2006年北京市外来人口中HIV-1感染者流行毒株gag基因序列测定和亚型分析

目的了解北京市外来人口中HIV-1亚型的特点和流行规律。方法随机采集北京市2006年外来人口中新确证HIV-1感染者的抗凝全血标本80份，分离血浆，提取病毒RNA，用套式聚合酶链反应扩增病毒gag基因，并进行序列测定和亚型分析。结果系统进化分析确定北京市外来人口HIV-1毒株属于8个亚型，分别为B亚型4份，泰国B亚型15份，C亚型1份，CRF01-AE亚型5份，CRF02-AG亚型1份，CRF07-BC亚型29份，CRF08-BC亚型3份，CRFl5—01B亚型1份。结论北京市外来人口中己存在8种HIV-1亚型和流行重组型，应该加强对HIV-1亚型变异的监测。     

我国HIV-1感染者耐药突变的流行性研究

目的 掌握我国大规模用药前耐药突变在我国HIV-1感染者中流行情况的本底资料。方法 在第二次全国HIV流行病调查2002年样本中随机选取20％，对于蛋白酶(PR)基因区全长和逆转录酶(RT)20～230氨基酸位点进行PCR扩增、测序并使用HIVdb-Drug Resistance Algorithm软件进行分析，检测耐药相关突变。结果 分别得到164份PR基因区样本和138份RT基因区样本。PR基因区样本中发现1份(0．61％)样本存在蛋白酶抑制剂(PI)主要相关突变，163份(99．39％)样本存在P1次要耐药相关突变。RT基因区样本中发现8份(5．80％)具有核苷类逆转录酶抑制剂(NRTI)耐药相关突变，2份(1．45％)存在非核苷类逆转录酶抑制剂(NNRTI)耐药相关突变。结论 我国未用药HIV感染者中耐药相关突变尚处于低流行状态，应当在用药过程中定期监控以减少耐药突变的产生与传播。     

2019—2020年北京市未治疗HIV-1感染者传播性耐药特征分析

目的:了解北京市未治疗HIV-1感染者蛋白酶-逆转录酶和整合酶基因型耐药发生水平和特征,为临床诊疗提供数据参考。方法:于2019—2020年募集北京市新确诊或新入组接受抗逆转录病毒治疗HIV-1感染者,进行 pol基因片段和整合酶基因扩增和测序。系统进化分析判断病毒亚型,通过HIV耐药数据库比对解析耐药突变...     

HIV-1蛋白酶和逆转录酶抗药基因变异检测方法的建立及临床应用

目的 应用现有ＤＮＡ序列分析技术对人类免疫缺陷病毒１型（ＨＩＶ－１）的蛋白酶（ＰＲ）和逆转录酶（ＲＴ）基因进行简便、快速、准确的序列分析,在临床上为ＨＩＶ－１患者治疗方案的确定提供可靠依据。方法 从ＨＩＶ－１感染者血清中提取ＲＮＡ,用套管式逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增ＨＩＶ－１的ＰＲ和ＲＴ基因片段,并对此片段进行核苷酸序列分析。结果 本方法对血清中ＨＩＶ－１ＲＮＡ含量约２０００拷贝／ｍｌ以上的样品都能有效扩增。在序列分析时背景干扰少,对２５％左右的混合序列均能准确反映。通过对临床治疗病人进行动态序列分析观察,发现在药物治疗过程中,病人血浆中ＨＩＶ－１ＲＮＡ含量变化与ＰＲ和ＲＴ基因抗药性变异具有很大相关性。结论 ＰＲ和ＲＴ基因序列分析方法能够及时、准确地反映ＨＩＶ－１患者在抗病毒药物治疗过程中病毒的变     

发酵支原体抗HIV-1作用机制的研究

目的　研究发酵支原体抗HIV 1作用机制。方法　以发酵支原体PG18为实验菌株 ,制备支原体培养上清液和支原体菌体蛋白。用高效液相层析纯化发酵支原体PG18培养上清的蛋白 ,检测各部分逆转录酶抑制活性和核酸酶活性。用ELISA法检测发酵支原体对正常人PBMC及感染HIV 1的人PBMC分泌IL 10的影响及rhIL 10在体外对HIV 1复制的抑制作用。结果　发酵支原体PG18培养上清蛋白质相对分子质量 (Mr)为 (6 7～ 10 0 )× 10 3 和 (10～ 2 5 )× 10 3 时 ,分别具有 36 %和 34 %的RT活性抑制作用和部分核酸酶活性。发酵支原体PG18菌体蛋白可显著诱导正常人PBMC及感染HIV 1的PBMC分泌IL 10 ,且对感染HIV 1的PBMC分泌IL 10的诱导活性更强。rhIL 10可抑制HIV 1在PBMC中的复制 ,并随剂量的增加而增强。结论　发酵支原体PG18培养上清的逆转录酶活性抑制作用和菌体蛋白对PBMC分泌IL 10的促进作用为发酵支原体PG18抗HIV作用的相关机制     

中国HIV-1暴露未感染者及感染者趋化因子受体CX3CR1的表达研究

目的 通过分析中国HIV-1暴露未感者（exposed semnegative individuals，ESN）及HIV-1感染者外周血中CX3C1^＋CD8^＋／CD3^＋、CX3CR1^＋CD16^＋／CD3^-、CX3CR1^＋CD56^＋／CD3^-细胞百分率及绝对值的变化，探讨CX3CR1受体与HIV-1感染及疾病进展的关系。方法 采集19例ESN、34例未经治疗的HIV-1感染者及18例健康人抗凝静脉血，采用流式细胞仪检测技术，分析计算三色荧光抗体标记的全血中CX3CR1^＋CD8^＋／CD3^＋、CX3CR1^＋CD16^＋／CD3^-、CX3CR1^＋CD56^＋／CD3^-细胞百分率及绝对值。结果 ESNCX3CR1^＋CD8^＋／CD3^＋细胞的百分率是11．05％±6．52％，绝对值是81．16±13．67个／山，显著高于正常对照组（百分率是5．69％±3．94％，绝对值是37．36±8．28个/μl）；HIV-1感染组CX3CR1^＋CD8^＋／CD3^＋细胞的百分率是20．98％±11．88％，绝对值是166．38±138．38个/μl，显著高于正常对照组。ESN的CX3CR1^＋CD16^＋／CD3^-细胞的绝对值是312．49±159．45个／m，显著高于HIV-1感染组（108．83±119．35个／ta）。ESN的CX3CR1^＋CD56^＋／CD3^-细胞的绝对值是316．98±162．56个叫，显著高于HIV-1感染组（100．27±114．57个／ta）。HIV．1感染者的CX3CR1^＋CD16^＋／CD3^-、CX3CR1^＋CD56^＋／CD3^-细胞的绝对值与CIM^＋T淋巴细胞的绝对值呈明显正相关（P〈0．05）。结论CX3CR1^＋CD8^＋／CD3^＋细胞在中国ESN体内起保护作用，而在HIV-1感染者体内发挥有限的保护作用。表达CX3CR1受体的NK细胞可以作为监测HIV-1感染者免疫状况的一个指标。     

HIV-1蛋白诱导T细胞产生IFN-γ反应特征及对HIV-1感染者病情进展的影响

目的 探讨HIV-1特异性T细胞反应特征及对HIV-1感染者病情进展的影响.方法 通过合成重叠肽技术及ELISPOT技术,采用队列研究方法对37名HIV-1感染者的病毒特异性T细胞免疫反应进行分析.结果 83.78%(31/37)的HIV-1感染者对1个或多个合成肽反应(反应强度大于50 SFU/106 PBMCs).HIV-1B型病毒不同蛋白均可激发HIV-1感染者的特异性T细胞反应,其中HIV-1 Gag蛋白被识别的频率最高,81%的HIV-1感染者识别HIV-1 Gag而且HIV-1 Gag蛋白诱导的T细胞反应强度最高,相对强度达到28.25%,明显高于其他蛋白,差异具有统计学意义(F=17.969,P<0.001);重叠肽诱导T细胞分泌IFN-γ反应频率、反应强度在HIV-1感染无症状期和艾滋病期无明显区别,但是HIV-1 Gag蛋白诱导的T细胞反应强度在无症状期明显高于艾滋病期.结论 HIV-1B型病毒不同基因编码蛋白激发T细胞分泌IFN-γ反应小同,其中HIV-1 Gag蛋白特异性T细胞在控制病情进展方面发挥了重要作用.     

人免疫缺陷病毒1型(HIV-1)gag基因疫苗的免疫原性

目的 :检测人免疫缺陷病毒 1型 (HIV 1)gag基因疫苗的免疫原性。方法 :分别以ELISA、荧光抗体染色和乳酸脱氢酶释放法 ,检测免疫小鼠血清抗体滴度、脾T细胞亚群的数量和淋巴细胞杀伤效应。结果 :血清抗体滴度、脾T细胞亚群的数量及淋巴细胞杀伤效应 ,重组质粒pVAXGAG免疫组与空载体pVAX1对照组相比较差异显著(分别为P <0 .0 5和P <0 .0 1)。结论 :HIV 1DNA疫苗质粒pVAXGAG在BALB/c小鼠中不仅可诱导特异性体液免疫 ,而且可诱导特异性细胞免疫。     

HIV-1感染者淋巴细胞活化与第二受体表达的研究

目的：了解HIV－1感染者体内淋巴细胞的活化情况及表达第二受体CCR5、CXCR4的淋巴细胞活化状态，分析这些指标与疾病严重程度的关系，探讨HIV感染的免疫基础。方法：用三色标记法流式细胞术检测24例HIV－1感染者及13例健康对照的抗凝血标本，分析活化标志物HLA－DR及第二受体CCR5、CXCR4的表达等指标。结果：HIV－1感染者CD8^ T淋巴细胞的HLA－DR表达高于健康对照（P＜0．001）；HIV－1感染者表达CCR5、CXCR4的CD8^ T淋巴细胞活化明显高于健康对照（P＜0．001）；表达CCR5CD4^ 、CD8^ T淋巴细胞与表达CXCR4相比HL－DR表达均明显增高（P＜0．001）；CD4^ 、CD8^ T淋巴细胞的活化状态与CD4百分率的变化明显关系。结论：HIV－1感染者CD8^ T淋巴细胞及表达不同第二受体的CD8^ T淋巴细胞活化程度明显增高，活化程度与疾病进程相关。     

河南省部分艾滋病患者抗病毒治疗的临床效果以及基因型耐药性分析

目的　了解河南省部分地区HIV 1感染者抗病毒治疗临床效果 ,分析服药依从性与治疗效果关系 ;与未进行抗病毒治疗的患者相比较 ,分析治疗后病毒耐药性突变发生和流行情况。方法通过问卷调查、CD4 +细胞测定评价抗病毒治疗的临床效果 ;用RT PCR方法扩增HIV 1 pol区基因 ,进行基因型耐药性分析。结果　接受抗病毒治疗的人群中 ,坚持服药的病人 55.0 8%病情明显好转 ,而未坚持服药的病人仅有 6 .78%病情明显好转 ,服药依从性对病情趋势变化具有显著影响 (P <0 .0 5) ;接受抗病毒治疗的病人CD4 +淋巴细胞均值为 ( 4 2 9.38± 7.89)个 /μl,未治疗的病人CD4 +淋巴细胞均值为( 2 0 1 .4 3± 8.72 )个 /μl,治疗后患者CD4 +淋巴细胞计数显著高于未治疗的患者 (P <0 .0 5) ;基因型耐药性检测结果表明 ,相对于未经治疗的患者 ,经过抗病毒治疗的患者对逆转录酶抑制剂的耐药性突变显著高于未治疗的患者 ( χ2 =1 9.4 2 85,P <0 .0 5) ;治疗人群与未治疗人群对蛋白酶抑制剂的耐药突变差异无统计学意义 ( χ2 =0 .3478,P <0 .50 ) ;耐药性突变主要发生在CD4 +淋巴细胞 <2 0 0个 /μl病人中。结论　用国产抗病毒药物治疗可取得较好的临床效果 ,服药依从性对治疗效果有重要影响 ,治疗后耐药性突变发生率显著升高 ,因此提     

Evolution and recombination of genes encoding HIV-1 drug resistance and tropism during antiretroviral therapy

Characterization of residual plasma virus during antiretroviral therapy (ART) is a high priority to improve understanding of HIV-1 pathogenesis and therapy. To understand the evolution of HIV-1 pol and env genes in viremic patients under selective pressure of ART, we performed longitudinal analyses of plasma-derived pol and env sequences from single HIV-1 genomes. We tested the hypotheses that drug resistance in pol was unrelated to changes in coreceptor usage (tropism), and that recombination played a role in evolution of viral strains. Recombinants were identified by using Bayesian and other computational methods. High-level genotypic resistance was seen in ∼ 70% of X4 and R5 strains during ART. There was no significant association between resistance and tropism. Each patient displayed at least one recombinant encompassing env and representing a change in predicted tropism. These data suggest that, in addition to mutation, recombination can play a significant role in shaping HIV-1 evolution.     

体外无药物选择压力条件下HIV-1耐药基因突变的演变

目的 分离培养体外稳定传代的原代HIV-1耐药毒株,观察失去药物压力下,耐药毒株的体外生长以及主要耐药突变的演化趋势.方法 采集15例服用拉米夫定+司他夫定+萘韦拉平(3TC+D4T+NVP)的HIV-1感染者的外周血单个核细胞(PBMC),用体外共培养的方法从中分离原代HIV-1毒株;RT-PCR扩增耐药毒株历代培养上清的HIV-1 pol区基因并测序,在Stanford HIV Drug Resistance Database数据库进行耐药性分析.结果 15例患者中病毒载量>1000拷贝/ml的有8例,均成功分离出稳定传代的原代毒株,其中2株为耐药毒株,所携带的主要耐药突变分别是K103N/K238T和M184V/K103N/Y181C/H221Y,分别对NVP和3TC/NVP高度耐药;无药物压力的体外培养过程中,M184V、K103N、Y181C和H221Y等耐药突变可以稳定传代,但是K238T发生了回复突变.结论 分离出2株稳定传代的HIV-1耐药毒株,无药物压力情况下,携带K103N突变的毒株具有较好的复制适应性,可稳定传代;携带M184V和K103N/Y181C/H221Y的毒株也能够稳定复制;本研究中发现K238T耐药突变在失去药物的条件下稳定性差,提示该位点易发生回复突变.     

Analysis of intracellular human immunodeficiency virus (HIV)-1 drug resistance mutations in multi-failed HIV-1-infected patients treated with a salvage regimen: 72-week follow-up

The human immunodeficiency virus (HIV) mutational archive of proviral DNA was monitored during a 72-week follow-up in 20 multidrug-experienced HIV-1-infected patients treated with a darunavir/ritonavir-based salvage therapy. At the beginning of the study, all patients harboured a number of intracellular drug resistance-associated mutations (RAMs) in peripheral blood mononuclear cells. In some patients, a significant fluctuation in the number of RAMs was observed during the observation period. However, all patients, notwithstanding the presence or the fluctuation of intracellular RAMs, showed a persistently undetectable viraemia. The data suggest that the archived resistant viral variants change during suppressive therapy, but that the variants are unable to re-emerge and to affect virological response.