黄芩苷通过硫氧还原蛋白介导对SH-SY5Y细胞保护作用

目的 研究黄芩苷对过氧化氢(H₂O₂)损伤后的成人神经细胞瘤细胞母细胞SH-SY5Y细胞的影响,进一步探讨黄芩苷保护SH-SY5Y细胞的作用机制. 方法 不同浓度黄芩苷预先处理正常培养的SH-SY5Y细胞24 h,200 μmol.L^-1 H₂O₂损伤上述SH-SY5Y细胞24 h,采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术检测各实验组细胞的硫氧还原蛋白(Trx)mRNA的表达;采用酶联免疫吸附测定(ELISA)技术检测各实验组细胞的Trx 蛋白的表达. 结果 黄芩苷在50～300 μmol.L^-1浓度范围内对SH-SY5Y细胞无细胞毒作用,0,50,100和200 μmol.L^-1黄芩苷组SH-SY5Y细胞存活率分别为(0.410±0.096),(1.304±0.101),(0.899±0.089)和(0.609±0.023),50,100和200 μmol.L^-1均明显高于H₂O₂ 损伤组(0.339±0.073)的存活率,正常组,H2O2损伤组,50 ,100和200 μmol.L^-1黄芩苷组Trx mRNA的表达水平分别为(1.023±0.014),(0.021±0.004),(0.054±0.005),(0.071±0.013)和(0.042±0.004);正常组Trx蛋白表达水平为(26.230±0.857),H₂O₂损伤组为(19.230±0.982),50,100和200 μmol.L^-1黄芩苷组Trx蛋白表达水平分别为(22.440±0.888),(23.020±1.070),(22.330±1.067). 结论 黄芩苷对H₂O₂损伤后的SH-SY5Y细胞有保护作用,其作用机制可能与黄芩苷抑制H2O2诱导的Trx表达下调作用有关,起到抗氧化应激及抗细胞凋亡的作用.     

黄芩苷对SH-SY5Y细胞损伤的Bcl-2和Bcl-xL mRNA基因表达的影响

目的 探讨黄芩苷对过氧化氢(H₂O₂)诱导的SH-SY5Y细胞损伤的Bcl-2和Bcl-xL mRNA表达的影响. 方法 建立人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的体外H₂O₂损伤模型,采用噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度黄芩苷对SH-SY5Y细胞存活率的影响,采用Real-time PCR法检测各组细胞的Bcl-2和Bcl-xL表达水平的变化. 结果 50,100,200 μmol.L^-1黄芩苷组细胞存活率分别为130.4%,89.9%和60.9%,H₂O₂损伤组细胞存活率为33.9%,50,100 μmol.L^-1黄芩苷组与H₂O₂损伤组比较,差异有统计学意义(P<0.01). 50,100,200 μmol.L^-1黄芩苷组Bcl-2 mRNA表达量分别为(11.48±0.48),(7.37±1.57),(7.39±2.01),H₂O₂损伤组为(5.84±0.58);50,100,200 μmol.L-1黄芩苷组Bcl-xL mRNA表达量分别为(19.96±2.22),(11.36±3.94),(13.07±2.37),H₂O₂损伤组为(7.95±0.58),50 μmol.L^-1组Bcl-2 和Bcl-xL mRNA与H^₂O^₂损伤组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05). 结论 黄芩苷对H₂O₂诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用,可能与黄芩苷上调Bcl-2和Bcl-xL的表达而起到抗凋亡的作用有关.     

黄芩苷对H_2O_2诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用及其对Trx表达的影响

目的探讨黄芩苷对H2O2诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用及其作用机制。方法采用体外培养细胞的方法,建立SH-SY5Y细胞H2O2损伤模型。分设药物组(50,100,200μmol/L)、H2O2损伤组、阴性对照组。采用MTT法检测细胞活力,采用实时荧光定量PCR法检测各组细胞的Trx表达的变化。结果同H2O2损伤组比较,黄芩苷能明显减轻H2O2引起的SH-SY5Y细胞的损伤,同时Trx表达升高。结论黄芩苷对H2O2诱导的SH-SY5Y细胞损伤具有明显的保护作用,其作用机制可能是黄芩苷通过上调Trx表达,起到抗氧化作用,继而起到抗凋亡的作用。     

蜗牛多肽混合物抗过氧化氢诱导的SH-SY5Y细胞损伤的作用

目的观察蜗牛多肽混合物对过氧化氢(H2O2)诱导SH-SY5Y细胞氧化损伤的抑制作用及其可能机制。方法用H2O2诱导SH-SY5Y细胞损伤,MTT法测定细胞存活率;39～1250 mg·L-1蜗牛多肽混合物处理后,Hoechst染色检测细胞凋亡;罗丹明123染色检测线粒体通透性;细胞免疫化学技术和Western blot技术分别检测增殖细胞核抗原(PCNA)和脑源性神经营养因子(BDNF)的表达。结果 1.54 mmol·L-1H2O2可诱导SH-SY5Y细胞凋亡。用39～156 mg·L-1浓度的蜗牛多肽混合物处理后,H2O2诱导的SH-SY5Y细胞凋亡数量明显减少,同时可减少H2O2引起的线粒体通透性增加,升高PCNA与BDNF的表达(P﹤0.01)。结论蜗牛多肽混合物可抑制过氧化氢诱导的SH-SY5Y细胞凋亡,其作用机制可能与其增加细胞PCNA与BDNF的表达有关。     

类叶升麻苷对鱼藤酮致SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用

目的探讨类叶升麻苷对鱼藤酮致多巴胺能神经元SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用及其机制。方法采用MTT法检测细胞存活率,以荧光染料Hoechst33342染色分析细胞核的形态学变化,用流式细胞仪定量分析细胞凋亡峰,以2,′7′-二氢二氯荧光黄双乙酸钠(DCFH-DA)为标记探针检测细胞内活性氧的产生。结果①0.5μmol.L-1的鱼藤酮处理SH-SY5Y细胞48 h能引起细胞存活率的显著下降;诱导细胞发生凋亡,凋亡率达47.39%;大部分细胞胞体皱缩,突起缩短消失或断裂;染色质皱缩、浓缩、断裂及形成凋亡小体;细胞内活性氧水平上升。②预先用盐生肉苁蓉提取物类叶升麻苷(10,20或40 mg.L-1)处理细胞6 h,可提高细胞存活率;明显改善鱼藤酮引起的细胞形态学变化;流式细胞仪检测凋亡率分别降低到25.87%,23.97%,10.45%;以DCFH-DA为标记探针检测到20 mg.L-1类叶升麻苷可明显抑制鱼藤酮引起的细胞内活性氧产生。结论类叶升麻苷能抑制鱼藤酮诱导的多巴胺能神经元SH-SY5Y细胞凋亡,其神经细胞保护作用可能与降低细胞内活性氧水平有关。     

西红花苷对缺氧复氧损伤的SH-SY5Y细胞线粒体动力学的影响

目的探讨西红花苷对缺氧缺糖(oxygen-glucose deprivation,OGD)损伤的人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)线粒体的保护作用及可能的机制。方法 SH-SY5Y细胞OGD损伤同时给予药物,4 h后复氧2 h,测定线粒体膜电位、胞内钙离子浓度;免疫荧光、免疫印迹法检测细胞线粒体Drp1、Opa1、Mfn1、Mfn2含量变化。结果 SH-SY5Y细胞缺氧后线粒体膜电位明显降低,胞内钙离子浓度升高;西红花苷明显提高OGD损伤引起的SH-SY5Y细胞线粒体膜电位,降低胞内钙离子浓度,抑制Drp1表达量,上调Opa1表达量。结论西红花苷对OGD损伤的SH-SY5Y细胞具有明显的保护作用,恢复其线粒体功能,起保护作用机制可能与抑制线粒体分裂融合异常有关。     

红花甙对过氧化氢诱导SH-SY5Y细胞凋亡保护作用的实验研究

目的研究红花甙(carthamin)对过氧化氢(H2O2)诱导神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞(SH-SY5Y cells)凋亡的影响,并探讨其机制。方法实验分为空白对照组、H2O2损伤组及红花甙高、中、低剂量组。用H2O2作用于SH-SY5Y细胞,使其发生凋亡。MTT法检测SH-SY5Y细胞活性,比色法测丙二醛(MDA)的含量,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果与损伤组比较,随着红花甙剂量的增加,SH-SY5Y细胞存活率提高(P<0.01),MDA生成量减少(P<0.01),凋亡率下降(P<0.05)。结论红花甙对H2O2诱导SH-SY5Y细胞凋亡有保护作用,与红花甙能抗氧化、降低细胞凋亡有关。     

黄芩苷抗癫痫作用及对神经肽Y受体Y1在海马区表达的影响

目的:观察黄芩苷对癫痫模型行为学及海马区神经肽Y受体Y1 (NPY Y1R)表达的影响.方法:将40只成功建立癫痫模型的SD大鼠随机分为模型组、丙戊酸钠(15 mg·kg-1)组、低剂量黄芩苷(50 mg·kg-1)组和高剂量黄芩苷(100 mg·kg-1)组,另设一正常组,每组10只.治疗观察4周,记录大鼠发作潜伏期...     

梓醇对乳胞素诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护作用

目的探讨梓醇对蛋白酶体抑制剂乳胞素诱导的人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞损伤的保护作用及其可能机制。方法梓醇10μmol·L-1预处理SH-SY5Y细胞1 h后,加入乳胞素10μmol·L-1继续处理24 h。倒置显微镜下观察细胞形态的变化,MTT比色法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Hoechst33258染色观察细胞核形态的变化,酶联免疫吸附检测细胞内20S蛋白酶体含量。结果与正常对照组相比,梓醇10μmol·L-1对细胞存活率、形态和凋亡及20S蛋白酶体含量无显著差异;乳胞素10μmol·L-1组细胞存活率为(72.0±1.8)%,明显降低(P<0.05),细胞凋亡率为(64.7±2.6)%,明显增高(P<0.05)。Hoechst33258染色发现梓醇细胞核形态改变,出现凋亡小体;细胞内20S蛋白酶体含量降低60%,差异具有统计学意义(P<0.05)。与乳胞素10μmol·L-1组相比,梓醇10μmol·L-1预处理组细胞存活率(87.9±2.2)%明显增高(P<0.05),细胞凋亡率为(51.4±1.5)%,明显降低(P<0.05)。Hoechst33258染色发现,梓醇细胞核形态明显改善;细胞内20S蛋白酶体含量升高了1.9倍,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论梓醇对乳胞素诱导的SH-SY5Y细胞损伤具有保护作用,其机制可能与梓醇提高SH-SY5Y细胞内20S蛋白酶体含量有关。     

毛蕊花苷对MPP~+诱导的SHSY5Y细胞凋亡的保护作用

目的观察肉苁蓉提取物毛蕊花苷对MPP+诱导的SHSY5Y细胞损伤的影响。方法用MTT法检测细胞存活率,以流式细胞仪检测细胞内活性氧的产生和线粒体膜电位的变化,以及细胞凋亡的发生,并用荧光酶标仪测定caspase-3的活性,蛋白印迹测定Bcl-2的表达水平。结果200μmol·L-1MPP+处理细胞24h降低细胞的存活率;诱导细胞发生凋亡,凋亡率达38.9%;细胞内活性氧水平及caspase-3的活性升高;而线粒体膜电位却明显降低。而预先给予0.1、1或者10mg·L-1浓度的毛蕊花苷处理细胞12h,可提高细胞存活率;流式细胞仪检测凋亡率分别降低到29.5%,15.3%和8.6%,而且细胞内活性氧的水平明显降低,并可逐渐恢复线粒体的高能量状态;caspase-3的活性不断降低,Bcl-2的表达水平增高,并呈现一定的剂量依赖性。结论毛蕊花苷能抑制MPP+诱导的SHSY5Y细胞凋亡,其神经细胞保护作用可能与其降低细胞内活性氧水平,维持线粒体膜电位的高能状态和抑制caspase-3的活性有关。     

人参蛋白协同H2O2诱导SH-SY5Y细胞氧化损伤

目的:探讨人参蛋白(GP)协同H₂O₂诱导人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)氧化应激损伤的作用,并筛选二者的最佳联合浓度。方法:首先采用不同浓度H₂O₂诱导SH-SY5Y细胞氧化损伤,然后采用不同浓度GP联合200 μmol·L^-1H₂O₂诱导SH-SY5Y细胞氧化损伤;采用倒置荧光显微镜观察细胞形态,MTT法检测细胞存活,Hoechst 33342染色法检测细胞凋亡。结果:SH-SY5Y细胞经GP-H₂O₂作用后,细胞数量减少,轴突缩短或消失,胞体变圆、缩小,大小不等;细胞存活率降低;Heochst 33342染色呈现高蓝光;GP 60 mg·L^-1+H₂O₂ 200 μmol·L^-1为联合诱导氧化应激损伤的最佳浓度。结论:GP有协同H₂O₂诱导SH-SY5Y细胞氧化损伤的作用,抑制细胞增殖、促进细胞凋亡是其可能的作用机制。     

13-甲基十四烷酸对H2O2诱导SH-SY5Y神经细胞损伤的保护作用

目的：探讨13-甲基十四烷酸（13-MTD）对过氧化氢（H2O2）诱导SH-SY5Y神经细胞损伤的影响。方法：采用体外细胞培养的方法,建立SH-SY5Y神经细胞H2O2损伤模型。光镜观察细胞形态,SRB法检测细胞存活率,AO/EB双重染色法检测细胞凋亡,MTT法检测线粒体活性。结果：与正常对照组相比,H2O2损伤模型组细胞出现明显病理改变,细胞存活率、线粒体活性均显著下降（P〈0.01）,细胞凋亡率显著升高（P〈0.01）;13-MTD10、20、40μg/mL可显著提高细胞存活率（P〈0.01）;13-MTD5、10、20μg/mL可显著下调细胞凋亡率（P〈0.01）;13-MTD5、10、20、40μg/mL可显著提高细胞MTT代谢率（P〈0.01）;且存在一定量效差异（P〈0.05,P〈0.01）。结论：不同剂量的13-MTD对H2O2诱导的SH-SY5Y神经细胞氧化损伤具有保护作用。     

氧化应激在鱼藤素致SH-SY5Y细胞神经毒性中的作用

目的研究氧化应激与鱼藤素致神经毒性的相关性,为后续鱼藤素的结构改造和联合用药提供机制基础。方法将鱼藤素(1.56~100μmol·L-1)与SH-SY5Y细胞共孵育培养24~72 h,采用CCK-8法测定细胞存活率;比色法测定乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)漏出量、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GPx)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的活力;流式细胞术检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量;免疫印迹法检测细胞中MEK、EGF、RAS、CREB蛋白的表达情况。结果鱼藤素对SH-SY5Y细胞增殖有抑制作用,且呈浓度和时间依赖性(P<0.05)。鱼藤素损伤细胞后,LDH漏出量、MDA和ROS含量明显增加,GPx和SOD的活力下降(P<0.05)。同时MAPK/ERK信号通路中MEK、EGF、RAS、CREB蛋白水平出现不同程度的下调。结论鱼藤素致SH-SY5Y神经细胞的损伤与氧化应激密切相关,MAPK/ERK信号通路可能在其中起介导作用。     

壁虎粗多肽对SH-SY5Y细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究壁虎粗多肽(GCPs)对人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞增殖、凋亡能力的影响.方法 用不同浓度GCPs(0,0.08,0.12,0.16,0.20,0.24,0.32 mg·mL-1)分别处理SH-SY5Y细胞24,48,72 h,用噻唑蓝(MTT)比色法检测SH-SY5Y细胞增殖能力的变化,根据MTT结...     

牛蒡苷元对H89诱导的SH—SY5Y细胞损伤的保护作用

目的：考察牛蒡苷元对H89诱导的人神经母细胞瘤SH—SY5Y细胞损伤的保护作用。方法：用蛋白激酶A抑制剂H89处理SH—SY5Y细胞．建立细胞损伤模型。将SH—SY5Y细胞分成正常组（正常细胞）、模型组（经H89处理的细胞）、H89＋牛蒡苷元组（经H89处理后给予牛蒡苷元处理的细胞）和H89＋丹酚酸B组（阳性对照组,经H89处理后给予丹酚酸B处理的细胞）。采用MTT法检测细胞活力、免疫荧光细胞化学法检测细胞中β-淀粉样肽和神经营养因子-3的表达以及Hoechst33258染色法检测细胞凋亡率。结果：H89诱导的细胞损伤模型造模成功。牛蒡苷元在低浓度（0．5μmol·L-1）用最佳,与模型组相比,H89＋低浓度显著提高（P〈0．01）,细胞中β-淀粉样肽的表达下调5．17％（P〈0．05）,而神经营养因子-3的表达上调80．54％（P〈0．01）．凋亡细胞百分比也显著降低（P〈0．05）。结论：低浓度牛蒡苷元对H89诱导的SH-SY5Y细胞损伤具有显著保护作用。     

葫芦素B抑制神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖机制的初步研究

目的研究葫芦素B对神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖的影响及其作用的分子机制。方法通过MTT法检测葫芦素B对SH-SY5Y细胞增殖的影响,流式细胞仪检测葫芦素B对SH-SY5Y细胞凋亡和生理水平上活性氧含量、线粒体膜电位的影响。Hoechst 33258染色检测药物处理前后细胞形态的变化。Westernblot检测葫芦素B处理SH-SY5Y细胞24 h前后Bcl-2、Bax、p21、p53等蛋白合成的变化。结果实验浓度范围内,葫芦素B可时间与浓度依赖性地抑制SH-SY5Y细胞增殖;浓度依赖性地诱导SH-SY5Y细胞凋亡、活性氧水平升高和线粒体膜去极化;在蛋白水平上,葫芦素B能诱导凋亡抑制蛋白Bcl-2下调,促凋亡蛋白Bax、p21、p53上调。结论葫芦素B在体外能显著抑制SH-SY5Y细胞增殖,这一影响可能通过诱导细胞凋亡、ROS积累、线粒体膜去极化及其相关蛋白表达变化来实现。