黄牛体外受精的研究

本实验主要探讨黄牛卵母细胞体外成熟、受精及其受精后胚胎的体外培养。结果表明,卵母细胞在体外培养22小时后:80％以上的卵母细胞发育至中期Ⅱ(MⅡ)阶段。当培养液中添加促卵泡素(FSH,10国际单位/毫升)和雌二醇(E_2 1微克/毫升)时,其培养成熟的卵母细胞不仅受精率提高(83%),而且受精后卵裂率显著提高(67％,P<0.01)。 输卵管细胞单层和细胞上清液不仅能有效地克服牛胚胎的8-细胞阻断,而且对胚胎的发育具有显著的促进作用,二者在培养效果上差异不显著。2—8-细胞阶段胚胎,在输卵管细胞单层、输卵管细胞上清液和对照组(TCM199+10%小牛血清)中培养5天后,分别有77％、74％和27％的早期胚胎发育到桑椹或囊胚。     

公羊精子对完整牛卵的体外穿透

科学家作了许多努力以弄清存在于绵羊和山羊间的受精屏障。实验表明,在自然状态下绵羊精子就能使山羊卵子受精,而绵羊用山羊精液授精后的受精率极低。McGovern(1973)研究表明,绵羊卵子并不具有阻 止山羊精子穿入的内部屏障,低受精率是由于绵羊输卵管中存在影响山羊精子运输、存活和获能的因子。所有试验都是在自然状态下进行的,即雌性动物通过子宫内或输卵管途径用异种精子授精。本试验将采用完全不同的方法,绵羊和牛的卵母细胞在体外培养 成熟并在体外受精。     

体外制备的牛胚胎移植后获得孪生犊牛

据Lu等(1987)报道,体外成熟和受精的牛卵泡卵母细胞在绵羊输卵管内培养一周后,多数胚胎发育到桑椹期和囊胚期。每头受体牛移植两枚这种胚胎,妊娠率达67％。本试验中—牛细胞胚培养到桑椹胚和囊胚的体外培养方法,使体外受精胚胎制造适于移植的牛胚的系统更方便了。在此之前,尽管用过各种培养基和培养方法作体外培养,但成绩不好。显然,胚胎在8细胞期时发育受     

乙醇对绵羊卵母细胞孤雌激活的研究

试验采用乙醇法孤雌激活绵羊体外成熟卵母细胞,研究了卵母细胞体外成熟时间、6-DMAP处理时间、乙醇浓度以及激活时间,对绵羊卵母细胞孤雌激活效果的影响。结果表明:(1)卵母细胞成熟22h、24h和26h卵裂率分别为60.7%、75.2%和74.5%,卵母细胞成熟24h的卵裂率较22h卵裂率,具有明显差异(P<0.05),与26h卵裂率差异不显著(P>0.05);其桑椹胚率38.6%,明显高于26h的桑椹胚率27.3%(P<0.05)。(2)6-DMAP6h的处理组,卵裂率83.4%,较2h卵裂率70.3%,有明显差异(P<0.05),也高于4h卵裂率79.4%,但差异不显著(P>0.05)。(3)乙醇浓度7%,激活3min、5min、7min卵裂率分别为76.7%、81.4%和70.4%,差异均不显著(P>0.05);激活3min囊胚率13.3%,显著高于激活7min囊胚率9.3%(P<0.05)。(4)乙醇浓度7%,激活绵羊卵母细胞5min,卵裂率85.5%,与乙醇浓度为5%的卵裂率72.2%,有显著差异(P<0.05),桑椹胚率和囊胚率,差异分别不显著(P>0.05)。     

异种卵泡液对牛卵母细胞体外成熟率的影响

本研究探讨了异种卵泡液对牛卵母细胞体外成熟率的影响。结果表明,在培养基中添加适当浓度的山羊、绵羊、骆驼卵泡液代替血清,牛卵母细胞的成熟率(67．9％、68．5％、65．3％)与血清对照组(72．0％)无显著差异(P＞0．05);在添加山羊、绵羊、骆驼卵泡液的基础上补充激素,卵母细胞的成熟率(70．8％、72．9％、69．7％)也未见明显提高(P＞0．05)。     

母体识别妊娠和胚胎死亡

各种哺乳动物出生前死亡率相当高。绵羊、牛的受精率非常高,但通常产活仔率约为70％。大多数胚胎的死亡发生在妊娠的最初三周。一胎多仔动物,如猪不受精也是极少的,约30％～40％孕体在妊娠期死亡,主要发生在妊娠最初30天。猪排卵15～16枚,仅产仔猪9～10头。牛胚胎死亡大多发生在妊娠最初18天,绵羊也如此。     

ART治疗反复IUI失败病人的实验室结果分析

目的评价反复宫腔内人工授精(IUI)失败的患者继续应用体外授精(IVF)方式治疗的实验室结果。方法对2010年1—12月在本中心应用辅助生殖技术(ART)治疗反复IUI失败病人进行回顾性分析。结果共有92对IUI患者转入ART治疗,其中86个周期进行IVF治疗(对照组),共17周期进行补救卵细胞浆内单精子注射(R-ICSI)治疗,有6周期进行ICSI治疗。与同年其他原因进行IVF治疗的周期相比,86个周期反复IUI失败组的卵母细胞成熟率以及受精率明显低于对照组,差异有统计学意义;2PN率,卵裂率,D3优质胚胎率均比对照组低,但差异无统计学意义。反复IUI治疗失败的患者采用R-ICSI与其他R-ICSI相比,卵子的成熟率,受精率,2PN率,卵裂率以及优质胚胎率差异均无统计学意义。结论反复IUI治疗失败的患者中存在着受精失败的可能,采取短时授精联合R-ICSI可以有效的解决受精障碍和低受精的情况。     

牛卵泡对卵母细胞的体外成熟及体外受精的影响

利用屠宰母牛卵巢，对来自不同大小和不同状态卵泡的卵母细胞的体外成熟（ＩＶＭ）、体外受精（ＩＶＦ）进行了系列研究。结果表明，当卵泡直径小于２ｍｍ时，卵母细胞的成熟率、卵裂率、囊胚率显著低于直径为２～５ｍｍ组和直径大于６ｍｍ组（６６．７％比８５．７％和８４．２％；６２．４％比８２．７％和７９．２％；１５．１％比２８．０％和２５．０％ Ｐ〈０．０５）。来自腔前卵泡的卵母细胞也可以成熟、受精、卵裂，甚至发     

牛核供体胚龄对核移植卵体外发育率的影响

本研究主要检测核共体胚龄对牛核移植卵体外发育率的影响，用体外受精后培养３．５－６．５日的胚胎卵裂球或培养７．５日的囊胚内细胞（ＩＣＭ）细胞与去核，并经电激活处理成熟的卵母细胞进行融合，融合卵与卵丘细胞体外共培养１０日，来自３．５－６．５日龄胚胎的卵裂球与去核卵母细胞的融合率（７８％－８８％）以及核移植卵发育至囊胚胎的体外发育率（６％－１０％）不受核供体胚龄的影响，然而，内细胞群细胞的融合率明显降低     

采用去透明带仓鼠卵母细胞分析人类精子染色体核型的方法及其在离体辐射效应研究中的应用

引言众所周知,某些哺乳动物的去透明带卵母细胞在离体条件下经人工方法可与某些其它种属的精子受精.在这些卵母细胞中,金仓鼠卵母细胞只允许人类精子穿过其透明带.这种离体的种间受精通过前核形成、DNA复制、染色体浓缩、核融合和首次卵裂纺锤体形成而进入第一次分裂.对人类精子染色体的研究已证明这种种间受精技术是有用的,并在各种流行病学和实验研究中得到了改进.本文叙述了改进的实验方法和最近研究的有关人类精子染色体的自发畸变率和离体辐射所致染色体畸变的结果.     

牛卵母细胞体外成熟减数分裂进程及核型变化的研究

为了更加深入了解牛卵母细胞体外成熟减数分裂及其伴随该进程中核型的变化,实验采用常规的牛卵母细胞体外成熟方法及核型染色方法对成熟过程中减数分裂恢复情况及其对应的核型进行了研究。结果表明:牛卵母细胞体外成熟8 h减数分裂抑制恢复率达45.26%,成熟12 h时绝大部分卵母细胞(81.63%)已经恢复了减数分裂抑制状态,正常成熟24 h后GVBD率达91.67%。说明在对牛卵母细胞进行体外成熟过程中卵母细胞可以按照正常的减数分裂进程发育至受精前阶段,经染色后可以较为清楚识别减数分裂各时期细胞核核型形态及其变化规律,为研究牛卵母细胞体外成熟减数分裂抑制恢复的分子机制探讨及体外成熟效率的提高提供了参考价值。     

不同培养体系对猪卵母细胞体外发育潜力的影响

目的:研究猪卵母细胞体外成熟的最佳条件,为用体细胞核移植的方法生产转基因克隆猪提供大量优质的MⅡ期卵母细胞。方法:采用猪卵母细胞体外成熟技术,研究了不同激素组合、猪卵泡液、半胱氨酸和颗粒细胞对猪卵母细胞体外成熟和发育潜力的影响。结果与结论:以15U/mlPMSG 20U/mlhCG成熟率最高,为(70.0±3.30)%,显著高于15U/mlFSH 30U/mlLH、10U/mlPMSG 10U/mlhCG〔成熟率分别为(45.6±5.10)%,(60.0±3.30)%〕,添加激素能促进卵母细胞的分裂,添加15%的猪卵泡液成熟率最高,为(86.7±3.35)%,显著高于5%,10%和20%组〔成熟率分别为(73.3±3.35)%,(71.2±5.08)%和(70.0±6.70)%〕,添加猪卵泡液促进了激活卵母细胞的分裂,在培养基中添加半胱氨酸和颗粒细胞,实验组和对照组成熟率差异不显著(P>0.05),但孤雌激活后卵裂率显著提高(P<0.05)。     

水牛卵母细胞去核方法的摸索

本研究对水牛卵母细胞的去核方法进行了摸索。首先通过盲吸法去核,摸索水牛卵母细胞在体外成熟不同时间的成熟率和去核率;其次采用spindle-View系统去核,摸索用这种系统去核的最佳时间。水牛卵母细胞IVM16-18h与IVM 19-21h的成熟率之间有显著差别(43.0％vs58.2％,P<0.05),与22-24h组的成熟率之间有极显著差别(43.0％vs 68.8％,P<0.01).而去核率的情况刚好相反。随着卵母细胞成熟时间的延长,卵细胞的核与PB1的相对距离增大。在体外成熟18h,20h,22h,有较大比例(分别为72.6％、67.9％、64.0％)的卵母细胞中的核与PB1的位置较近,但当成熟时间增加到24h时,这一比例下降到57.6％(72.6％vs 57.6％,P<0.05),如采用Spindle-View系统去核则可消除成熟时间对去核率的影响,这些结果表明:1.水牛卵母细胞的成熟时间的延长不断提高,而去核率呈下降趋势;2.水牛卵母细胞成熟时间的延长会增加核与PB1的相对距离;利用Spindle-View系统可提高成熟时间较长的卵母细胞的去核率。     

牛卵母细胞体外成熟培养时间对体外受精及早期胚胎体外发育的影响

本文报道了牛卵母细胞经不同时间体外成熟培养对其后体外受精及早期胚胎体外发育能力的影响。 实验用的母牛卵巢从附近的屠宰场收集。卵母细胞采用穿刺抽取法采集。将外观形态正常的卵母细胞随机分成6组,在含10％发情牛血清的TCM-199培养液中分别经12(G1)、16(G2)、20(G3)、24(G4、对照组)、28(G5)和32小时(G6)的体外成熟培养(IVM)后进行体外受精(IVF),早期胚胎(2-8细胞阶段)在采用卵泡颗粒细胞作为支持细胞的单层上皮细胞液滴中进行 复合培养至囊胚及孵化囊胚阶段。结果表明,经过12—32小时IVM的牛卵母细胞,在IVF后48小时检查,卵裂率均可达到81％以上(80.9％—91.9％);但IVM时间短至12小时(G1)及超过24小时(G5、G6)的卵裂率(分别为80.9％,83.5%和83.4％)显著地低于24小时的对照组(G4,91.9%,P>0.05)。     

蛋白激酶C激活剂对牛卵母细胞体外成熟的影响

近年来的研究证实,除cAMP依赖性蛋白激酶A外,另一在细胞信息传递过程中起重要作用的是磷脂/Ca~(++)依赖性激酶C(PKC)。在大鼠有报道表明,PKC在GnRH诱发卵泡内卵母细胞的成熟过程中起中介作用,因PKC的激活剂OAG、PMA及A23187可在卵母细胞成熟过程中模拟GnRH的作用。然而,在小鼠PKC的激活剂则证明对卵母细胞的成熟具抑制作用,PKC在牛卵母细胞体外成熟中的作用亦未见有报道。因此,本研究将通过测定牛卵母细胞成熟后的受精及早期胚胎发育能力来探讨PKC激活剂在牛卵母细胞体外成熟中的作     

山羊卵巢卵母细胞的体外受精

本试验选用10mMHepes缓冲的①TCM199+FCS(10％)+hCG(20微克/毫升);②TCM199+FCS+hCG+E_2 (1微克/毫升)和③Ham′sF_(12)+FCS+hCG+E_2三种培养基,研究了山羊卵巢卵母细胞的体外成熟和体外受精。252枚卵丘细胞层完整而致密的卵母细胞培养24—26小时,其成熟率分别为55.6％(25/45)、79.4％(104/131)和76.3％(58/76)。结果表明,TCM199和Ham′sF_(12)都是山羊卵母细胞体外成熟的合适培养基;雌激素的存在可显著地提高其成熟率;24小时的成熟培养可使山羊卵母细胞的核成熟。用17枚经①和②体外成熟的卵母细胞进行体外受精,受精率为70.6%(12/17)。将12枚受精卵(pbⅡ阶段)移植给5只受体山羊,2只妊娠,妊娠率达到40％(2/5)。其中一只妊娠受体于移植后52天因意外事故死亡,取得一只发育正常 的雄性胎羔,胎长8.5厘米。另一受体已妊娠4个月,预产期为1992年4月7日,属世界首例。     

一种可能替代超排的牛胚生产新方法

虽然多年来都是利用非手术方法从超排供体牛回收胚胎,但是,这些方法费用高,并且不能总是生产出满意数量的可移植胚胎。 未成熟的牛卵母细胞可以在体外成熟和受精,并且可在保姆母羊的输卵管内或者在体外与输卵管细胞混合培养时发育成桑椹胚或胚囊(Goto等,1988;Lu等,1988)。如果能从不管发情周期天数的同一母牛反复收     

卵母细胞体外成熟体外受精生产犊牛

建立的牛体外受精（ＩＶＦ）程序包括屠宰厂采集卵巢、卵母细胞外培养成熟（ＩＶＭ０、精子体外获能受精和受精卵体外发育成胚泡。将卵巢置于２３℃－３８℃的生理盐水中运输，能使大量的卵母细胞在体外成熟和体外受精后发育成胚泡。卵泡切开后，用一匙子将其内容物刮出以采集多个卵母细胞，而不用１８号针头抽取，这样每对卵可采集卵母细胞１３．４个，用针头抽取每对卵巢仅能采集７．２个。体外成熟和体外受精后，卵裂能力取决于卵     

牛卵母细胞体外成熟的研究

为了给牛细胞核移植提供卵母细胞 ,1 997年 3月至 2 0 0 1年 3月共进行了 86次卵母细胞体外成熟的实验研究 ,核成熟率 (以出现第一极体为成熟标志 )为 6 5.1 2 %( 2 332 /372 1 )。其中 ,基础培养液为TCM1 99+ 0 .1 2mg/ml丙酮酸钠 + 1 0mMHepes+ 8%NCS + 1 0 μg/mlFSH + 1 0 μg/mlLH + 1 μg/mlE2 (培养液 1 )组进行 6 8批次实验 ,核成熟率为 57.97% ( 1 6 80 /2 898)。基础培养液为TCM 1 99+ 0 .1 2mg/ml丙酮酸+ 8%的发情牛血清 (为 4头发情牛的混合血清 ,培养液 2 )组进行 1 8次实验 ,核成熟率为 79.2 2 % ( 6 52 /82 3)。培养液 1组与培养液 2组之间卵母细胞成熟率差异显著(P <0 .0 5)。培养液 2的组中有 9次添加了 40IU/ml的庆大霉素 ,其核成熟率为72 .1 5% ( 342 /4 74) ;另 9次未添加庆大霉素 ,其核成熟率为 88.83% ( 31 0 /349) ,两者之间无明显差异 (P >0 .0 5)。此外本研究对以去核卵母细胞激活后分裂率作为卵母细胞质成熟的标准作了初步的探讨     

猪卵子体外受精研究

本研究旨在探讨影响猪卵子体外成熟、猪精子体外获能和猪卵子体外受精的某些因素。主要研究:(1)猪卵体外成熟所需的时间;(2)促性腺激素和猪卵泡液对猪卵体外成熟的影响;(3)咖啡因、肝素和离子钙I-A_(23187)对猪精子体外获能的促进作用;(4)不同体外受精次数对猪卵体外受精结果的影响;(5)不同种类猪精液的体外受精能力。各试验组的结果比较主要根据体外受精后卵子的卵裂率,数据用卡方(x~2)进行统计学分析。 试验结果表明:(1)猪卵子体外成熟需要32—36小时,经32—36小时体外成熟的 卵子体外受精后卵裂率(2—4细胞期)达31.16％,明显高于其他对照组(P<0.01);(2)促性腺激素和猪卵泡液能够促进猪卵子体外成熟,当0.25国际单位/毫升PMSG和10％猪卵泡液,或者0.25国际单位/毫升FSH和10％猪卵泡液分别加入到猪卵子体外成熟中,经此培养后的猪卵子体外受精卵裂率分别达到23.95％和35.00％,明显高于对照组(P<0.05);(3)咖啡因、肝素、离子钙I-A_(23187)对猪精子体外获能有促进作用。在精子预培养液中加入0.05毫克/毫升肝索,在受精液中加入2毫克/毫升咖啡因,获得了体外受精后最高的卵裂率36.16％,明显高于其他组(P<0.01);(4)多次体外受精法有助于提高体外受精率,因为卵子的体外成熟是不同步的,但是超过2次又是有害的。用2