温泉水中嗜肺军团菌污染调查及分子分型研究

目的 探讨温泉水环境中嗜肺军团菌的污染状况和分布规律,了解其主要血清型别及基因型别。方法 采取随机抽样方法采集温泉场所蓄水池、温泉池、客房淋浴水等,浓缩后用细菌培养法分离得到可疑菌株,用血清学与荧光定量 PCR技术进行嗜肺军团菌的鉴定。对分离的菌株用脉冲场凝胶电泳(PFGE)和多位点序列分型方法(SBT)进行基因分型。结果 65份温泉水中35份检出嗜肺军团菌,检出率为53.85%。嗜肺军团菌计数范围在20 CFU/100 mL-16 000 CFU/100 mL之间。血清分型以LP1、LP3为主。分离的嗜肺军团菌菌株均携带dot基因。对40株嗜肺军团菌菌株进行了PFGE聚类分析,得到10种不同的带型。40株菌株13种ST型可以被分为3个克隆群和1个单态群。结论 本地区温泉水嗜肺军团菌污染程度较高,分子分型结果表明这些菌株具有遗传多样性。     

四川省嗜肺军团菌血清Ⅰ型(LP1)基因分型研究

目的为了解四川省嗜肺军团菌(Legionella pneumophila,LP)基因特征,采用多位点串联重复序列分析(MLVA)和基因序列分型(SBT)两种方法对四川省1989—2016年分离到的42株嗜肺军团菌血清I型(LP1)进行基因分型研究。方法根据文献报道的军团菌8个VNTR位点和SBT 7个管家基因对42株嗜肺军团1型菌(LP1)分别进行PCR扩增。VNTR结果经毛细管电泳分析后,得到MLVA分型。SBT结果测序后上传至欧洲军团菌感染组(EWGLI)数据库得到ST分型。结果 42株嗜肺军团菌血清I型(LP1)分为8个MLVA型,优势型别为M08型(47.6%)和M07型(23.8%)。SBT分为12个ST型,其中有2个ST型(ST2359,ST2360)为首次发现。ST1(52.3%)、ST630(14.2%)为优势型别。12个ST型分为3个克隆群(Clonal Complex,CCs)和2个singleton。结论 MLVA方法和SBT方法均能用于LP1型分子流行病学监测及分子遗传学特征的研究。四川省LP1型具备较高的遗传多样性和地区特异性,有感染人的风险,应加强对公共卫生环境中军团菌的监测工作。     

嗜肺军团菌血清1型基因检测及分子分型研究

目的了解南昌市宾馆业中央空调冷却塔水中分离的嗜肺军团菌菌株的基因特征。方法 6株分离嗜肺军团菌菌株分别经血清学凝集试验、胶乳凝集试验确定为Lp1型嗜肺军团菌后,利用PCR技术对军团菌属5SrRNA基因和嗜肺军团菌mip毒力基因的特异序列进行扩增,应用多位点测序(SBT)分析,获得相应的SBT型别。使用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型技术,对菌株进行全染色体DNA酶切电泳分型,并用BioNumerics数据库软件进行分型分析。结果所有的菌株均带有属特异性5SrRNA基因及mip毒力基因,SBT分型6株菌均为ST1型,PFGE聚类分析结果显示菌株带型之间有差异,6株菌可分为4种带型。结论南昌市公共场所冷却塔水中分离的Lp1型嗜肺军团菌菌株基因呈多样性。     

人工水和自然水环境中嗜肺军团菌mip基因分型

目的 比较人工水体与自然水体环境中军团菌的mip基因差异.方法 将2003-2008年间广州和新会两市水样中分离的121株嗜肺军团菌分为人工与自然水体环境分离株两组,分别对其mip基因进行系统进化树重建,基因多态性分析,分子方差分析与中性检验,并比较两种分离来源菌株的mip基因差异.结果 121株嗜肺军团菌mip基因按分离环境来源不均匀地分布在系统进化树的拓扑分支.人工水体环境分离株共有8个等位基因型,以等位基因1型为优势群,比例55.36％,自然水体环境分离株有11个等位基因型,以等位基因28型为优势群,比例40％.人工水体环境分离株的核苷酸多态性与平均核苷酸差异大于自然水体环境分离株.分子方差分析结果显示两种环境分离株mip基因差异占总体差异的14.43％.中性检验证明人工水体环境分离株的mip3’末端处,Tajima检验P＜0.05,D值显著大于0.而自然环境分离株在此区域未见显著性差异.结论 嗜肺军团菌mip基因在人工与自然水体环境分离株之间存在显著差异,这种差异可能来源于人工水体环境对嗜肺军团菌种群大小的影响或平衡选择作用.     

公共场所冷却塔水嗜肺军团菌的基因序列分型研究

目的 为了解温州市中央空调冷却塔水中嗜肺军团菌(Legionella pneumophila,LP)基因特征,采用序列分型方法(sequenced-based typing,SBT)对公共场所中央空调冷却塔水中的嗜肺军团菌进行分子分型研究。方法 选择嗜肺军团菌的7 个管家基因 flaA、asd、mip、pilE、mompS、proA 和 neuA 作为目的基因, 对温州市公共场所中央空调冷却塔水中分离的31株嗜肺军团菌进行PCR扩增并测序。测序结果上传欧盟军团菌感染工作组(EWGLI)数据库进行比对、分型。运用DNAsp 5.0 、Bionumerics5.1及SplitsTree 等软件对分型结果进行分析。结果 31株嗜肺军团菌中,11株LP1型被分为2种ST型;17株非LP1型被分为8种ST型,其中7种ST型是新发现的序列型,并新发现1个等位基因;另3株非LP1型因缺少neuA基因未被数据库确认 。7个管家基因的核苷酸多态性 (Pi)范围为0.00995(mip)～0.02311(flaA)。 flaA具有最大的核苷酸多态性 ( 0.02311 )。经聚类分析得到本地分离的嗜肺军团菌株的遗传进化关系。结论 温州市公共场所冷却塔水中的嗜肺军团菌与国内外其他地区报道的嗜肺军团菌具有一定的亲缘关系,同时也具有地区特异性和遗传多样性。     

云南部分地区军团菌感染状况调查

1986年6月至1988年1月,为澄清我省是否存在军团菌感染,选择了滇南的蒙自、滇中的昆明、滇西的下关3地区,采集呼吸道疾病患者双份血清306对,进行嗜肺军团菌Ⅰ型(简称LpⅠ)抗体检测,现将结果报道如下。     

嗜肺军团菌mip基因的克隆与表达

目的　扩增嗜肺军团菌mip基因 ,导入载体 pUC18,构建重组质粒 pLpmip ,并在原核系统中表达。 方法　采用聚合酶链式反应 (PCR)从嗜肺军团菌扩增得到巨噬细胞感染增强蛋白基因 (mip基因 ) ,导入载体pUC18,构建重组质粒 pLp mip并转化大肠杆菌JM 10 9,并用限制性酶切分析、聚合酶链式反应、序列分析、硫酸十二烷酸钠 -聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS-PAGE)、Western印迹进行鉴定。结果　扩增出 82 8bp的mip基因 ;构建重组质粒 pLpmip ;表达出 2 4kD的抗原区带。结论成功扩增 82 8bp的嗜肺军团菌mip基因 ,构建重组质粒 pLpmip ,并在原核系统中表达出 2 4KD的抗原区带。     

蚌埠地区嗜肺军团菌感染6例报告

1986年6月至1987年5月我们采用微量凝集试验(MAT)方法对37例住院肺炎患者检测L pB_1-8型血清抗体,抗体效价≥1:16阳性9人,阳性率为22.22%。其中检测双份血清25人,符合(1)恢复期血清抗体效价增高4倍以上;(2)抗体效价≥1:32;(3)有相应的临床经过,可确定为现症病人的有6人。现简要报     

新疆博尔塔拉地区嗜肺军团菌自然感染调查报告

1984～1985年,我们对新疆博尔塔拉地区的健康人群、家畜及野生动物作了嗜肺军团菌血清1型(LP-1)抗体测定,调查结果报告如下。 一、材料与方法 1.采血:用整群抽样法取受检者或动物全血1～2滴(每滴约0.03毫升),分别置于普通滤纸上,使其浸透干燥,血斑直径约1厘米左右,检测前将血片剪下,以10倍PB稀释液浸泡半小时后应用其浸出液,测定LP-1抗体。 2.LP-1可溶性抗原制备:按南京军区总医院《军团病手册》中方法。     

嗜肺军团菌lvgA基因分析及实时荧光定量RT-PCR对军团菌的检测

目的确定不同嗜肺军团菌lvgA基因序列的差异性及其感染宿主细胞后转录水平的变化,建立基于lvgA基因检测嗜肺军团菌的荧光定量RT-PCR。方法通过使用NCBI/Blast,Pfam,TMHMMServer v.2.0等网络资源分析嗜肺军团菌lvgA基因编码蛋白的保守功能结构域、跨膜区域。根据参考序列设计引物,采用PCR技术从嗜肺军团菌基因组DNA中扩增lvgA基因,将其连接入克隆载体pMD18-T进行测序,并用cltust软件比较不同嗜肺军团菌菌株lvgA基因的核苷酸、氨基酸序列。根据lvgA基因和嗜肺军团菌16SrDNA序列内的特异保守区域设计引物,以实时荧光定量RT-PCR检测嗜肺军团菌在感染人单核巨噬样细胞THP-1后lvgA基因转录水平的变化,同时,采用基于lvgA基因的荧光定量RT-PCR对嗜肺军团菌患者血液样本进行检测。结果研究表明,嗜肺军团菌lvgA基因为军团菌毒力基因,其产物定位于外膜表面。不同嗜肺军团菌菌株中lvgA基因的核苷酸序列和氨基酸序列保守,相似度分别达:99%,96%,96%和99%,98%,98%。在感染宿主细胞后lvgA基因的转录水平上调明显,最高达4.3倍(P<0.05)。基于lvgA基因的荧光定量RT-PCR方法可有效地检测嗜肺军团菌患者血液样本中的嗜肺军团菌。结论 lvgA基因与嗜肺军团菌的毒力相关,建立的基于lvgA基因的荧光定量RT-PCR方法具有快速、敏感、稳定等优点,适用于嗜肺军团菌肺炎临床实验室的早期诊断。     

嗜肺军团菌pilE基因的克隆及其原核表达

目的克隆嗜肺军团菌Ⅳ型菌毛蛋白pilE基因,构建重组质粒pET-pilE,并在原核系统中表达。方法采用聚合酶链反应(PCR)从嗜肺军团菌基因组DNA中扩增军团菌Ⅳ型菌毛蛋白pilE基因,并将其定向克隆至原核表达载体pET-32a( ),构建原核表达重组质粒pET-pilE,经限制性内切酶鉴定、PCR及测序分析后,转化宿主菌大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,产物进行SDS-PAGE电泳、免疫印迹分析鉴定。结果扩增出了429bp完整的pilE基因,构建的原核表达重组质粒pET-pilE表达出35.7 kDa的融合蛋白质。结论成功构建了军团菌pilE基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中得到了高效表达,为以后深入研究奠定了基础。     

嗜肺军团菌htpA基因的克隆及其原核表达

目的克隆并检测嗜肺军团菌htpA基因在原核系统中表达情况,为进一步研究HtpA蛋白的免疫性能作必要的准备。方法采用聚合酶链反应(PCR)从嗜肺军团菌基因组DNA中扩得军团菌热休克蛋白A基因htpA,并将其定向克隆至原核表达载体pGEX-4T-1,构建原核表达重组质粒pGhtpA,重组子经限制性内切酶分析、聚合酶链式反应及测序鉴定后,转化宿主菌大肠杆菌JM109,IPTG诱导表达,产物进行SDS-PAGE电泳、免疫印迹分析鉴定。结果扩增出了291bp完整的htpA基因,构建了原核表达重组质粒pGhtpA,并检测到约36kDa的GST-htpA融合蛋白质表达条带。结论成功克隆了嗜肺军团菌htpA基因并使HtpA蛋白在原核表达系统中得到了有效的表达,为进一步研究其免疫学特性奠定了基础。     

广东地区空调冷却塔水嗜肺军团菌分离株脂肪酸分型研究

目的探讨脂肪酸分析方法在种水平上对嗜肺军团菌的判断能力;将脂肪酸分型方法与传统的血清分型方法进行比较,了解不同血清型嗜肺军团菌株脂肪酸成分的异同。方法选取近3年从广东地区空调冷却塔水中分离到的112株嗜肺军团菌分离株,提取脂肪酸,利用MIDI公司Sherlock系统进行菌体脂肪酸成分分析,使用SPSS 13.0软件对获得的数据资料进行统计分析及聚类分析。结果脂肪酸分析法判定嗜肺军团菌的符合率为84.8%,所有菌株共有的脂肪酸成分有9种,主要脂肪酸成分有4种,分别为16∶0 iso、15∶0 anteiso、16∶1 w7c和14∶0 iso脂肪酸。血清1型菌株与血清6、7型菌株相比,有3种主要脂肪酸含量差异有统计学意义(P<0.05)。结论可以依据菌体脂肪酸分析方法对嗜肺军团菌进行快速鉴定;嗜肺军团菌菌株的脂肪酸成分稳定,但各血清型间脂肪酸含量存在一定差异;MIDI数据库中军团菌脂肪酸数据仍有待完善。本研究同时提供了广东地区空调冷却塔水嗜肺军团菌株脂肪酸组成及分型数据。     

嗜肺军团菌肺炎一例

患者男 ,6 5岁 ,因发热、咳嗽 1周余入院。患者受凉后出现发热 ,呈稽留热型 ,伴干咳 ,无畏寒、潮热及盗汗 ,体温最高达 39°Ｃ。脐周有阵发性绞痛 ,无放射 ,腹泻呈水样便 ,无黏液脓血 ,每日 4～ 5次 ,每次量约 5 0～ 10 0ｍｌ,无里急后重。门诊给予青霉素 80万单位肌肉注射 ,每日 2次 ,无效。胸片示“右下肺炎 ,右下胸膜炎 ,右下包裹性积液”。入院前半个月 ,患者曾到泰国旅游。既往有原发性高血压和胆石症。体检 :体温 39.8°Ｃ ,脉搏 10 0次 /ｍｉｎ ,呼吸 2 2次 /ｍｉｎ ,血压 15 0 / 80ｍｍＨｇ。急性热病容 ,浅表淋巴结不大。右下肺语…     

嗜肺军团菌肺炎的肺功能研究

嗜肺军团菌肺炎的肺功能研究姚婉贞，赵鸣武，韩荣藓我们对１９９０年９月～１９９２年１２月３１例嗜肺军团菌肺炎（ＬＰ）患者肺功能进行追踪观察，并与同期其它社会获得性细菌性肺炎（ＮＬＰ）的肺功能作对比分析，以便更全面地认识军团菌肺炎。研究对象：ＬＰ组３１例...     

四川省鼠疫耶尔森菌CRISPR基因分型及地区分布研究

目的 对四川省鼠疫耶尔森菌(Yersinia pestis)做规律成簇的间隔短回文重复序列(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats CRSIPR)基因分型和地区分布研究,为四川鼠疫防治提供科学依据。方法 对132株鼠疫菌培养和提取核酸,应用3对CRISPR引物对被试菌株DNA进行PCR扩增、测序和分析,确定四川省鼠疫菌的CRSIPR基因型。结果 132株鼠疫菌共发现17种spacer,包括YPa 9种、YPb 5种、YPc 3种,新发现的1种space阵列。所有鼠疫菌株被分为2个CRISPR基因簇(Cc3',Ca7),3个基因型(37'型、22型和sc01型)。其中石渠县青海田鼠型菌株基因型为37'型,石渠县人间鼠疫的菌株为22型,德格县旱獭型菌株基因型为22型,巴塘县、理塘县、雅江县和新龙县旱獭菌株基因型为sc01型。结论 四川省鼠疫菌菌株具有明显的地区分布特征。     

嗜肺军团菌致病机制及快速检测最新研究进展

正军团菌(Legionella)在1976年被首次报道,当时在美国费城参加退伍军人聚会的老兵中有182人出现了严重的肺炎症状,147人住院,29人死亡~([1])。经过密切的调查之后,发现致病菌是一种革兰氏阴性杆菌,命名为嗜肺军团菌(Legionella pneumophila)~([2])。自军团菌首次报道之后很短的时间内,共发现了50余种军团菌,其中至少24种与人类疾     

肺结核合并嗜肺军团菌肺炎一例

肺结核合并嗜肺军团菌肺炎一例北京胸科医院１０００９５武炅■，赵玉荣，李安德，李金红患者，男性，２０岁，民工，住院号４２１４８。因高热、咳嗽、气短十余天，加重伴痰中带血一周，于１９９６年１０月３日入院。入院前曾以肺脓肿静脉点滴头孢三嗪、妥布霉素五天，无...     

嗜肺军团菌肺炎合并心肌炎二例

嗜肺军团菌肺炎合并心肌炎二例石玉志，白大藏嗜肺军团菌肺炎合并心炎发生较少，近来我院收治２例，报告如下。例１男，４９岁。因发热、咳嗽、胸闷痛、气短５天，伴咳血痰、腹泻２天于１９９４年２月２日入院。入院前曾用青霉素治疗无效。查体：Ｔ３８．２℃，Ｐ１３２次...