载多烯紫杉醇脂质微泡增强人胰腺癌BxPC3细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用

目的制备载多烯紫杉醇脂质超声微泡,并研究其联合超声靶向微泡破裂技术(UTMD)对人胰腺癌BxPC3细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用。方法采用机械振荡法制备载多烯紫杉醇的脂质超声微泡,检测其粒径、zeta电位、载药量、包封率等性质,MTT法检测IC50,CCK-8法检测细胞毒性作用,流式细胞术检测细胞周期,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率,TUNEL法检测细胞凋亡情况,并与单纯多烯紫杉醇药物组、多烯紫杉醇药物+超声组等进行比较。结果载多烯紫杉醇超声微泡平均粒径1.6μm,微泡的包封率为64.2%,平均载药量为16.1%;载多烯紫杉醇脂质微泡组的细胞毒性作用强于其他各组(P<0.01),细胞凋亡率高于其他各组(P<0.01);载多烯紫杉醇脂质微泡组G2/M期细胞增多,与其他组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论载多烯紫杉醇脂质微泡联合UTMD能够增加G2/M期细胞阻滞,增强对BxPC3细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用;载多烯紫杉醇脂质微泡有望成为一种治疗胰腺癌的新型药物载体。     

载多西紫杉醇脂质微泡联合超声靶向微泡破裂对人肝癌细胞增殖和凋亡影响的初步研究

目的：初步研究载多西紫杉醇脂质微泡（docetaxel-loaded lipid microbubbles,LDLM）联合超声靶向微泡破裂（ultrasound targeted microbubbles destruction,UTMD）对人SMMC-7721肝癌细胞增殖和凋亡的影响。方法：体外培养人SMMC-7721细胞,确定适宜的多西紫杉醇浓度,细胞分为6组,比较各组的细胞增殖抑制率、超微结构改变、凋亡率和细胞周期分布。结果：载药微泡+超声组的细胞增殖抑制率明显高于其他组,与其他各组相比差异有统计学意义（P=0.000）;电镜下观察载药微泡+超声组的凋亡细胞最多;流式细胞仪检测结果显示载药微泡+超声组的细胞凋亡率最高（P=0.000）,LDLM+US组G0/G1期细胞比例明显减少,为（0.79±0.27）%（P=0.000）,G2/M期细胞比例升高最明显,为（90.54±0.48）%（P=0.000）。结论：LDLM联合UTMD可抑制人SMMC-7721细胞的增殖、促进其凋亡,为后续进一步从蛋白、基因层面探索其作用的机制奠定了重要基础。     

DR5介导的载多烯紫杉醇靶向脂质微泡联合超声靶向微泡破裂对人肝癌HepG2细胞凋亡及增殖的影响

目的 探讨DR5介导的载多烯紫杉醇靶向脂质微泡联合超声靶向微泡破裂技术对人肝癌HepG2细胞凋亡以及Bcl-2、NF-κB、Caspase-8、DR5蛋白表达的影响。方法 体外培养HepG2细胞并分为9组：空白对照组（Con）,药物组（Drug）,药物联合超声组（Drug+US）,空白微泡组（MBs）,空白微泡联合超声组（MBs+US）,载药微泡组（DLLM）,载药微泡联合超声组（DLLM+US）,DR5介导的靶向载药微泡组（DR5-DLLM）,DR5介导的靶向载药微泡联合超声组（DR5-DLLM+US）。Drug、Drug+US、DLLM、DLLM+US、DR5-DLLM、DR5-DLLM+US组中的多烯紫杉醇以IC50的药物浓度（5 nmol/L）给药,Con组加入0.5 mL生理盐水,超声以0.5 W/cm2的声强辐照45s,分组处理后,继续培养细胞24 h,分别用CCK-8、TUNEL、流式细胞术检测各组细胞增殖、细胞凋亡和细胞周期,并检测Bcl-2、NF-κB、Caspase-8、DR5的mRNA和蛋白表达水平。结果 与其他组相比,DR5介导的靶向载药微泡联合超声组对HepG2细胞的增殖抑制作用、凋亡诱导作用和G2/M细胞周期阻滞作用更强（P<0.001）,且该组的Bcl-2 和 NF-κB mRNA 和蛋白表达水平明显降低（P<0.001）,而 DR5 和 Caspase-8 的 mRNA 和蛋白表达水平明显升高（P< 0.001）。结论 DR5介导的载多烯紫杉醇靶向脂质微泡联合超声靶向微泡破裂技术可通过下调Bcl-2和NF-κB表达、上调Caspase-8和DR5表达,从而增强对人肝癌HepG2细胞周期阻滞、细胞增殖抑制和细胞凋亡诱导作用,因此有望成为一种新型、有效的肝癌超声靶向治疗方法。     

Preparation and controlled-release characteristics of microbubbles loaded with paclitaxel and doxorubicin

目的 制备能同时携带2种抗肿瘤药物的脂质微泡,对其载药量以及体外控制释放能力进行研究.方法 以机械振荡法制备脂质微泡,嵌入法对紫杉醇进行装载以及生物素-亲和素体系连接阿霉素脂质体.粒径分析仪以及荧光显微镜对其表征分析,紫外分光光度法以及酶标仪分别测定紫杉醇和阿霉素载药量;在超声辐照条件下,促使微泡对紫杉醇以及阿霉素的释放,并测定各自药物释放量确定超声辐照微泡的药物释放效率.结果 粒径分析仪测得载药微泡其粒径约为(1.45±0.27) μm,荧光显微镜下能够观察到微泡周围显红色荧光;以3 mg固定磷脂用量,紫杉醇最大包封率为(54.64±2.98)％,每108个微泡载阿霉素量为(4.52±0.53)μg;当超声波机械指数为1.0时(MI=1.0),90％的微泡破碎以及紫杉醇和阿霉素释放率分别为15％和80％.结论 载药微泡在超声辐照作用下具有良好的药物释放能力,能够在超声图像辅助给药体系为肿瘤治疗提供一种有效的双药载体.     

载紫杉醇-阿霉素微泡的制备以及控制释放研究

目的制备能同时携带2种抗肿瘤药物的脂质微泡,对其载药量以及体外控制释放能力进行研究。方法以机械振荡法制备脂质微泡,嵌入法对紫杉醇进行装载以及生物素-亲和素体系连接阿霉素脂质体。粒径分析仪以及荧光显微镜对其表征分析,紫外分光光度法以及酶标仪分别测定紫杉醇和阿霉素载药量;在超声辐照条件下,促使微泡对紫杉醇以及阿霉素的释放,并测定各自药物释放量确定超声辐照微泡的药物释放效率。结果粒径分析仪测得载药微泡其粒径约为(1.45±0.27)μm,荧光显微镜下能够观察到微泡周围显红色荧光;以3 mg固定磷脂用量,紫杉醇最大包封率为(54.64±2.98)%,每108个微泡载阿霉素量为(4.52±0.53)μg;当超声波机械指数为1.0时(MI=1.0),90%的微泡破碎以及紫杉醇和阿霉素释放率分别为15%和80%。结论载药微泡在超声辐照作用下具有良好的药物释放能力,能够在超声图像辅助给药体系为肿瘤治疗提供一种有效的双药载体。     

低频超声联合微泡造影剂通过激活内质网应激逆转前列腺癌紫杉醇耐药

目的 探讨低频超声联合微泡造影剂辅助紫杉醇逆转前列腺癌耐药的作用和机制.方法 筛选超声辐照紫杉醇耐药前列腺癌细胞株PC-3R的非毒性照射时间;将PC-3R细胞随机分为对照组、紫杉醇组(PTX组)、低频超声组(LFUS组)、紫杉醇和低频超声组(PTX+LFUS组),以及紫杉醇和低频超声联合微泡剂组(PTX+ LFUS+ UCA组),分别进行干预.AnnexinV-FITC/PI双染法检测各组细胞凋亡;q-PCR法检测各组细胞Bcl-2和多耐药基因表达变化;Western blot检测各组细胞GRP78和c-jun蛋白表达.GRP78 siRNA转染PC-3R细胞,微泡和低频超声联合处理后,Western blot检测GRP78蛋白表达,Annexin V-FITC/PI双染法检测凋亡情况.结果 低频超声照射频率1 MHz,强度1.2 W/cm2,非毒性照射时间为10 s.与单纯应用紫杉醇相比低频超声辅助紫杉醇处理前列腺耐药细胞可显著提高细胞凋亡率(P＜0.01),联合微泡剂照射后,凋亡率进一步提高(P＜0.01),并下调Bcl-2和多耐药基因的表达.PTX+ LFUS+UCA组内质网应激相关蛋白GRP78的表达较PTX组和PTX+LFUS组升高,c-jun的表达下降(P＜0.01).应用siRNA干扰GRP78基因表达后,细胞凋亡率下降(P＜0.01).结论 低频超声联合微泡造影剂通过激活内质网应激,抑制其下游JNK/c-jun通路下调多耐药基因及凋亡抑制基因的表达,提高化疗药物诱导细胞凋亡的作用,逆转肿瘤细胞的耐药性.     

超声联合紫杉醇微泡对卵巢癌细胞株A2780/DDP增殖和凋亡的影响

目的：探讨超声联合紫杉醇微泡对人卵巢癌细胞A2780/DDP细胞的增殖和凋亡的影响。方法：将人卵巢癌细胞株A2780/DDP随机分为5组：对照组、紫杉醇组、紫杉醇+超声组、紫杉醇微泡组和紫杉醇微泡+超声组。采用噻唑蓝（Methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）法检测作用24、48 h和72 h后卵巢癌细胞的增殖活性,并用Hochst 33258和TUNEL染色法检测细胞凋亡情况。结果：MTT法检测显示紫杉醇微泡+超声组24、48 h和72 h抑制率分别为（37.20±2.01）%、（51.60±2.10）%和 （57.47±2.85）%,明显高于其他各处理组（P＜0.05）;Hochst 33258和TUNEL染色均显示紫杉醇微泡+超声组凋亡率最高,作用24 h后的凋亡率为(46.10±4.15)%,明显高于其余各组（P＜0.05）。结论：超声联合紫杉醇微泡能明显抑制人卵巢癌细胞A2780/DDP的增殖和诱导其凋亡。     

超声联合紫杉醇微泡对卵巢癌细胞株A2780/DDP增殖和凋亡的影响

目的:探讨超声联合紫杉醇微泡对人卵巢癌细胞A2780/DDP细胞的增殖和凋亡的影响。方法:将人卵巢癌细胞株A2780/DDP随机分为5组:对照组、紫杉醇组、紫杉醇+超声组、紫杉醇微泡组和紫杉醇微泡+超声组。采用噻唑蓝(Methylthiazolyl tetrazolium,MTT)法检测作用24、48 h和72 h后卵巢癌细胞的增殖活性,并用Hochst 33258和TUNEL染色法检测细胞凋亡情况。结果:MTT法检测显示紫杉醇微泡+超声组24、48 h和72 h抑制率分别为(37.20±2.01)%、(51.60±2.10)%和(57.47±2.85)%,明显高于其他各处理组(P<0.05);Hochst 33258和TUNEL染色均显示紫杉醇微泡+超声组凋亡率最高,作用24 h后的凋亡率为(46.10±4.15)%,明显高于其余各组(P<0.05)。结论:超声联合紫杉醇微泡能明显抑制人卵巢癌细胞A2780/DDP的增殖和诱导其凋亡。     

载多西紫杉醇脂质微泡联合超声靶向微泡破裂对兔VX2舌癌颈部淋巴转移瘤作用的初步研究

目的：初步探讨载多西紫杉醇脂质微泡（docetaxel-loaded lipid microbubbles,DLLM）联合超声靶向微泡破裂（ultrasound targeted microbubbles destruction,UTMD）对兔VX2舌癌颈部淋巴转移瘤的治疗作用。方法：成功建立兔VX2舌癌颈部淋巴转移瘤动物模型30只,随机分为A组、B组、C组、D组、E组、F组（n=5）：A组为单纯药物组、B组为单纯载药微泡组、C组为药物+超声组、D组为单纯微泡+超声组、E组为载药微泡+超声组、F组为对照组。治疗前后用超声测量各组动物颈部淋巴转移瘤大小,计算瘤体体积和抑瘤率;比较各组动物颈部淋巴转移瘤组织中CD34、微血管密度（microvessel density,MVD）及血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）的表达。结果：E组实验动物颈部淋巴转移瘤的抑瘤率高于其他组（P<0.05）,与其他各组相比差异有统计学意义;E组实验动物颈部淋巴转移瘤中CD34表达水平最低,MVD、VEGF表达水平显著低于其他各组（P<0.01）与其他各组相比差异有统计学意义。结论：DLLM联合UTMD不仅能在宏观表现上抑制兔VX2舌癌颈部淋巴转移瘤生长,更能一定程度上从分子生物学水平明显抑制兔VX2 舌癌颈部淋巴转移瘤的转移、生长。     

正电荷载基因纳米微泡的超声成像及靶向杀伤肝癌细胞的研究

目的：制备载基因纳米微泡并探讨其体内外超声成像和靶向杀伤肝癌细胞的效果。方法：采用薄膜水化?机械震荡法制备磷脂为壳膜、六氟化硫（suphurhexafluoride,SF6）气体为核心的正电荷纳米微泡,再偶联甲胎蛋白（alpha fetoprotein,AFP）启动子的单纯疱疹病毒胸苷激酶（simplex herpes virus thymidine kinase,HSV?TK）质粒DNA制备载基因纳泡。对其形态、平均粒径、zeta电位、DNA结合力、基因转染进行检测;然后对其体内外超声成像特性进行考察;最后采用CCK?8和流式细胞（FCM）分析检测载基因纳泡联合超声靶向微泡击破（ultrasound?targeted microbubble destruction,UTMD）技术对BEL?7402和SMCC?7721细胞的杀伤作用。结果：电镜显示纳泡呈圆球形壳核结构;平均水合粒径约为667 nm,带正电;琼脂糖凝胶电泳显示质量比≥5时,纳泡可有效结合质粒DNA;体内外超声显示载基因纳泡具有良好的超声对比增强特性;RT?PCR检测显示纳泡联合UTMD能使HSV?TK在AFP阳性肝癌细胞内表达。CCK?8 和FCM分析显示载基因纳泡+UTMD组能显著抑制BEL?7402细胞的增殖和诱导其凋亡,与其他组相比差异具有显著性（P < 0.05）。结论：具有良好超声成像功能的载基因纳泡能够高效靶向杀伤AFP阳性的肝癌细胞。     

超声介导携氧载紫杉醇脂质微泡抑制乏氧巨噬细胞HIF-1α表达

目的 探讨超声介导携氧载紫杉醇脂质微泡对乏氧巨噬细胞HIF-1 α表达的影响.方法 CoCl2化学诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7乏氧模型,将乏氧巨噬细胞分成6组(n=13):对照组、紫杉醇组(6×10-6 mol/L)、超声组(0.5W/cm2,30 s)、携氧微泡组(25μL)、携氧载紫杉醇脂质微泡组(25 μL)和超声介导携氧载紫杉醇脂质微泡组(25μL;0.5 W/cm2,30 s).MTT测定巨噬细胞活性、RT-PCR和Western blot检测各组干预后HIF-1 α的表达,ELISA试剂盒测定干预后上清液TNF-α和IL-6的含量.结果 CoCl2100 μmol/L作用12 h细胞活性抑制率低于8％,可成功诱导乏氧状态;超声介导携氧载紫杉醇脂质微泡抑制乏氧巨噬细胞HIF-1α基因和蛋白的表达并抑制TNF-α和IL-6的分泌(P＜0.05).结论 超声介导携氧载紫杉醇脂质微泡能抑制乏氧巨噬细胞HIF-1α表达,从而改善其乏氧状态.     

超声靶向微泡破坏联合溶瘤腺病毒治疗胰腺癌的实验研究

目的探讨超声靶向微泡破坏（UTMD）联合溶瘤腺病毒（oAd）治疗胰腺癌的疗效及相关机制。方法在C57BL/6小鼠右前肢皮下注射Panc-02细胞（2×10６个/只）,选取肿瘤体积在100~150mm3的小鼠55只,随机分为NC组（注射PBS100μL）、UTMD组（注射微泡溶液100μL,并行超声微泡破坏处理5min）、oAd组（注射108PFU/mLoAd溶液100μL）、oAd+微泡组（注射108PFU/mL微泡oAd混合液100μL）、oAd+UTMD组（注射108PFU/mL微泡oAd混合液100μL,并行超声微泡破坏处理5min）,每组11只。2d给药1次,共给药5次,2d记录1次肿瘤体积。第3次给药24h后每组随机取6只小鼠颈椎脱臼法处死,剥离肿瘤制成肿瘤切片及肿瘤细胞悬液。肿瘤切片行HE染色比较各组肿瘤组织坏死情况并计算坏死面积,E1A抗体染色观察oAd在各组肿瘤组织内分布情况,CD3抗体染色比较各组肿瘤内CD3+T细胞数,Tunel染色及流式细胞术分析各组小鼠肿瘤细胞凋亡情况。当小鼠肿瘤体积超过2000mm3时终止实验处死所有小鼠。结果在14d时终止实验,oAd+UTMD组和oAd组相比肿瘤体积增长显著减缓（P＜0.05）。oAd+UTMD组细胞质内oAd的E1A蛋白染色最深,oAd组染色最浅。oAd+UT-MD组和oAd组坏死面积与NC组比值分别是9.50±0.60和3.51±0.24,差异有统计学意义（P＜0.05）。含oAd的3组小鼠肿瘤内CD3+T细胞数均增加,oAd+UTMD组肿瘤内的CD3+T细胞数（196.33±12.58）明显高于oAd组（120.67±12.90,P＜0.05）。oAd+UTMD组的细胞总凋亡率及Tunel染色荧光分布比oAd组多。结论UTMD增强oAd对胰腺肿瘤细胞的杀伤作用,促进oAd在肿瘤内转染,协助CD3+T细胞在肿瘤内富集,同时诱导肿瘤细胞凋亡和坏死增加。     

超声定位辐照载药微泡抑制卵巢癌裸鼠皮下移植瘤增殖的实验研究

目的:探讨超声定位辐照载紫杉醇脂质微泡(Paclitaxel-carrying liposome microbubbles,PLM)的方法对裸鼠人卵巢癌移植瘤的抑瘤效应及可能的机制.方法:建立20只人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型,随机分成PLM辐照组、紫杉醇药物组、PLM组及生理盐水对照组,每组5只,分别给予不同处理,末次处理24 h后处死裸鼠,测量重量体积,计算抑瘤率;用免疫组织化学sP法检测肿瘤组织中细胞核相关抗原Ki-67并进行半定量分析;在透射电镜下对肿瘤细胞进行形态学观察.结果:与对照组比较,PLM辐照组及紫杉醇药物组对移植瘤的生长有明显的抑制作用,以PLM辐照组的抑瘤率最高(P<0.01);PLM辐照组及紫杉醇药物组肿瘤组织中Ki-67的阳性表达量均下降,前者下降更为明显(P<0.01).透射电镜下观察到PLM辐照组肿瘤凋亡细胞出现较多.结论:与紫杉醇药物组相比,超声破坏PLM的方法对裸鼠SKOV3卵巢癌皮下移植瘤具有较强的体内抑瘤效应,可能是通过诱导细胞的凋亡,抑制肿瘤细胞的增殖活性而延缓肿瘤生长的.     

超声靶向破坏微泡技术介导小鼠肝癌细胞株JNK1基因表达、细胞迁移和侵袭抑制

目的: 探讨应用超声靶向破坏微泡 (UTMD) 技术介导小鼠肝癌细胞株JNK1基因的表达、细胞迁移和侵袭抑制的作用,阐明其作用机制。方法: 构建并筛选RNA干扰效果最好的短发夹RNA(shRNA)。将小鼠肝癌细胞株Hca-F分为正常Hca-F细胞组、shRNA质粒组、脂质体组、超声微泡结合超声辐照组及脂质体结合超声微泡加超声辐照组。采用倒置荧光显微镜观察各组细胞转染率,荧光定量PCR和Western blotting 法检测JNK1基因mRNA和蛋白表达水平,CCK-8法检测各组细胞的细胞活性,应用Transwell 实验检测各组细胞的体外迁移能力。结果: 脂质体结合超声微泡加超声辐照组细胞转染率高于shRNA质粒组、脂质体组和超声微泡结合超声辐照组(均P<0.05),脂质体组和超声微泡结合超声辐照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。脂质体结合超声微泡加超声辐照组JNK1 mRNA和蛋白表达水平低于其他各组(P<0.05);脂质体结合超声微泡加超声辐照组细胞活性和平均穿膜细胞数均低于其他各组(P<0.05)。结论: UTMD技术结合脂质体转染法可以提高小鼠肝癌细胞株JNK1 shRNA的转染效率,增强其对基因表达、细胞活力、迁移和侵袭能力的抑制。     

多西紫杉醇PLGA/nHA复合微球的制备及体外释放研究

目的 制备多西紫杉醇(DTX)聚乳酸羟基乙酸(PLGA)/纳米羟基磷灰石(nHA)复合微球,研究纳米羟基磷灰石对复合微球的载药量,包封率和体外释放等性质的影响,以及抑制前列腺癌细胞的增长效应.方法 以疏水性抗癌药物多西紫杉醇作为模型药物,采用单乳化溶剂挥发法(S/O/W)制备PLGA/nHA-DTX复合微球,对载药前后的纳米羟基磷灰石进行透射电子显微镜观察和FTIR分析,并采用扫描电镜、激光粒度仪和高效液相色谱对微球的载药量、包封率、粒径及体外释药性质进行研究.结果 FTIR结果 表明纳米羟基磷灰石对多西紫杉醇有较强的吸附作用.PLGA/nHA-DTX复合微球的载药量和包封率分别为3.92%和88.7%,较之单纯的PLGA-DTX微球均有很大的提高.经过体外释放药物突释后,复合微球比单纯PLGA微球的药物释放慢.在第30 d时,复合微球和单纯的PLGA微球累积药物释率放分别为62.40%和72.70%.MTT实验结果 显示PLGA/nHA复合微球对癌细胞增长的抑制效果优于单纯PLGA微球和药物.结论 与单纯的PLGA-DTX微珠相比,由于纳米羟基磷灰石对多西紫杉醇存在较强的吸附作用,使PLGA/nHA-DTX复合微球的载药量和包封率得到了较大的提高,具有更好的药物缓释效果,抑制癌细胞增长的作用更有效.     

姜黄素联合多烯紫杉醇诱导PC-3细胞凋亡的实验研究

目的探讨姜黄素联合多烯紫杉醇对人前列腺癌PC-3细胞凋亡的影响及其作用机制。方法将体外培养的PC-3细胞分为对照组(仅加培养基)、姜黄素组(5.0μmol/L姜黄素处理)、多烯紫杉醇组(2.5nmol/L多烯紫杉醇处理)及联合组(5.0μmol/L姜黄素与2.5nmol/L多烯紫杉醇联合处理),作用24h。用流式细胞仪分析PC-3细胞凋亡率,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法分别检测Bcl-2及Bax mRNA和蛋白的表达情况。结果姜黄素和多烯紫杉醇均可诱导PC-3细胞凋亡,二者联合用药组的细胞凋亡率明显高于单药组(P<0.05);RT-PCR及Western blot显示姜黄素和多烯紫杉醇都可明显下调Bcl-2mRNA和蛋白的表达率,而上调Bax mRNA和蛋白表达率,且联合组细胞Bax与Bcl-2表达的改变更明显。结论姜黄素和多烯紫杉醇可能通过下调Bcl-2,上调Bax的表达协同诱导PC-3细胞的凋亡。     

低频超声联合微泡增强宫颈癌Hela细胞对顺铂敏感性的实验研究

目的 研究低频率、低声压超声激励微泡增强顺铂对宫颈癌Hela细胞的杀伤作用.方法 实验分为对照组(C组),顺铂组(P组),顺铂联合超声组(PU组),超声微泡组(UM组),超声微泡联合顺铂组(PUM组).采用频率1MHz、声压400 kPa的非聚焦超声联合脂质微泡及顺铂,按照分组处理对数期生长的宫颈癌Hela细胞.Hoechst33342染色后通过荧光显微镜观察并计算各组细胞的凋亡率;采用Cell Counting Kit-8 (CCK-8)法检测处理后各组细胞的增殖活性;对各组细胞行Annexin V-FITC/PI双染色后,运用流式细胞仪检测各组处理后24 h细胞凋亡情况.结果 测定Hela细胞对顺铂的敏感性,顺铂的IC50为4.882 μg/mL.通过流式细胞仪检测到超声微泡顺铂组(PUM)的细胞凋亡率为58.1％,较顺铂联合超声组(PU)增高40％,明显高于其余各组,组间差异有统计学意义(P＜0.05);CCK-8检测结果显示PUM组较其余各组细胞生长明显受到抑制;Hoechst33342染色后,PUM组典型凋亡细胞明显多于其余各组.结论 低频率低声压超声联合微泡可以增强顺铂对宫颈癌Hela细胞的杀伤作用,明显抑制Hela细胞生长,促进其凋亡.     

应用UTMD技术联合脂质体转染介导人肝癌细胞表达miRNA-122的研究

目的:探讨应用超声靶向微泡破坏(UTMD)技术和脂质体介导质粒miRNA-122在人肝癌HCCLM3细胞表达后细胞增殖、迁移和侵袭能力以及耐药性的变化。方法:构建pLMP-miR-122质粒。将对数期肝癌细胞株HCCLM3分组转染:A组(对照组)、B组(脂质体+质粒组)、C组(超声微泡+质粒+超声辐照组)、D组(脂质体+超声微泡+质粒+超声辐照组)。采用荧光定量PCR法检测pre-miRNA-122表达水平比较各组细胞转染效率,以CCK-8法检测细胞活性,应用划痕实验和Transwell实验检测细胞的体外迁移和侵袭能力,蛋白质免疫印迹检测蛋白表达情况。结果:HCCLM3细胞miRNA-122过表达后,细胞的增殖、迁移、侵袭能力与对照组比较均显著受到抑制,且对化疗药物敏感性增加,抗凋亡蛋白Bcl2表达下调。结论:UTMD技术结合脂质体转染法可以提高质粒转染人肝癌细胞HCCLM3效率,并且miRNA-122上调后可以明显抑制HCCLM3增殖、迁移和侵袭能力,有可能成为肝癌基因治疗的新靶点。     

反相高效液相色谱法检测紫杉醇微泡的载药量及包封率

目的 建立测定紫杉醇微泡药物含量及包封率的HPLC法.方法 采用HYPERSIL C18柱(4.6mm×200mm,5μm);流动相:甲醇:乙腈;水(体积比40:35:25);流速:1 mL/min;紫外检测波长:227nm.结果 在本色谱条件下紫杉醇与辅料及溶剂峰分离良好,紫杉醇在1.0 ～200.0 μg/mL范围内线性关系良好(r=0.9996,n:7),平均回收率为101.51%,RSD为1.96%.结论 该方法 准确町靠、简单快速,可用于紫杉醇脂质微泡含量及包封率的测定.     

LHRHa靶向紫杉醇脂质体的制备及体外抗肿瘤作用

目的:制备促黄体激素释放激素类似物(Luteinizing hormone-releasing hormone analogues,LHRHa)靶向紫杉醇脂质体(Paclitaxel liposomes,PTX-Lipo),研究其在体外增强紫杉醇(Paclitaxel,PTX)对卵巢癌A2780/DDP细胞的抑制作用。方法:采用薄膜超声法制备PTX-Lipo与LHRHa靶向紫杉醇脂质体(LHRHa-Paclitaxel liposomes,LHRHa-PTX-Lipo),用透射电镜考察脂质体形态;高效液相色谱法测定2种PTX-Lipo的包封率;激光共聚焦法通过卵巢癌A2780/DDP细胞对4-氟-7-硝基-2,1,3-苯并氧杂恶二唑荧光素的摄取检测来反映细胞对NBD-Lipo与NBD-LHRHa-Lipo的摄取情况;MTT法及细胞克隆形成实验检测LHRHa-PTX-Lipo体外对卵巢癌细胞的生长抑制情况。结果:制备LHRHa-PTX-Lipo的平均粒径123.4 nm,包封率在90%以上;A2780/DDP细胞对NBD-LHRHa-Lipo组的荧光摄取明显高于NBD-Lipo组;LHRHa-PTX-Lipo对A2780/DDP细胞的生长及克隆形成抑制明显高于PTX组及PTX-Lipo组(P<0.05)。结论:采用薄膜超声法制备的LHRHa-PTX-Lipo可使药物在靶部位聚集,增强药物对卵巢癌细胞的抑制作用。