RNA干扰沉默乏氧诱导因子1α对乏氧条件下食管鳞癌细胞化疗敏感性的影响

目的探讨RNA干扰技术沉默乏氧诱导因子（HIF）-1α对食管鳞癌EC9706细胞乏氧条件下化疗敏感性的影响及其机制。方法应用化学乏氧法[氯化钴（CoCl2）加入培养液的终浓度为75μmol／L]体外模拟肿瘤乏氧微环境。采用MTS比色法检测常氧培养组和乏氧培养组EC9706细胞在顺铂／紫杉醇作用下细胞的抑制率,以及RNA干扰后乏氧培养细胞在顺铂／紫杉醇作用下细胞的抑制率。应用Western印迹方法检测HIF-1α基因沉默后乏氧诱导HIF-1α蛋白表达变化。用流式细胞仪检测RNA干扰前后乏氧条件下EC9706细胞的细胞周期。结果针对HIF-1α基因的siRNA干扰技术,有效抑制乏氧诱导的HIF-1α蛋白表达。同一药物浓度常氧培养组细胞抑制率均明显高于乏氧培养组（均P〈0．05）。相同药物浓度及相同的乏氧条件下RNA干扰组抑制率均明显高于未转染组及转染control siRNA组（均P〈0.05）。相同的乏氧条件下转染HIF-1α siRNA与未转染组／转染无关对照siRNA组相比,S期显著增加（P〈0．05）、G1期细胞减少（P〈0．05）。结论乏氧条件下HIF-1α诱导EC9706细胞周期停止,可能是乏氧条件下细胞耐药的机制之一。RNA干扰可逆转食管癌细胞EC9706乏氧环境中化疗耐药。     

乏氧和低糖条件下SPCA1肺癌细胞HIF-1α蛋白和Glut-1 mRNA的表达变化

【目的】观察乏氧和低糖对SPCA1细胞凋亡的影响及乏氧诱导因子-1α(HIF-1α)和葡萄糖转运蛋白1(Glut-1)的表达变化。【方法】乏氧低糖处理后用流式细胞术检测SPCA1细胞凋亡率,Western Blotting检测HIF-1α蛋白表达,Northern Blotting检测Glut-1 mRNA表达水平。【结果】乏氧和/或低糖处理后48 h,乏氧高糖组SPCA1细胞凋亡指数(10.2±1.6)%,显著高于常氧高糖组(3.4±1.1)%(P<0.01),乏氧低糖组(32.6±4.7)%显著高于常氧低糖组(4.6±1.4)%(P<0.01)。常氧条件下SPCA1细胞不表达HIF-1α蛋白,Glut-1 mRNA仅轻微表达,但在乏氧和低糖条件下HIF-1α蛋白和Glut1 mRNA表达明显增加。【结论】乏氧低糖条件下SPCA1细胞HIF-1α蛋白和Glut-1 mRNA表达增加,提示SPCA1肺癌细胞通过增加糖代谢以适应乏氧和低糖。     

乏氧对肺腺癌A549细胞P糖蛋白和多药耐药相关蛋白表达的影响

目的 通过研究乏氧对人肺腺癌细胞株A549的P糖蛋白(P-gp)和多药耐药相关蛋白(MRP)表达的影响,探讨乏氧在引起肿瘤细胞多药耐药中的作用。方法 乏氧条件下(2％O2)人肺腺癌细胞株A549体外培养24h,丙酮固定后运用免疫组织化学的方法对乏氧诱导因子-1α(HIE-1α)、P-gp和MRP的表达进行检测,并用MTT法检测乏氧条件下A549细胞在阿霉素和顺铂作用下的存活率。结果 乏氧条件下人肺腺癌细胞株A549中乏氧诱导因子-1α、P-糖蛋白和多药耐药相关蛋白的表达明显较正常氧浓度下增高,HIF-1α与P-gp、MRP的表达增高存在明显的相关性。乏氧条件下人肺腺癌细胞株A549对阿霉素的耐药性明显增强。结论 在人肺腺癌A549细胞中HIF-1α蛋白表达与P-gp和MRP表达存在明显的相关性。     

沉默乏氧诱导因子-1α基因对乏氧人肝癌细胞SMMC-7721放射敏感性的影响

目的探讨RNA干扰乏氧诱导因子-1α（HIF-1α）基因对CoCl2诱导的乏氧人肝癌细胞SMMC-7721放射敏感性的影响及其机制。方法利用分子生物学技术构建靶向HIF-1α基因的RNA干扰质粒pGenesil-HIF,脂质体介导转染SMMC-7721细胞后进行乏氧培养,分别采用RT-PCR和Western blot法检测HIF-1α基因的mRNA和蛋白表达,四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,克隆存活实验检测细胞放射敏感性的变化。结果酶切鉴定和测序证实重组质粒pGenesil-HIF构建正确,转染质粒后乏氧培养24 h,SMMC-7721细胞HIF-1α基因的mRNA和蛋白表达水平明显低于对照组和阴性干扰组（P〈0.05或P〈0.01）;乏氧培养24 h、48 h和72 h后,HIF-1α干扰组细胞增殖活性明显低于对照组（P〈0.05或P〈0.01）,细胞阻滞于G0/G1期（P〈0.01）;乏氧培养48 h和72 h后HIF-1α干扰组细胞凋亡百分率明显高于对照组（P〈0.01）;乏氧培养72 h后HIF-1α干扰组SMMC-7721细胞放射增敏比为1.45。结论 RNA干扰HIF-1α基因可增强乏氧人肝癌细胞SMMC-7721的放射敏感性,其机制可能与RNA干扰HIF-1α基因抑制乏氧细胞增殖和诱导凋亡有关。     

乏氧对EC9706细胞多药耐药相关蛋白表达的影响

目的:研究乏氧对人食管鳞状细胞癌EC9706细胞株的多药耐药相关蛋白(MRP)表达的影响,探讨乏氧诱导因子-1α(HIF-1α)在乏氧引起肿瘤细胞多药耐药中的作用.方法:采用化学性低氧诱导剂氯化钴(CoCl2)体外培养人食管鳞状细胞癌EC9706细胞株,用RNAi沉默HIF-1α基因表达,应用半定量RT-PCR检测HIF-1α基因沉默效果.应用RT-PCR、免疫细胞化学技术检测RNA干扰前后乏氧条件下MRP1蛋白及RNA水平表达的变化.结果:乏氧后EC9706细胞中MRP1 mRNA和蛋白的表达均增加(P<0.05).针对HIF-1α基因的siRNA干扰技术,能有效沉默HIF-1α基因的表达.同样乏氧条件,转染HIF-1α siRNA后EC9706细胞较未转染及转染Control siRNA组细胞相比,MRP1 mRNA和蛋白的表达均减少(P<0.05).结论:HIF-1α上调食管鳞状细胞癌细胞中MRP1的表达可能是乏氧条件下化疗耐药的机制之一;HIF-1α可望成为新的食管鳞状细胞癌治疗的靶点.     

辐射诱导乏氧HeLa细胞HIF-1α和DNA-PK相互调控机制的研究

目的初步探讨辐射效应诱导下乏氧人宫颈癌细胞系HeLa细胞乏氧诱导因子-1α（HIF-1α）和DNA依赖蛋白激酶（DNA—PK）表达相关性及其调控机制。方法免疫印迹法检测乏氧状态下HeLa细胞接受射线照射后HIF-1α和DNA—PK（包括DNA—PKcs及Ku80）表达情况;运用靶向抑制HIF-1α或DNA—PKcs的小发卡样干扰RNA（shRNA）表达质粒分别转染乏氧HeLa细胞,经辐射诱导后检测不同时间点各自DNA—PKcs或HIF-1α表达的变化。结果乏氧HeLa细胞经辐射诱导后0、12、24、48h时间点检测到HIF-1α、DNA-PKcs和Ku80表达随时间增加逐渐增高,其中HIF-1a和DNA—PKcs的相对表达量呈正相关（r=0．816,P=0．041）;运用HIF1a—shRNA表达质粒明显抑制乏氧HeLa细胞内HIF-1α表达,检测到细胞经照射后12、24、48h时间点DNA-PKcs的表达与转染空白质粒的阴性对照组相比差异均无统计学意义（P〉0．05）;而pDNAPKcs-shRNA表达质粒抑制DNA-PKcs表达后检测各时间点HIF-1α的表达与转染空白质粒的阴性对照组相比均明显减少（P〈0．05）。结论辐射诱导乏氧HeLa细胞内HIF-1α表达与DNA-PKcs的表达水平相关;通过抑制DNA-PKcs的表达能显著降低乏氧HeLa细胞HIF-1α表达水平,对HIF-1α的调控机制提出新的思路。     

2种人卵巢癌细胞乏氧耐药模型的比较研究

目的：采用二氯化钴（cobaltous chloride,CoCl2）化学诱导法构建人卵巢癌细胞株A2780和SKOV3的乏氧耐药模型,并比较二者耐药特性。方法：（1）体外培养的A2780和SKOV3细胞分别加入不同浓度CoCl2培养液作用12、24、48、72 h,采用MTT法检测其增殖活性及对紫杉醇的耐药倍数;（2）采用150 μmol/L CoCl2培养液作用24 h构建乏氧环境,RT-PCR检测常氧和乏氧条件下乏氧诱导因子（hypoxia inducible factor,HIF）1α mRNA的表达情况。结果：２种细胞的增殖抑制率与CoCl2呈剂量-时间依赖关系（A2780组：F=1 165.416,P＝0.000;SKOV3组：F=2 802.394,P＝0.000）。随着CoCl2浓度的增加,A2780和SKOV3细胞对紫杉醇的耐药倍数增加（F=7 842.711,P＝0.000）;在相同CoCl2浓度作用下,SKOV3细胞对紫杉醇的耐药倍数明显高于A2780（50 μmol/L组：t=-48.287,P＝0.000;100 μmol/L组：t=-263.205,P＝0.000;150 μmol/L组：t=-143.305,P＝0.000）。150 μmol/L CoCl2作用24 h,2种细胞耐药倍数分别为（9.84±0.11）和（21.08±0.08）,并出现稳定的HIF-1α mRNA表达,其中SKOV3细胞HIF-1α mRNA的表达增加量明显高于A2780细胞（t=-5.573,P＝0.000）。结论：CoCl2化学诱导法可成功建立卵巢癌细胞乏氧耐药模型,其耐药倍数与细胞类型有关。在相同条件下,SKOV3细胞株乏氧耐药模型较A2780更易建立,是乏氧耐药逆转研究较为理想的细胞株。     

HIF-1α对间充质干细胞SDF-1/CXCR4的调控作用研究

[目的]探讨缺氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α）对间充质干细胞基质细胞衍生因子-1（stromal cell-derived factor-1,SDF-1）/CXC趋化因子受体4（chemokine receptor 4,CXCR4）的调控作用。[方法]贴壁法培养ICR小鼠骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）;采用RNA干扰技术用SuperFectinTMⅡ转染HIF-1αsiRNA于MSCs;实验分为五组：常氧组、缺氧组、转染Control siRNA组、转染HIF-1αsiRNA常氧培养组、转染HIF-1αsiRNA缺氧培养组;RT-PCR检测HIF-1α、SDF-1α、CXCR4 mRNA表达水平;Western blotting检测HIF-1α、SDF-1α、CXCR4蛋白表达水平。[结果]同常氧组比较,缺氧组HIF-1α、SDF-1α、CXCR4 mRNA及蛋白表达水平提高（P〈0.05）;同转染Control siRNA组比较,转染HIF-1αsiRNA常氧培养组HIF-1α、SDF-1α、CXCR4 mRNA及蛋白表达水平降低（P〈0.05）;同缺氧组比较,转染HIF-1αsiRNA缺氧培养组HIF-1α、SDF-1α、CXCR4 mRNA及蛋白表达水平降低（P〈0.05）。[结论]缺氧可使MSCs的HIF-1α、SDF-1α、CXCR4的表达提高,常氧与缺氧条件下抑制HIF-1α的表达可使SDF-1α、CXCR4的表达降低,HIF-1α在间充质干细胞中对SDF-1/CXCR4有调控作用。     

乏氧诱导的自噬与肺腺癌放射抵抗的相关性研究

目的 研究乏氧诱导的自噬与肺腺癌放射抵抗之间的相关性.方法 肺腺癌A549细胞行常氧和乏氧培养.构建靶向抑制乏氧诱导因子-1α(HIF-1α)的shRNA表达质粒,转染乏氧A549细胞,筛选稳定表达的克隆细胞.克隆形成实验检测细胞放射敏感性.Western blot法检测各处理组细胞HIF-1α、beclin1蛋白的表达.结果 乏氧细胞存活分数(SF2)为0.62,常氧细胞为0.43,提示乏氧A549细胞放射敏感性降低.常氧下A549细胞HIF-1α和beclin1蛋白低表达,乏氧12、24、48 h时间点HIF-1α和beclin1蛋白表达明显增加,差异均有统计学意义(P＜0.05).相应时间点HIF-1α与beclin1的表达呈正相关(r＝0.75,P＜0.05).A549/HIF-1α-shRNA的SF2为0.45,放射增益比(SER)为0.72,明显低于阴性对照组,说明抑制HIF-1α表达明显提高乏氧A549细胞放射敏感性.乏氧条件下HIF-1α的表达被抑制后 beclin1 蛋白的表达明显降低(24 h:t=5.69,P=0.01;48 h:t=5.13,P=0.01).结论 乏氧诱导的自噬参与肺腺癌的放射抵抗.     

脊索瘤细胞系CM-319中放化疗抵抗相关基因的表达及临床意义

[目的]探讨多药耐药相关基因如缺氧诱导因子1d（HIF-1α）、多药耐药基因（MDR1）及多药耐药相关蛋白（MRP1）在脊索瘤细胞系CM－319中的表达及临床意义。[方法]用RT—PCR检测HIF－1α、MDR1、MRP1基因表达,间接免疫荧光及免疫细胞化学Envision法检测HIF－1α、MRPl蛋白在CM－319中的表达情况,并分析其与放化疗抵抗的关系。[结果]常氧条件下,在脊索瘤细胞系中能检测到HIF～1α及MRP1 mRNA的表达,但未检测到MDR1 mRNA的表达（P〈0．01）,间接免疫荧光及免疫细胞化学可以检测到HIF-1α表达在细胞浆及核中,而MRP1主要表达在细胞浆中。[结论]HIF-1α与MRP1的过度表达在脊索瘤的放化疗抵抗中可能具有重要作用,而MDR1表达未被检测到,提示脊索瘤的放化疗抵抗主要与HIF－1α和MRP1相关。     

突变型HIF-1α慢病毒载体的构建及其在常氧条件下的抗降解作用

目的构建点突变型低氧诱导因子-1α（HIF-1α）慢病毒载体,并检测其在常氧条件下的抗降解作用。方法根据人的HIF-1α基因（NM₀01530）,对其全长编码区序列进行如下定点突变:803位天冬酰胺突变成丙氨酸,564位脯氨酸突变成丙氨酸,402位脯氨酸突变成丙氨酸。设计并合成3对引物用以导入变异点。PCR扩增序列片段,然后将目的基因PCR产物连接到载体pEGFP-N1上,构建真核表达载体pEGFP-N1-mutant/HIF-1α。PacI和AscI酶切鉴定后,用LR重组系统将目的序列重组到慢病毒载体plenti6.3V5-DEST上,构建慢病毒载体Lenti-MT（突变型HIF-1α）及Lenti-WT（野生型HIF-1α）。将Lenti-MT、Lenti-WT及Lenti-LacZ（对照组）转染293T细胞后,采用qPCR检测目的基因的表达。转染后的细胞在低氧条件下（2%O2）培养48 h,然后常氧条件下培养48 h,采用Western blot检测HIF-1α蛋白在不同氧浓度条件下的表达情况。结果与WT测序结果对比表明MT已被完成。酶切结果证明已成功构建pEGFP-N1-mutant/HIF-1α。qPCR结果显示Lenti-MT组目的基因表达高于Lenti-WT组,且差异具有统计学意义。低氧条件下,HIF-1α在WT组和MT组中的蛋白表达差异无统计学意义。但常氧条件下培养48 h后,WT组目的蛋白的表达显著下降,而MT组变化不大。上述结果表明MT具有明显的抗降解作用。结论成功构建了突变型HIF-1α,慢病毒载体在常氧条件下,Lenti-MT具有显著的抗降解作用。     

RNA干扰沉默HIF-1α基因对卵巢癌SKOV3细胞定植和侵袭的影响

【目的】构建针对HIF-1α基因的短发夹干忧RNA真核表达质粒，探讨低氧条件下其对卵巢癌SKOV3细胞定植和侵袭能力的影响。【方法】根据siRNA设计原则，结合psilencer 2．1-U6-neo质粒特点，针对HIF-1α基因设计并合成2条寡聚DNA片段，退火后将其克隆人DSilencer2．1-U6-neo质粒中，采用脂质体法将重组真核表达质粒转染人卵巢癌SKOV3细胞。缺氧培养后，应用实时定量PCR和Western blotting方法检测HIF-1α蛋白及mRNA表达水平；用软琼脂克隆形成实验和体外侵袭实验检测SKOV3细胞的定植和侵袭能力。【结果】成功构建的HIF-1α的短发状siRNA真核表达载体，转染卵巢癌SKOV3细胞，低氧条件下细胞HIF-1蛋白及mRNA表达水平下降；同时SKOV3细胞在软琼脂中形成的克隆数和穿透Matrigel膜的细胞数明显减少。【结论】构建的HIF-1α短发状siRNA真核表达载体，下调卵巢癌SKOV3细胞HIF-1α基因表达，卵巢癌细胞的定植和侵袭能力降低。     

RNA干扰HIF-1α对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞的VEGF表达及增殖的影响

目的 探讨shRNA特异性干扰沉默缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）对类风湿关节炎（RA）成纤维样滑膜细胞（FLS）的血管内皮生长因子（VEGF）表达及其增殖的影响.方法 获取9例RA患者滑膜组织进行RA-FLS的分离培养及传代.将FLS分为4组：常氧组、缺氧组、阴性质粒组（转染阴性质粒）和阳性质粒组（转染HIF-1α阳性质粒）,常氧组进行常规培养,后3组进行缺氧培养12h;采用Western blot和qRT-PCR法分别检测各组FLS中HIF-1α和VEGF以及HIF-1α和VEGFmRNA表达情况.将缺氧组、阴性质粒组和阳性质粒组的FLS分别于缺氧条件下培养6、12、24、48h,应用MTT比色法检测各组细胞增殖情况.结果 与常氧组相比,缺氧组FLS的HIF-1α和VEGF以及HIF-1α和VEGFmRNA表达明显升高,差异均有统计学意义（均P＜0.05）,而阴性质粒组和缺氧组FLS的HIF-1α和VEGF以及HIF-1α和VEGFmRNA表达水平无明显差异（P＞0.05）;阳性质粒组FLS的HIF-1α和VEGF以及HIF-1α和VEGF mRNA较缺氧组下调,差异均有统计学意义（均P＜ 0.05）.4组FLS的HIF-1α和VEGF以及HIF-1α和VEGF mRNA表达呈正相关（P＜0.01）.缺氧培养12h后阳性质粒组的FLS生长较缺氧对照组及阴性质粒组减慢,差异有统计学意义（P＜0.05）,而后两组FLS生长无统计学差异（P＞0.05）.结论 RNA干扰HIF-1α表达能有效下调RA-FLS中HIF-1α和VEGF以及HIF-1α和VEGFmRNA水平,并且能抑制FLS的异常增殖.     

乏氧诱导因子-1α抑制剂YC-1对乏氧脑胶质瘤SHG44细胞株的放射增敏作用

目的探讨乏氧诱导因子1α（HIF-1α）抑制剂YC-1对乏氧脑胶质瘤SHG44细胞株的放射增敏作用及其作用机制。方法选择脑胶质瘤SHG44细胞株,分别在常氧（20%O2）、乏氧（1%O2）12 h和24 h、乏氧＋YC-112 h和24 h这5种不同条件下培养,采用Western blot检测HIF-1α的表达水平;细胞克隆形成实验绘制细胞存活曲线以观察其放射敏感性;利用剂量分割法绘制亚致死性损伤修复曲线以观察其修复能力。结果脑胶质瘤SHG44细胞株在乏氧12 h和24 h与常氧培养相比,HIF-1α的表达水平显著升高,放射敏感性下降,其氧增强比分别为1.22和1.37,进一步统计分析发现其亚致死性损伤修复能力升高,且在间隔8、10、12 h照射时,差异均有统计学意义（均P〈0.05）;而当在乏氧12 h和24 h培养的同时加用YC-1时,HIF-1α的表达水平则显著降低,放射敏感性升高,其增强因子均为1.27,进一步统计分析也发现其亚致死性损伤修复显著降低,且在间隔8、10、12 h照射时,差异均有统计学意义（均P〈0.05）。结论 YC-1能明显提高乏氧脑胶质瘤SHG44细胞株的放射敏感性,其机制可能与YC-1能抑制细胞的亚致死性损伤修复能力有关。     

白藜芦醇对缺氧环境中鼻咽癌细胞株CNE2的化疗增敏作用

目的：观察缺氧环境下白藜芦醇（resveratrol,Res）提高人鼻咽癌细胞株CNE2对化疗药物敏感性的作用并探讨其机制。 方法：将不同浓度白藜芦醇加入化疗药物干预过的CNE2中,低氧培养48 h,甲基噻唑基四唑法检测CNE2中白藜芦醇对化疗药物的逆转倍数,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,应用反转录聚合酶链式反应和蛋白质印迹法检测CNE2细胞中多药耐药相关基因1（multidrug resistance gene 1,mdr1）、多药耐药相关蛋白1（multidrug resistance-associated protein 1,MRP1）和缺氧诱导因子1α（hypoxia inducible factor 1α,HIF-1α）mRNA和蛋白水平的表达变化。 结果：缺氧环境下白藜芦醇对化疗药物具有协同增效作用,200 μmol/L白藜芦醇对紫杉醇的逆转倍数为2.58。25、50、100和200 μmol/L白藜芦醇与紫杉醇合用,使紫杉醇诱导的CNE2细胞凋亡增加,且表现出明显的浓度依赖效应。此外随着白藜芦醇浓度的增加,mdr1、MRP1和HIF-1α的表达显著降低,加用白藜芦醇组与不加白藜芦醇组比较,差异有统计学意义（P〈0.01）。 结论：白藜芦醇可以通过下调核转录因子HIF-1α及多药耐药相关基因mdr1、MRP1的表达提高缺氧环境中鼻咽癌细胞株CNE2对化疗药物的敏感性。     

低氧环境下西尼地平抑制HIF-1α下调宫颈癌HeLa细胞VEGF表达的研究

目的 探讨西尼地平能否在低氧环境下,通过抑制HIF-1α下调宫颈癌HeLa细胞VEGF的表达.方法 将HeLa细胞分为常氧组（Normoxia组）、低氧环境组（Hypoxia组）、低氧环境＋3μM西尼地平组（Hypoxia＋3μM Cilnidipine组）和低氧环境＋30μM西尼地平组（Hypoxia＋30μM Cilnidipine组）.在低氧环境（1% O2、5% CO2和94% N2）下,对Hypoxia＋3μM Cilnidipine组和Hypoxia＋30μM Cilnidipine组细胞使用西尼地平（3μM和30μM）干预,在干预后不同时间点（0、24、48和72 h）使用MTT法对HeLa细胞活性进行测定;在干预72h后,使用RT-PCR法对细胞表达的VEGF和HIF-1α mRNA进行测定,使用Western blot法对细胞表达的VEGF和HIF-1α蛋白进行测定.结果 在低氧环境下,西尼地平干预后,HeLa细胞的细胞活性呈时间和剂量依赖性降低（P均〈0.05）;在干预72 h后,细胞VEGF和HIF-1α mRNA和蛋白的表达水平较未干预细胞降低并呈剂量依赖性（P均〈0.05）.结论 在低氧环境下,西尼地平可能是通过抑制HIF-1α的表达下调HeLa细胞VEGF的表达,导致肿瘤的增殖能力降低.     

P-gp、HIF-1α在非小细胞肺癌组织中的表达

目的探讨P-糖蛋白（P-gp）联合缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）检测在非小细胞肺癌组织中的表达及临床意义。方法采用免疫组织化学染色法检测60例非小细胞肺癌患者术后组织标本中P-gp、原位核酸分子杂交技术检测组织HIF-1α的表达。结果与癌旁正常组织相比,P-gp、HIF-1α在癌组织中的表达显著增强（P〈0.05）,且与肿瘤的分化、分期、淋巴结转移相关（P〈0.05）。结论缺氧与耐药参与非小细胞肺癌的发生,P-gp联合HIF-1α检测对于非小细胞肺癌患者的预后可能有预警作用。     

缺氧环境下A549细胞促进人脐静脉内皮细胞迁移及血管形成

目的 研究在缺氧条件下A549 细胞对人脐静脉内皮细胞（ HUVEC） 迁移及微血管形成的影响。方法 A549 细胞在常氧组（ 21% O2 ） 、缺氧组（ 2% O2 ） 、无氧组（ 0% O2 ） 中培养24 h 后, 通过倒置相差显微镜观察细胞形态、MTT 法检测细胞增殖、免疫细胞化学技术检测细胞内低氧诱导因子1α（ HIF-1α） 蛋白量以确定缺氧模型建立是否成功。随后取常氧组、缺氧组的A549 细胞上清液、HUVEC 细胞培养液干预HUVEC, 用细胞划痕实验、微丝绿色荧光染色方法观察各组HUVEC 的迁移情况及伪足形成, 体外HUVEC 三维培养技术观察血管形成情况。结果 与常氧组比较, 缺氧组A549细胞的生长状态好, 增殖明显; 无氧组A549 细胞生长状态差, 细胞数量减少; 缺氧组及无氧组A549细胞均有HIF-1α表达, 且缺氧组表达更加明显。与细胞培养液干预组比较, 缺氧上清液干预组和常氧上清液干预组A549 细胞的HUVEC 均有不同程度的迁移、伪足结构形成及血管管腔样结构形成,且前者较后者明显。结论 缺氧环境下A549 细胞生长状态良好, 增殖明显, 而无氧环境下则不利于A549 细胞的生长。缺氧环境下A549 细胞能促进HUVEC 的迁移、伪足形成及血管形成。