miR-199-3p过表达调控肺癌A549细胞生长、侵袭及上皮间质转化机制研究

目的 探究miR-199-3p过表达靶向抑制SOX5对肺癌A549细胞生长、侵袭及上皮间质转化(EMT)的影响。方法 荧光素酶实验检测miR-199a-3p与SOX5靶向关系。构建SOX5 pcDNA载体过表达SOX5,将miR-199-3p与pcDNA-SOX5单独或联合转染A549,将细胞随机分为对照组(Control组)、miR-199-3p过表达组(mimic组)、SOX5组和mimic+SOX5组进行后续实验。克隆形成法检测肺癌A549细胞增殖情况,流式细胞术检测肺癌A549细胞凋亡情况,Transwell检测肺癌A549细胞侵袭能力;荧光显微镜观察肺癌A549细胞EMT形态学变化;蛋白免疫印迹试验检测Ki-67、PCNA、Bax、Bcl-2、Caspase-3、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平。结果 与SOX5组比较,mimic+SOX5组细胞克隆形成率降低,Ki-67、PCNA蛋白水平降低,细胞凋亡率升高,Bax/Bcl-2和cleaved Caspase-3/Caspase-3比值升高,细胞侵袭数降低,E-cadherin蛋白水平...     

转化生长因子β_2对人视网膜色素上皮细胞间质转化的影响

目的研究转化生长因子(TGF)-β_2对人视网膜色素上皮细胞间质转化的影响。方法体外培养的ARPE-19细胞,经不同浓度的TGF-β_2(0、1、5、10ng/mL)处理24h后,免疫荧光染色观察细胞形态学改变;Transwell小室观察细胞迁移能力的变化;实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)及蛋白质印迹法(Western blotting)方法检测上皮细胞标记物E-cad及间质细胞标记物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(FN)及Ⅰ型胶原蛋白(Col-Ⅰ)的基因及蛋白表达量。结果随着TGF-β_2浓度的增加,鬼笔环肽免疫荧光染色发现细胞的丝状伪足增多,并且细胞内的应力纤维也变得粗壮而且排列有序;Transwell小室结果显示:跨膜细胞数随TGF-β_2浓度增加而逐渐增加,组间差异有统计学意义(F=37.45,P<0.05);E-cad mRNA和蛋白的表达随TGF-β_2的浓度增加逐渐下降,组间差异有统计学意义(P均<0.05);α-SMA、FN及Col-Ⅰ的mRNA和蛋白的表达随TGF-β_2浓度的增加而逐渐增高,组间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论TGF-β_2可能通过促进RPE细胞发生EMT,导致Ⅰ型胶原蛋白和纤维连接蛋白等细胞外基质大量沉积,从而在增生性玻璃体视网膜病变(PVR)的发病过程中发挥重要作用。     

大蒜素抑制胃癌细胞上皮-间质转化作用及其机制

目的研究大蒜素对胃癌细胞上皮-间质转化(EMT)的抑制作用及其机制。方法以含10%胎牛血清的RPMI 1640培养基培养人胃癌细胞株HGC-27,分别采用大蒜素(3μg·L^-1)联合白细胞介素6(IL-6,50 ng·mL^-1)、大蒜素(3μg·L^-1)、IL-6(50 ng·mL^-1)处理,另设空白对照组。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测各组胃癌HGC-27细胞E-cadherin、vimentin及核因子-κB(NF-κB)P65的mRNA表达;Wst-3-2H-四唑单钠盐(CCK-8)实验、细胞划痕实验及细胞侵袭实验检测各组胃癌HGC-27细胞增殖、迁移和侵袭能力。结果RT-qPCR显示,与空白对照组比较,大蒜素组E-cadherin mRNA表达上调,vimentin及NF-κB mRNA表达下调;IL-6组E-cadherin mRNA表达下调,vimentin及NF-κB P65的mRNA表达上调(均P<0.05)。与IL-6组比较,大蒜素联合IL-6组E-cadherin mRNA表达上调,vimentin与NF-κB mRNA表达下调(均P<0.05)。CCK-8实验结果显示,与空白对照组比较,大蒜素组胃癌HGC-27细胞被明显抑制,IL-6组具有明显增殖优势;与IL-6组比较,大蒜素联合IL-6组细胞被抑制(均P<0.05);划痕实验中,与空白对照组比较,12,24 h大蒜素组胃癌细胞迁移能力明显减弱;与IL-6组比较,大蒜素联合IL-6组划痕愈合百分比缩小(均P<0.05)。细胞侵袭实验中,与空白对照组比较,大蒜素组侵袭数目减少,IL-6组侵袭数目明显增多;大蒜素联合IL-6组细胞侵袭能力较IL-6组明显减弱(均P<0.05)。结论大蒜素能明显抑制胃癌细胞EMT,减弱其增殖、迁移及侵袭能力,该过程可能与调节NF-κB信号通路有关。     

转化生长因子-β通路对胃癌细胞增殖、侵袭及slug蛋白、上皮钙黏素表达的影响

目的 研究转化生长因子-β(TGF-β)通路的激活与阻断对人胃癌HGC-27细胞增殖、侵袭及slug蛋白和上皮钙黏素（E-cadherin,E-cad）表达的影响。方法 于2021年1月至2022年1月使用外源性通路激活剂TGF-β1和阻断剂SB431542培养胃癌细胞,后根据对细胞给药不同分为五组。空白对照组：仅使用等量常规培养基;激动剂组：TGF-β1(25μg/L);阻断剂组：SB431542(2 mg/L);激动剂+低浓度阻断剂组：TGF-β1(25μg/L)+SB431542(2 mg/L);激动剂+高浓度阻断剂组：TGF-β1(25μg/L)+SB431542(4 mg/L)。并使用细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测各组胃癌细胞增殖活性,使用Transwell侵袭实验检测各组胃癌细胞侵袭能力,使用酶联免疫吸附测定（ELISA）检测胃癌细胞中slug与E-cad两种蛋白的表达情况。结果 五组胃癌细胞增殖活性、侵袭能力及slug蛋白、E-cad蛋白表达水平比较均差异有统计学意义（P<0.05）。激动剂组胃癌细胞增殖活性（24 h:0.70±0.13）和侵袭能力[细胞穿过小...     

TGF-β1通过F-actin聚合促进乳腺癌细胞MCF-7发生上皮-间质转化

<正>上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是上皮细胞失去极性,获得间质形态的一个过程~([1])。肿瘤细胞中,EMT的激活促进了肿瘤的侵袭转移。转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)属于TGF家族,它能够调节细胞增殖、分化、细胞凋亡及细胞外基质的生成等~([2])。在生理和病理状态下,TGF-β1都是EMT发生的主要     

GLi1的表达及与上皮-间质转化的关系

非小细肺癌(NSCLC)是全球癌症中发病率和死亡率最高的疾患,尽管目前多学科综合治疗包括分子靶向药物、靶向抗体与化疗药物联用等手段,使肺癌的治疗效果有所改善,但其5年生存率仍然很低(14％-15％)[1].转移是影响疗效的最主要障碍,近来研究发现上皮-间质转换(epithelial mes-enchymal transitions,EMT)现象及音猬因子(sonichedgehog,SHH)信号途径中GLi1表达与肿瘤发生转移密切相关.现对GLi1在非小细胞肺癌中表达及与EMT的关系进行综述.     

妊娠期高血压疾病患者血清转化生长因子β1和肿瘤坏死因子-α的表达及临床意义

目的 探讨妊娠期高血压疾病(HDCP)患者血清转化生长因子1(TGF-β1)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的变化及临床意义.方法 采用酶联免疫吸附反应(ELISA)方法检测50例HDCP患者和30例正常晚孕期妊娠妇女(对照组)分娩前血清中TGF-β1和TNF-α水平.50例HDCP患者根据病情严重程度分为三个亚组:妊娠期高血压组、轻度子痫前期组、重度子痫前期组.结果 HDCP组患者血清TGF-β1和TNF-α水平显著高于对照组(t=13.283、13.607,均P＜0.05).随HDCP患者病情加重,血清TGF-β1和TNF-α水平呈逐渐上升趋势,HDCP各亚组之间血清TGF-β1和TNF-α水平差异均有统计学意义(均P＜0.05).相关性分析表明,血清TGF-β1、TNF-α水平与HDCP病情呈正相关性(r=0.575、0.512,均P＜0.05),血清TGF-β1和TNF-α水平之间呈正相关(r=0.515,P＜0.05).结论 HDCP患者血清中存在TGF-β1、TNF-α高表达,血清TGF-β1、TNF-α水平可以反映HDCP患者病情的变化与发展,TGF-β1、TNF-α表达异常可能与HDCP滋养细胞功能低下有关.     

TGF-β介导的上皮-间质转化与恶性肿瘤转移的相关性研究进展

<正>上皮-间质转化(epithelium-mesenchymal transition,EMT)是一个连续的生物学过程,可促进上皮细胞表型发生变化,以获得间充质细胞的表型特征[1];EMT在恶性肿瘤转移过程中起到了关键的作用,在此过程中,肿瘤细胞获得了一定的迁移和侵袭能力,这也是肿瘤发生转移的前提和基础。转化生长因子-β(TGF-β)作为一个多功能的细胞因子,在EMT的诱导及肿瘤细胞的侵袭转移中起到关键作用。研     

食管癌及其淋巴结转移癌组织中血清应答因子与 α?平滑肌肌动蛋白差异表达的意义

目的研究血清应答因子(SRF)、 α?平滑肌肌动蛋白(α?SMA)在食管癌及其淋巴结转移癌组织中差异表达的临床病理意义。方法收集 2017年 1月至 2018年 12月在唐山市人民医院行食管癌根治性手术的食管癌伴有淋巴结转移病人 68例,采用免疫组织化学染色法检测 68例手术标本的食管癌原位癌组织及其淋巴结转移癌组织中 SRF和 α?SMA的表达,并比较阳性表达率的差异。结果免疫组织化学染色结果显示,在食管鳞癌淋巴结转移癌组织中的 SRF、α?SMA阳性表达率分别为 73.53%和 77.94%,显著高于原位癌组织的 52.94%和 44.12%;SRF、α?SMA在淋巴结转移癌中的高表达与浸润深度、淋巴结转移区域和 TNM分期关系密切(P＜0.05),且两者具有正相关性(P＜0.05)。结论 SRF可能促进了食管癌淋巴结转移。     

微小RNA-212调控TOB2蛋白表达对转化因子-β1干预A549细胞诱导肺纤维化及上皮-间质转化的影响

目的 探讨微小RNA-212(miR-212)对转化因子-β1(TGFβ1)干预A549细胞诱导肺纤维化及上皮-间质转化(EMT)的影响及可能的相关机制.方法 体外培养A549细胞,实验分组:PBS组(常规培养)、TGFβ1组(含有5 ng/mL TGFβ1培养液培养)、TGFβ1+anti-miR-con组(转染an...     

槲皮素对人食管癌Eca-109细胞的分化诱导作用

目的探讨槲皮素对人食管癌Eca-109细胞的分化诱导作用。方法将培养的Eca-109细胞分为两组:①加槲皮素组(Q组);②不加药物对照组(C组)。同时培养48h,收集各组细胞制备成细胞硝酸纤维素膜(NCM)标本及提取RNA制备RNA硝酸纤维素膜标本。分别对细胞硝酸纤维素膜(NCM)标本进行PCNA,VEGF的免疫斑点印迹阵列;对RNA硝酸纤维素膜标本EGFR,c-myc及wtp53的RNA斑点印迹阵列。印迹阵列皆用岛津薄层色谱扫描仪(TLC)进行波长523nm的扫描数值比较。结果①免疫斑点印迹显示:Q组的PCNA-IR,VEGF-IR的TLC扫描数值分别比C组低5.5倍,3.5倍;②RNA斑点印迹阵列显示,与C组相比:Q组的EGFR,c-myc的RNA斑点TLC扫描数值分别下调了7倍,2.2倍。而wtp53的RNA斑点TLC扫描数值则上调了2.2倍。结论槲皮素可下调作为肿瘤细胞恶性程度生物学指标的PCNA,EGFR,VEGF,c-myc等的表达,上调抑癌基因wtp53的表达,表明对人食管癌Eca-109细胞具有一定的诱导分化效应。     

Growth inhibitory effects and molecular mechanisms of crotoxin treatment in esophageal Eca-109 cells and transplanted tumors in nude mice

Aim:

To investigate the antitumor actions of the Crotalus durissus neurotoxin (crotoxin) on human esophageal carcinoma (Eca-109) cells in vitro and transplanted esophageal Eca-109 tumors in nude mice.

Methods:

The growth-inhibitory effect was analyzed in Eca-109 cells using MTT assay. Cell morphology changes in nuclei were observed using Hoechst 33342 staining, while apoptosis and cell cycle distribution were examined by flow cytometry. RT-PCR was used to measure the Bcl-2, p15, and caspase-3 p17 gene expression levels. A tumor transplantation model was established by inoculation of Eca-109 cells were into female Balb/c nude mice. Crotoxin (25, 50, and 100 mg/kg) was subcutaneously injected into the transplanted tumors every 2 d for a total of 10 injections. Tumor size and weight were measured. Bcl-2, p15, and caspase-3 p17 protein expression in transplanted tumors was analyzed using Western blotting.

Results:

Crotoxin (25, 50, and 100 μg/mL) inhibited the growth of Eca-109 cells in a dose-dependent manner with inhibition rates of 22.9%, 35.8%, and 57.2%, respectively. Hoechst 33342 staining revealed apoptotic cells with pyknotic nuclear chromatin after crotoxin treatment. In Eca-109 cells, crotoxin induced apoptosis and G1 block, significantly upregulated the expression of p15 and caspase-3 p17 genes and downregulated the expression of Bcl-2 gene. Furthermore, crotoxin inhibited the growth of Eca-109 tumors in nude mice in a dose-dependent manner. Western blotting showed that crotoxin increased p15 and caspase-3 p17 protein levels and reduced Bcl-2 protein level in tumor specimens.

Conclusion:

Crotoxin inhibits the growth of Eca-109 cells in vitro via apoptosis induction and G1 block. Local administration of crotoxin inhibits the growth of subcutaneously transplanted Eca-109 cells in nude mice, possibly via increasing p15 and caspase-3 p17 protein expression and reducing Bcl-2 protein expression.     

尼美舒利对人食管癌细胞Eca-109 COX-2表达及生长的抑制作用

目的研究环氧化酶-2(COX-2)选择性抑制剂尼美舒利对人食管癌Eca-109细胞株COX-2表达和细胞增殖及凋亡的影响。方法MTT法测定尼美舒利对人食管癌Eca-109细胞增殖的抑制率;RT-PCR法检测Eca-109细胞COX-2mRNA表达变化;流式细胞仪检测COX-2蛋白表达、细胞周期时相分布及凋亡率的变化;光镜和琼脂糖电泳法进一步观察细胞凋亡。结果尼美舒利对人食管癌Eca-109细胞有较强的抑制作用,有明显的时间和浓度依赖性;呈浓度依赖性下调Eca-109细胞COX-2 mRNA及蛋白表达;可使Eca-109细胞G0/G1期比例增高,S期细胞减少,增殖指数降低,凋亡细胞增多。结论尼美舒利可能通过对COX-2表达的下调而诱导凋亡和细胞周期阻滞,从而抑制人食管癌Eca-109细胞生长。     

8-Br-cAMP联合槲皮素对人食管癌Eca-109细胞的逆转化作用

目的探讨8-Br-cAMP与槲皮素联合用药对人食管癌Eca-109细胞逆转化的作用。方法将培养的Eca-109细胞随机分为4组:①8-Br-cAMP组(Br):加终浓度为2×10-5mol/L8-Br-cAMP;②槲皮素组(Q):加槲皮素终浓度为43μmol/L;③8-Br-cAMP和槲皮素共同作用组(Br+Q):加终浓度为2×10-5mol/L8-Br-cAMP和终浓度为43μmol/L的槲皮素;④对照组(C):仅加DMEM培养液(含10%胎牛血清)。同时培养48h后分别对以上4组细胞制备细胞滴片及硝酸纤维素膜滴膜两种标本,进行Caspase-3和PCNA的免疫组化和免疫斑点印迹实验;应用完整细胞原位斑点印迹杂交技术检测c-myc、野生型p53(wtp53)、p16和EGFR的基因表达;并进行分化细胞/增殖细胞计数。结果8-Br-cAMP与槲皮素联合或单独应用均可上调Caspase-3免疫反应信号的表达,下调PCNA免疫反应信号的表达;同时上调wtp53和p16基因的表达,下调c-myc和EGFR基因的表达;且分化细胞的比率显著提高。结论8-Br-cAMP与槲皮素联合用药或单独用药均可通过调控人食管癌Eca-109细胞癌基因和抑癌基因的表达对Eca-109细胞起到生长抑制和促分化的作用。     

丹皮酚协同顺铂抑制人食管癌Eca-109细胞的增殖

目的 探讨丹皮酚单药及联合顺铂应用对人食管癌Eca-109细胞的增殖抑制作用.方法 以不同浓度的丹皮酚、顺铂和两药联用处理人食管癌Eca-109细胞,采用MTT法测定药物对体外培养的人食管癌Eca-109细胞增殖的抑制作用,应用两药相互作用指数(coefficient of drug interaction,CDI)进行联合用药分析.结果 丹皮酚(7.81～250 mg·L-1)和顺铂(0.078～5 mg·L-1)单独应用均对人食管癌Eca-109细胞有抑制作用,呈现剂量效应关系.丹皮酚与顺铂联合应用时,丹皮酚能明显提高顺铂对Eca-109细胞的增殖抑制作用,有显著的协同杀伤作用.结论 丹皮酚与顺铂联合应用具有明显的协同抗食管癌Eca-109细胞增殖的作用.     

姜黄素逆转食管癌Eca-109/VCR细胞耐药性的研究

目的 探讨姜黄素(Cur)通过p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号传导通路对人食管癌耐药Eca-109/VCR细胞耐药的逆转作用.方法 实验分为空白组、实验A组、实验B组、联合组和低、中、高剂量对照组.空白组给予不含药物的完全培养基进行培养;实验A组给予含20μmol·L-1 Cur的完全培养基进行培养;实验...     

TCS对Eca-109的增殖抑制作用及其机制初探

目的:探讨天花粉蛋白(TCS)对食管癌Eca-109细胞增殖的影响及其作用机制.方法:采用MTT法检测TCS对Eca-109细胞增殖的抑制率;电子显微镜和AnnexinV-FITC/PI双染检测细胞凋亡;流式细胞仪分析细胞周期;RT-PCR法检测Eca-109细胞Survlvin mRNA表达变化;Western blot检测Survivin、Caspase-3与C-myc蛋白表达变化;TRAP-PCR银染法定性测定细胞的端粒酶活性.结果:TCS对Eca-109细胞增殖有抑制作用且具有剂量-时间效应;TCS明显诱导细胞凋亡,药物组凋亡率高于对照组(P<0.05),并且药物组的S期细胞明显高于对照组(P<0.05):TCS可降低SurvivinmRNA和蛋白表达,增加Caspase-3蛋白表达,下调C-myc蛋白表达、使端粒酶活性降低.结论:TCS能够抑制Eca-109细胞增殖.其机制可能为TCS影响了细胞周期和抑制了Survivin表达.     

靶向survivin基因的小干扰RNA对食管癌细胞Eca-109 化疗敏感性的影响

目的 利用RNAi (RNA interference, RNAi) 技术抑制食管癌Eca-109细胞survivin基因表达,观察survivin基因沉默后对Eca-109细胞化疗敏感性的影响。方法 构建靶向survivin基因特定序列的小干扰RNA(small interference RNA, siRNA)真核表达载体并转染Eca-109细胞,筛选得到稳定转染的survivin干扰组细胞Eca-109 /si-survivin,同时设转染无关干扰质粒的Eca-109细胞为阴性对照组,未转染的Eca-109细胞为空白对照组;通过Western Blot法检测干扰前后survivin基因沉默抑制效果;随后将各组细胞与不同浓度的氟尿嘧啶(5-Fu)作用,MTT法检测各组细胞对5-Fu的半数抑制浓度(IC₅₀),流式细胞仪分析各组细胞的凋亡率。结果 干扰组Eca-109 /si-survivin细胞survivin蛋白表达水平(18.75±3.12)较阴性对照组Eca-109 /si-control(44.17±3.15)及空白对照组Eca-109 (46.20±2.62)明显下调(P<0.05);联合应用5-Fu的Eca-109 /si-survivin干扰组细胞IC₅₀为(18.75±1.53)mg·L-1,显著低于空白对照组(39.65±1.75)mg·L-1和阴性对照组(38.95±1.34)mg·L-1,差异具有统计学意义(P<0.05);联合应用5-Fu的Eca-109 /si-survivin干扰组细胞凋亡率为(37.35±1.52)%,明显高于空白对照组(11.26±1.21)%和阴性对照组(12.34±1.32)%,差异具有显著性(P<0. 05)。 结论 靶向survivin的siRNA能特异性沉默survivin基因表达,抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,并增强人食管癌Eca-109细胞对5-Fu的化疗敏感性。     

丹皮酚体内外抗人食管癌Eca-109细胞增殖及诱导凋亡的作用

目的研究丹皮酚(paeonol,Pae)在体内外对人食管癌细胞Eca-109的抑瘤作用及其对细胞凋亡的影响。方法采用噻唑蓝(MTT)体外试验法和灌胃给药体内抗肿瘤试验。光镜及电镜观察各组的肿瘤组织的形态学变化。应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)法测定细胞凋亡指数。结果丹皮酚在体外对Eca-109细胞有明显的细胞毒作用,半数抑制浓度(IC50)为0.342mmol·L-1;体内灌胃给予丹皮酚25、50、100和200mg·kg-1对裸鼠移植人食管癌Eca-109的抑制率分别为10.67%、23.54%、27.91%和34.46%;顺铂5mg·kg-1组抑瘤率为58.71%;丹皮酚在100mg·kg-1剂量下与顺铂5mg·kg-1联合用药抑制率为77.91%。光镜下用药组可见较多凋亡的肿瘤细胞。透射电镜下可见肿瘤细胞核染色质浓缩边聚、胞质浓缩、核碎裂以及凋亡小体形成等典型的凋亡表现。用药组凋亡指数较对照组明显增加。结论丹皮酚在体内外具有抑制人食管癌Eca-109细胞增殖及诱导其凋亡作用。     

D-氨基葡萄糖衍生物诱导Eca-109细胞凋亡的机制

目的探讨2-(3-羧基-1-丙酰氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖{2-[(3-carboxy-1-oxoprogy1)amino]-2-deoxy-D-Glucose,CO-PADG}诱导Eca-109细胞凋亡的机制。方法不同浓度COPADG作用于人食管癌Eca-109细胞24h,检测Eca-109细胞的抑制率、凋亡率、细胞内活性氧(reactive oxygen spe-cies,ROS)、线粒体跨膜电位。结果Eca-109细胞凋亡率与COPADG浓度呈正相关,r=1.0,P<0.01;Eca-109细胞线粒体膜电位水平与Eca-109细胞凋亡率相关,r=1.0,P<0.01;ROS水平与Eca-109细胞凋亡率呈正相关,r=1.0,P<0.01;ROS水平与Eca-109细胞线粒体膜电位水平呈负相关,r=1.0,P<0.01。结论COPADG可促进Eca-109细胞凋亡,提高Eca-109细胞内ROS水平,并降低线粒体膜电位。实验结果提示COPADG提高ROS,降低Eca-109细胞线粒体膜电位启动细胞凋亡通路促使Eca-109细胞凋亡,并且线粒体膜电位的下降是通过提高ROS实现的。