Ⅱ型胶原防治关节炎的研究进展

口服耐受(oral tolerance，OT)是指口服蛋白质抗原后，诱导机体对该抗原产生的特异性无免疫应答或低免疫应答状态。1911年Wells首先描述口服耐受现象，发现豚鼠口服鸡卵蛋白后，对这种蛋白引起的过敏反应有抵抗性。随后不断有学者进行类似的研究与探讨，并进一步开展了口服自身抗原治疗自身免疫性疾病的研究，如实验性自身免疫性脑脊髓膜炎、     

抗Ⅱ型胶原抗体在类风湿关节炎诊断中的意义及口服Ⅱ型胶原对其的影响

目的了解抗Ⅱ型胶原（CU）抗体在类风湿关节炎（RA）中的临床意义及口服鸡CⅡ对血清中抗CⅡ抗体的影响。方法以鸡CⅡ蛋白作为包被抗原，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测70名健康献血者、113例活动期RA患者，其中病程≤1年的早期患者30例；同时检测19例患者在口服鸡CⅡ90μg，d治疗前和治疗12、24周后血清中的抗CⅡ抗体水平。结果①RA患者血清抗CⅡ抗体水平明显高于健康对照组；RA患者血清抗CⅡ抗体阳性率为37．2％（42／113），正常对照组阳性率为2．9％（2／70），两者比较差异有统计学意义（P〈0．01）；②早期RA患者抗CⅡ抗体阳性率73．3％（22130），而病程〉1年的RA患者抗CⅡ抗体阳性率为24．1％（20／83），两组差异具有统计学意义（P〈0．05）；③比较抗CⅡ抗体阳性组和阴性组其他相关指标：抗CⅡ抗体阳性组42例，阴性组71例，两组类风湿因子（RF）阳性率分别为83．3％（35／42）和43．7％（31／71），两组比较差异有统计学意义（P〈0．05）；抗环瓜氨酸肽（CCP）抗体阳性率分别为90．5％（38／42）和52．1％（37／71），两组比较差异有统计学意义（P〈0．05）：同时抗CⅡ抗体阳性组的血沉（ESR）、C反应蛋白（CRP）水平均高于抗CⅡ抗体阴性组；两组在日常生活能力及骨质破坏方面差异无统计学意义；④口服CⅡ治疗前和治疗12、24周后，RA患者血清抗CⅡ抗体水平有逐渐下降趋势，但差异无统计学意义。结论RA患者抗CⅡ抗体明显升高，尤其在早期RA患者有较高的阳性率：抗CⅡ抗体阳性患者RF、抗CCP抗体阳性率明显高于阴性患者，同时ESR、CRP亦明显升高；口服CⅡ治疗后抗体水平有逐渐下降趋势。因此，抗CⅡ抗体在RA发病中可能起着重要的作用，可作为早期诊断、判断病情活动的指标之一；口服CⅡ对CⅡ抗体的影响有待进一步观察。     

抗Ⅱ型胶原抗体的检测及其在类风湿关节炎中的意义

目的 了解抗Ⅱ型胶原抗体在类风湿关节炎（ＲＡ）中的临床意义。方法 以改进的酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）检测１７９例ＲＡ患者和１７１例其他风湿病患者的血清ＩｇＧ型抗天然及抗变性Ⅱ型胶原抗体水平。结果 ＲＡ患者抗天然和抗变性Ⅱ型胶原抗体阳性率各为２２．３％和３６．９％,早期ＲＡ患者各为３０．０％和３６．７％。其他风湿病患者中各为３．５％和３１．６％,健康人二者均为２．５％。抗天然Ⅱ型胶原抗体阳性ＲＡ患     

抗Ⅱ型胶原抗体与类风湿关节炎

抗Ⅱ型胶原抗体与类风湿关节炎张梅荣马骥良自Ｓｔｅｆｅｎ等发现类风湿关节炎（ＲＡ）患者血清中存在抗胶原抗体之后，已对胶原的抗原性及抗胶原抗体与ＲＡ的关系进行了大量报道，现综述如下。一、胶原蛋白与抗胶原蛋白抗体人体内胶原蛋白根据其结构不同可分为许多型。其...     

乌梢蛇Ⅱ型胶原对关节炎大鼠免疫功能的影响

目的 研究乌梢蛇Ⅱ型胶原对关节炎大鼠的免疫调节作用,以了解乌梢蛇治疗类风湿关节炎(RA)的机制.方法 关节炎大鼠随机分成3组,即乌梢蛇Ⅱ型胶原组、牛Ⅱ型胶原组和关节炎对照组,另设健康埘照组,每组7只,乌梢蛇Ⅱ型胶原组和牛Ⅱ型胶原组分别灌胃乌梢蛇Ⅱ型胶溶液1 ml(Ⅱ型胶原15 mg/kg)和牛Ⅱ型胶溶液1 ml(Ⅱ型胶原15 mg/kg),另两组灌胃不含胶原的胶原稀释液1 ml,每日1次,连续15 d后,取大鼠外周血测抗Ⅱ型胶原抗体、淋巴细胞亚群、肿瘤坏死因子(TNF)-a、白细胞介素(IL)-10、IL-1和IL-4水平.结果 关节炎埘照组:抗Ⅱ型胶原抗体、TNF-a水平和CD4+T/CD8+比值与健康对照组相比明显升高(P＜0.05),IL-10水平明显下降(P＜0.01);乌梢蛇Ⅱ型胶原组和牛Ⅱ型胶原组:TNF-a水平和CD4+T/CD8+比值与关节炎对照组相比明显下降(P＜0.05),与健康对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05),抗Ⅱ型胶原机体滴度较关节炎对照组下降(P＜0.05),与健康埘照组差异有统计学意义(P＜0.01),IL-10水平较关节炎对照组升高(P＜0.01),与健康对照组差异有统计学意义(P＜0.05),口服Ⅱ型胶原两组间各项免疫指标比较差异均无统计学意义(P＞0.05);外周血IL-1和IL-4水平,4组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 乌梢蛇Ⅱ型胶原与牛Ⅱ型胶原具有相同的免疫调节作用,两者能减低关节炎大鼠外周血TNF-a水平、抗Ⅱ型胶原抗体滴度和CD4+T/CD8+比值,提高IL-10水平的作用,推测乌梢蛇Ⅱ型胶原可能是乌梢蛇治疗RA的活性药理成分.     

抗Ⅱ型胶原抗体的检测及其在类风湿关节炎中的意义

目的　了解抗Ⅱ型胶原抗体在类风湿关节炎 (RA)中的临床意义。方法　以改进的酶联免疫吸附法 (ELISA)检测 179例RA患者和 171例其他风湿病患者的血清IgG型抗天然及抗变性Ⅱ型胶原抗体水平。结果　RA患者抗天然和抗变性Ⅱ型胶原抗体阳性率各为 2 2 3%和 36 9% ,早期RA患者各为 30 0 %和 36 7%。其他风湿病患者中各为 3 5 %和 31 6 % ,健康人二者均为2 5 %。抗天然Ⅱ型胶原抗体阳性RA患者类风湿因子检出率、患者对病情活动性评价高于阴性组(P <0 0 5 )。抗变性Ⅱ型胶原抗体和抗天然Ⅱ型胶原抗体同时阳性RA患者的CRP平均水平较高。结论　抗天然Ⅱ型胶原抗体可以作为RA的一个辅助诊断指标。抗天然与抗变性Ⅱ型胶原抗体的检测有助于判断RA病情活动性     

Ⅱ型胶原C端肽诊断膝关节骨性关节炎的价值

目的探讨关节液、血液、尿液中Ⅱ型胶原C端肽(CTX-Ⅱ)浓度与骨性关节炎(OA)程度之间的关系。方法 112例膝关节OA患者严格排除各项影响CTX-Ⅱ浓度的因素后纳入,抽取对照组、试验各组关节液、血液、尿液并通过酶联免疫吸附(ELISA)方法测定CTX-Ⅱ浓度,对病例关节炎程度进行Outerbridge评分,分成4组;1组≤6分,2组7~12分,3组13~18分和4组19~24分。结果关节液、血液、尿液中CTX-Ⅱ浓度:OA各组较非OA组CTX-Ⅱ浓度升高明显(P<0.05);2、3、4组同1组差异明显(P<0.05);3、4组同2组差异明显(P<0.05);4组同3组无明显差异(P>0.05);当Outerbridge评分>12分时关节液、血液、尿液中CTX-Ⅱ浓度无明显差异,≤12分CTX-Ⅱ浓度随关节炎程度Outerbridge评分的增加而具有明显差异(P<0.05)。结论 1关节炎病人血液与尿液中CTX-Ⅱ浓度水平同关节液中CTX-Ⅱ浓度水平变化趋势一致;2血与尿液中CTX-Ⅱ浓度可以作为早期诊断OA软骨破坏进程的有用指标;3CTX-Ⅱ不能用于严重软骨损伤进程的评价。     

重组人Ⅱ型胶原250-270多肽对类风湿关节炎患者外周血T细胞的活化作用

目的　研究重组人Ⅱ型胶原 2 5 0 2 70多肽 (recombinanthumancollagentypeⅡ pep tide 2 5 0 2 70 ,rhCⅡ 2 5 0 2 70 )对类风湿关节炎 (RA)患者外周血特异性T细胞的活化作用 ,为口服耐受治疗RA提供研究材料和实验依据。方法　不同浓度 (0 1、1 0、10、10 0、10 0 0 μg ml)的 6聚rhCⅡ 2 5 0 2 70体外刺激RA患者外周血单个核细胞 (PBMC) ;等浓度的融合表达的基础蛋白 (GST)和磷酸盐缓冲盐水 (PBS)作为阴性对照 ;化学合成CⅡ 2 5 0 2 70和十四烷酰佛波醇乙酯 (PMA)刺激组为阳性对照 ,体外培养 1～ 6d。流式细胞仪 (FCM)测定刺激前后各组培养细胞中T(CD3+ )淋巴细胞表面活化标志CD2 5的表达、5 溴脱氧尿嘧啶 (BrdU)在DNA中的掺入及细胞因子干扰素 (IFN) γ和白细胞介素 (IL) 4的分泌 ,以验证其对RA患者外周血特异性T细胞的活化作用。结果　rhCⅡ2 5 0 2 70合适的刺激浓度为 10 0 μg ml,在此浓度下刺激 4d ,RA患者外周血T细胞中CD2 5 + 、Br dU+ 细胞率分别为 (17± 4 ) %、(35± 5 ) % ,均显著高于同行对照GST组 (P <0 0 1) ,而和化学合成CⅡ 2 5 0 2 70刺激组差异无显著性 (P >0 0 5 )。同等条件下rhCⅡ 2 5 0 2 70刺激组T细胞中IL 4、IFN γ阳性细胞率分别为 (13 3± 4 0 ) %、(6 0± 2 1)     

Ⅱ型胶原特异性T细胞系与关节炎发病机制的研究

目的　建立Ⅱ型胶原特异性T细胞系 ,研究其对关节炎的诱导作用。方法　通过用弗氏完全佐剂乳化的鸡Ⅱ型胶原 (CCⅡ )皮内免疫注射诱导Wistar大鼠胶原诱导性关节炎 (CIA)。取CIA大鼠肠系膜淋巴细胞在体外用CCⅡ刺激扩增、建立CCⅡ反应性T细胞系。用3 H TdR掺入试验和流式细胞术分别测定其克隆扩增情况和表型格局。观察T细胞系过继转输后Wistar大鼠关节炎的发生情况 ,同时通过肉眼观察和组织化学法鉴定受体大鼠踝关节的病理特征 ;并用酶联免疫吸附试验 (ELISA)测定血清中抗CCⅡ抗体。结果　成功建立T细胞系。通过用荧光素标记抗体作细胞表型分析显示 :所建细胞系 98 2 %为T细胞 ,其中 89 7%为CD4 + T细胞。过继转输试验结果显示 :当注入细胞为 5× 1 0 7时可导致 5 0 %大鼠产生关节炎 ,抗CCⅡ抗体也较对照组明显升高。结论　成功建立T细胞系 ;T细胞系转移关节炎的结果提示 :T细胞在CIA发病机制中具有重要作用。这为RA发病机制的研究和T细胞疫苗的治疗提供了实验依据     

通泰胶囊治疗Ⅱ型糖尿病62例

观察通泰胶囊对Ⅱ型糖尿病的疗效.方法62例Ⅱ型糖尿病(男35,女27例),年龄47±8岁,病程10.5±5年.在用足量的磺酰脲类降糖药效果不好时加用通泰胶囊,一克一日三次两周.结果空腹血糖和24h尿糖均明显降低(P＜0.01).     

Ⅱ型胶原短肽对胶原诱导性关节炎大鼠淋巴细胞体外增殖作用的研究

目的 观察Ⅱ型胶原短肽(CⅡ260-272)对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠T淋巴细胞激活的影响,探讨其在类风湿关节炎(RA)发病中的作用.方法 建立CIA大鼠模型,分别在建模1、2…8周后,体外分离、培养大鼠脾淋巴细胞,采用活细胞计数(CCK-8)法检测CⅡ260-272短肽对淋巴细胞增殖反应的影响,并分析CⅡ短肽特异性T淋巴细胞增殖反应与滑膜炎及血管翳评分、成模时间及抗CⅡ及其短肽抗体之间的相关性.用SPSS 17.0软件进行数据分析.滑膜炎和血管翳评分结果比较用单因素方差分析,方差齐用LSD法,方差不齐用Games-Howell法;2组间增殖水平比较用Mann-Whitney U检验;细胞增殖与其他指标的关系用Spearman相关分析;2组间抗体水平比较用t检验.结果 免疫3周后,CⅡ短肽特异性T细胞即出现明显的增殖反应[0.963(0.332～1.628)],与0周组大鼠[0.332(0.331～0.357)]比较,差异有统计学意义(P＜0.05);分析发现,T细胞增殖反应与成模时间及抗bCⅡ抗体、抗Cit-bCⅡ抗体水平均呈正相关(r分别为:0.624,0.413,0.575,P均＜0.01).免疫2周后模型组大鼠中抗CⅡ260-270抗体(0.827±0.155)与0周(0.043±0.009)比较,差异有统计学意义(P＜0.01),免疫4周后抗bCⅡ抗体(0.362±0.062)、抗Cit- bCⅡ抗体(0.390±0.141)与0周相比,均有显著升高(P＜0.01);同时,这3种抗体水平与血管翳评分也有显著相关性(P＜0.01或P＜0.05).结论 CⅡ短肽在建模早期即可刺激CIA大鼠脾淋巴细胞异常增殖,并在血清中检出针对CⅡ短肽的抗体反应.提示在利用CⅡ分子诱发CIA疾病发生过程中,该表位肽在驱动T、B淋巴细胞活化及引起自身免疫反应中发挥了重要作用.     

复方谷氨酰胺肠溶胶囊对缓解期UC维持缓解的作用

目的观察复方谷氨酰胺肠溶胶囊对缓解期UC维持缓解的作用,比较奥沙拉秦钠与复方谷氨酰胺肠溶胶囊对维持缓解期UC的疗效.方法采用随机对照方法观察70例活动期溃疡性结肠炎经治疗后处于缓解期的患者,给予奥沙拉秦钠或复方谷氨酰胺肠溶胶囊口服,疗程为1年.结果治疗1年末复方谷氨酰胺肠溶胶囊组的复发率为33.3%,奥沙拉秦钠组的复发率为36.7%,两组复发率相比无统计学差异(P＞0.05).结论复方谷氨酰胺肠溶胶囊对缓解期UC维持缓解有较好的疗效,与奥沙拉秦钠组比无明显差异.     

通泰胶囊治疗Ⅱ型糖尿病62例

观察通泰胶囊对Ⅱ型糖尿病的疗效。方法６２例Ⅱ型糖尿病（男３５，女２７例），年龄４７±８岁，病程１０．５±５年。在用足量的碘酰脲类降糖药效果不好时加用通泰胶囊，一克一克日三次两周。结果空腹血糖和２４ｈ尿糖无明显降低（Ｐ〈０．０１）。     

口服Ⅱ型胶原肽—霍乱毒素B亚单位复合物对胶原诱导性关节炎的影响

目的 关节炎急性期胶原诱导性关节炎(CIA)小鼠口服Ⅱ型胶原免疫活性肽段(250-270))[CⅡ（250-270）]和霍乱毒素B亚单位(CTB)的共价复合物,观察其是否能产生免疫耐受。方法 DBA/1小鼠分成Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组,Ⅰ组为健康对照,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组小鼠制成CIA。Ⅲ组小鼠于关节炎发病率达到100％后,灌胃CⅡ(250-270 )-CTB共价复合物,Ⅳ组小鼠于初次免疫后第14日灌胃CⅡ(250-270)与CTB的混合物。记录小鼠关节炎症评分及病理评分。关节炎发生率比较采用Fisher精确概率法,关节炎累计评分及组织病理累计评分采用方差分析。结果 Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组的关节炎发生率分别为0、100％、100％和25％;关节炎累计评分均值分别为0、5.0±1.7、10.8±2.8和1.0±2.0;关节炎病理累计评分均值分别为0、16±8、32±13和7±6。结论 CIA小鼠于免疫后的关节炎临床前期口服CⅡ( 250-270)与CTB的混合物能抑制关节炎的发生及严重程度,关节炎急性炎症期口服CⅡ(250-270)-CTB共价复合物后可能使关节炎症加重。     

降钙素对兔膝骨性关节炎Ⅱ型胶原和基质蛋白酶-1的影响

目的探讨降钙素(CT)对兔膝骨性关节炎(KOA)关节软骨、Ⅱ型胶原和基质金属蛋白酶(MMP)-1的影响。方法将36只健康大耳白兔随机分为空白对照组(A组)、模型组(B组)、CT治疗组(C组),B、C两组采用改良Hulth法复制KOA模型,A组除切开皮肤和关节腔外,不做其他处理,从术后第6周开始C组每天皮下注射CT 5 U/kg,A、B组给予等量生理盐水皮下注射,连续注射20 d后处死动物。观察关节软骨病理形态、软骨基质Ⅱ型胶原及MMP-1的变化。结果与A组相比较,B组JP和Mankin评分明显升高,关节软骨损伤明显加重,Ⅱ型胶原表达减少而MMP-1表达增高(P<0.05);与B组比较,C组JP评分和Mankin评分明显降低,软骨损伤明显减轻,Ⅱ型胶原表达明显增多,而MMP-1表达则明显减少(P<0.05)。结论 CT可通过下调MMP-1表达,抑制Ⅱ型胶原降解,减少软骨基质破坏,从而减轻KOA软骨的损伤。     

Ⅱ型胶原蛋白对大鼠佐剂性关节炎的抑制作用

目的　观察Ⅱ型胶原蛋白 (CⅡ )对大鼠佐剂性关节炎 (AA)的影响及给药时间与疗效之间的关系。方法　用完全福氏佐剂 (CFA)致SD大鼠AA ,分别于致关节炎之前 2周、同时及之后 2周开始给予不同剂量CⅡ灌胃 ,均持续 3个月 ;分别观察大鼠AA的发生率及晚期致畸情况 ,并对继发病情评分。结果　与对照组比较 ,给予CⅡ灌胃的SD大鼠 ,其AA的发病率及晚期致肢体畸形比例明显降低 (5 8 9%～ 6 5 8%∶90 0 % ;30 %～ 40 %∶10 0 % ) ,而且关节炎症明显减轻 ,病程缩短 [(35±31)～ (45± 37) ]d∶(10 8± 15 )d ,病程中关节外表现亦减少 (30 0 %～ 36 7%∶10 0 % ) ;其中 ,以致AA前 2周开始治疗的CⅡ Ⅰ组疗效更好。结论　CⅡ灌胃对大鼠AA的原发及继发病变均有良好的治疗作用 ;预防性用药 ,疗效更佳。此结果为CⅡ用于人类类风湿关节炎的治疗提供了动物实验依据。     

衣霉素对胶原性关节炎小鼠免疫功能影响的研究

目的 探讨衣霉素治疗Ⅱ型胶原性关节炎(CIA)的作用机制. 方法 将48只小鼠随机分为对照组,模型组,衣霉素低、中、高剂量组和地塞米松组.除对照组外均行CIA造模,造模后衣霉素3个剂量组和地塞米松组分别腹腔注射衣霉素5、25、50 μg/kg和地塞米松0.2 mg/kg,1次/d,连续7 d.观察各组关节炎发生情况,检测脾脏淋巴细胞增殖反应,测定迟发性变态反应(DTH)和血清抗CⅡ抗体,同时行病理组织学检查.结果 中、高剂量衣霉素组和地塞米松组关节炎炎症评分、脾脏淋巴细胞增殖反应、DTH反应及血清中抗CⅡ抗体、滑膜增生和软骨破坏程度均较衣霉素低剂量组和模型组减轻或降低(P均＜0.05).结论 衣霉素对CIA大鼠免疫功能具有抑制作用,且呈浓度依赖性,此可能为其治疗CIA的机制.     

尿Ⅱ型胶原羟基端交联肽水平与椎间盘退变及骨性关节炎的相关性

目的探讨尿关节软骨标志物Ⅱ型胶原羟基端交联肽(CTX-Ⅱ)水平与椎间盘退变(IVDD)及骨性关节炎(OA)的相关性。方法选择2013年5月至2014年5月该院收治的IVDD和OA患者各50例,选取体检健康者50例作为对照组,采用Pfirrmann分级标准和Kellgren/Lawrence(K/L)评分标准分别对IVDD和OA患者评分,利用酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组患者血清CTX-Ⅱ表达水平,并分析患者分级与CTX-Ⅱ水平的相关性。结果 IVDD组和OA组尿中CTX-Ⅱ水平高于对照组(P0.05),而IVDD组与OA组无显著差异(P0.05);IVDD组及OA组患者尿中CTX-Ⅱ水平随分级增加而增加(F=66.161,42.223,P0.05),且存在相关性(r=0.605,0.754,P0.05)。结论血清CTX-Ⅱ表达水平随IVDD和OA病情加重而升高,可以作为评估IVDD和OA病变程度的指标。     

不同膝关节骨性关节炎模型大鼠软骨细胞Ⅱ型胶原表达的比较

目的采取2%木瓜蛋白酶溶液关节腔注射和手术造成关节不稳两种方法诱导大鼠膝关节骨性关节炎(KOA)模型,比较两种造模方法在不同时间节点关节软骨Ⅱ型胶原表达的异同。方法 54只8周龄SD大鼠按体重分层后随机分为3组,每组18只。手术组手术切除大鼠右膝内侧半月板、切断内侧副韧带诱导KOA;药物组通过在大鼠右膝关节腔注射2%木瓜蛋白酶溶液诱导KOA;对照组常规饲养。于造模后第4、6、8周取右膝股骨内侧髁关节软骨,行免疫组化染色观察Ⅱ型胶原表达。结果造模后第4、6、8周,手术组和药物组软骨细胞Ⅱ胶原表达逐渐减低,软骨表面缺损,与对照组相比有统计学差异(P<0.05)。手术组关节软骨Ⅱ型胶原表达与药物组比较无统计学差异(P>0.05)。结论手术切除膝关节内侧半月板、切断内侧副韧带和关节腔注射木瓜蛋白酶溶液是KOA的理想造模方法,在第4、6、8周关节软骨Ⅱ型胶原表达逐渐减少,Ⅱ型胶原的表达手术组与药物组比较无统计学差异。实验可根据个体需要,做出科学地选择。