超声造影剂在基因转染中的应用进展

目前基因治疗学已成为研究的热点,然而基因转染仍缺乏高效的载体.超声微泡造影剂可作为一种良好的基因载体,通过靶位的超声辐照破坏基因微泡,实现基因的靶向转染.     

亚微米级超声微泡造影剂的制备及体外基因转染效率的实验研究

目的 探索制备亚微米级超声微泡造影剂的方法 ,以GFP作为目的 基因验证其作为一种新型基因载体的可行性.方法 以高剪切分散法制备超声微泡造影剂,透射电镜及激光粒度分析仪检测其形态及粒径;将超声微泡造影剂与不同剂量的绿色荧光蛋白质粒PShuttle-IRES-hrGFP-1结合后转染HepG2细胞,利用荧光显微镜观察并检测其基因转染效率.结果 自制超声微泡造影剂为均匀分散的圆泡,粒径分布在282.2～415.7 nm之间,平均值为(335±5)nm,达到亚微米级;该微泡能将GFP基因成功转运到HepG2细胞内并高效表达,转染效率达32.61%±3.42%.结论 自制亚微米级超声微泡造影剂粒径小、分散均匀,并能成功转运外源DNA进入细胞内,可作为一种新型基因载体.     

超声微泡造影剂在基因转移中的应用

大量研究表明,不仅超声照射本身可促进目的基因在体外和体内的转染与表达,而且超声介导的微泡造影剂破坏可进一步增强基因的转染率,其主要机制是空化效应.超声造影剂作为一种新型、无创的基因运载系统具有广阔的应用前景.     

超声微泡造影剂介导基因治疗卵巢癌的研究进展

卵巢癌基因治疗的关键在于如何安全高效地将外源性基因导入细胞。超声微泡造影剂作为新兴的基因转染载体,有望为卵巢癌基因治疗开辟新的路径。本文就超声微泡造影剂在卵巢癌基因治疗中的研究进展进行综述。     

超声微泡造影剂在心血管疾病基因治疗中的应用

基因治疗心血管疾病成为研究的热点及方向,但由于担心病毒载体的安全性以及非病毒载体的低效性,基因治疗的发展缓慢。而超声微泡造影剂可作为一种新型的基因转染载体,为目前处于困境中的基因治疗带来了新的曙光,本文就超声微泡造影剂在心血管疾病基因治疗中的应用作一综述。     

一种载基因及多聚赖氨酸的脂质超声微泡造影剂制备的实验研究

目的 制备一种能高效载基因的脂质超声微泡造影剂,评价其物理性质、载基因和体内显影能力.方法 采用层-层吸附(LbL)法将基因和多聚赖氨酸(PLL)分层吸附在自制的脂质超声微泡造影剂上,检测微泡造影剂的形态、分布、浓度、粒径、表面电位、载基因和体内显影能力.结果 载PLL、载PLL+基因及载PLL+基因+PLL的微泡与空白微泡相比,其形态、浓度、粒径没有显著差异;随着载PLL和基因层数增加,其表面电位向正或负反转;载基因超声微泡造影剂其外壳吸附基因的层数增加,载基因量也随之增加;载PLL+基因的微泡可增强兔肝实质显像,持续20 min以上.结论 自制的载基因及PLL脂质超声微泡造影剂制备方法简单,载基因的效率高,可作为携带基因等生物活性物质的载体材料.     

共聚物P85和微泡造影剂对小鼠骨骼肌超声介导基因转染的影响

目的 探讨共聚物P85、微泡造影剂和超声在质粒DNA对小鼠骨骼肌基因转染中的影响.方法 应用共聚物P85、微泡造影剂Optison与DNA混合后直接小鼠胫前肌(TA)注射,并辐照超声.1周后取出胫前肌并快速冰冻切片,荧光显微镜计数表达GFP转染的肌纤维数,HE染色评价肌肉损伤情况.结果 共聚物P85和微泡造影剂Optison均可促进质粒DNA的基因转染(P<0.01,P<0.05).辐照超声可使P85介导的基因转染效率显著提高(P<0.01),但对微泡造影剂介导的基因转染却无显著提高(P>0.05),并且P85所介导的基因转染效率高于微泡造影剂介导的基因转染效率(P<0.01).微泡造影剂和P85耦合并辐照超声可使质粒的基因转染效率显著提高,与所有各组的差异有统计学意义(P<0.01).同时辐照超声显著增加含微泡造影剂组骨骼肌的损伤面积(P<0.01).结论 共聚物P85和微泡造影剂可介导质粒DNA的基因转染,辐照超声对其有促进作用,三者联合应用具有协同作用.     

超声微泡造影剂在肿瘤治疗应用中的进展

近年来,超声微泡造影剂在肿瘤治疗中的作用日臻明显.超声微泡造影剂在超声能量作用下发生空化效应,定向释放药物和基因,提高局部的浓度,达到定向治疗的目的.研究表明,超声微泡造影剂作为药物和基因的载体将有可能为肿瘤的治疗提供一条新的途径.     

超声波介导微泡破裂促EGFP基因转染大鼠脑组织的实验研究

目的 探讨超声波介导微泡造影剂破裂促外源基因在中枢神经系统转染的可行性.方法 15只大鼠分3组,1组经股静脉输入含绿色荧光蛋白质粒(pEGFP)的造影剂0.8 ml,立即用超声波照射大鼠颅骨3 min;第2组输入相同的造影剂0.8 ml,不采用超声波照射;第3组输入不含造影剂的pEGFP 0.2 ml,立即超声波照射3 min.48 h后处死大鼠,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达.结果 只在股静脉输入含pEGFP的造影剂,并经超声波照射的大鼠微血管壁上观察到绿色荧光蛋白表达.结论 以微泡造影剂为基因载体,通过超声波靶向破坏微泡,有可能在脑血管内皮细胞中获得基因转染.     

超声靶向破坏阳离子微泡介导SDF-1α基因转染提高外源性血管新生效应的研究

目的通过证实超声介导阳离子微泡能显著提高微泡的携基因量及体内转染后的血管新生效应来探讨阳离子微泡作为基因载体的价值。方法紫外分光光度法检测阳离子微泡与声诺维微泡在体外的基因携带效率。构建兔子急性心肌梗死模型并分组:阳离子微泡组(超声靶向破坏携SDF-1α基因的阳离子微泡并进行转染)、声诺维微泡组(超声靶向破坏携SDF-1α基因的声诺维微泡并进行转染)和对照组(不进行转染)。转染后3 d后3组各取3只兔子处死,ELISA检测目的基因蛋白表达情况;转染后4周行超声心动图和心肌超声造影,检测兔子心功能及心肌灌注情况,之后全部处死,免疫组化检测心肌血管新生效应。结果阳离子微泡组基因携带率是声诺维微泡组的11倍。阳离子微泡组SDF-1α蛋白表达是声诺维微泡组的4倍,对照组的9倍。阳离子微泡组在心肌毛细血管新生效应、心肌血流灌注和心功能方面均优于声诺维微泡组和对照组(P<0.05)。结论阳离子微泡能明显提高在体外的基因携带效率,从而使体内转染效率增强,更好地促进心肌血管新生,是一种高效的基因载体。     

超声微泡造影剂声诺维与基因转染的研究

超声微泡是一种新型基因转染的载体,超声辐照微泡（SonoVue）可增加基因在体内及体外的转染效率。若在不损伤基因和组织的前提下促进基因的转染,合适的辐照条件是非常重要的。     

超声微泡转染前列腺癌细胞的参数筛选

目的观察不同辐照参数下超声微泡对前列腺癌细胞生长及基因转染效率的影响。方法采用噻唑兰比色法检测单纯超声、单纯微泡、超声辐照微泡对前列腺癌细胞生存率的影响。荧光显微镜观察超声微泡介导的质粒为EGFP基因与HSV l-TK基因共表达载体。观察它对前列腺癌细胞PC-3转染后荧光表达情况,Westernblot检测EGFP蛋白的表达情况。结果 MTT显示超声强度为1.0W/cm2,频率为1MHz,辐照时间30s时超声辐照对细胞无明显的抑制作用;采用不同浓度的微泡对前列腺癌细胞PC-3作用24h后,各实验组细胞存活率与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);当采用最适的超声辐照时间辐照微泡浓度为10、20、40、80μL时,超声+微泡(80μL)组细胞存活率低,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),而10、20、40μL组中细胞生长良好;转染EGFP后48h,在荧光显微镜观察对照组未见荧光表达,其他各组中均有荧光表达,并随着微泡剂量的增加,荧光表达量增多;Western blot检测显示各处理组中均有EGFP蛋白的表达,超声+微泡(20μL)+TK(1μg)组、超声+微泡(40μL)+TK(1μg)组的EGFP蛋白表达明显高于其他各组。结论在最适辐照参数下,超声微泡造影剂能够有效地促进TK基因的转染。     

超声造影剂在肝癌基因治疗中的靶向性实验研究

目的 探讨结合了肝细胞配体的超声造影剂在超声辐照下介导目的 基因转染肝癌细胞的可行性,寻找一种新的基因靶向导入方法.方法 制备肝细胞表面特异性配体半乳糖基化多聚赖氨酸(GPLL),并对产物进行红外光谱分析.将c-myc基因反义寡核苷酸(ASODN)、G-PLL与SonoVue微泡三者偶联,在超声波介导下,促使c-myc ASODN转染人肝细胞癌SMMC-7721细胞及肺腺癌A-549细胞(作对照),实验结束后行半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)以观察不同组问c-myc基因的表达情况.结果 超声介导微泡破裂可增加c-myc ASODN在SMMC-7721细胞和A-549细胞中的表达;SMMC-7721细胞加入G-PLL组中c-myc基因表达水平显著降低,差异有统计学意义(P＜0.01),而A-549细胞中加入与未加入G-PLL组间c-myc基因表达量的差异无统计学性意义(P＞0.05).结论 超声介导微泡造影剂破裂的方法可促进基因的转染,而超声联合肝细胞受体介导的微泡造影剂则更具有肝细胞靶向性,能有效地促进目的 基因在肝癌细胞中的表达,为肝癌基因治疗提供了新的途径.     

超声介导靶向微泡造影剂促进c-myc反义基因在人肝癌细胞的表达

目的 根据超声破坏微泡造影剂可增加细胞膜通透性的原理,探讨一种新的受体介导基因转移技术.方法 将c-myc基因反义寡核苷酸(ASODN)、荧光素标记的特异性配体半乳糖基化多聚赖氨酸(G-PLL)与载体SonoVue微泡结合,用超声介导微泡破裂的方法使c-myc ASODN转染于人肝癌细胞SMMC-7721,观察其对癌细胞的作用.结果 体外实验结果显示,1.5 MHz脉冲波,10%工作周期,机械指数1.0 W/cm2、60 s超声介导10%SonoVue微泡对细胞活性无明显影响;半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)显示实验组(治疗基因c-myc ASODN+G-PLL+微泡+超声)c-myc mRNA基因表达水平显著降低(P<0.01).结论 受体介导的靶向超声微泡造影剂在超声作用下能有效地促进日的基因在肝癌细胞中的表达,为肝癌基因治疗提供了新的途径.     

超声介导靶向微泡造影剂促进c-myc反义基因在人肝癌细胞的表达

目的 根据超声破坏微泡造影剂可增加细胞膜通透性的原理,探讨一种新的受体介导基因转移技术.方法 将c-myc基因反义寡核苷酸(ASODN)、荧光素标记的特异性配体半乳糖基化多聚赖氨酸(G-PLL)与载体SonoVue微泡结合,用超声介导微泡破裂的方法使c-myc ASODN转染于人肝癌细胞SMMC-7721,观察其对癌细胞的作用.结果 体外实验结果显示,1.5 MHz脉冲波,10%工作周期,机械指数1.0 W/cm2、60 s超声介导10%SonoVue微泡对细胞活性无明显影响;半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)显示实验组(治疗基因c-myc ASODN+G-PLL+微泡+超声)c-myc mRNA基因表达水平显著降低(P<0.01).结论 受体介导的靶向超声微泡造影剂在超声作用下能有效地促进日的基因在肝癌细胞中的表达,为肝癌基因治疗提供了新的途径.     

新型白蛋白微泡经超声介导破裂促进EGFP基因在Cos-7细胞的表达

目的：根据超声介导白蛋白微泡破裂空化效应可以增加真核细胞膜对大分子(如DNA)通透性的原理，探讨一种新的转基因方法，以便安全有效和定向地转移目的基因。方法：实验中选择绿色荧光蛋白基因EGFP为标记基因，以自制的白蛋白微泡为载体，用超声介导微泡破裂的方法在体外进行Cos—7细胞的基因转化，同时以脂质体为对照，激光共聚焦显微镜和流式细胞计数仪分别定性和定量观察细胞转化效率。锥虫蓝染色观察细胞的活性。结果：体外试验发现0．8MHz、1．0W／cm^2、10％占空比(dutycycle)、60s超声介导10％白蛋白微泡破裂可以有效稳定地转化EGFP基因在Cos—7细胞表达，且对细胞无毒副作用。结论：自制白蛋白微泡是一种安全、有效的新型基因载体，在一定超声条件控制下，能增强基因的转导与表达，有良好的靶向性，提示该技术有应用于临床基因治疗的广阔前景。     

超声造影检查在评价慢性肝炎肝纤维化程度中的应用

使用超声微泡造影剂进行造影检查时,应用超声影像学和血流动力学指标评价慢性肝炎肝纤维化程度的研究进展。     

医学超声微泡造影剂空化效应的研究进展

近年来,随着新型超声微泡造影剂的研究和应用,超声微泡介导靶向治疗可增强基因转染效率,提高特定组织的基因表达水平和药物浓度,是一种安全、简便、高效的靶向性基因转染及药物治疗的新方法。本文就超声空化效应和超声微泡的治疗机制和应用做一简要综述。