垂体腺苷酸环化酶激活多肽对胰腺癌细胞的生长调控

1989年Miyata A.从绵羊下丘脑中提纯出一种含38个氨基酸残基的神经肽,此肽能激活大鼠脑垂体细胞的腺苷酸环化酶,故称之为垂体腺苷酸环化酶激活多肽(Pituitary Adenylate Cyclase Activating Peptide,PACAP)。相继又发现另一个C端被酰胺化的PACAP-27。1995年Falnokrug J.在产血管活性肠肽(VIP)肿瘤中发现了一种由PACAP前体衍生出的一个含29个氨基酸的多肽,称为PACAP相关肽(PACAP-     

垂体腺苷环化酶激活肽调节cAMP对胃癌细胞的作用

垂体腺苷环化酶激活肽(pituitary adenylatecyclase activating polypeptide-38,PACAP-38)是由38个氨基酸组成的一种新的胃肠激素,现已证实PACAP对胃肠道分泌、胰腺外分泌、胃肠道运动有调节作用,但它与胃肠道肿瘤有何关系,目前尚了解甚少。本研究观察了PACAP对人胃腺癌细胞MKN-45生长的影响。方法:MKN-45细胞株用含10％新生小牛血清(FBS)RPMI 1640常规消化传     

胃癌细胞垂体腺苷环化酶激活肽相关受体的分析

垂体腺苷环化酶激活肽(PACPA)属血管活性肠肽(VIP)家族的脑肠肽,它广泛分布于胃肠道,并参与许多胃肠功能的调节。在胃粘膜细胞及十二指肠、胰腺等组织细胞上存在有PACAP受体;研究亦发现,胰腺癌细胞膜上也表达PACAP受体,提示它可能与某些消化系肿瘤有一定关系,但是在胃癌细胞膜上是否存在PACAP受体,尚未见报道,本文对     

垂体腺苷酸环化酶激活肽受体在心血管组织及细胞表面的分布

目的 :了解垂体腺苷酸环化酶激活肽 (PACAP)受体在心血管组织、细胞表面的表达水平及分布差异。方法 :取SD大鼠肺作阳性对照 ,采用放射性配基 受体结合分析法检测SD大鼠心脏、主动脉及培养的猪血管内皮细胞 (EC)和平滑肌细胞 (SMC)膜上PACAP受体的分布状态。结果 :PACAP受体在心室组织的容量为(88.70 7± 4 6 .182 )fmol/mg蛋白 ,在主动脉为 (15 7.347± 84 .4 4 0 )fmol/mg蛋白 ,在肺则为 (1777.96 7± 88.712 )fmol/mg蛋白 ;在EC上的密度为 (6 6 99± 85 3.132 )结合位点 /细胞 ,在SMC上为 (2 784± 792 .4 30 )结合位点 /细胞。结论 :心血管组织PACAP受体数量低 ,显著低于肺组织 ;EC上的受体数目明显多于SMC。PACAP对心血管系统的强大作用不仅只通过其受体途径实现 ,可能与受体后作用途径的直接激活也有关。     

人胃癌细胞膜表皮生长因子受体的表达

用~(125)Ⅰ标记的人类表皮生长因子(~(125)Ⅰ-EGF)与分离制备的胃癌和癌旁组织细胞膜进行放射配体结合试验。胃癌细胞膜~(125)Ⅰ-EGF结合量为13.5±3.84fmol/mg膜蛋白,癌旁组织为6.15±1.65fmol/mg膜蛋白,两者差异显著(22例,t=8.25,P<0.01)。高分化组胃癌~(125)Ⅰ-EGF结合量显著低于低分化组胃癌(P<0.05)。Scatchard分析表明,胃组织细胞膜EGF受体是一种单一亲和力的受体。胃癌~(125)Ⅰ-EGF最大结合力(B_(max)=26.15±2.17fmol/mg膜蛋白)高于癌旁正常组织(B_(max)=19.87±2.81 fmol/mg膜蛋白),两者差异显著(t=2.95,P<0.05)。胃癌EGF受体的亲和力(K_D=11.13±0.22nM)大于癌旁正常组织(K_D=1.79±0.23nM),两者差异显著(t=3.59,P<0.05)。本研究表明,胃癌细胞膜表面EGF受体在数量和亲和力两方面都有显著改变,提示在胃癌的发生发展过程中,EGF受体与其配体所形成的自/旁分泌增殖环可能起着重要的生长调节作用     

甘氨酸延伸型胃泌素受体在结肠和结直肠肿瘤中的研究

目的建立甘氨酸延伸型胃泌素胞浆膜受体结合试验,并应用该方法检测甘氨酸延伸型胃泌素受体的部分特性及其在正常结肠和人结直肠肿瘤中的表达.方法用人结直肠肿瘤细胞株DLD-1建立胞浆膜制备方法,125I标记的甘氨酸延伸型胃泌素进行受体结合试验.结果胞浆膜受体结合试验的条件为5～10mg胞浆膜(离心25000r/min45min制备),37℃温育60min.正常Sprague-Dawley大鼠结肠粘膜和从结肠粘膜制备的胞浆膜有特异结合,而从完整结肠制备的胞浆膜无特异结合.胞浆膜甘氨酸延伸型胃泌素受体抑制50%结合的非标记配体浓度(IC50)为3.64μmol/L±1.93μmol/L;特异性胆囊收缩素(CCK)-A受体拮抗剂L364和特异性CCK-B受体拮抗剂L365不能拮抗该受体;非特异性受体拮抗剂氯苯酰色氨酸则能拮抗.结论甘氨酸延伸型胃泌素受体位于正常大鼠结肠粘膜、结肠粘膜和结直肠肿瘤细胞膜上,属单结合位点、低亲和力受体,不能被特异性CCK-A或CCK-B受体拮抗剂拮抗,是一种新受体.     

天花粉蛋白对胃癌多药耐药细胞的细胞毒和诱导凋亡作用

目的研究天花粉蛋白(TCS)对胃癌多药耐药细胞细胞毒和诱导凋亡作用,探讨其治疗胃癌多药耐药的可能性.方法采用生长曲线、MTT、电镜、TUNEL染色和流式细胞仪等技术,研究TCS对胃癌多药耐药细胞SGC-7901/VCR和MKN-45/VCR的增殖抑制和诱导凋亡作用.结果 TCS明显抑制胃癌多药耐药细胞SGC-7901/VCR和MKN-45/VCR的生长,其作用与对其本细胞的抑制作用相近.TCS对SGC-7901/VCR和MKN-45/VCR细胞有较强的细胞毒作用,TCS对SGC-7901和SGC-7901/VCR的IC50分别为28.6μg/mL和35.3 μg/mL;对MKN-45和MKN-45/VCR的IC50分别为和10.67μg/mL和14.61μg/mL.TCS作用于MKN-45细胞后,光镜和电镜下能见到典型的细胞凋亡形态学特征:细胞核染色质致密浓缩,染色质断裂、凋亡小体形成等.TUNEL检测显示耐药细胞凋亡指数为2.8%～11.5%,流式细胞仪DNA直方图上出现典型的亚二倍体"凋亡峰",耐药细胞凋亡率在4.73%～21.5%,细胞凋亡与TCS作用时间和浓度相关.结论 TCS对胃癌多药耐药细胞有较强的细胞毒和诱导凋亡作用,具有治疗胃癌多药耐药的潜在价值.     

红花黄色素及羟基红花黄色素A对Pindolol-β受体结合力的影响

目的:观察红花黄色素(SY)和羟基红花黄色素A(HSYA)对β受体结合力的影响。方法:以放射配基受体结合实验观察SY及HSYA拮抗125Ⅰ-s-(-)-Pindolol与大鼠心室肌细胞膜β受体特异性结合的作用。结果:SY及HSYA抑制125Ⅰ-s-(-)-Pindolol与大鼠心室肌细胞膜β受体的特异性结合具量效关系,SY的IC50为(17.5±1.3)g/L,KiSY值为12.9g/L;HSYA的IC50为(35.6±1.4)mmol/L,KiHSYA值为26.4mmol/L。结论:SY及HSYA对Pindolol-β受体结合力有一定的影响。     

胃腺癌细胞中血管活性肠肽自分泌调节作用及其机制

目的　研究胃腺癌细胞株SGC7901细胞中是否存在血管活性肠肽(VIP)的自分泌调节作用及其机制。方法　用RT PCR检测SGC7901细胞中VIP及其受体(VIPR1、VIPR2 )mRNA的表达,用免疫组化观察SGC7901细胞蛋白的表达,用放射免疫法测定细胞上清液中VIP含量,用MTT及细胞计数法观察外源VIP和VIP受体拮抗剂 [D p Cl Phe6, Leu17 ] VIP对SGC7901细胞增殖的影响。同时用RT PCR检测外源VIP及其受体拮抗剂孵育前后细胞c myc、鸟氨酸脱羧酶(ODC)mRNA的表达量变化。结果　SGC7901细胞不仅表达VIPmRNA,而且是VIP免疫反应阳性细胞,VIP免疫反应阳性颗粒主要分布在细胞质,少数在细胞核。细胞培养上清液中可检测到VIP蛋白,平均每 106 个细胞可分泌 (13. 15±8. 54)pg的VIP。SGC7901细胞也能表达VIPR1 和VIPR2 mRNA。10-5 ~10-12 mol/L外源性VIP孵育 24h后,细胞增殖无显著影响 (P>0. 05),而 10-5 ~10-8 mol/L拮抗剂显著促进SGC7901细胞增殖(P<0. 05)。10-6 mol/L外源性VIP孵育 24h后,SGC7901细胞c myc及ODCmRNA的表达量显著下降(RM /β: 0. 816±0. 049比 0. 901±0. 054,P<0. 01;RO/β: 0. 737±0. 060比 0. 830±0. 051,P<0. 01);而10-6 mol/L[D p Cl Phe6, Leu17 ] VIP使细胞c myc及ODCmRNA的表达量显著升高 (RM/β: 0. 950±0     

NS-398联用AG-041R对胃癌细胞的协同抑制作用机制

目的:研究特异性COX-2抑制剂NS-398和CCK-B/胃泌素受体拮抗剂AG-041R对人胃癌细胞的抑制作用机制.方法:以人胃癌细胞株MKN-45为研究对象,采用MTT法、流式细胞仪(FCM)、RT-PCR观察NS-398,AG-041R及联合应用对MKN-45细胞增殖、凋亡百分率及癌基因c-MycmRNA表达的影响.结果:NS-398和AG-041R均在一定范围(12-72h;NS-398:1×10-8-1×10-4mol/L;AG-041R:1×10-8-1×10-5mol/L)内呈浓度和时间依赖性地抑制MKN-45细胞的增殖,AG-041R(1×10-6mol/L)、NS-398(1×10-5mol/L)作用72h抑制率分别为42.1%,41.8%,二者联合应用有协同抑制胃癌细胞增殖效应,且随着作用时间延长而增强.FCM显示NS-398(1×10-5mol/L)、AG-041R(1×10-6mol/L)和二者联合作用于MKN-45细胞72h后,细胞凋亡率分别为9.57%±0.60%、10.25%±0.68%和20.83%±1.90%,与对照组(1.67%±0.76%)相比细胞凋亡率均显著增高(P<0.01),联合用药组细胞凋亡率显著高于单一用药组(P<0.01).RT-PCR显示NS-398、AG-041R及联合应用均显著抑制MKN-45细胞c-MycmRNA的表达,联合用药组抑制效应显著高于单一用药组.结论:联合应用NS-398和AG-041R剂量、时间依赖性地抑制MKN-45细胞增殖,促进MKN-45细胞凋亡,抑制癌基因c-MycmRNA的表达,具有协同作用.