Musashi-1基因启动子区域-2297T〉C多态与人群食管癌的易感性

目的：研究Musashi-1基因（MSI-1）启动子区-2297T〉C（rs3742038）多态与我国人群食管癌发病的关联。方法：应用病例对照研究方法,采用Taqman技术检测300对食管癌病例的基因与正常对照-2297T〉C多态位点的基因型,并用SAS9．13软件分析该位点变异与食管癌易感性的关联。结果：以-2297TT基因型携带者为参照,携带C变异基因型（-2297CT／CC）个体发生食管癌的风险将显著增加（adjusted OR=2．27;95％CI=1．29-4．02）,且随着变异等位基因个数增加,食管癌发病风险呈剂量-效应关系地增加（Ptrend=0．0088）。结论：MSI-1基因启动子区-2297T〉C基因变异型能显著增加我国人群发生食管癌的风险性,将为食管癌高危人群的筛选提供重要的遗传标志。     

SP1调控PIWIL1基因启动子转录活性研究

目的 克隆转录因子SP1编码序列,构建真核表达质粒PCDNA3.1-SP1,并研究其对PIWIL1基因转录活性的影响。方法 RT-PCR法从正常人外周血总RNA中钓取SP1基因的编码序列,插入至真核表达载体PCNDA3.1（+）,酶切及测序鉴定重组质粒。Western blot法分别验证重组表达载体的在COS-7细胞中的表达效应。分别将活性最高的PIWIL1基因启动子报告基因截短体（即核心启动子区域）、活性最低的PIWIL1基因启动子报告基因截短体,与SP1重组质粒共转染COS-7细胞,利用Dual-Luciferase reporter assay system测定不同启动子活性区的PIWIL1基因转录活性的改变,同时应用光辉霉素A下调SP1的表达来进一步验证SP1对PIWIL1活性的影响。结果 酶切及测序鉴定结果显示SP1表达质粒构建成功,Western blot法结果表明重组SP1表达载体能有效表达于COS-7细胞,过表达SP1可明显提高PIWIL1不同活性区的启动子的活性（P<0.05）。结论 外源性SP1真核表达载体转染能有效表达于COS-7细胞,并对PIWIL1的转录活性起着上调的作用,提示SP1可能是PIWIL1转录活性的正调控元件之一。     

PRKG1基因非编码区多态与蒙古族原发性高血压的易感性研究

目的:高血压是由遗传和环境因素共同作用而引起的复杂性疾病,本研究预探讨PRKG1基因非编码区多态在蒙古族原发性高血压中的作用。方法:采集内蒙古自治区锡林郭勒盟蒙古族标本429例,其中高血压212例,正常血压者217例。对PRKG1基因的启动子和3’非翻译区进行测序后对突变位点进行基因分型。结果:PRKG1基因测序共发现3个突变位点,分别是PRKG1-1,PRKG1-2和PRKG1-3。在蒙古族人群中,PRKG1基因的PRKG1-2和PRKG1-3位点各检测到A等位基因和AA基因型,未检测到另一等位基因和和其对应的基因型,PRKG1-1位点的等位基因频率和基因型频率在高血压组和正常对照组间差异无统计学意义。结论:PRKG1基因启动子和3’非翻译区多态与蒙古族原发性高血压无明显相关性。     

S100A8启动子的克隆及转录活性检测

目的 构建小鼠S100A8基因启动子序列的报告基因载体,通过报告基因技术检测在静息、脂多糖(LPS)、PolyI:C及NaASO2等刺激下该段启动子的转录活性.方法 采用PCR从小鼠脾组织基因组DNA扩增S100A8启动子序列(-826～+468);将其克隆至pDsRed1-1载体上,重组质粒经过PCR、酶切及测序分析正确无误后转染小鼠巨噬细胞系RAW264.7,荧光显微镜下观察静息、LPS、PolyI:C和NaASO2刺激下红色荧光蛋白表达.结果 正确扩增出小鼠S100A8启动子片段(-826～+468);成功构建其红色荧光蛋白报告基因载体,证实该质粒转染RAW 264.7细胞后静息状态下仅可见少量而微弱的红色荧光,经LPS、PolyI:C和NaASO2刺激后,红色荧光强度和亮度明显增加.结论 小鼠S100A8启动子(-826～+468)在静息状态下即具有转录活性,炎性、氧化应激刺激后S100A8表达增强;该启动子的成功克隆和其报告基因载体的构建,为进一步研究S100A8的基因表达调控机制打下了良好的基础.     

WNK4基因启动子结构初探

目的 鉴定WNK4基因启动子结构,初步探讨WNK4基因表达的调节机制.方法 应用5′ RACE方法确定WNK4基因转录起始点;构建WNK4基因启动子报告基因载体,并应用ELISA法检测启动子活性;应用软件分析预测WNK4基因启动子区顺式作用元件.结果 初步确定了WNK4基因转录起始位点;构建了WNK4基因启动子报告基因载体,并通过ELISA方法确定了转录起始点上游1 275 bp具有高转录活性,并且软件预测该区域内存在多个顺式作用元件,初步证明该区域为WNK4基因的启动子序列.结论 鉴定了WNK4基因的启动子区,并对其功能进行了初步鉴定.     

Ada蛋白质在突变alKA基因启动子转录中的作用研究

目的：研究Ａｄａ蛋白质对ａｌｋＡ基因表达的调节,探讨Ａｄａ蛋白质与ａｌｋＡ基因有效转录的关系。方法：采用ＤＮＡ顺序测定和体外转录的方法,以ｌａｃ基因启动子为对照进行实验。结果：Ａｄａ蛋白质加入以突变和野生ａｌｋＡ基因启动子为模板的体外转录体系中,产生的ａｌｋＡｍＲＮＡ高于无Ａｄａ蛋白质组;Ａｄａ蛋白质加入ｌａｃ基因启动子转录体系中,产生的ｌａｃｍＲＮＡ与未加Ａｄａ蛋白质组基本相同。结论：Ａｄａ蛋白质对ｌａｃ基因启动子转录调节作用不明显,对于突变的和野生的ａｌｋＡ基因转录均有促进作用,这种调节作用可能发生在启动子上游区。     

Klotho基因启动子区域定位及活性分析

目的构建含不同长度klotho基因启动子片段的报告基因载体,研究其在不同细胞系中的转录活性。方法以人全血基因组DNA为模板,克隆长短不同的klotho基因启动子片段,命名为klothoⅠ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ;分别克隆入荧光素酶报告基因质粒pGL3-Basic构建真核表达载体;采用Lipofectamine 2000将重组质粒分别和pRL-TK共转染HEK293和HeLa细胞,分析不同长度的klotho基因启动子片段在细胞内的转录活性。结果双酶切和测序鉴定均显示表达载体构建成功;klotho基因的核心启动子区域位于-504～-6;双荧光素酶活性检测显示klothoⅢ在2种细胞中的转录活性明显高于klothoⅠ、Ⅱ(P<0.05),而klothoⅣ的转录活性在HEK293细胞中能维持高水平,在HeLa细胞中显著下降(P<0.01)。结论 klotho基因启动子在不同细胞中的转录活性不同,-973～-504区域可能是导致HeLa细胞中klothoⅣ转录活性下降的原因。     

Hes1基因启动子的克隆及活性研究

目的:获取人Hes1基因的启动子并对其进行活性分析。方法:以人Hela细胞基因组DNA为模板,利用PCR技术扩增Hes1基因5’侧翼序列,将扩增的片段与pMD18-T载体连接,然后利用双酶切进行鉴定,并送测序;将测序正确的启动子插入pGL3-Basic,双酶切并测序鉴定。将测序正确的重组DNA质粒瞬时转染宫颈癌细胞,运用双荧光素酶报告基因检测系统检测其启动子的活性。结果:PCR扩增到的人Hes1基因启动子与基因库的序列完全一致,双荧光素酶报告基因检测系统显示其在宫颈癌细胞中具有启动子活性。结论:成功得到人Hes1基因启动子并且其具有活性。     

cAMP对lac基因启动子体外转录影响的研究

目的：研究ｃＡＭＰ对ｌａｃ基因启动子体外转录的影响作用。方法：以含ｌａｃ基因启动子及其Ｚ结构基因的线性ｐＵＲ２２２ＤＮＡ为模板，观察Ｅ．ｃｏｌｉＲＮＡ聚合酶受ｃＡＭＰ作用后的转录强度。结果：０．１０～０．８０ｍｍｏｌ／Ｌ的ｃＡＭＰ对ｌａｃ基因启动子体外转录有明显的促进作用，低于０．１０ｍｍｏｌ／Ｌ对体外非特异性转录有促进作用；浓度进一步增高对转录起抑制作用。ｃＡＭＰ作用下特异性与非特异性转录产物放射活性间无相关性。结论：ｃＡＭＰ对转录有双重作用，这种作用可能与启动子区的构象特点及ＲＮＡ聚合酶与启动子的特异结合有关。     

人NaDC1基因启动子序列转录调控元件的初步分析

目的 对hNaDC1基因启动子序列转录调控元件进行初步分析.方法 构建hNaDC1基因5'侧翼序列系列缺失质粒,以双荧光素酶报告基因检测系统检测hNaDC1基因5'侧翼区(-2 232/ 136)的转录调控元件与转录调控蛋白之间的相互作用.结果 pGL3-hNaDC1A质粒的转录活性最高,为(2.98±0.45);pGL3-hNaDC1D的转录活性最低,为(0.45±0.14).以pGL3-hNaDC1A质粒的转录活性为基准(100%),其他4种质粒相应的转录活性分别为:pGL3-hNaDC1B 86.7%,pGL3-hNaDC1C 89.4%,pGL3-hNaDC1D 15.8%,pGL3-hNaDC1E 61.2%.MatInspector 5.0软件预测结果显示hNaDC1基因5'侧翼启动子序列共含有22个14种转录因子结合位点.结论 hNaDC1基因5'侧翼区-1 084/-254和-12/ 136区域可能存在有正性作用转录因子的结合位点.     

中国人群中肾上腺素α2A受体基因SNP的分布及其对基因表达的影响

目的：在中国人群肾上腺素α2A受体(α2A-AR)基因中搜寻单核苷酸多态性(SNP)并研究其对基因表达的影响。方法：对α2A-AR基因进行序列分析，搜寻SNP。从全血中提取基因组DNA，扩增包含G／C多态性位点的239bpDNA片段。利用PCR-RFLP方法对中国北方人群α2A-AR基因-1296bp位点SNP进行基因分型。利用凝胶阻滞方法研究含G／C的390bp DNA片段与细胞核提取物的结合。结果：在中国北方人群α2A-AR基因中共发现2处SNP。-1296位SNP等位基因G、C频率分别为0．61和0．39，基因型GC,，C,C，CC频率分别为0．34，0．54，0．13。EMSA结果表明，细胞核提取物与-1296bp为C的DNA片段可特异性结合。结论：中国北方人群啦α2A-AR基因中存在2处SNP，调控区(-1296位)SNP等位基因为C的DNA片段可与特异性蛋白质结合，可能通过这一机制影响基因表达。     

老年性痴呆相关基因nicastrin启动子区单核苷酸多态性分析

【目的】分析老年性痴呆(Alzheimer病)相关基因nicastrin启动子区单核苷酸多态性(SNP),探讨其基因表达可能的分子调控机制。【方法】扩增nicastrin基因ATG上游约1.0kp启动子区DNA片段,与萤火虫荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic进行重组质粒的克隆与鉴定,确立启动子区候选功能SNP及其相应位点结合的转录调节因子。应用Lipofectamine 2000对包含功能SNP的重组质粒进行CRL-2137细胞瞬时转染,双荧光素酶相对活性分析及电泳迁移率变动分析。【结果】Nicastrin基因启动子区960 bp DNA片段内存在功能SNP_rs10752637-922 G→T,与其相应位点结合的转录因子为hepatic leukemia factor(HLF),SNP_rs10752637-922 T的序列结构对启动萤火虫荧光素酶报告基因的表达功能较SNP_rs10752637 -922 G的序列结构强(P<0.05,n=3)。【结论】Nicastrin基因核心启动子应该在960 bp DNA片段内,SNP_rs10752637-922 G→T可能是启动子区有功能位点突变,包含rs10752637-922 G/T的核苷酸序列结构可能通过与HLF在内的转录调节因子的作用来实现对nicastrin基因表达差异的调控。     

白癜风易感基因单核苷酸多态性研究进展

白癜风是一种色素脱失性疾病,其发病受多种因素影响,其中遗传因素占据重要地位。单核苷酸多态性是遗传变异中最常见的一种,可通过候选基因分析、全基因组关联分析研究方法进行检测。近年来研究发现多个易感基因在白癜风发生发展中起着重要作用。本文按照基因功能对白癜风易感基因单核苷酸多态性进行了归纳与介绍。     

COL3A1基因多态性与国内散发颅内动脉瘤病人的相关关系

目的通过对颅内动脉瘤病人和对照组的比较研究,探讨Ⅲ型胶原蛋白基因α1(COL3A1基因)与颅内动脉瘤之间的相关关系。方法抽取病例组和对照组的外周血,并提取基因组DNA,选择目的基因片断,设计聚合酶链反应(PCR)所需引物并合成,应用PCR反应扩增感兴趣的目的片断,经琼脂糖电泳验证后进行测序反应,比较病例组和对照组之间COL3A1基因多态性出现频率的差异。结果通过统计分析发现,2组研究对象的COL3A1基因功能性SNP-rs1800255基因型之间,差异具有统计学意义(χ2=4.94,P<0.05)。结论COL3A1基因的功能性SNP-rs1800255与国内散发颅内动脉瘤病人之间存在明显相关,COL3A1基因是国内散发颅内动脉瘤病人的易感基因之一。     

脯氨酸脱氢酶基因单核苷酸多态性与偏执型精神分裂症的关联研究

目的：探讨脯氨酸脱氢酶（PRODH）基因单核苷酸多态性（SNP）与偏执型精神分裂症的关系。方法：应用聚合酶链反应技术及聚丙烯酰胺凝胶芯片技术对中国广东潮汕地区汉族276例偏执型精神分裂症患者与100例正常对照者的PRODH基因4个（2026、1945、1766、1852）SNP位点进行基因型检测,并对分型结果进行测序鉴定。结果：联合统计发现,PRODH基因的4个位点的单倍型频数两组分布差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：PRODH基因多态性与偏执型精神分裂症存在关联。PRODH基因可能通过多个多态位点相互作用影响了偏执型精神分裂症的发病风险。     

Fas基因的多态性与椎间盘退变的相关性分析

目的：探讨中国汉族人群中如基因A-670单核苷酸多态性（SNP）与椎间盘退变（DDD）的相互关系。方法：采用等位基因特异性聚合酶链式反应（PCR）技术检测223例AD患者和124名健康对照者Fas基因A-670G位点SNP的分布,并分析各基因型与疾病的关系。结果：DDD组和对照组基因型频率（AA23％：29％;AG56％：54％;GG21％：17％,P〉0．05）及等位基因频率（A51％：58％;G49％：42％,P〉0．05）,表现型频率（A78％：83％;G77％：71％,P〉0．05）,差异均无统计学意义。结论：中国汉族人群中Fas基因A-670位点SNP与DDD无关联。     

血红素加氧酶1基因启动子微卫星多态性与疾病易感性研究进展

血红素加氧酶1(HO-1)基因启动子微卫星多态性调节HO-1的表达,影响机体对多种疾病的易感性。长GT重复序列是心血管疾病、脑血管疾病、外周血管疾病、肺部疾病的易感基因,短GT重复序列预防这些疾病。短GT等位基因的类风湿性关节炎患者的预后更好。GT重复序列对肿瘤的影响因肿瘤的类型、遗传背景不同而不同。     

贵州汉族人群肿瘤坏死因子-α基因启动子区的单核苷酸多态性

目的: 了解贵州汉族人群肿瘤坏死因子-α (tumor necrosis factor alpha, TNF-α)基因启动子区的基因多态性.方法: 采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP) 和序列特异性引物-PCR(SSP-PCR) 方法,对贵州汉族人群中TNF-α基因启动子区已知的5个多态性位点进行基因分型检测,并用统计学方法分析各位点基因型、等位基因频率及其组间差异.结果: 贵州汉族人群中TNF-α基因启动子区5个位点的等位基因频率分别为-238(G,96%;A,4.0%)、-308(G,92%;A,8%)、-857(C,65.0%;T,35.0%)、-863(C,80.0%;A,20.0%)、-1 031(T,48.0%;C,52.0%).结论: 贵州汉族人群中TNF-α基因启动子区单核苷酸多态性具有独特的特征,这为TNF-α基因多态性与疾病的相关性研究提供了基础资料.     

信号转导和转录激活因子4基因多态性与类风湿关节炎发病的相关性

目的探讨信号转导和转录激活因子4（STAT4）基因多态性与类风湿关节炎发病的相关性。方法以聚合酶链反应连接酶检测反应（PCR-LDR）法对139例RA患者和139名正常对照组进行STAT4基因rs7574865位点的SNP分型,比较各基因型及等位基因频率在正常人群和RA患者中的差异。结果 RA组STAT4 rs7574865各基因型分布频率与正常对照组有明显差异（P〈0.05）,T型和G型等位基因频率在RA组与正常对照组比较有显著差异（P〈0.01,OR1.658,95%可信区间为1.154～2.383）。结论 STAT4 rs7574865位点GT/TT基因型与RA发病具有相关性,STAT4基因rs7574865位点T等位基因为RA患者的易感基因。