金黄色葡萄球菌临床分离株肠毒素基因的检测

[摘要]目的 检测临床分离的金黄色葡萄球菌肠毒素基因,了解肠毒素基因的携带情况。方法 根据Genbank的序列设计合成金黄色葡萄球菌肠毒素基因A-F的引物,采用聚合酶链反应方法对随机收集的124株金黄色葡萄球菌肠毒素基因进行检测,并进行序列分析。结果 在124株受检的金黄色葡萄球菌中,116株检出肠毒素基因,检出率为93.5%,其中SEA、SEB、SEC、SED和SEF的检出率分别为90.5%、6.9%、61.3%、5.2%和25.9%,未检测出SEE基因。同时检出2种及2种以上的肠毒素基因的菌株有78株（67.2%）,以携带SEA+SEC、SEA+SEF和SEA+SEC+SEF基因为主,检出率分别为33.6%,7.8%,13.8%。序列分析显示所检出的肠毒素基因与Genbank上登陆的参考序列的同源性为97%～100%。结论 金黄色葡萄球菌临床分离株肠毒素基因携带率高,其中以携带SEA、SEC、SEF基因为主。     

临床标本金黄色葡萄球菌肠毒素基因分布及耐药性

目的 了解临床分离的金黄色葡萄球菌肠毒素基因分布及耐药情况。 方法 对金黄色葡萄球菌进行分离鉴定。采用聚合酶链反应检测肠毒素基因 (SEA~SEE),采用K-B法进行药敏试验。 结果 共收集到138株金黄色葡萄球菌,其中74株分离自痰液标本,占53.62%;从年龄≥50岁患者中分离得到102株菌株,占73.91%;金黄色葡萄球菌中肠毒素阳性为120株,检出率为86.96%,SEA、SEB、SEC和SEE阳性率分别为63.33%、46.67%、45.00%和37.50%,未检测出SED基因,分离自痰液标本菌株以携带SEA和SEC为主,而分离自创面分泌物菌株则以携带SEB和SEE为主;药敏 结果 显示金黄色葡萄球菌对青霉素（96.67%）、红霉素（81.67%）、氯霉素（74.17%）、四环素（71.67%）耐药较为严重,对呋喃妥因（6.67%）、复方磺胺甲恶唑（16.67%）、阿莫西林/克拉维酸钾（4.17%）则比较敏感,所有菌株对万古霉素、替考拉宁均敏感。 结论 临床分离的金黄色葡萄球菌肠毒素基因携带率较高;不同标本来源的金黄色葡萄球菌携带肠毒素基因型存在差异,对于临床金黄色葡萄球菌的感染治疗应根据药敏结果选择合理的抗生素。     

食源性金黄色葡萄球菌肠毒素及耐药性分析

目的了解乌鲁木齐市日常食品中分离出的金黄色葡萄球菌的肠毒素分布情况以及耐药性特征。方法金黄色葡萄球菌的分离以及肠毒素的鉴定依据国标GB 4789.10-2010《食品卫生微生物检验金黄色葡萄球菌检验》进行,利用法国梅里埃全自动微生物生化鉴定系统(VITEK2–compact)对菌株进行生化鉴定和药敏试验。同时对分离出的阳性菌株进行肠毒素测定及分型。结果 2013-2014年检测乌鲁木齐市日常食品样品6类823份,检测出38株金黄色葡萄球菌。通过对金黄色葡萄球菌肠毒素分型,共有12株产生肠毒素,携带率为31.6%。对阳性菌株进行耐药性分析,其中对万古霉素和头孢噻肟敏感,敏感率为100.0%;对青霉素的耐药程度较高,耐药率为71.1%;对诺氟沙星、氧氟沙星、甲氧苄啶敏感性较高,对其他几种抗生素都有不同程度的耐药。结论乌鲁木齐市食品中存在金黄色葡萄球菌潜在的危害,主要来源于肉制品;金黄色葡萄球菌的产毒能力较强,且耐药性较强,应合理用药。     

金黄色葡萄球菌肠毒素的检测和耐药性分析

目的了解临床分离的金黄色葡萄球菌(SA)产肠毒素(SE)的情况及耐药现状。方法对从临床标本中分离出的260株SA,用反向间接血凝试验检测其肠毒素,按2005年美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)的标准,用K-B法对260株SA进行药物敏感性试验,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)检测分别用检测头孢西丁及乳胶凝集检测PBP2a方法进行。结果260株SA中有172株携带肠毒素,占66.2%,主要为SEA型10.8%(28/260)、SEB型14.6%(38/260)、SEC型10.0%(26/260),同时携带二种或二种以上肠毒素的占23.8%(62/260);其中MRSA134株,全部携带肠毒素,且以SEA、SEB和SEC为主,分别为19.4%、16.4%和13.4%;甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)126株,携带肠毒素率为30.0%(38/126),以SEB为主,占9.5%。用头孢西丁及检测PBP2a的方法检测MRSA,检出率无显著意义(P>0.05);SA对临床常用的抗菌素除万古霉素及替考拉宁较敏感(100.0%敏感),其它的抗菌素存在多重耐药性,且MRSA的耐药性比MSSA的强。结论临床分离的SA株大部分都携带肠毒素,MRSA的带毒率及耐药性均高于MSSA;临床应重视SA肠毒素和MRSA的检测,合理使用抗菌素。     

金黄色葡萄球菌肠毒素基因定位研究

对40株产1种或1种以上肠毒素的金黄色葡萄球菌（以下简称金葡菌）进行分析，结果全部金葡菌肠毒素A（SEA，12/12）、金葡菌肠毒素C（SEC，19／19）、大部分金葡菌肠毒素B（SEB，23／28）的产生不因质粒的消除而消失，说明SEA、SEC的基因位点在染色体上。有5株金葡菌因质粒消除而失去产SEB的能力，其基因位点，可能在质粒或染色体上。4株金葡菌亦均因质粒消除失去产金葡菌肠毒素D的能力，其基因位点可能在质粒上。     

PCR技术检测金黄色葡萄球菌A型肠毒素基因的实验研究

目的建立一种检测金黄色葡萄球菌A型肠毒素的PCR方法，以期用于葡萄球菌肠毒素食物中毒的诊断。方法根据文献报道选择金葡菌SEA基因中比较保守的片段设计引物，优化各种工作条件，建立PCR检测方法，并鉴定其敏感性和特异性以及抗杂菌干扰性。扩增片段应用限制性核酸内切酶RsAI消化进行分析。结果所建立的方法敏感性和特异性均较好，有较强的抗杂菌干扰能力。结论应用PCR法检测SEA基因为SEA基因的诊断提供了病因学基础。     

金黄色葡萄球菌肠毒素A基因的克隆、纯化与鉴定

金黄色葡萄球菌肠毒素Ａ(ＳＥＡ)是金黄色葡萄球菌分泌的一种肠毒素 ,具有多种生物学活性。作为一种超抗原 ,ＳＥＡ可直接与抗原递呈细胞(ＡＰＣ)表面的ＭＨＣ -ＩＩ类分子及ＴＣＲβ链的Ｖ区结合 ,选择性地大量扩增和激活ＴＣＲＶβ3 和ＴＣＲＶβ1 1 Ｔ细胞[1 ] ,并诱导肿瘤敏感性细胞因子如ＩＦＮ -γ ,ＴＮＦ -α的产生 ,从而达到杀伤肿瘤细胞 ,抑制肿瘤生长的效果。基于此 ,ＳＥＡ被越来越多地应用于多种肿瘤的基因治疗中 ,尤其是传统治疗方法疗效不佳的恶性黑色素瘤的治疗中。 2 0 0 1年1 0月～ 2 0 0 2年 1月利用ＰＣＲ技术成功地从…     

金黄色葡萄球菌引起食物中毒的分析

目的 探讨以微生物学和分子生物学角度寻找金黄色葡萄球菌引起的食源性疾病的病因。方法 分别以食品卫生微生物检验国家标准（GB/T4789）分离鉴定菌株、K-B法进行药敏试验、mini-VIDAS全自动荧光酶标免疫测试仪进行葡萄球菌肠毒素检测和RiboPrinte全自动微生物基因指纹鉴定系统进行基因分型对一起由金黄色匍萄球菌引起的中毒事件进行分析。结果 从来源于各类共17份样品的菌株中，均检出葡萄球菌肠毒素，对青霉素G100％耐药，对其他10种抗生素耐药率低于30％，RiboPfinter全自动微生物基因指纹鉴定系统结果证实为一起同型金黄色葡萄球菌的爆发。结论 结合微生物学和分子生物学检测结果，确认这起食源性疾病是由产生肠毒素的金黄色葡萄球菌污染食物所引起。     

慢性鼻-鼻窦炎中金黄色葡萄球菌肠毒素基因研究

目的 检测国人慢性鼻-鼻窦炎患者鼻腔金黄色葡萄球菌肠毒素基因谱,探讨与国人慢性鼻-鼻窦炎发病相关的金黄色葡萄球菌肠毒素基因类型.方法 本实验取国人慢性鼻-鼻窦炎不伴鼻息肉组、慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉组及鼻中隔偏曲组患者中鼻道黏膜拭子进行金黄色葡萄球菌分离培养鉴定,通过PCR技术检测实验组每例患者金黄色葡萄球菌样本18种肠毒素基因的携带情况,并进行统计学分析.结果 3组患者金黄色葡萄球菌肠毒素基因均有较高的阳性检出率,但差异无统计学意义;3组患者阳性检出例数均较高的几种肠毒素基因为:seg、sem、sen、sei、seo、seu;金黄色葡萄球菌肠毒素基因seq在慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉患者中有16例     

Antimicrobial resistance and molecular epidemiological characteristics of clinical isolates of Staphylococcus aureus in Changsha area

Background  Increasing prevalence of Staphylococcus aureus (S. aureus), particularly methicillin-resistant S. aureus (MRSA) has been reported in China. In this study, we investigated the drug resistance characteristic, genetic background, and molecular epidemiological characteristic of S. aureus in Changsha.

Methods  Between January 2006 and December 2008, 293 clinical isolates of S. aureus were collected from 11 hospitals in Changsha and identified by the Vitek-2 system. All the isolates were verified as MRSA by PCR amplification of both femA and mecA genes. K-B disk method was used to test drug sensitivity of S. aureus to antibiotics. Pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) was performed for genotypic and homologous analysis of 115 isolates randomly selected from the original 293 clinical S. aureus isolates.

Results  S. aureus was highly resistant to penicillin, ampicillin, erythromycin, and clindamycin with resistant rates of 96.6%, 96.6%, 77.1%, and 67.2% respectively. All the isolates were susceptible to tecoplanin, vancomycin, and linezolid. MRSA accounted for 64.8% (190/293) of all the S. aureus strains. The 115 S. aureus isolates were clustered into 39 PFGE types by PFGE typing, with 13 predominant patterns (designated types A to M) accounting for 89 isolates. The most prevalent PFGE type was type A (n=56, 48.7%) and 100.0% of type A strains were MRSA. PFGE type A included 13 subtypes, and the most prevalent subtype was subtype A1 (46.4%, 26/56). Strains with PFGE type A were isolated from eight hospitals (8/11), and both subtypes A1 and A4 strains were isolated in a university hospital.

Conclusions  Clinical isolates of S. aureus in Changsha were resistant to multiple traditional antibiotics. There was an outbreak of PFGE type A MRSA in this area and the A1 subtype was the predominant epidemic clone. Dissemination of the same clone was an important reason for the wide spread of MRSA.     

临床分离金黄色葡萄球菌生物膜相关基因的PCR分析

目的 确定临床分离的金黄色葡萄球菌生物膜形成能力和生物膜相关基因之间的关系,为生物膜形成的机制研究提供依据.方法 96孔板番红染色法检测生物膜的形成,icaAD、icaBC、sar、agr和sigB的PCR扩增,并对产物进行测序和同源性比较.结果 27株金黄色葡萄球菌中共有17株形成了肉眼可见的生物膜,其中以X387和X409两株最明显;有22株扩增出icaAD和icaBC,全部菌株扩增出sar、agr和sigB.结论 ica是形成金葡菌生物膜的关键基因,但ica在形成生物膜过程中需要其他基因的协同作用.     

金黄色葡萄球菌L型产B型肠毒素及其基因的研究

目的: 探讨金黄色葡萄球菌(金葡菌)L型肠毒素B的产生量及其基因存在情况。方法: 将金葡菌诱导成稳定L型后,用ELISA法检测葡萄球菌肠毒素B(SEB),用PCR法检测SEB基因。结果: 金葡菌L型SEB的产生量与原菌比差别无显著性(P>0.05),PCR发现478bp的阳性条带。结论: 金葡菌变异为L型后SEB产生量不变,其基因也未丢失。     

超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A基因克隆与鉴定

目的克隆金黄色葡萄球菌肠毒素A（SEA）全长基因并构建其表达载体。方法采用PCR技术,从产SEA的葡萄球菌标准菌株ATCC13565基因组DNA中获得SEA全长序列共771bp,克隆入pUC57载体中,进行酶切及测序鉴定。结果克隆了SEA全长基因,经测序证实与Genbank中收录的SEA基因序列完全一致。结论本研究成功地克隆了SEA全长基因,为进一步研究SEA基因的靶向抗肿瘤研究奠定了实验基础。     

155例血培养金黄色葡萄球菌耐药分析

目的了解2003-2011年血培养中金黄色葡萄球菌的耐药性变迁,为临床治疗提供依据。方法采用北京伯泰技术开发中心血培养瓶采样,BacT/ALERT 3D全自动血培养仪进行培养,VITEK微生物仪进行鉴定,BIOMIC仪进行药敏测试,WHONET5.4软件进行耐药性分析。结果 2003年1月-2011年12月从临床送检的血培养标本分离出金葡菌155株,其中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin resistant staphylococcus aureus,MRSA）110株,MRSA在金葡菌中平均发生率为70.9%;9年间金葡菌对万古霉素、利奈唑胺未发现耐药株;对呋喃妥因、复方新诺明敏感性尚好,耐药率〈30%;对四环素、左氧氟沙星、克林霉素、环丙沙星、头孢唑啉、阿齐霉素、红霉素、青霉素耐药率均达50%以上,且表现为多药耐药,最高七重耐药（21.6%）;MRSA最高以八重耐药（34.6%）。结论血培养中金葡菌存在严重耐药,MRSA多药耐药性高,应加强MRSA耐药性监测。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌临床感染分布及耐药性分析

目的了解山西省长治医学院附属和平医院耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)临床感染分布和耐药现状。方法常规进行细菌的分离培养和鉴定,采用纸片扩散法行药物敏感试验;采用头孢西丁纸片扩散法行MRSA菌株鉴定;采用双纸片扩散法(D试验)检测诱导型克林霉素耐药情况。结果耐药率>50.0%的有8种,其中青霉素、红霉素、克林霉素(包括2株D试验阳性株)、阿奇霉素、环丙沙星、左旋氧氟沙星、庆大霉素耐药率均达到100.0%。敏感率>50.0%的仅4种,其中万古霉素、替考拉宁敏感率为100.0%。MRSA对12种抗菌药物共有6种耐药表型,其中对青霉素、红霉素、克林霉素、阿奇霉素、环丙沙星、左旋氧氟沙星、庆大霉素、复方新诺明是其主要的耐药模式。38株MRSA中检测出对红霉素耐药、克林霉素敏感菌株共2株,D试验阳性株2株(100.0%)。结论 MR-SA菌株表现为多重耐药,耐药性有上升趋势。万古霉素仍是目前对抗NRSA感染的首选用药。     

金黄色葡萄球菌耐药性变迁1279株分析

目的：了解金黄色葡萄球菌（金葡菌）耐药性的变迁，指导治疗。方法：采用ＫＢ法，对从血液和骨髓中分离的１２７９株金葡菌做１７种抗生素的药敏试验，并经８年动态观察。结果：金葡菌对各种抗生素的８年总耐药率为：复方新诺明（８２．３％）、新青霉素Ⅱ（７５．３％）、链霉素（６９．２％）、红霉素（６５．８％）、氨苄青霉素（６４．０％）、复达欣（６２．１％）、氯霉素（５６．０％）、卡那霉素（５４．３％）、庆大霉素（４６．２％）、氧哌嗪青霉素（３７．７％）、头孢哌酮（２７．５％）、丁胺卡那霉素（２６．４％）、先锋Ⅴ（２５．３％）、氟哌酸（２４．５％）、万古霉素（１．６％），均显示Ｐ＜０．００５；利福平为１．６％（Ｐ＜０．０５）；而头孢三嗪为２９．１％（Ｐ＞０．０５）。结论：金葡菌对上述１６种抗生素耐药性呈上升趋势，而头孢三嗪基本上呈稳定耐药状态。