永久性大脑中动脉闭塞大鼠纹状体P—SAPK/JNK表达与神经元凋亡的相关性

目的探讨永久性大脑中动脉闭塞（permanent middle cerebral artery occlusion,pMCAO）大鼠纹状体P-SAPK／JNK表达与神经元凋亡的相关性。方法54只Sprague—Dawley雄性大鼠随机分为假手术组以及pMCAO1h、3h、6h、12h和24h组,每组9只。应用TUNEL法检测纹状体凋亡神经元,免疫组织化学染色法检测纹状体P—SAPK／JNK核转位,Western印迹法检测P-SAPK／JNK蛋白表达。结果pMCAO 1h纹状体TUNEL和P—SAPK／JNK阳性细胞数量显著增多（P=0．0001）,6h达高峰,12h时TUNEL阳性细胞减少,但仍高于假手术组（P=0．0002）。Western印迹分析显示,pMCAO后纹状体P—SAPK／JNK蛋白表达水平显著增高,且时程变化与免疫组化染色结果一致。纹状体神经元凋亡与P—SAPK／JNK蛋白表达呈显著正相关（r=0．984,P=0．0004）。结论脑缺血可能通过激活P-SAPK／JNK诱导纹状体神经元凋亡。     

细胞内丝裂原活化蛋白激酶信号通路与脑缺血后神经元凋亡

脑缺血可导致梗死核心区细胞坏死和缺血半暗带细胞凋亡。脑缺血后,丝裂原活化蛋白激酶（mitogen－activated protein kinases, MAPKs）信号通路被激活,引起程序性细胞死亡,包括细胞凋亡。文章就M APKs信号家族与脑缺血后神经元凋亡的关系进行了综述。     

Rho激酶抑制剂法舒地尔通过抑制MLK3－JNK信号通路保护脑缺血再灌注大鼠海马CAl区神经元

目的探讨Rho激酶抑制剂法舒地尔对脑缺血再灌注大鼠混合性谱系激酶（mixed—lineagekinase3,MLK3）、c—Jun—N末端激酶（c-JunNH2-terminalkinase,JNK）磷酸化、胱冬酶-3表达以及海马CAl区神经元损伤的影响。方法72只Sprague—Dawley大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、生理盐水对照组和法舒地尔组。四血管结扎法制作大鼠全脑缺血模型。免疫印迹分析检测MLK3和JNK磷酸化水平以及胱冬酶-3表达,采用焦油紫染色图像分析检测海马CAl区存活神经元数量。结果缺血再灌注6h时,法舒地尔组MLK3磷酸化水平（1．13±0．03）显著低于生理盐水对照组（2．08±0．01,P=0．0003）,但MLK3水平无显著差异（P=0．69）;缺血再灌注3d时,法舒地尔组JNK磷酸化水平（1．27±0．02）显著低于生理盐水对照组（2．09±0．01,P=0．0002）,但JNK水平无显著差异（P=0．83）;缺血再灌注6h时,法舒地尔组胱冬酶-3表达水平（1．28±0．02）显著低于生理盐水对照组（2．10±0．01,P=0．0006）;缺血再灌注5d时,法舒地尔组海马CAl区存活锥体细胞数量为（82．8±3．2）个,显著多于生理盐水对照组的（11．8±1．6）个（P〈0．05）。结论法舒地尔能显著抑制缺血再灌注诱导的MLK3、JNK磷酸化水平以及胱冬酶-3蛋白表达,进而减轻海马CAl区神经元损伤。     

永久性大脑中动脉闭塞大鼠梗死周围组织p-Akt(Ser473)、p-Bad(Ser136)表达与细胞凋亡

目的 探讨永久性大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)大鼠脑梗死周围组织p-Akt(Ser473)、p-Bad(Serl36)表达的变化及其与细胞凋亡关系.方法 60只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术、MCAO 3 h、MCAO 12 h、LY294002干预MCAO 3 h和 LY294002干预MCAO 12 h组,每组12只.改良线栓法制作永久性MCAO模型,LY294002干预组在模型制作前15min经侧脑室给药.采用Longa法进行神经功能评分,氯化三苯基四氮唑(2,3,5-triphenyl tetrazolium chloride,TTC)法检测梗死体积,免疫组织化学染色法检测梗死周围组织p-Akt(Ser473)和p-Bad (Ser136)表达,TUNEL法检测梗死周围组织凋亡细胞.结果 模型制作后3h,所有实验大鼠均从麻醉中清醒.假手术组神经功能缺损评分为0分,MCAO 3 h组、MCAO 12 h组、LY294002干预MCAO 3 h组和LY294002干预MCAO 12 h组分别为(2.25±0.45)、(2.92±0.99)、(3.00±0.95)和(3.02 ±0.36)分,各组间存在显著性差异(F =26.520,P=0.000).其中,LY294002干预MCAO 3 h组显著性高于MCAO 3 h组(P=0.009),LY294002干预MCAO 12 h组与MCAO 12 h组无显著性差异(P=0.354).TTC染色显示,假手术组未见梗死灶,MCAO 3 h组、MCAO 12 h组、LY294002干预MCAO 3 h组和LY294002干预MCAO 12 h组梗死体积分别为(23.4±1.4)、(40.3±1.1)、(31.9±6.0)和(44.4±3.8)mm3,各组间存在显著性差异(F=30.440,P=0.000).其中,LY294002干预MCAO 3 h组显著性大于MCAO 3 h组(P =0.002),LY294002干预MCAO 12 h组与MCAO 12 h组无显著性差异(P=0.113).与假手术组相比,MCAO 3 h组梗死周围组织p-Akt(Ser473)表达显著性增高,MCAO 12 h组显著性下降;p-Bad(Ser136)表达水平随着MCAO时间的推移呈现进行性下降,同时凋亡细胞数量进行性增多.LY294002干预后,MCAO 3 h时梗死周围组织p-Akt(Ser473)和p-Bad(Ser136)表达水平均显著性下降,凋亡细胞数量显著性增多(P＜0.05),但对MCAO后12 h时的各指标无显著性影响.结论 脑梗死早期P13K/Akt信号转导通路的激活以及该通路关键蛋白p-Akt(Ser473)的应激性升高具有脑保护作用,而脑梗死后期该通路活性的衰竭及其关键蛋白的急剧降低则与脑损伤有关.     

Rho激酶抑制剂法舒地尔通过抑制MLK3-JNK信号通路保护脑缺血再灌注大鼠海马CA1区神经元

目的 探讨Rho激酶抑制剂法舒地尔对脑缺血再灌注大鼠混合性谱系激酶(mixedlineage kinase 3,MLK3)、c-Jun-N末端激酶(c-Jun NH2-terminal kinase,JNK)磷酸化、胱冬酶-3表达以及海马CA1区神经元损伤的影响.方法 72只Sprague-Daw1ey大鼠随机分为假手...     

老年大鼠单侧大脑中动脉闭塞对心肌的影响

18～24月龄老年大鼠闭塞单侧大脑中动脉后,在6、24和48小时三个时间内对心肌组织形态学、超微结构及代谢指标改变进行观察。结果表明,实验组脑缺血范围占全脑32.1％,对侧肢体出现痛觉减弱为10O％,18％大鼠出现肢体活动异常,对照组无脑缺血症状。脑缺血后外周血和心肌组织SOD明显减低(P<0.01),MDA明显升高,但48小时后心肌组织MDA含量有所下降。形态学发现心肌组织呈颗粒样变,超微结构定量分析反映线粒体肿胀,部分?破坏。结果提示,老年大鼠单例大脑中动脉闭塞后对心肌组织有损伤作用。     

橄榄苦苷对脑缺血再灌注损伤大鼠神经元凋亡及JNK/p38 MAPK信号通路的影响

目的研究橄榄苦苷对脑缺血再灌注损伤大鼠神经元凋亡及c-Jun氨基末端激酶(JNK)/促分裂素原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路的影响。方法SD大鼠随机分为假手术组、模型组、尼莫地平组(0.5 mg/kg)及橄榄苦苷高、低剂量组(40、20 mg/kg),每组14只。连续灌胃给药14 d,末次给药结束后采用线栓法建立脑缺血再灌注损伤模型,进行2 h缺血后再灌注24 h,测定神经症状评分、脑梗死面积、脑组织含水量、半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3、B淋巴细胞瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关的x蛋白(Bax)mRNA表达及磷酸化的JNK(p-JNK)、磷酸化的p38 MAPK(p-p38)蛋白表达等指标。结果与模型组比较,橄榄苦苷高、低剂量组大鼠神经症状评分、脑梗死面积及橄榄苦苷高剂量组脑组织含水量均显著降低(P<0.05);与模型组比较,橄榄苦苷高、低剂量组大鼠Caspase-3、Bax mRNA及p-JNK、p-p38蛋白表达均明显降低(P<0.05),而Bcl-2 mRNA表达明显增加(P<0.05)。结论橄榄苦苷对大鼠脑缺血再灌注损伤具有保护作用,该作用与抑制JNK/p38 MAPK信号通路的活化进而减少神经元凋亡有关。     

大鼠持续性局灶脑缺血后Fas基因表达及其与神经元凋亡的关系

目的 研究成年大鼠持续性局灶脑缺血后Fas基因表达以及与缺血后细胞凋亡的关系。方法 用右侧近端大脑中动脉电凝术,建立大鼠持续性局灶脑缺血模型。分别在电凝术后3、6、12、24、48、72和120h取材,用原位末端标记(TUNEL)检测细胞凋亡,用原位RT-PCR法检测Fas mRNA表达并进行半定量分析。结果 梗死灶周边区细胞从12h开始表达Fas mRNA,24h达到高峰,48和、72h逐渐下降,120h已经检测不到。缺血后3、6、12、24和48h未见凋亡细胞,72h在梗死灶周边区域出现散在的凋亡细胞,120h仍然有凋亡细胞,分布范围与数量与72h相似。Fas mRNA原位杂交信号阳性细胞的出现明显早于凋亡细胞,数量明显多于后,而细胞形态和分布区域相似。结论 大鼠局灶性脑缺血可诱导梗死灶周边区域Fas mRNA的表达,Fas基因可能介导了脑缺血后细胞凋亡的发生。     

实验性肝硬化大鼠纹状体中神经元的形态定量学研究

目的 观察肝硬化大鼠纹状体中神经元的形态及数目的变化，探讨肝性脑病的发病机制。方法 用四氯化碳（CCL4）建立肝硬化模型，尼氏染色法观察纹状体神经元的变化。图像分析仪对神经元的形态及数量变化做定量分析。结果 肝硬化模型制备成功。肝硬化大鼠纹状体中神经元数量减少，染色变浅，尼氏小体减少或消失。结论 提示纹状体神经元的变化有可能与肝性脑病时出现的运动异常有关。     

脾切除对大脑中动脉闭塞大鼠脑梗死体积的影响

目的 探讨脾切除对脑缺血大鼠脑梗死体积的影响及其可能机制.方法 18只雄性Sprague- Dawley大鼠随机分为脾切除组、假脾切除术组和对照组,每组6只.脾切除2周后,采用线检法建立大鼠大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,24h后灌注固定并取脑.尼氏染色...     

大鼠缺血半暗带区神经元凋亡与磷酸化C-Jun氨基末端激酶及原癌基因c-Myc表达的相关性

目的观察大鼠永久性局灶脑缺血皮质缺血半暗带区（IP）磷酸化应激活化激酶/C-Jun氨基末端激酶（P-SAPK/JNK）及原癌基因c-Myc mRNA转录的表达情况,探讨IP区神经细胞凋亡的可能机制。方法健康雄性Sprague-Dawley大鼠72只,随机分为假手术组和永久性大脑中动脉阻塞（pMCAO）后1、3、6、12、24 h组,每组12只。线栓法制备大鼠pMCAO模型,提取缺血不同时间点大鼠脑皮质IP区的组织。应用原位细胞凋亡（TUNEL）检测法分析IP区皮质神经元的凋亡情况,采用免疫组织化学法分析脑缺血后P-SAPK/JNK细胞的表达情况,采用Western-blot检测P-SAPK/JNK蛋白含量;采用实时定量PCR技术检测c-Myc mRNA的转录水平。结果①大鼠pMCAO后3 h,IP区TUNEL阳性细胞和P-SAPK/JNK阳性细胞均明显增加,12 h达高峰,与假手术组比较,差异有统计学意义,P〈0.01。②Western-blot结果证明,大鼠pMCAO后3 h,P-SAPK/JNK蛋白水平增加,12 h达高峰,各时间点与假手术组比较,差异有统计学意义,P〈0.01。③实时定量PCR结果表明,大鼠pMCAO后6 h,IP区c-Myc mRNA的转录水平明显上调,12 h达高峰,均高于假手术组,差异有统计学意义,P〈0.01。④IP区皮质P-SAPK/JNK蛋白水平与神经元凋亡及c-Myc mRNA转录水平均呈正相关系（r=0.985,P〈0.01;r=0.887,P〈0.05）。结论 pMCAO模型IP区神经元的凋亡可能与JNK/c-Myc信号通路的激活有关。     

脑梗死后脑红蛋白的表达及其保护机制

目的探讨脑梗死后缺血半暗带脑组织中脑红蛋白（NGB）表达与caspase-3、谷氨酸表达的关系及NGB在脑缺血中的表达规律和保护作用的机制。方法制作大鼠局灶性脑缺血模型（MCAO）,随机分为假手术对照组、脑缺血组和单克隆NGB抗体干预组、干预对照组、正常干预对照组,分别在不同时间点断头取脑,制作标本,作脑红蛋白、caspase-3和谷氨酸免疫组化染色。结果（1）与假手术对照组比较,缺血5min亚组可见NGB阳性细胞数开始上升,0.5h达到高峰（P〈0.01）,随后下降,至6h接近假手术组。缺血各组（除24h、72h外）之间两两比较,差异均有统计学意义（P〈0.01）;（2）与假手术对照组比较,缺血0.5h亚组大脑皮质与豆状核区细胞caspase-3阳性表达增多,6～24h达到高峰（P〈0.01）,72h时仍高于假手术对照组,缺血各亚组之间两两比较,差异均有统计学意义（P〈0.01）;（3）与假手术对照组比较,缺血各亚组大脑皮质与豆状核区细胞谷氨酸阳性表达缺血0.5h就已增多,且随时间的变化呈逐步增高的趋势,24～72h达到高峰（P〈0.01）,缺血各亚组之间两两比较,差异均有统计学意义（P〈0.01）;（4）NGB表达与caspase-3、谷氨酸表达均呈负相关关系（分别为r=-0.953,P〈0.01;r=-0.973,P〈0.01）;（5）干预对照组caspase-3、谷氨酸表达均上调（P〈0.01）。结论脑缺血后NGB在缺血周围半暗带区早期表达升高,随后下降,于6h后降至正常,具有调节caspase-3、谷氨酸表达的作用,这是NGB脑保护作用的可能机制。     

脂质胞壁酸诱导的延迟预适应对大鼠局灶性脑缺血/再灌注后神经细胞凋亡的作用

目的　探讨脂质胞壁酸 (LTA)诱导的延迟预适应对大鼠局灶性脑缺血 /再灌注损 (I/R)后神经细胞凋亡的作用。方法　采用改良Longa法制作大鼠右大脑中动脉 (MCA)闭塞 2h造成局灶性脑缺血模型 ,恢复血液灌流 1 2h。大鼠在脑缺血前 2 4h腹腔注射LTA(1mg/kg)诱导延迟预适应 ,检测脑组织再灌注 1 2h后大鼠神经症状、组织超氧化物歧化酶 (SOD)和丙二醛 (MDA)水平 ,以及组织中一氧化氮 (NO)的含量 ,同时用TUNEL染色法检测神经细胞的凋亡 ,用免疫组织化学的方法检测神经组织Bcl 2蛋白的表达。结果　LTA诱导的延迟预适应能明显改善脑I/R后的神经功能 ,减少神经缺欠评分值 (P <0 0 1 ) ,脑I/R后组织中MDA的含量明显减少 (P <0 0 1 ) ,SOD活性显著提高 (P <0 0 1 ) ,同时LTA预适应能明显降低I/R导致脑组织中NO含量的升高 (P <0 0 1 )。LTA预适应还显著减少神经细胞的凋亡百分率 (P <0 0 1 ) ,明显增加脑组织中Bcl 2蛋白的表达 (P <0 0 1 )。结论　LTA诱导的延迟预适应能显著减少大鼠脑组织再灌注损伤 ,减少组织坏死和细胞凋亡。其作用机制与减少脑I/R后自由基和NO毒性作用 ,增加Bcl 2蛋白的表达有关。     

交感神经活性对大脑中动脉闭塞大鼠外周免疫功能的影响

目的 探讨交感神经系统活性变化与脑梗死后外周细胞免疫功能抑制之间的关系.方法 成年雄性Sprague -Dawley大鼠制作大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型.采用双抗体夹心酶联免疫吸附法测定大鼠血清促炎细胞因子白细胞介素(interleukin,IL)-1...     

慢性氟中毒大鼠脑组织中c-Jun氨基末端激酶表达水平观察

目的 观察慢性氟中毒大鼠脑组织中c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号转导激酶表达变化,进一步揭示慢性氟中毒神经损伤的分子机制.方法 SD大鼠随机分为3组:对照组、低氟组、高氟组,每组24只,饮用水含氟量分别为＜0.5和5.0、50.0 mg/L,实验期为6个月.用氟离子选择电极法测定大鼠尿氟及血氟,用Western blotting和免疫组织化学方法检测脑组织中JNK信号转导激酶的表达和分布,并分析血氟与活化的JNK激酶的相关关系.结果低氟组和高氟组大鼠尿氟[(2.56±0.91)、(5.73±3.14)mg/L]和血氟[(0.36±0.14)、(0.50±0.18)mg/L]均较对照组[(0.92±0.30)、(0.12±0.07)mg/L]升高(P均＜0.05).高氟组(1.74±0.69)脑组织phospho-JNK表达高于对照组(1.00±0.37)和低氟组(1.20±0.28,P均＜0.05);total-JNK蛋白表达水平3组间比较,差异无统计学意义(F=0.046,P＞0.05).phospho-JNK、total-JNK阳性表达神经元主要集中在皮质、海马和背侧丘脑,其中高氟组大鼠phospho-JNK在顶叶皮质(119.3±14.1)、枕叶皮质(112.7±5.4)、海马CA3区(100.6±8.9)、背侧丘脑(117.8±10.4)及橄榄核(112.6±5.9)中阳性表达较对照组(104.1±8.9、106.6±9.6、106.6±9.7、108.9±6.4、100.3±8.4)和低氟组(96.7±17.1、102.5±8.3、106.4±6.5、110.2±9.3、102.4±4.7、102.5±9.8)明显增高(P均＜0.05),而total-JNK在各组大鼠脑组织中阳性表达分布未见明显改变(P均＞0.05).相关分析结果发现,随大鼠血氟升高,脑组织中phospho-JNK表达呈增高趋势,二者存在正相关关系(r=0.677).结论慢性氟中毒导致脑组织中磷酸化JNK表达改变,并与机体中氟蓄积量存在相关关系,这些改变可能与慢性氟中毒导致的神经损伤有关系.