作用72 h的K562细胞株A值最低. 原位细胞凋亡检测可见细胞变小,核固缩为一个或多个染色质团块,与未经ASON转染的K562细胞株相比,经bcl-2 ASON转染的K562细胞株对青蒿琥酯的诱导凋亡作用更加明显;FCM法出现低于G1期DNA含量的亚二倍体凋亡峰,细胞凋亡主要发生在G1/S期,与未经ASON转染的K562细胞株相比,经bcl-2 ASON转染的K562细胞凋亡率显著增加. 结论:青蒿琥酯在体外一定浓度范围内可诱导K562细胞株凋亡,bcl-2反义核酸可增强青蒿琥酯诱导K562细胞凋亡的作用.     

PTK787对K562细胞增殖及细胞周期作用的影响*

目的:观察酪氨酸激酶抑制剂PTK787对K562细胞增殖、细胞周期的作用,探讨PTK787抗急性髓系白血病的作用机制.方法:应用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)观察不同浓度PTK787在不同时间对K562细胞增殖作用的影响;用流式细胞仪检测浓度PTK787对K562细胞周期的抑制作用.结果:随着PTK787浓度增加与作用时间延长,K562细胞的增殖抑制率逐渐升高.同一时间不同浓度组之间比较,或者同一浓度不同时间组间比较,差异均有统计学意义(P<0.05),其中PTK787作用48 h,以浓度320μmol/L对细胞抑制率最强.随着PTK787浓度增加,G1期细胞比例逐渐升高,S期细胞比例逐渐下降,各组间比较差异有统计学意义(P<0.05).结论:PTK787可以抑制K562增殖,阻止K562细胞由G1期向S期转化,从而达到抗白血病的作用.     

雷公藤内酯醇对皮肤鳞状细胞癌A431细胞株增殖与凋亡的影响

目的:探讨雷公藤内酯醇(triptolide,TP)对体外培养的人皮肤鳞状细胞癌A431细胞株增殖与凋亡的影响.方法:以体外培养的人皮肤鳞状细胞癌A431细胞株为研究对象,MTT比色法测定TP对A431细胞株增殖活性的影响,光镜观察细胞形态学的改变,流式细胞仪检测TP作用于A431细胞株后细胞周期的分布及凋亡率的变化.结果:随着TP剂量的增加及作用时间的延长,TP对A431细胞株增殖活性的抑制作用增强,TP不但能够引起细胞形态的改变(漂浮细胞及核固缩现象增多),而且能够诱导A431细胞株凋亡,改变细胞周期的分布,与对照组相比G0/G1期细胞比例增多(P<0.05),S期细胞比例减少(P<0.05).结论:TP通过诱导A431细胞凋亡并抑制其增殖发挥抗肿瘤作用.     

雷公藤内酯醇抑制白血病干细胞自我更新的研究

目的:检测在雷公藤内酯醇作用下,白血病干细胞的NANOG、β-catenin和OCT-4蛋白表达的水平,从抑制白血病干细胞细胞自我更新方面探讨其机制。方法:首先使用免疫磁珠法进行分选白血病干细胞。实验共设4组,分为:对照组、雷公藤内酯醇3个浓度(低中高)组。4个组均加入K562/A02细胞悬液100μL,对照组加入RPMI1640培养液100μL,雷公藤内酯醇低中高浓度组终浓度分别为10、50、100ng/mL。进行各组细胞增殖率的检测、并采用蛋白印迹法检测各组细胞NANOG、β-catenin和OCT-4蛋白的表达水平。结果:对各组细胞增殖率检测结果显示,3个不同浓度雷公藤内酯醇组,处理24h后都可以观察到K562/A02干细胞增殖受抑,并呈浓度依赖性。与对照组比较,3个不同浓度雷公藤内酯醇度组的β-catenin蛋白表达水平降低,且与对照组间存在统计学差异(P0.05)。中剂量组中OCT-4蛋白表达水平较对照组有统计学差异,而NANOG蛋白的表达在这4个组中,没发现显著差异。结论:中剂量组的雷公藤内酯醇能够调控β-catenin/OCT-4蛋白表达水平,表明该浓度剂量对抑制白血病干细胞自我更新作用最强;而试验中发现的其具有抑制白血病干细胞增殖的浓度依赖性,表明白血病干细胞受到高浓度雷公藤内酯醇抑制可能存在其他机制。     

雷公藤多甙对人类红白血病细胞株K562作用机制的研究

目的　探讨雷公藤多甙对人类红白血病细胞株K5 6 2作用及其机理。方法　应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、荧光染色法、流式细胞仪 (FCM)等方法检测雷公藤多甙对人类红白血病细胞株K5 6 2的影响。结果　雷公藤多甙能显著抑制K5 6 2细胞的增殖 ,降低其存活率 ,其半数抑制浓度IC50 为 7.2 μg/ml;荧光显微镜下观察雷公藤多甙实验组的凋亡细胞增多 ;FCM检测雷公藤多甙实验组凋亡细胞百分率显著上升 (P <0 .0 5 )且G2 /M期细胞的百分率较对照组上升 (P <0 .0 5 )。结论　雷公藤多甙能显著抑制人类红白血病细胞株K5 6 2细胞的生长 ,促进细胞凋亡。     

中药安迪注射剂对白血病K562细胞株增殖和凋亡的影响

目的:探讨安迪(Adi)注射剂对人白血病K562细胞株增殖和凋亡的影响.方法:MTT法测定K562在Adi作用后的细胞活力(A值);流式细胞技术检测细胞凋亡变化;电镜观察细胞的形态学改变等;综合评价Adi对K562细胞株增殖和凋亡的影响.结果:①MTT法测得Adi在(2.5～20.0)μg/mL浓度范围内能明显抑制K562细胞的增殖,并具有浓度依赖性,20.0 μg/mL Adi作用36 h的K562细胞株A值最低;②流式细胞仪检测结果显示10.0,20.0 μg/mL Adi处理组K562细胞的凋亡率分别为50%和39%,明显高于对照组的10%(P＜0.05);③电镜下可见K562细胞呈典型凋亡样改变.结论:Adi能明显抑制K562细胞增殖,并具有显著促进细胞凋亡的作用.     

小分子酪氨酸激酶抑制剂AG-490对人慢性髓系白血病急变细胞株K562细胞增殖凋亡的影响

目的探讨酪氨酸激酶抑制剂AG-490对人慢性髓系白血病急变细胞株K562细胞的增殖及凋亡的影响。方法采用MTT法观察AG-490在体外对人慢性髓系白血病急变细胞株K562细胞增殖的影响,光学显微镜下观察AG-490对K562细胞形态的变化,流式细胞术检测AG-490对K562细胞凋亡及细胞周期的影响,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）及实时荧光定量PCR技术检测AG-490作用后K562细胞bcr/abl融合基因及凋亡相关基因c-myc mRNA的表达水平。结果 AG-490可明显抑制K562细胞的增殖,并随药物作用时间的延长和浓度的增加,抑制作用越明显（P〈0.05）;AG-490可使细胞周期阻滞于G1期,促使其凋亡（P〈0.05）。AG-490作用于K562细胞48 h后bcr/abl融合基因的表达无明显改变（P〉0.05）,而c-myc的表达水平明显降低（P〈0.05）。结论 AG-490可能通过阻断JAK2信号通路而下调c-myc的表达,使K562细胞阻滞于G1期,从而抑制K562细胞增殖,促使其凋亡。     

丹参酮ⅡA对白血病细胞株K562增殖抑制及机制研究

目的 探讨丹参酮ⅡA(TAT)对人白血病细胞株K562的生长抑制作用及其可能机制。 方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测TAT（终浓度1、10、15、30、50 μmol/L)对K562细胞的增殖抑制作用,光学显微镜观察TAT (30 μmol/L)作用24 h后K562细胞的形态变化,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot法检测凋亡蛋白BCL-2、BAX的表达和蛋白激酶AKT/mTOR信号通路的变化。 结果 终浓度为10~50 μmol/L的TAT对K562细胞的生长具有抑制作用,与对照组比较差异具有统计学意义（P50）值为（7.75±2.47） μmol/L。30 μmol/L TAT作用K562细胞24 h后显微镜下显示细胞破坏明显,部分细胞裂解成碎片。流式细胞仪检测发现30 μmol/L TAT作用组凋亡细胞明显增多（P<0.05）。Western blot结果提示,30 μmol/L TAT作用K562细胞后AKT、mTOR、p70S6K、4-EBP1等信号通路关键点蛋白磷酸化表达水平减低,凋亡抑制蛋白BCL-2下调,而促凋亡蛋白BAX上调。 结论 TAT通过抑制AKT/m-TOR信号通路,下调BCL-2和上调BAX的表达,促进细胞凋亡,抑制白血病细胞株K562的生长。     

白藜芦醇对人食道癌细胞生长和凋亡的影响

目的:探讨白藜芦醇对人食管癌EC9706细胞生长及凋亡影响。方法:分为正常组、溶剂组(加了DM-SO)、白藜芦醇组(分为0.2,0.4,0.8,1.6,3.2 mmol/L不同浓度),应用MTT比色法检测白藜芦醇对EC9706细胞体外生长的抑制作用;流式细胞仪测定细胞的周期和凋亡;电子显微镜观察细胞凋亡。结果:MTT实验观察,白藜芦醇对EC9706细胞生长有抑制作用,随浓度升高,时间延长作用增强,呈剂量-时间效应关系。白藜芦醇(3.2 mmol/L)作用EC9706细胞72 h抑制率达86.73%,凋亡率达47.53%。作用24,48,72 h后,半数细胞毒性作用所需浓度(CC50)及最大无毒浓度分别为3.15,3.01,1.14 mol/L及0.32,0.08,0.09 mmol/L。从低到高浓度(0.2-3.2 mmol/L)白藜芦醇使S期细胞比例逐渐下降,G0/G1细胞的比例逐渐增加。电子显微镜观察:白藜芦醇作用的EC9706食管癌细胞,呈明显的凋亡特征。结论:白藜芦醇可抑制人食管癌细胞EC9706增殖并可诱导细胞发生凋亡。使食管癌EC9706细胞周期呈G0/G1阻滞。白藜芦醇可能为食管癌提供一种新的治疗手段。     

氨氯吡咪诱导白血病K-562细胞酸化及凋亡研究

目的研究氨氯吡咪诱导白血病细胞株K-562细胞酸化及凋亡的作用。方法采用荧光探针法检测氨氯吡咪对人白血病细胞株K-562细胞的酸化作用;采用流式细胞仪观察氨氯吡咪对K-562细胞周期的影响及诱导细胞凋亡的情况。结果与0 h相比,100μmol·L~(-1)氨氯吡咪处理8 h即能明显酸化K-562细胞,细胞内pH明显降低(P<0.05)。与0μmol·L~(-1)比较,除50μmol·L~(-1)氨氯吡咪处理K-562细胞24 h后G_1期细胞增加差异无统计学意义(P>0.05)外,其余各浓度氨氯吡咪处理K-562细胞24 h后G_1期细胞增加(P<0.01),S期细胞降低(P<0.01),G_2/M期细胞也有所增加(P<0.05)。与0μmol·L~(-1)相比,其余各浓度氨氯吡咪对K-562细胞处理24 h后细胞凋亡率明显增加(P<0.01)。与0 h相比,100μmol·L~(-1)氨氯吡咪对K-562细胞处理8、24、48 h凋亡细胞比率均明显增加(P<0.01)。结论氨氯吡咪可有效酸化K.562细胞,使细胞内pH显著降低,并诱导K-562细胞凋亡,肿瘤细胞的增殖生长也显著受到抑制,在白血病治疗中可能具有一定的应用前景。     

四嗪二甲酰胺对K562和K562／Adr的作用及其与NF—κB信号分子的关系

目的探讨四嗪二甲酰胺（ZGDHu-1）对慢性粒细胞白血病细胞株K562（K562-S）和耐药细胞株K562／Adr（K562-R）的抑制作用及其对p210BCR／Abl融合蛋白和转录核因子KB（NF—κB）表达的影响。方法MTT比色法观察其对K562-S细胞增殖的抑制作用,采用Hoechst33258荧光染色检测细胞凋亡,流式细胞仪及细胞克隆形成初步分析其对白血病干细胞的影响,通过Western印迹分析PARP-1、p210BCR／Abl、e—Abl、NF—KB的表达。结果不同浓度的ZGDHu-1对K562-s细胞均有增殖抑制作用,呈现剂量一时间依赖关系,ZGDHu-1作用48h时的IC50值为0．25μg／ml。在ZGDHu-1作用7天后,K562-S及K562-R细胞克隆形成被完全抑制。ZGDHu-1作用48h后,出现PARP-1裂解,诱发细胞凋亡,下调K562-R细胞p210BCR／Abl及C—Abl的表达,抑制K562-S及K562-R细胞质内NF—κB／p65的表达。结论ZGDHu-1能够抑制K562-s及耐药细胞株K562／Adr（K562-R）细胞的增殖,促进细胞凋亡。通过抑制p210BCR／Abl的表达,降低NF—κB的活性,阻断NF—κB信号传导通路,尤其对于耐药型白血病细胞具有广泛的应用价值。     

Antitumor effect of betulinic acid on human acute leukemia K562 cells <Emphasis Type="Italic">in vitro</Emphasis>

The effects of betulinic acid (BA), a pentacyclic lupane-type triterpene, on the cell viability, cell cycle and apoptosis in human leukemia K562 cells were investigated. The effects of BA on the growth of K562 cells were studied by MTT assay. Apoptosis was assayed through Annexin V/propidium iodide (PI) double-labeled cytometry. The effects of BA on the cell cycle of K562 cells were studied by a PI method. The expression of Bax and capase-3 was detected by using Western blot. The results showed that BA was ...     

奥沙利铂对 K562细胞体外生长的影响

目的:观察奥沙利铂对人白血病K562细胞的作用.方法:检测奥沙利铂对K562细胞作用的时间效应和剂量效应,在电镜下观察奥沙利铂作用后细胞形态变化;用流式细胞仪分析细胞周期的改变.结果:随着作用时间及药物浓度的增加,奥沙利铂对K562细胞的增殖抑制作用就越明显.0.016mmol/L奥沙利铂作用72h,K562细胞生长抑制率达85%,形态学及流式细胞仪分析显示G2/M期阻滞和细胞凋亡.结论:奥沙利铂诱发的人白血病细胞的凋亡与细胞分裂期阻滞密切相关.     

端粒酶反义基因对恶性胶质瘤细胞生长的作用

目的研究端粒酶RNA的反义寡核苷酸(AODN)抗恶性胶质瘤细胞系的作用。方法采用脂质体包裹AODN转染恶性胶质瘤细胞系U251-MG细胞。用四唑盐MTT法测定细胞生长曲线,用端粒重复序列扩增法(TRAP)检测细胞的端粒酶活性变化;用流式细胞术检测凋亡细胞。结果2~8μmol/L AODN转染恶性胶质瘤细胞系,培养1~4 d,恶性胶质瘤细胞系端粒酶活性下降,且有剂量依赖性和时间依赖性。AODN转染的恶性胶质瘤细胞培养后细胞增生速度减慢,发生了细胞凋亡。而无义寡核苷酸则无此效应。结论AODN能特异性抑制恶性胶质瘤细胞的端粒酶活性,诱导细胞凋亡。     

雷公藤甲素通过调节microRNA21的表达干预K562/A02细胞的化疗敏感性

目的: 研究雷公藤甲素对K562/A02细胞多药耐药性的逆转作用,并探讨其机制。方法: 四甲基偶氮唑盐比色（MTT）法检测雷公藤甲素细胞毒性;采用非毒性浓度雷公藤甲素作用于K562/A02细胞,AnnexinV/PI双标法检测细胞凋亡;荧光定量PCR检测microRNA21表达水平;蛋白印迹法检测Bcl-2蛋白表达水平。microRNA21反义寡核苷酸转染K562/A02细胞,观察细胞增长率,凋亡率和Bcl-2表达的变化。结果: 非毒性浓度（5 nmol/L）雷公藤甲素明显增强K562/A02细胞对多柔比星的敏感性,并能增强多柔比星诱导细胞凋亡的作用,使K562/A02细胞平均凋亡率由4.3%明显上升到18.5%（P< 0.05）;雷公藤甲素作用后,microRNA21和Bcl-2蛋白水平降低;microRNA21反义寡核苷酸转染K562/A02细胞后,降低了Bcl-2表达,提高多柔比星敏感性和多柔比星诱导的细胞凋亡。 结论: 雷公藤甲素增强K562/A02细胞对多柔比星的敏感性,并诱导其凋亡,可能与下调microRNA21水平有关。     

2-(3-羧基-1-丙酰氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖对人食管癌细胞的抗增殖研究

目的探讨2-(3-羧基-1-丙酰氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖(COPADG)对人食管癌细胞Eca-109和TE-1的增殖及其细胞周期的影响.方法采用体外细胞培养,通过MTT比色分析法观察不同浓度COPADG对Eca-109及TE-1细胞生长的抑制作用;流式细胞仪检测药物对细胞周期的影响;透射电镜下观察细胞的形态学变化.结果COPADG能有效的抑制人食管癌细胞Eca-109及TE-1的增殖,且存在时间及剂量依赖性(P＜0.01);不同浓度的COPADG作用48 h之后,流式细胞仪检测均显示G0/G1期细胞比例增加(P＜0.01),而S期细胞比例减少(P＜0.01),在Eca-109细胞中出现了典型的凋亡峰;电镜下可观察到凋亡的典型形态学变化.结论COPADG能有效抑制人食管癌细胞Eca-109及TE-1的增殖,改变其细胞周期分布,导致明显的G0/G1期阻滞,并在一定浓度下诱导肿瘤细胞凋亡.     

新型多胺缀合物NMMB逆转K562/ADM细胞多药耐药及其机制

目的：研究新型多胺缀合物NMMB对白血病细胞株K562/ADM的多药耐药（MDR）逆转作用,并进一步探讨其耐药逆转机制。方法：分别以不同浓度的NMMB(10～1 000 mg/L)作用于体外培养的K562和K562/ADM细胞24 h,采用MTT 法检测细胞增殖抑制率,确定NMMB的非毒性剂量;采用非毒性剂量,NMMB 0、 2.5 、5.0 和10.0 mg/L组,分别与不同浓度ADM（0.25～100.00 mg/L）联合作用,检测各组细胞生长抑制50%的ADM浓度,即IC50,计算逆转倍数;利用流式细胞术检测NMMB联合ADM作用后K562/ADM 细胞内ADM蓄积程度和细胞周期变化。结果：随着NMMB浓度的增加,细胞增殖抑制率也相应增加,呈剂量-效应关系;NMMB的最大无毒剂量为12.5 mg/L,逆转倍数为4倍;NMMB可明显提高ADM在K562/ADM细胞内的蓄积,与未加NMMB对照组比较差异有显著性（P<0.05）;K562/ADM细胞被阻滞在G0/G1期,与未加NMMB对照组比较差异有显著性（P<0.01）。结论：NMMB对白血病耐药细胞株K562/ADM有增殖抑制和多药耐药逆转作用,其部分逆转机制可能是通过增加细胞内化疗药物蓄积和将K562/ADM细胞阻滞在G0/G1期而实现的。