两种冷冻保护剂对人精子冷冻复苏后活动能力的影响

目的探讨两种不同的精子冷冻保护剂TYB和HSPM对人精子复苏后前向运动百分率(a+b)%的影响。方法 25例禁欲2～7 d的健康男性精液同时采用两种冷冻保护剂进行冷冻,比较复苏后精子的前向运动百分率。结果冷冻前精子的前向运动百分率平均为(58.4±6.2)%,TYB和HSPM冷冻保护后复苏精子的前向运动百分率平均分别为(45.2±5.2)%和(42.5±4.6)%,两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 TYB和HSPM对冷冻后复苏精子的前向运动无影响。     

两种冷冻保护剂对精子冷冻保护的效果比较

精液冷冻保护剂可以为三类,即单纯甘油型、甘油复合型以及无甘油型,其中甘油复合型由于效果较好,得到广泛应用.甘油复合型中根据其复合成分的不同,还可分为不同类型,如含有Tes-Tris、卵黄等的冷冻保护剂(TYB),含有卵黄、柠檬酸盐的冷冻保护剂(egg yolk-citrate medium, ECM),另外如含有人血清白蛋白(HSA)及HEPES的冷冻保护剂(human sperm preservation medium, HSPM).此前有学者[1]研究表明,ECM对精子冷冻的保护效果略差于HSPM.由于我们沿用的是自制ECM型的冷冻保护剂,因此,我们拟通过比较本所自制的ECM与商品化的HSPM,来探讨这两种冷冻保护剂的对精子的保护效果.已有研究[2]证实,精子的活动率和活力与精子的生育力明显相关,所以我们采用的比较参数是应用两种冷冻保护液后,其冻融精子活动率、活力及复苏率的变化.     

两种冷冻保护剂对精子冷冻保护的效果比较

精液冷冻保护剂可以为三类，即单纯甘油型、甘油复合型以及无甘油型，其中甘油复合型由于效果较好，得到广泛应用。甘油复合型中根据其复合成分的不同，还可分为不同类型，如含有Tes-Tris、卵黄等的冷冻保护剂(TYB)，含有卵黄、柠檬酸盐的冷冻保护剂(egg yolk-citrate medium，ECM)，     

精子形态和处理后精液参数与体外受精率的关系

目的探讨优化处理后前向运动精子比率、前向运动精子总数、精子正常形态百分率与IVF受精率之间的关系。方法回顾性分析生殖医学中心进行常规试管婴儿273个周期,研究精子正常形态率和处理后精液参数与受精率之间的关系。结果当处理后前向运动精子比率<50%和前向运动精子总数<5×106时,体外受精(IVF)受精率显著低于其他组(P<0.01);处理后前向运动精子总数<5×106时精子正常形态率<5%组与≥5%组IVF受精率差异有统计学意义(P<0.01)。结论优化处理后精子前向运动率和前向运动精子总数与IVF受精率相关,当处理后前向运动精子比率<50%时IVF受精率显著降低,而处理后前向运动精子总数<5×106且正常精子形态<5%时IVF受精率明显降低。     

供精者冷冻精液参数对精子宫颈黏液穿透功能的影响

目的：通过检测冷冻精液相关参数,探讨影响精子宫颈黏液穿透功能的相关因素。方法选取41例准入合格的志愿供精者冷冻精液标本,按冷冻精子宫颈黏液穿透功能结果好、中、差不同分3组,对每组复苏后的供精者冷冻精液标本进行精液参数综合评估,包括精液常规、精子形态、精子的存活率（伊红Y染色）、精子膜功能、精子DNA完整性、精子顶体酶活性、酶活力指数等。采用方差分析以及3组之间两两比较进行统计分析。结果供精者冷冻精液解冻后前向运动精子百分率、精子膜结构与功能完整性在3组之间差异有统计学意义（P＜0.05）。3组之间精子DNA完整性和精子顶体酶活性差异无统计学意义（P＞0.05）。结论供精者冷冻精液解冻后前向运动精子百分率、精子膜结构与功能完整性是影响精子宫颈黏液穿透功能的主要因素。精子DNA完整性和精子顶体酶活性对精子宫颈黏液穿透功能并不构成影响。     

人精子超低温冻贮技术的研究(四)——不同的保护剂对精子存活率的影响

用38种不同的保护剂对冻贮复温后的精子存活率的影响做了比较性研究.结果发现,甘油复合剂中大分子右旋糖酐和706代血浆溶液优于葡萄糖和/或枸椽酸钠溶液.将沿用的甘油—卵黄—葡萄糖—枸椽酸钠—红霉素复合剂内加入20%健康人血清或12%人血白蛋白,可分别提高精子存活率13.3%和■.6%(P<■).并结合实验结果对甘油复合剂的作用机制进行了讨论.     

精子特定形态学与部分精子动力学参数的相关性研究

目的 探讨精子形态和部分精子动力学参数的相关性,分析精子的各种形态缺陷与各精子动力学参数间的相关性。方法 采集2 233份精液标本,进行精液常规检测和精子形态学分析,对异常精子的形态缺陷和精子动力学参数进行相关性分析。结果 精子正常形态率与精子动力学参数均呈正相关性(P<0.05);精子头部畸形率(除精子浓度、非向前运动精子百分比)、中段畸形率、主段畸形率、过量残留胞浆精子率(除非向前运动精子百分比)与精子动力学参数均呈负相关性(P<0.05)。精子浓度与精子正常形态率呈线性相关(P<0.05);前向运动精子百分比与精子正常形态率、中段畸形率、主段畸形率、过量残留胞浆精子率呈线性相关(P<0.05);非前向运动精子百分比与精子中段畸形率呈线性相关(P<0.05);精子总活力与精子正常形态率、中段畸形率、主段畸形率、过量残留胞浆精子率均呈线性相关(P<0.05)。结论 精子形态学与精子动力学参数间存在一定相关性,部分参数间呈线性相关。精子形态学检测与动力学参数检测相结合可以更好地评估精子质量。     

附睾穿刺来源精子冷冻中添加褪黑素的效果研究

目的 研究附睾穿刺来源精子冷冻中添加褪黑素对精子冷冻效果的影响.方法 收集2020-10/2021-03月到作者医院就诊的梗阻性无精子症男性行诊断性附睾穿刺来源精子62份,与患者沟通取得知情同意,检测精液的存活率、运动能力、DNA碎片指数(DNA fragmentation index,DFI)等指标.随机分为不添加额...     

睾丸Clock基因下调后小鼠精子前向运动百分率降低的机制

目的 通过对睾丸精子超微结构的观察和实验室前期数据的生物信息学再分析,探讨睾丸Clock基因下调使小鼠精子前向运动百分率降低的机制。 方法 选取SPF级ICR雄性小鼠（8周龄）14只,随机分为实验组和对照组,每组6只,另2只小鼠作为免疫共沉淀实验样本。获取小鼠Clock基因下调的睾丸组织,透射电镜观察其中精子的超微结构。结合对实验室前期数据再分析的结果,ELISA检测睾丸组织中α-KGDH的活性,并以RT-qPCR检测睾丸中二氢硫辛酸脱氢酶（DLD）的转录组水平。最后在野生型小鼠睾丸组织中验证CLOCK蛋白与DLD蛋白的相互作用关系。 结果 与对照组相比,实验组Clock基因的表达显著降低（P＜0.001）;实验组睾丸中精子细胞线粒体形态和排列出现异常;差异蛋白的GO和KEGG富集分析提示,实验组精子线粒体中三羧酸循环限速酶α-KGDH的亚基构成蛋白之一的DLD明显下调 （P＜0.05）;与对照组相比,实验组睾丸α-酮戊二酸脱氢酶复合体（α-KGDH）酶活性明显降低（P＜0.05）;与对照组相比,实验组睾丸Dld基因mRNA水平也明显下调（P＜0.05）;而野生型小鼠睾丸中CLOCK蛋白与DLD蛋白能够相互作用。 结论 睾丸Clock基因的下调可导致小鼠精子线粒体结构和功能蛋白发生改变,从而限制了线粒体能量的产出,最终导致精子前向运动百分率降低。     

三种不同配比的保护剂对人类精子冷冻复苏后活动能力的比较

目的 比较添加葡萄糖与添加不同浓度蔗糖的冷冻保护剂对人精子冷冻复苏后的活动能力的影响。方法 将47份志愿者的标本分别采用三种不同的保护剂冷冻，比较精子复苏后的活动力。结果 冷冻前：前向活动精子百分率、总活动率分别为（60．4±6．4）％、（67．3±6．0）％；采用添加葡萄糖的冷冻保护剂冷冻复苏后的前向活动精子百分率、总活动率分别为（41．6±9．8）％、（50．7±10．2）％；采用添加0．1M蔗糖的冷冻保护剂冷冻复苏后的前向活动精子百分率、总活动率分别为（39．9％±8．0）％、（49．8±8．4）％；采用添加0．2M蔗糖的冷冻保护剂冷冻复苏后的前向活动精子百分率，总活动率分别为（29．7±7．7）％、（39．5±7．4）％。冷冻前后精子的前向活动百分率和总活动率差异有显著性，添加葡萄糖保护剂与0．1M蔗糖的保护剂相比差异无显著性但两者与添加0．2M蔗糖的保护剂比较差异有显著性。结论 冷冻对精子的活动力损伤明显；添加蔗糖作为精子的冷冻保护剂是可行的，较低浓度的蔗糖较高浓度的效果好。     

茯苓酸，一种新型的抗鼠心脏移植后急性期排斥反应的化合物

Background Pachymic acid （PA）, a natural triterpenoid, is known to significantly reduce cell proliferation and induce apoptosis in vitro through initiation of mitochondria dysfunction. However, its effect on immune cells and anti-rejection following organ transplantation remains unknown. Methods In this study, we investigated PA as a treatment to control acute rejection occurred in rats which had accepted cardiac transplantation. We measured apoptosis of peripheral blood lymphocyte （PBLs）, and CD4^＋ lymphocyte, as well as the number of CD4^＋ and CD8^＋ lymphocytes and the effect of PA on acute rejection in rats 7 days after cardiac transplantation. Results PA treatment might decrease allograft rejection, protect PBLs from apoptosis, and reduce the percentage of CD8^＋ lymphocyte. PA neither regulated the number nor the apoptosis rate of CD4^＋ lymphocyte. Conclusions Our findings indicated that PA has an anti-apoptotic effect acting on PBLs through a novel mechanism involving stabilization of the PBLs mitochondrial transmembrane potential, an anti-rejection effect in rats after cardiac transplantation and an inhibiting effect to CD8^＋ lymphocyte.     

低温冷冻对人精子受精能力的影响

目的评价低温冷冻对人精子受精能力的影响.方法用人精子与去透明带金黄地鼠卵异种体外授精技术(穿卵实验),比较冷冻前后及不同冷冻方法间精子的穿卵率,评估低温冷冻对人精子受精能力的影响.结果精子穿卵率在冷冻前为(36.41±8.75)%,经速冻法冷冻后为(24.63±7.75)%,经缓冻法冷冻后为(31.20±7.23)%,任意两者间比较结果均有显著差异(P＜0.01).结论低温冷冻使人精子的受精能力显著下降;降温速度越快,受精能力下降越显著.在冷冻前后进行精子穿卵实验,具有重要的临床意义.     

Effect of rhTNF-α on Mitochondrial Transmembrane Potential and Motility of Human Sperm in vitro by Flow Cytometry and Computer Aided of Semen Analysis

Objective To evaluate effect of recombined human tumor necrosis factor (rhTNF-α)on mitochondrial transmembrane potential and motility of human sperm in vitro Methods Semen samples for study were obtained from 40 health men (average age 26± 1.2 years) with normal semen analysis. Sperm suspension with computer aided of semen analysis (CASA) technique; 2) were stained in the presence of 10 μg/ml Rh123and PI, mitochondrial transmembrane potential of those was analyzed by flow cytometry(FCM).Results Significant differences were found between experimental groups and control groups on viability, straight line velocity, curvilinear velocity, average path velocity,progressive motility of human sperm and number of sperm with normal mitochondrial transmembrane potential (P＜0. 01) expect final concentration 30 pg/ml group (P＞0.05). Sperm motility lowed with increasing rhTNF-α concentration and incubating time (P＜0.01). Number of sperm with normal mitochondrial transmembrane potential decreased with increasing rh TNF-a concentration and incubating time (P＜0.01).Conclusion rhTNF-α can decrease human sperm motility function in vitro, which can interfere the function of human sperm mitochondrial transmembrane potential and may inhibit sperm mitochondrial enzymatic activities.     

纳米细菌对人精子质量的影响

目的　探讨纳米细菌对人精子浓度和运动能力的影响。方法　选择 2021年10~12月新乡医学院第三附属医院泌尿外科收治的12例Ⅲ型前列腺炎患者为研究对象,收集患者前列腺液标本,分离培养和鉴定前列腺液标本中纳米细菌,依据培养结果将患者分为纳米细菌阴性组和纳米细菌阳性组。应用计算机辅助精子分析系统（CASA）分析纳米细菌阴性组和纳米细菌阳性组患者的精液量、精子总活力、精子前向运动力。另取10例健康男性精液,优化处理后分为对照组和实验组;实验组精子与纳米细菌悬液共孵育,对照组精子与输卵管液共孵育;分别于孵育0、2、4、8 h时,应用CASA检测2组精子浓度、总活力、前向运动力、直线速度（VSL）、曲线速度（VCL）、平均路径速度（VAP）、精子头部侧摆幅度（ALH）和精子形态及凝集情况。结果　培养的纳米细菌为沉积在管底的白色沉淀,且培养基颜色变黄;阴性标本颜色与培养基对照组相比,颜色略有变黄。茜素红钙染色结果显示,不同视野下的纳米细菌常聚集成簇,单个细菌由于形体微小不可见,成簇的纳米细菌可被染成红色。12例Ⅲ型前列腺炎患者的前列腺液标本中,5例纳米细菌培养阳性,7例纳米细菌培养阴性。纳米细菌阴性组与纳米细菌阳性组患者的年龄、精液量、总活力比较差异无统计学意义（P>0.05）,纳米细菌阳性组患者的精子浓度、前向运动力显著低于纳米细菌阴性组（P<0.001）。实验组和对照组精子形态各时间点无明显变化,均未出现明显凝集。实验组和对照组精子浓度随孵育时间的延长呈下降趋势（F=135.420、132.925,P<0.001）;孵育0 h时,对照组和实验组精子浓度比较差异无统计学意义（P>0.05）;孵育2、4、8 h时,实验组精子浓度显著低于对照组（P<0.001）。对照组精子总活力、前向运动力、VCL、VSL、VAP及ALH随着孵育时间的延长呈下降趋势（F=304.494、48.012、95.780、53.538、383.257、287.428,P<0.001）,且实验组精子总活力、前向运动力、VCL、VSL、VAP及ALH随着孵育时间的延长亦呈下降趋势（F=1 758.057、924.174、297.114、244.244、1 173.730、290.031,P<0.001）。孵育0 h时,对照组和实验组精子总活力、前向运动力、VCL、VSL、VAP及ALH比较差异无统计学意义（P>0.05）;孵育2、4、8 h时,实验组精子总活力、前向运动力、VCL、VSL、VAP及ALH显著低于对照组（P<0.05）。结论　纳米细菌可显著降低精子浓度和运动参数,进而影响患者的生育能力。     

冷冻保存剂及两种冷冻方法对人精子活力的影响

目的：探讨精子冷冻保存剂（TEST-YOLK-Buffer,TYB）及快速冷冻法和液氮缓慢冷冻示两种不同的冷冻方法对人精子活力的影响。方法：健康男性的新鲜精液与TYB等比例混匀后，室温下分别放置5、15、30、60min，计数与TYB作用不同时间有活力的精子数，每个时间段的标本分别采用快速冷冻法和液氮缓慢冷冻法冷冻，冷冻保存时间大于24h，解冻复温后计数精子活力指数与平均精子活力指数。结果TYB作用5、15、30、60min 4个时间段后平均精子活力指数均下降，与初始精液相比差异均有统计学意义（P〈0.05），其中15.60min下降更明显（P〈0.01）；经过液氮缓慢冷冻的精子平均精子活力指数明显高于快速冷冻法（P〈0.01）。结论：TYB对精子活力有影响，与TYB作用时间越长，精子活力下降越明显，液氮缓慢冷冻法优于快速冷冻法。     

离心速度与时间对精子活动的影响

选用12例正常男性精液，用合成营养液将精子稀释至20×109／L，用不同的离心速度和离心时间，分别观察其对精子的活动率、6h存活率及精子活动力的影响，结果提示优选精子的最佳离心速度和离心时间是1000r／min和6min时，精子活动力能提高。增加离心速度和时间，则降低精子的活动力。     

FVB小鼠精子冷冻及体外受精的研究

目的：探索FVB小鼠及FVB遗传工程小鼠种系保存的新途径.方法：用孕马血清和人绒毛膜促性腺激素（HCG）超排FVB小鼠,并分别用复苏精子和新鲜精子进行体外受精并将受精卵移植到假孕雌鼠输卵管中,比较两种精子的受精率;对注射HCG后13,15,17h不同时间采集FVB小鼠的卵母细胞进行体外受精,比较其受精率及体外培养至2细胞情况.结果：新鲜精子的受精率（62.4%）略高于冷冻复苏精子的受精率（58.1%）;在注射HCG 13～15 h后取FVB小鼠卵母细胞其受精率效果较好,受精率（60.2%、61.6%）显著高于17h取卵的受精率（51%）,但13,15,17 h采集卵母细胞体外受精后胚胎发育至2细胞及异常卵数无显著性差异.结论：本研究将为FVB小鼠及FVB遗传工程小鼠的种系保存、繁殖提供了基础.     

西维因致男性工人精子DNA损伤的机制初探

目的:探讨西维因农药暴露与男性工人精子DNA损伤的关系,并探讨其可能的机制?方法:选择某农药厂西维因生产男工31名为暴露组;该厂行政区男性员工36名为内对照组;同地区男性行政人员22名为外对照组?检测3组人群精子DNA损伤?精浆超氧化物歧化酶(SOD)活性及精子活性氧(ROS)含量?选用培养的小鼠精母细胞(GC2-spd细胞)进行体外功能学验证,在不同浓度西维因染毒条件下,分析细胞存活率?凋亡及SOD活性,ROS含量的变化?结果:与内?外对照组相比,暴露组男性精子DNA断裂损伤显著增加(P < 0.05)?精浆SOD活性降低及精子ROS增加(P < 0.05)?相关性分析的结果显示,精子DNA损伤与精浆SOD的活性负相关(r=-0.53,P < 0.001),与精子ROS水平呈正相关(r=0.32,P=0.002)?小鼠精母细胞随西维因染毒剂量增加细胞存活率显著下降,凋亡增多并且细胞SOD减少及ROS增加(P < 0.05)?结论:西维因可影响男性精液质量,其可能的机制是通过氧化应激导致精子DNA的损伤?     

子宫内膜异位症腹腔液对精子运动功能影响的体外研究

目的　研究子宫内膜异位症 (内异症 )患者腹腔液体外对精子运动功能的影响 ,以探讨内异症引起不孕的机制。方法　取正常精液标本 ,经上游优化处理后 ,与内异症组 (30例 )及对照组 (18例 )腹腔液孵育 2h、4h ,采用计算机辅助精子分析系统 (CASA)检测精子的运动参数。结果　精子与腹腔液孵育 4h后 ,内异症组的精子总活动率、前向运动精子百分率、快速前向运动精子百分率及曲线速度 (VCL)、路径速度 (VAP)、直线速度 (VSL)、直线性(LIN)、摆动性 (WOB)、前向性 (STR)均显著低于对照组 (P <0 .0 1)。结论　内异症患者腹腔液对精子活动的抑制可能是导致不孕的一个因素。