丹参酮IIA磺酸钠注射液对心肌缺血再灌注大鼠心功能和免疫反应的调节作用

目的　本文研究丹参酮IIA磺酸钠注射液（Sodium tanshinone IIA sulfonate,TIIA）对心肌缺血再灌注（ischemia-reperfusion,I/R）大鼠心功能和免疫反应的调节作用及其机制。 方法　采用冠状动脉结扎法建立心肌缺血再灌注大鼠模型;随机分成5组：Ctrl组、I/R组、I/R+TIIA（0.5 mL）组、I/R+TIIA（1 mL）组和I/R+TIIA（2 mL）组;测定平均动脉压（mean ventricular systolic pressure,MAP）、左室收缩压（left ventricular systolic pressure,LVSP）和心率（heart rate,HR）;采集血清Elisa检测心损标记物表达水平和氧化应激指标含量;HE染色和TUNEL染色观察心肌损伤情况;流式分选外周血CD4+iNOS+,CD4+IL-10+凋亡变化;蛋白印迹法检测凋亡相关蛋白和P65、IL-8及TNF-α表达情况。 结果　丹参酮ⅡA磺酸钠注射液能上调MAP、HR和LVSP水平以改善I/R模型大鼠心功能(P＜0.01);降低血清中CK-MB、cTnΙ和Mb的表达上调;减少MDA、LDH表达,增加SOD水平;改善心肌组织的病理改变,抑制心肌细胞凋亡,上调Bcl-2、下调Bax蛋白表达(P＜0.01);减少iNOS+和增加IL-10+细胞凋亡而改善Th1/Th2平衡(P＜0.01);抑制P-P65、IL-8和TNF-α的表达下调(P＜0.01)。 结论 丹参酮IIA磺酸钠注射液对心肌缺血再灌注损伤具有保护作用,其机制与改善心功能,调节免疫反应有关。     

冬凌草甲素对大鼠糖尿病心肌缺血再灌注损伤的保护作用及其机制

目的以糖尿病诱导大鼠心肌缺血再灌注(ischemia reperfusion,I/R)损伤模型为研究对象,探讨冬凌草甲素(oridonin,Ori)对心肌I/R模型大鼠心肌病理损伤、抗炎等方面的治疗作用及其可能机制。方法将大鼠随机分为Ctrl组、I/R组(模型组)、I/R+Ori(5 mg)组、I/R+Ori(10 mg)组和I/R+Ori (20 mg)组,前2组灌胃给予生理盐水,后3组灌胃给予冬凌草甲素溶液;检测大鼠平均动脉压(mean ventricular systolic pressure,MAP)、左室收缩压(left ventricular systolic pressure,LVSP)、心率(heart rate,HR);HE染色和TUNEL染色检测心肌损伤和细胞凋亡情况;ELISA检测大鼠血清中心损标记物肌红蛋白(myoglobin,Mb)、肌钙蛋白-Ⅰ(troponin-Ⅰ,cTnⅠ)和肌酸激酶同工酶(creatine kinase-MB,CK-MB)表达水平,氧化应激因子谷胱甘肽(glutathione,GSH)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(MDA)的含量,以及心肌炎标记分子白介素-1β(inerleukin-1β,IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)的含量;免疫组织化学检测心肌组织中白介素-6(inerleukin-6,IL-6)的表达水平;蛋白印迹检测心肌组织中转化生长因子β1(TGF-β1)、磷酸化核转录因子p65(p-NF-κB p65)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)蛋白表达情况。结果冬凌草甲素能上调模型大鼠MAP、HR和LVSP(P0.01);减少心肌组织病理损伤(P0.01);抑制CK-MB、cTnⅠ和Mb表达(P0.01);上调SOD、GSH活性,下调MDA含量(P0.01);减少IL-6、TNF-α和IL-1β表达水平(P0.01);且抑制TGF-β1、P-NF-κB和TNF-α蛋白表达(P0.01)。结论冬凌草甲素能改善糖尿病心肌缺血再灌注损伤模型大鼠的心脏功能、减少心肌损伤和细胞凋亡、降低氧化应激和炎症分子表达,其机制可能与抑制NF-κB信号通路活化有关。     

银杏达莫注射液抑制大鼠离体心脏缺血/再灌注损伤的机制研究

 目的：观察银杏达莫注射液预处理对大鼠离体心脏缺血/再灌注损伤的影响,并探讨其可能的作用机制。方法：SD雄性大鼠40只随机分成5组（n=8）：正常对照（NC）组、缺血/再灌注（I/R）组、缺血预处理（IPC+I/R）组、银杏达莫注射液预处理（GD+I/R）组和银杏达莫+氯化镧预处理（GD+LaCl3+I/R）组。观察各组相同时点（预灌30 min稳定点,缺血30 min,再灌5 min、30 min、60 min）的心功能指标,包括心率(HR)、左室收缩压(LVSP)和室内压变化速率（±dp/dtmax）,同时收集各时点冠脉流出液,检测其中乳酸脱氢酶（LDH）和肌酸激酶（CK）活性。实验结束后检测心肌线粒体Ca2+浓度和α-酮戊二酸脱氢酶（α-OGDH）含量。结果：与I/R组比较,IPC+I/R组和GD+I/R组在心脏再灌注期各项心功能指标均得到改善（P<0.05）;心肌LDH和CK的释放量降低（P<0.01）;线粒体内Ca2+超载降低（P<0.01）,且线粒体内α-OGDH含量升高（P<0.05）;而GD+I/R组中银杏达莫对心肌的保护作用被LaCl3抑制（P<0.05）。结论：银杏达莫可能通过抑制钙超载、增强线粒体酶活性以稳定线粒体能量代谢,从而缓解缺血/再灌注诱导的心肌细胞损伤。     

SIRT1激活ERK1/2通路抑制大鼠心肌缺血再灌注时内质网应激相关蛋白的表达

目的 研究大鼠心肌缺血再灌注时沉默信息调节因子1(SIRT1)对心肌内质网应激相关凋亡的影响及其与ERK1/2信号通路的关系.方法 将大鼠随机分为6组:假手术组、缺血再灌注组、白藜芦醇+缺血再灌注组、白藜芦醇+ EX527+缺血再灌注组、白藜芦醇+PD98059+缺血再灌注组、PD98059+缺血再灌注组,每组12只.结扎大鼠冠状动脉左前降支建立大鼠心肌I/R损伤模型.TUNEL法检测心肌细胞凋亡;比色法检测LDH、CK-MB活性.实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测心肌GRP78、caspase-12和CHOP mRNA的表达;Western印迹检测SIRT1、caspase-12、CHOP、磷酸化ERK1/2和总ERK1/2蛋白的表达.结果 Res+ I/R组与I/R组相比,心肌凋亡指数降低(P＜0.05),血清LDH及CK-MB活性降低,内质网应激相关凋亡的指标GRP78、caspase-12及CHOP的蛋白表达量和mRNA均降低(P＜0.05);给予SIRT1抑制剂后与Res+ I/R组相比,以上指标升高;Res+ I/R组与I/R组相比,SIRT1及磷酸化ERK1/2蛋白的表达量均增加(P＜0.05);而Res+ EX+ I/R组与Res+ I/R组相比,SIRT1、磷酸化ERK1/2蛋白的表达量又降低(P＜0.05).结论 SIRT1能够抑制大鼠在体缺血再灌注心肌的内质网应激凋亡相关蛋白表达,发挥保护心肌的作用,其机制可能与ERK1/2通路激活有关.     

地奥司明对肾缺血再灌注大鼠肾组织MPO和中性粒细胞CD11b、CD54及CD62L水平的影响

 目的：观察地奥司明（DOSM）对肾缺血/再灌注（I/R）大鼠肾组织髓过氧化物酶（MPO）和中性粒细胞CD11b、CD54及CD62L表达水平的影响。方法: 180只SD大鼠随机分成3组:假手术组(SO)、肾缺血/再灌注模型组(I/R)和地奥司明+肾缺血/再灌注模型组(DOSM+I/R)。采用ELISA方法测定肾脏组织中MPO的水平,流式细胞分析法检测中性粒细胞表面CD11b、CD54和CD62L的表达水平。结果: 在1h、3h、6h、12h、24h和48h不同时间点的肾组织中,I/R和DOSM＋I/R两组MPO活性均随时间逐渐升高,于6h达最高,后逐渐下降,两组相比有显著性差异（P＜0.05或P＜0.01）。中性粒细胞CD11b、CD54及CD62L的表达在相同时段I/R组显著高于SO组（P＜0.05或P＜0.01);而在DOSM+I/R组显著低于I/R组（P＜0.05或P＜0.01)。结论：DOSM可显著降低肾I/R病理过程中MPO活性,显著降低中性粒细胞CD11b、CD54及CD62L的表达,有助于减轻I/R时炎性细胞的浸润。     

精胺减轻大鼠在体心肌缺血/再灌注损伤的作用及机制初探

目的: 观察低浓度外源性精胺对大鼠心肌缺血/再灌注损伤的影响。方法: Wistar大鼠随机分成假手术（Sham）组、缺血/再灌注损伤（I/R）组、盐水对照（NS）组和精胺干预（Sp）组（n=10）。结扎冠脉复制心肌缺血/再灌注损伤模型。Sp组缓慢静脉推注 0.5 mmol/L 精胺 2 mL/kg。观察指标：心电图，心功能参数，血清SOD、LDH、NO、MDA水平和心肌超微结构等。结果: I/R组心律失常发生率高达90％，心肌超微结构损伤严重，LVSP 和±dp/dtmax明显降低，血清中NO、MDA及LDH升高，SOD活性降低（P<0.05或P<0.01 vs Sham组）。Sp组与I/R组及NS组相比，上述指标均有显著差异（P<0.05或P<0.01）。结论: 低浓度外源性精胺能减轻大鼠心肌缺血/再灌注损伤，其机制可能与抗氧化和减轻氧自由基损伤有关。     

大鼠心肌缺血预适应对I/R心肌细胞凋亡及bcl-2表达的影响

目的:对缺血预适应(IP)第一保护窗对大鼠缺血再灌注(I/R)心肌细胞凋亡和凋亡抑制基因bcl-2表达的影响进行研究。方法:采用TUNEL法、免疫组化和原位杂交方法测定大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡和bcl-2的表达。结果:①IP+I/R_3h组TUNEL法阳性心肌细胞核数量及阳性心肌细胞核占总心肌细胞核数的百分比均明显少于I/R_3h组(P＜0.05,P＜0.01);②IP+I/R_3h组表达bcl-2蛋白阳性的心肌细胞数及阳性心肌细胞占心肌细胞总数的百分比均明显高于I/R_3h组(P＜0.01);IP+I/R_1h组表达bcl-2mRNA阳性的心肌细胞数及阳性心肌细胞占心肌细胞总数的百分比均明显高于I/R_1h组(P＜0.01)。结论:①大鼠心肌IP第一保护窗能够显著减少I/R心肌细胞凋亡;②IP通过上调凋亡抑制基因bcl-2基因表达可能是其减少I/R心肌细胞凋亡的机制之一。     

磷酸肌酸减少大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡及自噬泡的数量

目的 研究磷酸肌酸减少大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡及白噬的能力.方法 雄性SD大鼠24只,体质量200 ～ 250 g,随机均分为假手术(sham)组、缺血/再灌注(ischemia-reperfusion,I/R)组和磷酸肌酸钠(phosphocreatine,CP)干预组.其中CP组按4 mg/kg磷酸肌酸钠剂量于再灌注前经右股静脉注射.用TUNEL法检测心肌细胞凋亡;电子显微镜观察心肌细胞自噬泡的发生和线粒体的形态学改变;Western blot检测微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)蛋白的表达.结果 I/R组与sham组相比,线粒体超微结构损伤加重,自噬泡数量增多(P＜0.01),心肌细胞凋亡率明显增加(P＜0.01);CP干预组可减轻I/R组线粒体超微结构损伤,自噬泡数量减少(P＜0.05),降低心肌细胞凋亡率(P ＜0.05);LC3-Ⅱ作为评价自噬强度的指标,I/R组与sham组相比,LC3-Ⅱ蛋白的表达明显上调(P＜0.01);而CP与I/R组相比,该蛋白表达明显下调(P＜0.05).结论 磷酸肌酸通过减少大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡及自噬泡的数量,从而减轻心肌缺血再灌注损伤.     

去甲肾上腺素和缺血预处理对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡、Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的:研究去甲肾上腺素预处理(NE-P)和缺血预处理(IP)对大鼠缺血再灌注(I/R)心肌细胞凋亡及相关基因Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。方法:复制缺血再灌注损伤(IRI),采用末端标记技术(TUNEL)检测心肌细胞凋亡;应用免疫组化SABC法检测Bcl-2和Bax蛋白表达。结果:I/R组凋亡细胞较多,NE-P组及IP组凋亡细胞明显少于I/R组(P＜0.01)。在I/R组Bcl-2的表达少而Bax的表达较多,NE-P组及IP组Bcl-2的表达明显高于I/R组(P＜0.01),而Bax的表达明显低于I/R组(P＜0.01)。NE-P组与IP组各指标均无显著差异(P＞0.05)。结论:NE-P可抑制I/R诱发的心肌细胞凋亡,Bcl-2和Bax的蛋白表达在心肌凋亡的发生中起重要作用。NE-P与IP两者对心肌细胞凋亡及相关基因表达的影响的作用相近。     

柴胡皂苷A减轻脑缺血再灌注大鼠海马神经元损伤

目的 探讨柴胡皂苷A（Saikosaponin A,SA）通过上调SIRT1水平减轻脑缺血再灌注（ischemia reperfusion,I/R）大鼠海马神经元损伤的作用。 方法 大鼠随机分为6组,每组9只,分别为假手术组（Sham）、模型组（I/R）、柴胡皂苷A 1 mg/kg组（I/R + SA 1 mg/kg）、柴胡皂苷A 5 mg/kg组（I/R + SA 5 mg/kg）、柴胡皂苷A 10 mg/kg（I/R + SA 10 mg/kg）和尼莫地平1 mg/kg组（I/R + NMDP 1 mg/kg）。双侧颈总动脉用微动脉夹夹闭法构建脑缺血再灌注模型,灌胃给药7 d。记录各组大鼠跳台实验犯错次数和Y迷宫实验检测新异臂进入次数,HE染色观察脑组织病理损伤,采用2,3,5-三苯基氯化四氮唑法计算各组大鼠脑梗死率、脑组织含水量及脑指数,尼氏小体染色检测神经元凋亡,免疫印迹法检测Caspase3,Caspase9,Bax／Bcl-2和SIRT1的表达,试剂盒检测SOD、MDA、LDH的含量,RT-PCR检测SIRT1的表达。 结果 柴胡皂苷A能减少大鼠跳台实验犯错次数,增加新异臂进入次数,减少脑梗死率、脑组织含水量及脑指数,降低Bax/Bcl-2和Cleaved caspase3/caspase3、Cleaved caspase9/caspase9的比值,降低MDA和LDH的含量,升高SOD活性,上调SIRT1表达水平（P<0.05）。 结论 胡皂苷A能缓解缺血再灌注大鼠海马神经元损伤和氧化应激,这与SIRT1上调有关。     

甲基莲心碱对脑缺血再灌注脑损伤的调节作用

目的探讨甲基莲心碱(Neferine,Nef)对缺血再灌注脑损伤大鼠脑保护作用及其机制.方法线栓法建立大鼠脑缺血再灌注损伤(CI/R)模型.造模后对大鼠神经功能进行评分;HE检测病理损伤;检测血清MDA、SOD和LDH含量;TUNEL检测脑细胞凋亡;RT-PCR检测Caspase-3、-9 mRNA表达;免疫组化检测脑组织ICAM-1表达;ELISA检测IL-6、IL-18和IL-1β的含量;蛋白印迹检测TLR4、NF-κB P65(核)和MIP-2表达.结果甲基莲心碱能有效改善脑缺血再灌注损伤大鼠的神经功能(P<0.01),减少造模诱导的脑组织病理损伤;减少MDA和LDH含量(P<0.01),增加SOD活性(P<0.01);减少脑组织细胞凋亡率(P<0.01),下调凋亡相关蛋白Caspase-3、-9 mRNA表达水平(P<0.01);降低促炎因子(ICAM-1)、炎性因子(IL-6,IL-18,IL-1β)和炎性蛋白(TLR4,NF-κB P65,MIP-2)在脑组织中的表达水平(P<0.01).结论甲基莲心碱能对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织起保护作用,其机制与减少凋亡及抑制炎性反应有关.     

miR-214-5p靶向PAK4对缺血再灌注大鼠的心肌损伤和免疫反应的调节作用

目的:探讨微小RNA-214-5p(miR-214-5p)靶向p21活化蛋白激酶4(PAK4)对缺血再灌注(I/R)大鼠的心肌损伤和免疫反应的作用。方法:将健康雄性SD大鼠随机分为假手术(sham)组、I/R组、Ad-Scramble组和Ad-miR-214组(n=9)。在大鼠左心室前壁6个不同的位点注入腺病毒;4 d后,缝合左前部下行冠状动脉构建I/R模型。RT-qPCR检测miR-214的表达水平,HE染色观察心肌损伤,ELISA检测心肌损伤标志物(CK-MB、Mb和cTnI)和炎症因子(IL-6、IL-1β和TNF-α)的水平,流式细胞术检测心肌细胞凋亡率,试剂盒检测MDA含量和SOD活性,基因软件预测靶基因并通过双萤光素酶报告验证,Western blot检测caspase-3、caspase-9、Bcl-2、Bax、PAK4、p-Akt和p-mTOR表达水平。结果:miR-214在I/R大鼠心肌细胞中低表达(P<0.01);miR-214-5p过表达减轻I/R大鼠心肌损伤程度,下调CK-MB、Mb和cTnI表达,降低心肌细胞凋亡率,上调Bcl-2表达,下调Bax、cas...     

miR-377-5p靶向IRAK1通过抑制JNK信号通路改善脑缺血再灌注大鼠神经损伤和炎性反应

目的 探究miR-377-5p对脑缺血再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)大鼠神经损伤和炎性反应的作用及机制.方法 通过生物信息学预测到miR-377-5p与白介素1受体相关激酶(interleukin-1 receptor-associated kinases,IRAK1)靶向关系.SD大鼠随机...     

右美托咪啶上调sirtuin3减轻小鼠肾缺血-再灌注损伤

目的研究右美托咪啶(DEX)在肾缺血-再灌注(I/R)损伤小鼠中的保护作用及其机制。方法将小鼠分为假手术(sham)组、siRNA+sham组、肾I/R组(常规法)、DEX+I/R组(腹腔注射25μg/kg DEX)、siRNA+I/R组及siRNA+DEX+I/R组;siRNA+sham组、siRNA+I/R组、siRNA+DEX+I/R组术前3 d经尾静脉注射5×10^9TU/kg慢病毒-去乙酰化酶3(SIRT3) siRNA。生化分析仪测定肾功能;HE染色法观察肾组织形态学;Tunel染色法检测肾组织凋亡;Western blot检测SIRT3、亲环素D(Cyp D)和细胞色素C(Cyt C)表达。结果 DEX可降低小鼠肾I/R后肾脏损伤,上调SIRT3表达并下调Cyt C及乙酰化Cyp D蛋白表达水平(P<0. 05)。抑制SIRT3后可减轻DEX对肾脏的保护作用(P<0. 05)。结论 DEX减轻肾I/R损伤的作用可能与上调SIRT3相关。     

重组人促红细胞生成素对脑缺血再灌注小鼠海马IL-1β表达的影响

目的探讨重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropoietin,rhEPO)对脑缺血再灌注小鼠白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)表达的影响。方法 96只昆明小鼠随机分为3组,每组32只:假手术组(Sham);rHuEPO治疗组;缺血再灌注组(I/R)。每组依据缺血后再灌注不同时间点再分6 h、24 h、3 d、7 d 5个小组。免疫组化和Western blot检测各组小鼠IL-1β的表达。TUNEL法检测海马细胞凋亡情况。结果缺血再灌注组IL-1β蛋白表达量和凋亡细胞数明显高于假手术组(P<0.05),而rhEPO治疗组IL-1β蛋白表达量和凋亡细胞数则明显少于缺血再灌注组(P<0.05)。结论 rHuEPO很可通过下调IL-1β的表达参与脑缺血再灌注损伤。     

蛋白激酶C活化对大鼠缺血/再灌注心肌细胞凋亡和Bcl-2表达的影响

目的:探讨PKC活化对大鼠I/R心肌细胞死亡和凋亡抑制基因bcl-2表达的影响。方法:采用TUNEL法以及免疫组化和原位杂交方法。结果:①PMA+IR_3h组TUNEL法阳性心肌细胞核数量及阳性心肌细胞核占总心肌细胞核数的百分比均明显少于IR_3h组(P＜0.05,＜0.01);②PMA+IR_3h组表达Bcl-2蛋白阳性的心肌细胞数及阳性心肌细胞占心肌细胞总数的百分比均明显多于IR_3h组(P＜0.01);PMA+IR_1h组表达bcl-2mRNA阳性的心肌细胞数及阳性心肌细胞占心肌细胞总数的百分比均明显多于IR_1h组(P＜0.01)。结论:①PKC活化能够显著减少大鼠I/R心肌细胞死亡;②PKC活化通过上调凋亡抑制基因bcl-2的基因表达可能是其减少大鼠I/R心肌细胞死亡的机制之一。     

辛伐他汀对大鼠肾缺血再灌注损伤后心肌Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的:观察辛伐他汀对肾缺血再灌注损伤后心肌组织的影响及其机制。方法:随机将36只大鼠分为假手术组、肾缺血再灌注组和辛伐他汀组,每组12只。后2组用夹闭双侧肾动脉的方法复制肾缺血再灌注损伤模型;辛伐他汀组在造模前给予辛伐他汀(20 mg·kg~(-1)·d~(-1))灌胃,持续2周。用生化检查检测血清肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)、心肌组织丙二醛(MDA)含量及乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)和超氧化物歧化酶(SOD)的活性,并用Western blot法检测Bcl-2和Bax的表达水平。结果:与假手术组比,缺血再灌注组SCr、BUN和心肌MDA含量均升高(P0.05),心肌LDH和CK活性增强(P0.05),心肌SOD活性明显下降(P0.05);与缺血再灌注组比较,辛伐他汀组SCr、BUN和心肌MDA的含量降低(P0.05),心肌LDH和CK活性明显减弱(P0.05),而心肌SOD活性增强(P0.05)。与假手术组比较,心肌Bcl-2与Bax的蛋白表达水平在肾缺血再灌注组增多(P0.05);与缺血组相比,Bax表达在辛伐他汀组明显降低,而Bcl-2表达增加(P0.05)。结论:辛伐他汀对肾缺血再灌注后的心肌有保护作用,保护机制可能与辛伐他汀可以消除自由基、升高Bcl-2蛋白表达和降低Bax蛋白表达有一定关系。