去除高丰度蛋白质对脑脊液差异蛋白鉴定的影响

摘要：目的探讨去除高丰度蛋白质对脑脊液差异蛋白鉴定的影响。方法应用Cibacron—blue-3GA亲和层析柱去除脑脊液中含量最多的高丰度蛋白质一白蛋白,然后对去除白蛋白前后的脑脊液样本,以及经过Cibacron—blue-3G—A亲和层析柱吸附后洗脱下来的脑脊液样本,分别进行双向凝胶电泳,对比分析各样本差异蛋白点的分布情况。结果Cibacron-blue3G-A亲和层析柱通过结合去除了脑脊液中的大部分白蛋白,但是同时也去除了一些其它可能有意义的蛋白质,而且在去除白蛋白后,一些在白蛋白存在时丰度显现并不是很高的蛋白质丰度相对增加,同样干扰了周边低丰度蛋白的检出。结论亲和层析柱无法特异性去除脑脊液中的高丰度蛋白质,丢失的蛋白信息可能影响后续疾病相关差异蛋白的鉴定。     

家兔血清蛋白质组双向凝胶电泳技术的建立

背景:家兔血清是基础研究中常用的实验样品,双向凝胶电泳是蛋白质组学中最经典的蛋白分离技术,因此建立稳定的家兔血清蛋白质组双向凝胶电泳技术体系非常重要.目的:建立家兔血清蛋白分离的双向凝胶电泳技术体系.设计、时间及地点:单一样本观察,实验于2008-06/07在武警医学院天津市职业与环境危害生物标志物重点实验室完成.材料:健康家兔6只,由唐山市职业技术学院动物中心提供.方法:去除高丰度蛋白前后的健康家兔血清样品,分别加入水化上样液使样品中的蛋白充分裂解,还原烷基化后上样,被动水化14 h.等电聚焦电泳后进行SDS-PAGE电泳.凝胶银染后用PDQuest7.4软件进行分析.主要观察指标:①高丰度蛋白去除效率.②2-DE图谱.结果:双向电泳图谱清晰,分辨率高,重复性好.未去除高丰度蛋白的血清2-DE图效果优于去除高丰度蛋白后的血清2-DE图.结论:成功建立家兔血清蛋白质双向凝胶电泳技术,将为进一步开展疾病的血清蛋白质组学研究奠定基础.     

血清蛋白质组学研究中乙腈沉淀法去除清蛋白的实验研究

目的 建立去除人血清清蛋白的乙腈沉淀法并研究其去除效果.方法 血清经除脂后按血清:水:乙腈=1:2:4.5(v/v/v)比例沉淀分离高丰度清蛋白,用SDS-PAGE验证去除效果和重复性.分别对4名体检健康者和非小细胞肺癌患者去除清蛋白前后的血清凝胶电泳图像进行分析.结果 经本法去除后血清清蛋白平均浓度由(50.65 4...     

HAART治疗后病毒学治疗有效组和失败组患者血浆比较蛋白质组研究

目的 筛选AIDS患者血浆中与HAART疗效相关的特异性生物标志物,为临床疗效评估提供新型检测分子,指导AIDS治疗的预后判断.方法 收集2008年6月至2009年2月由上海市公共卫生临床中心感染一科收集的艾滋病患者血浆,包括病毒学治疗有效组10例(病毒载量＜ 50拷贝/ml)和病毒学治疗失败组11例(病毒载量＞50拷贝/ml),入组患者年龄22 ～ 63岁.血浆样品用Bio-rad公司血浆高丰度蛋白质去除试剂盒处理,去除血浆中的白蛋白和免疫球蛋白IgG.处理后的血浆蛋白质样品通过二维凝胶电泳(2DE)进行分离,采用ImageMaster软件分析获得的电泳图谱,找到与疗效相关的差异蛋白质.差异蛋白质点经过胰酶酶切后,通过在线纳升级反向液相色谱串联电喷雾离子阱质谱分析鉴定.结果 血浆经过高丰度蛋白去除试剂盒处理后,低丰度的蛋白质得到了有效的富集.共发现了6个在治疗有效组和治疗无效组血浆样品中表达差异的蛋白质点.这些差异蛋白质经液相色谱串联质谱分析得到准确鉴定,包括血清转铁蛋白、血清β纤维蛋白原等.结论 通过蛋白质组学研究发现,血清转铁蛋白等蛋白质在艾滋病患者血浆中表达水平与治疗过程中病毒载量相关,它们可能是评价抗病毒治疗疗效的潜在生物标志物.     

蛋白质组学技术及其在临床检验诊断学中的应用

人类基因组计划的完成加速了蛋白质组学的发展,使之成为当今生命科学的热点之一。疾病的发生,往往伴随着蛋白质数量、结构和性质的异常,蛋白质组学技术的应用,为疾病的诊断提供了新手段。临床捡验诊断学的根本目的是将识别疾病并诊断和治疗的生物标识物,包括血液、尿液、脑脊液(CSF)、乳头抽吸液(NAF)等各种体液都被用于研究与某些疾病的关系。采集有价值的样本,应用合理的蛋白质组学研究策略,进行蛋白质分离、鉴定,有望发现新的有意义的标志物,从而有助于疾病的早期诊断。本文着重对蛋白质组学技术及其在临床检验诊断学中的应用作一综述。1蛋白质组学研究的新技术1.1分离Righetti等[1]报道了一种用固相配体库(solid-phase ligandlibraries)缩小血浆蛋白丰度动态范围的样本处理方法。该配体库中的配体数目众多(约10亿),理论上血浆中的每一个蛋白都能在库中找到其相应的配体,并与之特异的结合。首先,固相配体先与样品血清孵育,高丰度蛋白很快就达到饱和,未结合部分被洗掉;由于各种低、高丰度蛋白配体数目相近,这样,保留下来的配体-蛋白数目也相近,从而达到稀释高丰度蛋白和浓缩低丰度蛋白的目的。同一条件下,未用固相配体...     

应用超滤法对聚合血红蛋白分子量分级

目的 对聚合人胎盘血红蛋白(PolyPHb)作分子量分级以达到去除后小分子(≤64 kD)≤13％.方法 逐个分析影响超滤法超滤效果的超滤膜规格、PolyPHb浓度、超滤倍数等3个主要因素,以高效液相色谱(HPLC)检测超滤效果,选出三者较佳匹配条件后作扩试验制备出血红蛋白氧载体(HBOCs),超滤后HBOCs分别用血氧分析仪测定生物活性携/放氧功能P50和圆二色谱分析仪测定蛋白质二级结构等理化指标.结果 以结构、理化性质稳定、截留分子量合适、超滤效果较好为原则,确定超滤膜的规格为100 kD截留分子量膜堆、PolyPHb浓度为0.5％、超滤倍数8～10倍为较适组和扩试验所制得的PolyPHb分子量分布:寡聚体(≥600 kD)超大分子≤3％,小分子(≤64kD)≤13％.结论 选用合适的截留分子量膜堆、PolyPHb浓度、超滤倍数的超滤工艺能较好的将PolyPHb实现分子量分级,为大规模制备高纯度合格HBOCs奠定基础.     

湿化学酶法测定华氏巨球蛋白血症患者血清肌酐假性增高的评析

目的探讨湿化学酶法检测华氏巨球蛋白血症患者肌酐假性增高的原因及解决方法。方法以2010~2012年中国人民解放军白求恩国际和平医院收治的5例华氏巨球蛋白血症患者为研究对象,采用离心超滤管将采集的患者血清中大分子蛋白滤去,分别用湿化学酶法、苦味酸法、干化学酶法检测超滤前后患者血清肌酐水平并进行比较分析。结果超滤前其中2例华氏巨球蛋白血症患者用湿化学酶法测得血清肌酐水平与苦味酸法、干化学酶法比较有明显差异,而5例患者后2种方法测得的肌酐水平差异不明显。而以离心超滤管滤去大分子蛋白后,3种方法测得的血清肌酐水平无明显差异。结论采用湿化学酶法检测华氏巨球蛋白血症患者血清肌酐时,应去除大分子蛋白以防止所测血清肌酐水平异常增高,或用干化学酶法或苦味酸法测定以确定检测的准确性,为临床提供真实可靠的检验结果。     

不同结核病患者群血清蛋白质谱分析与比较

目的:比较分析菌阳肺结核与菌阴肺结核、肺结核与肺外结核患者的血清蛋白质谱,从蛋白质组学层面了解不同结核病患者群血清蛋白质谱的特征,为结核病诊断标志物的筛选提供指导。方法:应用表面增强激光解吸-电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)蛋白质芯片系统,采用弱阳离子交换蛋白质芯片(WCX)对54例菌阳肺结核、45例菌阴肺结核、18例肺外结核患者的血清蛋白质进行检测;应用ClinProTools分析软件依据各蛋白质的质谱峰面积计算相对强度表示该血清蛋白质的丰度,采用t检验(对Anderson-Darling检验P>0.05的正态分布者)或Wilcoxon检验(对Anderson-Darling检验P<0.05的非正态分布者)分析比较菌阳肺结核与菌阴肺结核、肺结核与肺外结核患者各血清蛋白质的平均丰度。结果:(1)在3种不同结核病患者人群中均捕获到102种相对分子质量在1011.41～9435.07的不同血清蛋白质,经Anderson-Darling检验,在菌阳肺结核、菌阴肺结核、肺外结核患者人群中分别有31、23和29种血清蛋白质呈正态分布。(2)正态分布的血清蛋白质在不同结核病患者人群间其水平未见显著差异。(3)非正态分布的血清蛋白质:在菌阳肺结核与菌阴肺结核患者人群间其水平未见显著差异;在肺结核与肺外结核患者人群间发现1个差异血清蛋白质(P=0.0251),其相对分子质量为5753.76,在肺结核与肺外结核患者人群血清中的平均丰度分别为15.42±4.86和28.29±14.08。结论:不同结核病患者群的血清蛋白质谱具有同质性,为普遍适用性结核病血清学诊断标志物的筛选提供了科学依据。     

血清前清蛋白和C反应蛋白的检测在临床疾病中的应用

前清蛋白(PA)相对分子质量为54×103,由肝细胞合成,在电泳分离时,常显示在清蛋白的前方,其半衰期很短,仅约12 h。因此,测定其在血浆中的浓度对于了解蛋白质营养不良、肝功能不全,比清蛋白和转铁蛋白具有更高的敏感性。C反应蛋白(CRP),是人类重要的急性期反应蛋白,急性期浓度     

血清前白蛋白检测在消化道恶性肿瘤中的诊断价值

<正>前白蛋白(PA)是肝脏细胞合成的一种富含色氨酸、相对分子质量为55×103的血清蛋白质。它作为组织修补材料和运载蛋白,是运输甲状腺素和维生素A等的蛋白质。电泳时迁移在白蛋白(Alb)之前,半衰期短,仅1.9 d[1]。由于PA半衰期比Alb短,肝脏疾病时血清PA变化较Alb早,有30%左右的肝病患者血清Alb正常而PA降低,急性、亚急性重症肝炎发病后1周内,PA     

Nurses make high tech high touch

Until nurses at St. Mary's Hospital took the lead in establishing an outpatient infusion unit, oncology patients had to travel up to 100 miles to receive chemotherapy. Today, they need travel only ten minutes to receive the best and latest of a variety of high-tech services.     

Allina Health System's approach to high tech and high touch

All health care providers, regardless of their integration status, must meet customer expectations to maintain market share and viability. The balance between high tech and high touch customer interactions is not a fad or trend. For integrated health systems with the full continuum of medical care, additional challenges are presented by the organization's competing health care delivery and financing components. Allina Health System describes its integrated health system approach to satisfying customer high tech and high touch needs.     

腹腔镜高位胆管切开取石术

目的　探讨腹腔镜治疗肝内外胆管结石的方法。方法　将胆总管切开至左右肝管汇合部 ,使左右肝管的开口得到很好显露 ,在腹腔镜的监视下 ,将左右肝管内结石取出 ,进而利用扩张的左右肝管 ,显露各二级胆管的开口 ,取出二级胆管结石 ,在二级胆管明显扩张时 ,还可以看到三级胆管内的结石 ,并将其取出。存在较多泥沙样结石时 ,可用导尿管反复冲洗胆道。结果　本组 4 7例 ,手术时间 75～ 2 70min ,平均 (130±5 7.4 )min ,32例病人术后仍有残石 ,需要胆道镜取石。中转开腹 3例。 2例胆总管下端结石嵌顿的病人 ,通过腹腔镜下术中液电碎石后将结石取出。结论　腹腔镜下高位胆管切开可以较好地显露一、二级胆管 ,甚至三级胆管 ,使手术者能在腹腔镜的监视下进行肝内胆管取石     

Sub-nanograin metal based high efficiency multilayer reflective optics for high energies

The present finding illuminates the physics of the formation of interfaces of metal based hetero-structures near layer continuous limit as an approach to develop high-efficiency W/B₄C multilayer (ML) optics with ML periodicity varying d = 1.86–1.23 nm at a fixed number of layer pairs N = 400. The microstructure of metal layers is tailored near the onset of grain growth to control the surface density of grains resulting in small average sizes of grains to sub-nanometers. This generates concurrently desirable atomically sharp interfaces, high optical contrast, and desirable stress properties over a large number of periods, which have evidence through the developed ML optics. We demonstrate significantly high reflectivities of ML optics measured in the energy range 10–20 keV, except for d = 1.23 nm due to quasi-continuous layers. The reflectivities at soft gamma-rays are predicted.

The present finding illuminates the physics of the formation of interfaces of metal based hetero-structures near layer continuous limit as an approach to develop high-efficiency W/B₄C multilayer optics with varying periods at a fixed large layer pairs.     

高职高专儿科护理学实践教学改革体会

为适应卫生事业改革和发展的需要,要求高职高专护理专业以培养应用型人才为目标,加大实践教学的改革力度.我院对护理专业的儿科护理学实践教学进行了改革,取得了一定成绩,并取得了一定的经验:①改变教学观念,以社会需求为导向,充分调研市场需求,根据调研结果制订实训内容及教学大纲.②实验室建设要有针对性及先进性.③构建模块式实践教学体系,方式与手段应体现目的性与多样性.④完善考核制度,评价教学目标的实现情况,进一步深化教学改革.