补肾调冲方对半乳糖致POF大鼠始基卵泡募集因子GDF-9、AMH表达的影响

目的:研究补肾调冲方对半乳糖致POF大鼠卵巢功能的调节,探讨补肾调冲方通过调控卵巢始基卵泡募集因子GDF-9及AMH调节卵巢功能及治疗POF的机制。方法:建立半乳糖致POF大鼠模型,将造模成功的POF大鼠随机分为模型组与治疗组,每组各20只,另设正常对照组。于PND80开始,治疗组大鼠每日灌服补肾调冲方水溶液,模型组及空白组大鼠每日灌服等体积生理盐水,共4周。实验结束后光镜下计数各组大鼠卵巢内各级卵泡数目,ELISA法检测各组大鼠血清FSH、LH及E2水平,Real-time PCR法检测各组大鼠卵巢内GDF-9及AMH mRNA表达水平。结果:①补肾调冲方可使POF大鼠动情周期趋于正常,并能明显降低血清FSH、LH水平(P<0.05),提高E2水平(P<0.05),从而改善POF大鼠血清高促性腺激素低雌激素状态;组织形态学检测结果显示治疗组大鼠卵巢体积较POF模型组增大,各级卵泡生长较好,颗粒细胞层次多,黄体数目明显增多;始基卵泡、窦前卵泡及窦状卵泡数目均较模型组增多,闭锁卵泡数目则明显减少。②与正常组比较,POF大鼠卵巢GDF-9及AMH mRNA水平均明显降低(P<0.01),而治疗组大鼠卵巢GDF-9及AMH mRNA水平较模型组明显升高(P<0.05或P<0.01)。结论:补肾调冲方治疗POF的作用机制之一可能是通过上调卵巢局部始基卵泡募集因子GDF-9及AMH的表达,促进卵泡的生长发育,抑制卵泡的过度耗竭与闭锁,恢复始基卵泡的正常募集状态,从而抑制卵巢功能的过早衰竭。     

补肾调冲方对半乳糖致POF大鼠卵巢储备力及其相关因子INHB、AMH表达的影响

目的 研究补肾调冲方对半乳糖致POF大鼠卵巢储备力及其相关因子INHB、AMH蛋白表达的影响,为临床防治卵巢储备力降低提供理论依据.方法 建立半乳糖致POF大鼠模型,将造模成功的POF大鼠随机分为模型组与治疗组,每组各20只;另设正常对照组.于PND80开始,治疗组大鼠每日灌服补肾调冲方水溶液,模型组及空白组大鼠每日灌服等体积生理盐水,共4周.实验结束后光镜下计数各组大鼠卵巢内各级卵泡数目,ELISA法检测各组大鼠血清FSH、LH及E2水平,Western blot法检测各组大鼠卵巢内INHB及AMH蛋白表达水平.结果 ①补肾调冲方可使POF大鼠动情周期趋于正常,并能明显降低血清FSH、LH水平(P＜0.05),提高E2水平(P＜0.05),从而改善POF大鼠血清高促性腺激素低雌激素状态;组织形态学结果显示治疗组大鼠始基卵泡及窦状卵泡数目均较模型组增多,闭锁卵泡数目则明显减少.②与正常组比较,POF大鼠卵巢INHB及AMH蛋白表达水平均明显降低(P＜0.01),而治疗组大鼠卵巢INHB及AMH表达水平较模型组明显升高(P＜0.05或P＜0.01).结论 补肾调冲方可明显改善POF大鼠血清高促性素低雌激素状态,促进卵泡发育,抑制卵泡过度闭锁,从而调节卵巢功能,提高卵巢储备力,其机制可能是通过上调卵巢局部因子INHB及AMH的表达而实现的.     

补肾调冲方对半乳糖致卵巢早衰大鼠卵巢功能的影响

目的：研究补肾调冲方对半乳糖致卵巢早衰（POF）大鼠卵巢功能的影响,探讨补肾调冲方调节卵巢功能的作用机理。方法：将POF模型大鼠随机分为模型组与补肾调冲方治疗组,另设正常组,分别给相应药物或生理盐水灌胃4周。实验结束前10d,各组大鼠逐日阴道涂片,观察动情周期变化;光镜下观察各级卵泡和黄体形态;实验结束后,酶免法检测大鼠血清E2、P、FSH、LH含量。结果：造模后大鼠动情周期紊乱,治疗组大鼠动情周期渐趋于正常,接近正常组;治疗组大鼠卵巢组织中的生长期卵泡、黄体、闭锁细胞的情况优于模型组,接近正常组。治疗组大鼠血清中的FSH,LH水平明显低于模型组,而E2水平则明显高于模型组。结论：补肾调冲方能够使POF大鼠恢复规则的动情周期及正常的卵巢生理结构,调整大鼠血清激素水平。     

中药补肾调冲方对卵巢储备功能低下大鼠的影响

目的:观察中药补肾调冲方对环磷酰胺所致卵巢储备功能低下(DOR)大鼠性激素水平和免疫因子TNF-α、IFN-γ含量的影响,探讨补肾调冲方对DOR的预防、改善和调节作用。方法:将SD雌性大鼠40只,随机分为对照组、模型组、补肾调冲方预防组、补肾调冲方治疗组各10只。运用ELISA法检测大鼠血清中雌二醇(E2)、卵泡刺激素(FSH)与黄体生成素(LH)比值、抗苗勒激素(AMH)水平。采用Real Time PCR法检测大鼠卵巢组织相关细胞因子TNF-α、IFN-γmRNA转录水平的变化情况。结果:补肾调冲方可升高DOR大鼠的E2、AMH水平,降低FSH/LH比值和TNF-α、IFN-γmRNA表达,与对照组比较差异具有统计学意义(P0.05)。结论:中药补肾调冲方对卵巢损伤具有一定的预防保护作用,可以预防DOR的发生,其作用机制可能与补肾调冲方中某些中药能够调节卵巢性激素水平,抑制TNF-α、IFN-γ分泌,降低卵泡闭锁的速度,抑制卵泡过度凋亡,进而改善卵巢功能。     

补肾调冲方对卵巢早衰大鼠性激素水平和卵巢组织形态学的影响

用雷公藤多甙片灌胃法制造大鼠卵巢早衰动物模型,在造模结束后用补肾调冲方不同剂量进行治疗;在造模的同时用补肾调冲方不同剂量进行预防;并用阳性对照和阴性对照进行比较;以大鼠血清性激素水平、卵巢组织形态学检测作为观测指标;观察补肾调冲方的药效学作用和预防作用,并探讨作用机制.实验研究表明,补肾调冲方对实验性卵巢早衰大鼠模型有性激素调节作用,可使雌二醇升高,对早衰的卵巢组织有恢复作用;可增加原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡的数量,并使优势卵泡成熟化而促排卵;可增加黄体数量,使早衰的卵巢恢复正常.通过对补肾调冲方高、中、低3 个剂量组的药效学观察,发现低剂量组疗效最好,组间差异有统计学意义或有差别趋势.通过对补肾调冲方预防组高、中2个剂量组的药效学观察,提示在临床预防性腺损伤时,治疗用药和中药补肾调冲方同时应用可能防止性腺损伤.     

补肾调冲方对半乳糖致POF大鼠始基卵泡募集及卵泡闭锁相关因子GDF-9表达的影响

目的:观察补肾调冲方对半乳糖致卵巢早衰(Premature ovarian failure,POF)大鼠始基卵泡募集及卵泡闭锁相关因子生长分化因子-9(Growth differentiation factor-9,GDF-9)表达的影响。方法:应用Real-time PCR法检测各组大鼠卵巢内GDF-9基因表达水平;采用Western Blot法检测各组大鼠卵巢内GDF-9蛋白表达水平。应用TUNEL法检测各组大鼠卵巢内细胞凋亡情况。结果:与空白组比较,模型组卵巢内的GDF-9 mRNA与蛋白表达水平明显减少;与模型组比较,治疗组卵巢内的GDF-9基因与蛋白表达明显增加。结论:补肾调冲方可通过调节GDF-9 mRNA与蛋白的表达,促进POF大鼠始基卵泡募集,促进生长卵泡发育,抑制卵泡异常闭锁,从而达到促进排卵,调节卵巢功能,治疗POF的目的。     

补肾法防治化疗致卵巢早衰实验研究

目的:探讨中医补肾经典方左归丸、右归丸对卵巢早衰(POF)的防治机理。方法:采用环磷酰胺(CTX)化疗致POF模型。选动情周期规律的大鼠60只纳入实验,随机分为空白组、模型组、左归丸+CTX组、右归丸+CTX组、左右归丸+CTX组、雌孕激素+CTX组,共6组,每组10只。于造模当日,同期灌服实验药物,观察各组动物一般状态、动情周期及卵巢GDP-9 mRNA的相对表达量。结果:各组与空白组比较卵巢GDP-9 mRNA的相对表达量均有非常显著性差异(P0.01);左归丸组和左右归丸组与模型组比较均有显著性差异(P0.05),雌孕激素组与模型组比较有非常显著性差异(P0.01);右归丸组与雌孕激素组比较有显著性差异(P0.05)。结论:左归丸、右归丸早期运用不仅能够改善POF大鼠的一般状况,还能上调POF大鼠卵巢GDF-9 mRNA的表达,增加卵泡数量,改善卵巢内分泌功能,进一步明确了POF发生与发展的调控环节,为临床早期防治POF提供依据。     

补肾调冲方对卵巢早衰大鼠性激素水平和卵巢Bcl-2/Bax表达的影响

目的:观察补肾调冲方对雷公藤多苷片所致卵巢早衰(premature ovarian failure,POF)雌性大鼠卵巢性激素水平和卵巢中B细胞淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/leukemia-2,Bcl-2),促进凋亡蛋白Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 assaciated X protein,Bax)蛋白及mRNA表达的影响,探讨补肾调冲方的预防作用。方法:SD雌性大鼠42只,随机分为正常组,模型组,结合雌激素组,补肾调冲方预防高、中、低剂量组。运用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清中雌二醇(estradiol,E_2),卵泡刺激素(follicule-stimulating hormone,FSH),黄体生成素(luteinizing hormone,LH),孕酮(progesterone,P)水平。蛋白质免疫印迹(Western blot)法和逆转录-聚合酶链式方应(RT-PCR)法检测卵巢组织中Bcl-2,Bax蛋白和mRNA的表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠FSH,LH含量明显升高,E_2的含量明显降低,卵巢组织中Bcl-2蛋白及mRNA的表达明显降低,Bax蛋白及mRNA的表达明显升高(P0.01);补肾调冲方各给药组和结合雌激素组E_2的含量均高于模型组(P0.01),其中补肾调冲方低、中、高剂量和结合雌激素组E_2含量与正常组比较,差异无统计学意义。补肾调冲方各给药组和结合雌激素组FSH,LH的含量均低于模型组(P0.01);低、中、高剂量组和结合雌激素组FSH,LH含量与正常组比较,差异无统计学意义。各组与正常组P含量比较差异无统计学意义。补肾调冲方预防低、中、高剂量组和结合雌激素组Bcl-2蛋白及mRNA的表达明显高于模型组(P0.01);Bax蛋白及mRNA的表达明显低于模型组(P0.01)。结论:补肾调冲方对卵巢具有一定的保护作用,可以预防卵巢早衰的发生。其作用机制可能与补肾调冲方中某些中药能够调节卵巢性激素水平,维持Bcl-2,Bax的平衡,降低卵泡闭锁的速度,抑制卵泡的过度凋亡,改善卵巢的功能。     

补肾调冲法治疗卵巢功能失调性不孕的实验研究

目的：探讨补肾调冲法治疗卵巢功能失调性不孕症的作用机理。方法：选择雌性小白鼠72只，大白鼠38只，各随机分4组，分别予以补肾方、调冲方、补肾调冲方及生理盐水灌胃。观察排卵和黄体情况、血清E2、LH含量及卵巢环磷酸腺苷(cAMP)水平。结果：补肾调冲方具有明显的促卵泡发育、促黄体生成功能；可使脑垂体前叶促性腺激素细胞分泌颗粒增多及卵泡颗粒层细胞处于活跃状态，使大鼠卵巢cAMP含量增加。结论：补肾调冲法对垂体－卵巢生死分泌系统具有良好的调节作用。     

补肾健脾方对卵巢早衰大鼠下丘脑-垂体-性腺轴功能的影响

目的观察补肾健脾方对卵巢早衰(POF)大鼠下丘脑-垂体-性腺轴(HPG轴)功能的影响机制。方法筛选具有正常动情周期的雌性SD大鼠34只,按随机数字表法分为正常组10只和造模组24只,正常组不予处理,造模组采用环磷酰胺法成功建立POF大鼠模型19只。将造模组随机分为模型组10只和补肾健脾组9只。补肾健脾组予补肾健脾方10 mL/(kg·d)灌胃,正常组和模型组予等体积生理盐水灌胃,每日1次,共4周。监测3组大鼠动情周期变化,计算体质量增量及卵巢指数,观察卵巢组织形态变化,检测促卵泡激素(FSH)、雌二醇(E2)、促性腺激素释放激素(GnRH)、抗苗勒管激素(AMH)水平以及丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(Akt)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)mRNA相对表达量。结果与正常组比较,模型组体质量增量、卵巢指数、Akt和mTOR mRNA表达量下降(P均<0.05),血清FSH、GnRH水平显著提高(P均<0.05),E₂、AMH水平显著降低(P均<0.01),动情周期延长、紊乱,卵巢组织病理显示闭锁卵泡数量增多,生长卵泡数量少,未见成熟卵泡;与模型组比较,...     

温肾助阳益气养血方配合人工周期疗法治疗肾阳虚型卵巢早衰疗效观察

目的 观察温肾助阳益气养血方配合人工周期疗法治疗肾阳虚型卵巢早衰的临床疗效。方法 将96例肾阳虚卵巢早衰患者随机分为治疗组和对照组,每组48例。治疗组采用温肾助阳益气养血法配合人工周期疗法治疗;对照组采用西药人工周期疗法进行治疗。1个月为1个疗程,共治疗3个疗程,观察患者治疗前后月经情况及主要症状,检测治疗前后血清卵泡刺激素（FSH）、黄体生成素（LH）、雌二醇（E-2）水平。结果 治疗组总有效率（85.42%）高于对照组（66.67%,P〈0.05）。且治疗组在改善中医症状方面明显优于对照组（P〈0.05）。结论 温肾助阳益气养血方配合人工周期疗法对卵巢功能早衰患者血清激素水平和临床症状均有改善作用。     

石斛汤联合促排卵药治疗多囊卵巢综合征不孕症的临床观察

目的观察石斛汤联合促排卵药克罗米芬（CC）、尿促性素（HMG）治疗多囊卵巢综合征（P-COS）不孕症的临床疗效。方法将120例PCOS患者随机分为4组。治疗组2组,分别运用石斛汤联合CC、HMG治疗PCOS不孕症各30例;对照组2组,分别单纯运用CC、HMG治疗各30例。观察每组排卵例数、妊娠例数、每周期用药总量、B超监测排卵前卵泡大小、卵泡最大直径与最小直径的差值、排卵前子宫内膜厚度。结果治疗组与对照组排卵例数、排卵前卵泡大小相近,比较差异无统计学意义（P〉0．05）;治疗组受孕例数、排卵前子宫内膜厚度均高于对照组,卵泡最大直径与最小直径差值、周期用药量少于对照组（P〈0．05）。结论石斛汤可减少促排卵药物的应用,促进卵泡生长、变圆,促进子宫内膜增长,提高妊娠率,对PCOS不孕症有较好临床疗效。     

抗苗勒氏管激素在免疫性卵巢早衰中的发病意义及左归丸的作用机制

目的:研究抗苗勒氏管激素(AMH)在免疫性卵巢早衰(POF)中的发病意义及左归丸对POF小鼠AMH及其信号转导通路[AMH/活化素蛋白激酶2(ALK2)/Smad1]的影响,探讨左归丸的作用机制。方法:8周龄Balb/c雌性小鼠随机分为正常组、模型组、戊酸雌二醇组、左归丸组。以小鼠透明带3多肽建立POF动物模型,予左归丸及戊酸雌二醇进行治疗。电化学发光法检测小鼠血清AMH,卵泡刺激素(FSH)的水平,光学显微镜检测小鼠生长卵泡比率,免疫组化法及蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测小鼠卵巢AMH及其信号转导蛋白ALK2,Smad1蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠血清AMH水平明显降低,FSH水平明显升高(P0.05);与模型组比较,左归丸组明显升高小鼠血清AMH水平,明显降低FSH水平(P0.05)。与正常组比较,模型组小鼠卵巢生长卵泡比率明显减少(P0.01),与模型组比较,左归丸组生长卵泡比率明显增高(P0.05)。AMH,ALK2,Smad1蛋白均在卵泡颗粒细胞胞浆表达。与正常组比较,模型组小鼠卵巢AMH,ALK2,Smad1蛋白表达明显下降(P0.05);与模型组比较,左归丸组小鼠卵巢AMH蛋白表达明显升高(P0.05),免疫组化检测显示ALK2,Smad1表达均有上升,但无统计学差异,Western blot检测显示ALK2,Smad1表达也均明显升高(P0.05)。结论:POF的发生与AMH分泌不足、卵巢AMH蛋白表达低下有关,其通过影响AMH/ALK2/Smad1信号转导,影响始基卵泡的募集,从而使卵泡消耗过快,卵巢功能过早衰竭,卵巢处于衰老状态。左归丸可促进POF小鼠AMH分泌,上调卵巢AMH蛋白的表达,并通过影响AMH/ALK2/Smad1信号转导,抑制始基卵泡的过快募集和消耗,改善卵巢功能。     

补肾通脉方对伴胰岛素抵抗的多囊卵巢综合征大鼠胰岛素抵抗及排卵障碍的影响

目的 建立由硫酸普拉睾酮钠联合高脂饮食诱导的伴胰岛素抵抗（insulin resistance, IR）的多囊卵巢综合征（polycystic ovarian syndrome, PCOS）的大鼠模型,并观察补肾通脉方对 模型大鼠IR和排卵障碍的影响。     

补肾活血汤对小卵泡排卵不孕症患者卵泡发育、卵巢动脉血流的影响

目的:观察补肾活血汤对小卵泡排卵(SFO)不孕症患者卵泡发育、卵巢动脉血流的影响。方法:将80例SFO不孕症患者随机分为两组,对照组40例接受枸橼酸氯米芬口服治疗,观察组40例,在对照组基础上加用补肾活血汤治疗,两组均治疗3个月经周期。统计两组临床疗效,并比较两组最大卵泡平均直径、子宫内膜厚度、成熟卵泡排卵率、未破裂卵泡黄素化综合征(LUFS)、妊娠率、早期自然流产率、性激素与卵巢动脉血流。结果:观察组治疗的临床总有效率为82.50%,明显高于对照组的62.50%(P<0.05)。与治疗前比较,两组治疗后最大卵泡平均直径、子宫内膜厚度均明显增加(P<0.05),且治疗后观察组以上指标均高于对照组(P<0.05)。观察组成熟卵泡排卵率和妊娠率高于对照组(P<0.05),LUFS发生率、早期自然流产率低于对照组(P<0.05)。与治疗前比较,治疗后两组血清LH、E₂水平、卵巢动脉PSV、EDV均明显增加(P<0.05),血清FSH、RI均明显降低(P<0.05),且治疗后观察组上述指标均优于对照组(P<0.05)。结论:补肾活血汤可明显促进SFO不孕症患者卵泡发育,增加成熟卵泡排卵率与妊娠率,并改善性激素与卵巢动脉血流循环。     

益肾健脾养血通利方对Poresky PCOS大鼠模型的影响

目的:观察益肾健脾养血通利方对PCOS大鼠的作用及其作用机制进行初步探讨.方法:选用Poresky的PCOS动物,观察大鼠体重、动情周期、血清胰岛素和IGF-I水平、性激素以及病理组织学的变化.结果:本方能降低PCOS大鼠的体重、维持动情周期、降低血清胰岛素和IGF-I水平;卵巢囊泡体积明显缩小,卵泡壁颗粒细胞层及黄体数量增加.结论:益肾健脾养血通利方具有降低血清胰岛素水平、改善多囊卵巢征象、恢复排卵的作用.     

健脾化浊通瘀方药治疗多囊卵巢综合征60例疗效观察

目的 观察健脾化浊通瘀方药治疗多囊卵巢综合征的临床疗效.方法 将120例多囊卵巢综合征患者随机分为2组,对照组60例予黄体酮注射液与枸橼酸氯米芬胶囊,治疗组60例在对照组的基础上加用健脾化浊通瘀方药.2组均以1个月经周期为1个疗程,共治疗6个疗程.观察治疗前后卵泡刺激素（FSH）、黄体生成激素（LH）、睾酮（T）、雌二醇（E2）水平变化,并分别对2组患者治疗前后的规律排卵率和规律月经率进行比较.结果 2组治疗后FSH、LH、T、E2均比治疗前下降（P〈0.05）;治疗组治疗后FSH、LH、T、E2与对照组治疗后比较下降显著（P〈0.05）.治疗组治疗后规律排卵率、规律月经率改善均优于对照组（P＜0.05）.结论 自拟健脾化浊通瘀方药治疗多囊卵巢综合征疗效显著.     

活血三步法对卵巢过度刺激征的防治及对妊娠结局的影响

目的:探讨"活血三步法"对卵巢过度刺激征(OHSS)的防治及对妊娠结局的影响。方法:对70例因多囊卵巢综合征、年轻、瘦小、有高敏感性的不孕症应用促排卵后每侧卵巢有3~5个为16mm以上卵泡生长的患者,分为治疗组与对照组。治疗组采用"活血三步法"。并采用血府逐瘀汤做对照。结果:治疗组与对照组卵泡破裂数、周期取消率、临床妊娠率,对比差别均有统计学意义(P<0.05)。与对照组对比,轻度OHSS发生率有增高趋势,但轻、中、重度OHSS发生率、流产率,多胎妊娠率、减胎率,孕12周胎儿存活率,对比差别均无统计学意义(P>0.05)。结论:"活血三步法"能有效减少中、重度OHSS的发生,提高临床妊娠率,不增加流产率及多胎妊娠率,对于促排卵中高反应病人是避免周期取消的一个良好选择。     

针刺对多囊卵巢综合征大鼠不孕的影响

目的 观察针刺对多囊卵巢综合征（PCOS）大鼠不孕的影响, 并探讨其作用机制。     

右归丸对雄激素致排卵障碍型不孕大鼠血清E2、T和IGF-1水平影响研究

目的：右归丸对雄激素致排卵障碍性不孕大鼠血清中E2、T和IGF-1水平的影响,以进一步探讨右归丸治疗不孕症的作用机理。方法：将43只9日龄SD雌性大鼠随机分为空白对照组、模型组、右归丸组、克罗米芬组。于颈背下注射丙酸睾丸酮建立ASR大鼠模型,第80天开始灌服右归丸制剂,5周后股动脉取血,并取出新鲜卵巢组织,观察卵巢形态学,用放免法检测血中E2和T水平,用酶联免疫法检测血清中IGF-1水平。结果：右归丸能够促进卵泡生长发育及排出,并有黄体生成,降低病理性囊性卵泡数。右归丸能够增加血清中E2含量（P〈0.05）,降低血清中T的含量（P〈0.05）,右归丸有降低IGF-1趋势。结论：右归丸有可能通过降低IGF？I和T,促进T转化为E2这一途径,从而促进卵泡生长发育及排出。