CA916798基因通过PI3K/AKT通路参与肺癌顺铂耐药

目的在前期体外研究的基础上,建立裸鼠移植瘤模型,观察阻断PI3K/AKT通路对肺腺癌细胞A549及多药耐药肺腺癌细胞A549/CDDP内CA916798基因mRNA表达的影响。方法建立A549、A549/CDDP裸鼠移植瘤模型,以LY294002作用A549组和A549/CDDP组后,比较各组移植瘤生长情况,HE染色观察组织结构变化,实时荧光定量PCR检测肿瘤细胞中CA916798基因mRNA的表达水平。结果成功建立裸鼠移植瘤模型,以LY294002分别阻断A549、A549/CDDP组裸鼠移植瘤细胞的PI3K/AKT通路后,移植瘤体积明显缩小,CA916798基因的表达明显下调(P<0.05)。结论抑制PI3K/AKT通路能够明显抑制肺腺癌细胞A549及A549/CDDP的恶性增殖。     

miR-184对顺铂耐药肺癌细胞PI3K、AKT和mTOR蛋白表达的影响

目的:探讨miR-184对顺铂耐药的肺癌细胞PI3K/AKT/mTOR信号通路的影响。方法:选择人肺腺癌A549和鳞癌SKMES1细胞系分别建立顺铂耐药细胞模型。构建miR-184过表达和低表达质粒载体并成功转染耐药A549和SKMES1细胞,构建过表达和低表达miR-184的耐药细胞。实验分为对照组(未处理的肺癌细胞)、耐药组、过表达组和低表达组,各组细胞培养24、48和72 h后采用MTT法检测细胞增殖率,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率,培养72 h后Western blot法检测细胞中PI3K、AKT和mTOR蛋白的表达。结果:耐药组A549和SKMES1细胞中miR-184表达水平高于对照组(P<0.05)。与对照组比较,耐药组A549和SKMES1细胞增殖率升高;与耐药组比较,过表达组A549和SKMES1细胞增殖率升高,而低表达组降低(P<0.05)。与对照组比较,耐药组A549和SKMES1细胞凋亡率降低;与耐药组比较,过表达组A549和SKMES1细胞凋亡率降低,而低表达组升高(P<0.05)。与对照组比较,耐药组A549和SK...     

CIK逆转耐顺铂人肺腺癌细胞对顺铂耐药与ERCC1的相关性

目的观察脐血来源的CIK细胞对A549/DDP细胞的耐药逆转作用。并探讨CIK逆转耐药机制是否与核苷酸切除修复交叉互补基因1（excision repair cross complementation group 1,ERCC1）的表达存在相关性。方法采集脐血单个核细胞经细胞因子体外诱导获得CIK细胞（cytokine induced killer cells,CIK）,MTT法检测顺铂（cisplatin,DDP）对A549细胞和A549/DDP细胞的体外杀伤作用,以及CIK细胞与A549/DDP细胞共培养前后对DDP敏感性的变化。Real-time RT-PCR法检测A549细胞、A549/DDP细胞以及CIK干预后的A549/DDP细胞中ERCC1 mRNA的表达情况。Western blot法检测A549细胞、A549/DDP细胞以及CIK干预后的A549/DDP细胞中ERCC1蛋白的表达情况。结果 A549/DDP细胞对DDP耐药,耐药指数为2.391。CIK细胞能逆转A549/DDP细胞对DDP的耐药性,逆转倍数为3.967。Real-time RT-PCR、Western blot测得A549/DDP细胞中ERCC1 mRNA和蛋白表达量比A549细胞高（P〈0.05）,CIK细胞共培养前后A549/DDP细胞中ERCC1 mRNA和蛋白表达量无明显变化。结论 CIK细胞能逆转A549/DDP细胞对DDP的耐药性,其逆转耐药的机制与ERCC1的表达无明显相关性。     

ACSS2通过PI3K/AKT信号通路调控食管鳞癌细胞的顺铂敏感性

目的: 探讨乙酰辅酶A合成酶2（acetyl-CoA synthetase 2,ACSS2）表达对食管鳞癌细胞顺铂（cisplatin,DDP）敏感性的影响和可能机制。方法: 通过免疫组化和蛋白质印迹法检测40对食管鳞癌瘤体和癌旁组织中ACSS2蛋白的表达。蛋白质印迹法验证食管鳞癌细胞株TE-1、ECA-109和KY-SE150与正常食管鳞状细胞Het-1A中ACSS2的表达差异;利用脂质体转染siRNA-ACSS2或者慢病毒转染LV-ACSS2至TE-1细胞构建ACSS2下调或过表达细胞株;CCK8实验检测下调ACSS2对顺铂IC50值的改变;顺铂处理（5 μg/mL）前后,流式细胞术检测ACSS2干扰处理对TE-1细胞凋亡水平的影响;蛋白质印迹检测PI3K/AKT信号通路及凋亡相关蛋白cleaved-Caspase-3的表达。结果： 免疫组化及蛋白质印迹结果显示,食管鳞癌组织中ACSS2蛋白表达显著高于癌旁组织（P<0.001）,食管鳞癌细胞株中ACSS2表达水平明显高于正常鳞状上皮细胞Het-1A。CCK8结果显示siRNA-ACSS2处理显著下调TE-1细胞对顺铂的IC₅₀值（P值均<0.05）;流式细胞术结果证实,抑制ACSS2表达可显著上调食管鳞癌细胞凋亡率（P <0.01）;结合5 μg/mL顺铂处理,ACSS2干扰后TE-1细胞凋亡率明显上升（P值均<0.001）;蛋白质印迹结果表明,顺铂处理上调TE-1细胞中ACSS2及p-PI3K、p-AKT的表达;顺铂作用下,靶向抑制ACSS2后可见p-PI3K、p-AKT的显著降低而凋亡相关蛋白cleaved-Caspase-3表达量明显升高,过表达ACSS2在维持PI3K/AKT信号活化的同时可有效逆转cleaved-Caspase-3的形成。结论： ACSS2通过调控PI3K/AKT信号通路活化以及cleaved-Caspase-3表达参与食管鳞癌细胞顺铂敏感性调节。     

顺铂耐药机制研究进展

顺铂作为化疗药物已经在临床得到广泛应用,并显现出良好的广谱抗肿瘤效应。但是由于其存在一定的毒副作用,特别是内在的或获得性耐药的发生严重影响了顺铂的临床疗效。近年来,许多研究工作者对顺铂耐药发生的分子机制进行了大量深入研究,为肿瘤的治疗、新型抗肿瘤药物的研发及克服耐药性等方面都提供了更广阔具体的思路。     

aaptamine 与顺铂联合用药对人肺腺癌顺铂耐药A549/DDP细胞的协同抑制作用

探讨aaptamine与顺铂（DDP）联合用药对肺癌DDP耐药A549/DDP细胞的协同抑制作用,并阐明其可能的分子机制。     

卵巢癌顺铂耐药机制的研究进展

卵巢癌是严重威胁妇女健康的恶性肿瘤之一,近几年卵巢癌的发病率有增高的趋势,据报道,美国2007年有22430例卵巢癌新发病例。由于卵巢癌发病隐匿和缺乏完善的早期诊断方法,约70％患者确诊时已为晚期（FIGO分期,Ⅲ期和Ⅳ期）,其死亡率居妇科恶性肿瘤的首位。在细胞减灭术的基础上施以以顺铂为主的联合化疗方案已成为卵巢癌的常规治疗方案。但由于卵巢癌患者对顺铂的原发性（primary drug resistance）和（或）获得性（acquired resistance）多药耐药（multiple drug resistance,MDR）的存在,     

马蔺子素对耐顺铂人肺腺癌细胞系A549DDP耐药逆转及可能的机制

顺铂 (ＣＤＤＰ)耐药阻碍临床疗效的发挥 ,迄今尚无可完全逆转顺铂耐药的药物。马蔺子素[1] (ＡＮＫＡ)是国内外唯一开发成功的乏氧细胞放射增敏剂 ,我们以耐顺铂人肺腺癌细胞系Ａ54 9ＤＤＰ为靶细胞 ,研究马蔺子素对顺铂耐药的逆转效应及其可能的机制。一、材料与方法1.主要材料 :ＤＭＥＭ培养基 (美国ＧＩＢＣＯ公司产品 ) ,噻唑兰 (ＭＴＴ) (美国Ｓｉｇｍａ产品 ) ,顺铂 (昆明三戌贵金属药业有限公司产品 )。马蔺子素由三戌投资发展有限公司提供。谷胱甘肽 (ＧＳＨ)检测试剂盒购于南京建成生物工程研究所。ＭＲＰ单抗本室自制 ,谷胱苷肽…     

FA/BRCA途径参与肺癌细胞对顺铂耐药的机制

目的:研究顺铂(DDP)对肺癌细胞FANCC、FANCF、FANCL表达水平的影响,探讨FA/BRCA途径DNA损伤修复功能在肺癌细胞对顺铂耐药机制中的作用。方法:采用CCK-8法测定经不同浓度顺铂处理24、48 h后两种肺癌细胞株(A549和Calu-1)的细胞增殖抑制率。应用实时荧光定量PCR技术(RFQ-PCR)和蛋白质印迹法检测两类肺癌细胞株中的FANCC、FANCF、FANCL mRNA和蛋白的表达。结果:肺癌A549细胞和Calu-1细胞的增殖抑制率均随顺铂浓度和作用时间的不同而变化,呈剂量依赖性(P<0.05)和时间依赖性(P<0.05),Calu-1细胞的半数抑制浓度(IC50)明显高于A549细胞。肺癌A549细胞除在10μg/ml浓度顺铂处理24 h后FANCF和FANCL mRNA表达水平增高外,2.5～5μg/ml和20μg/ml浓度顺铂时FANCF和FANCL mRNA呈无变化和低表达(P<0.05)。细胞Calu-1经不同浓度顺铂处理后的FANCC和FANCF mRNA表达水平先增高后降低(P<0.05)。肺癌A549细胞中的FANCC、FANCF和FANCL蛋白表达水平随顺铂浓度增高呈进行性降低。而肺癌Calu-1细胞的FANCF蛋白表达水平在顺铂浓度5～10μg/ml范围内较对照组明显增高。结论:Calu-1细胞对顺铂的耐药性显著高于A549细胞,其机制之一可能是FA/BRCA途径中FANCF蛋白高表达的结果。     

Bcl2-siRNA提高人肺腺癌细胞A549/DDP对顺铂敏感性的研究

目的 探讨Bcl2-siRNA 对人肺腺癌顺铂耐药细胞株A549/DDP 对顺铂敏感性的影响.方法 在人肺腺癌顺铂耐药细胞株A549/DDP 细胞中转染bcl2-siRNA,48h 后加入不同浓度(0、3、6、9、12、15μg/ml) 新鲜配置的顺铂溶液,药物作用48h后,用CCK-8 法检测细胞生长抑制率.荧光实时定量PCR(Real time RT-PCR) 检测A549/DDP 细胞转染bcl2-siRNA 后Bcl-2mRNA 的变化,Western Blot 检测A549/DDP 细胞转染bcl2-siRNA 后Bcl-2 蛋白的变化.结果 在A549/DDP 细胞中转染bcl2-siRNA 后,细胞Bcl-2 mRNA 降低92.6%(P<0.05),Bcl-2 蛋白表达也明显降低,同时细胞对顺铂的敏感性增加57.8%(P<0.05).结论 Bcl2-siRNA 能降低A549/DDP 中Bcl-2 mRNA 及蛋白的表达,增加A549/DDP 对顺铂的敏感性.     

磷脂酰肌醇3激酶信号通路影响细胞凋亡在肺腺癌A549细胞群集耐药中的作用

目的探讨PI3K信号通路在肿瘤群集耐药中的作用.方法采用旋转培养瓶结合台式水浴恒温振荡器旋转培养的方法,进行肺腺癌A.549细胞体外立体培养,通过Western blot、原位细胞凋亡检测、四唑盐(MTT)比色法及血球计数器计数法检测Akt、Bcl-2、Bad的表达、细胞凋亡率及对阿霉素(ADM)敏感性.结果①立体培养细胞存在Akt的高表达;②同平面培养比较,立体培养细胞存在Bcl-2高表达,Bad低表达,细胞凋亡率低,对ADM敏感性低的特征,阻断PI3K信号通路后,两者差异明显缩小.结论PI3K信号通路可通过抑制细胞凋亡在肺腺癌A549细胞群集耐药中发挥作用,阻断PI3K信号通路可能逆转该耐药现象.     

黄芪多糖对人肺癌顺铂耐药株A549/DDP细胞耐药性的影响及其机制

探讨黄芪多糖（APS）对人肺癌顺铂（DDP）耐药A549/DDP细胞耐药性的影响,并阐明其可能的作用机制。     

异钩藤碱脂质体逆转人肺腺癌细胞A549／DDP对顺铂耐药的研究

目的研究异钩藤碱脂质体(Isorhynchophylline Liposomes,IR-L)在体外对人肺腺癌细胞系A549/DDP对顺铂(DDP)的逆转作用。方法采用MTT法检测药物细胞毒性作用及耐药细胞逆转倍数,电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)法测定细胞内顺铂浓度。结果IR-L无细胞毒浓度组(2.0μg/mL)使A549/DDP细胞对DDP的IC50由16.81 mg/L降至3.36 mg/L;低细胞毒浓度组(7.0μg/mL)的IC50降至2.34 mg/L;两组均明显提高DDP在A549/DDP细胞内的浓度,从0.92μg/L分别提高到4.62μg/L和6.89μg/L。结论IR能部分逆转A549/DDP细胞的MDR,其作用机制可能与增加细胞内药物浓度有关。     

人肺腺癌耐药细胞株A549/CDDP中相关泛素化蛋白质研究

目的研究肺腺癌中与耐药相关的泛素化或类泛素化蛋白质及其与耐药的关系。方法从经顺铂处理和未处理的A549细胞及其耐顺铂细胞株中分离泛素化、类泛素化蛋白质,通过1D SDS-PAGE和Chip HPLC-MS/MS分析鉴别蛋白,Western blot法验证质谱结果;MTT法检测细胞对顺铂的耐药性。结果鉴定出发生类泛素化修饰蛋白质-PKM2,并发现其在耐药细胞株中低表达;以蛋白酶体抑制剂MG132干预细胞后,PKM2表达上调;CDDP和MG132联合作用细胞后,细胞耐药性下降。结论细胞中PKM2表达水平与肿瘤细胞耐药程度呈负相关,PKM2受蛋白质类泛素化修饰-SUMO化修饰调节,提示PKM2可能与肿瘤耐药的发生密切相关。     

塞来昔布联合培美曲塞对人肺腺癌A549细胞株增殖、凋亡及PI3K/AKT信号通路 相关蛋白的影响

目的 探讨塞来昔布（Cele）联合培美曲塞（Pem）对人肺腺癌A549细胞株增殖、凋亡的影响及其可能的机制。方法 分别采用不同浓度的Cele和Pem作用于A549细胞,48?h条件下,CCK-8法检测光密度（OD）值,计算半抑制浓度（IC50）作为后续实验的药物浓度;实验分组：对照组（加入培养液）和实验组（分别加入IC50浓度的Cele、IC50浓度的Pem、IC50浓度的Cele+Pem）;Cele、Pem单独用药或者联合用药在不同时间条件下（24、36和48?h）作用于A549细胞,CCK-8法检测细胞增殖,择最佳作用时间作为后续实验的干预时间,金氏法评估两药之间的相互关系,流氏细胞仪检测细胞凋亡及周期分布,Western blotting检测AKT、p-AKT蛋白表达情况。结果 与对照组比较,Cele和Pem组呈浓度依赖性抑制A549细胞的增殖,但低浓度Cele组（5?μmol/L） 与对照组比较,差异无统计学意义（P?>0.05）。Cele IC50值为30.51?μmol/L,Pem IC50值为1.33?μmol/L;与对照组比较,Cele和Pem组呈时间依赖性抑制A549细胞增殖,且Cele+Pem组效果最佳。最佳干预时间为48?h,Cele与Pem联合抑制A549细胞增殖;Cele+Pem组与对照组、Cele组及Pem组比较,Cele+Pem组细胞凋亡率和G0/G1期细胞比例升高,p-AKT/GAPDH值下调（P?<0.05）,而AKT/GAPDH值各组间差异无统计学意义（P?>0.05）。结论 Cele与Pem联合可抑制A549细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与诱导细胞G0/G1期阻滞及抑制PI3K/AKT信号通路相关蛋白AKT活性相关。     

SIRT3/FOXO3通路在肺癌A549细胞放疗抵抗中的作用机制研究

目的 探讨沉默信息调节因子3(SIRT3)/叉头转录因子O3(FOXO3)通路在肺癌A549细胞放疗抵抗中的作用.方法 体外培养肺癌A549细胞,设置对照组(A549细胞)、放疗组(A549细胞+X射线照射)、SIRT3抑制剂(3-TYP)组(A549细胞+50μmol/L 3-TYP)、X射线+3-TYP组(A549...     

MicroRNA-98对A549/DDP细胞顺铂耐药性的影响

目的探讨MicroRNA-98（miR-98）对肺腺癌耐顺铂细胞系A549／DDP顺铂耐药性的影响。方法利用MicroRNA（miRNA）芯片及生物信息学筛选出miR-98。将miR-98质粒载体瞬时转染至A549／DDP细胞：M．rr检测细胞药物敏感性的改变。结果在A549／DDP细胞中miR-98表达水平下调。转染miR．98的A549／DDP细胞生长抑制率明显增高。结论miR-98能够增加肺腺癌耐药细胞株A549／DDP对顺铂的药物敏感性。