日本血吸虫成虫抗原和虫卵抗原检测先天性感染仔兔血清抗体的动态变化

目的　观察仔兔血清抗体动态变化 ,探讨家兔日本血吸虫病垂直传播的体液免疫反应规律。方法　 5只怀孕晚期母兔分别人工感染 5 0 0条日本血吸虫尾蚴 只 ,仔兔出生后 4 3d起每隔 2周采血收集血清 ,至仔兔发育成熟 (约出生后113d)。分别运用日本血吸虫成虫抗原 (AWA)和可溶性虫卵抗原 (SEA) ,ELISA法检测血清中特异性IgG、IgM抗体 ,观察动态变化。结果　仔兔先天性感染率为 6 0 % (12 2 0 ) ,其中 5只双性感染 ,7只单性感染。 2 0只仔兔 ,抗AWA IgG、抗AWA IgM抗体检测始终呈阴性 ;抗SEA IgG检测 ,5只双性感染仔兔有 4只于出生后 5 7d起陆续呈阳性 ,其余 16只始终为阴性 ;2 0只仔兔抗SEA IgM也始终呈阴性。结论　先天性感染日本血吸虫病的仔兔呈低免疫应答状态 ,可能存在免疫耐受     

日本血吸虫经胎盘传染的仔兔再次感染后血清抗体动态的研究

怀孕晚期母兔 (怀孕 2 1～ 2 5ｄ)感染70 0条日本血吸虫尾蚴。分 3组 :①经胎感染仔兔无攻击感染组 (Ｇ1) :4只母兔感染 ,所产仔兔不进行攻击感染 ;②经胎感染仔兔攻击感染组 (Ｇ2 ) :3只母兔感染 ,所产仔兔出生后 5 5ｄ攻击感染 2 0条尾蚴 /只 ;③对照组 (Ｇ3 ) :3只母兔不感染 ,所产仔兔出生后 5 5ｄ感染 2 0条尾蚴/只。 3组仔兔出生后 5 3ｄ起 ,每隔 2周(出生后 5 3、6 7、81和 95ｄ)收集血清 ,用ＥＬＩＳＡ检测血清中抗日本血吸虫特异性ＩｇＧ和ＩｇＭ抗体。ＩｇＧ检测 :①Ｇ1组 :5只仔兔ＩｇＧ始终阴性 (Ａ值 0 0 4～ 0 2 1)未检到虫…     

检测日本血吸虫循环抗原的压电免疫传感器中抗体的纯化与固定

采用饱和硫酸铵沉淀法及凝胶过滤法从感染兔血清 (InRS)和免疫兔血清 (ImRS)中纯化出IgG抗体 ,分别经过SDS PAGE鉴定其纯度及对流免疫试验、免疫双扩散试验鉴定其活性和效价 ,以便制成一种新型的液相压电免疫传感器 ,用于检测兔与病人血清中的日本血吸虫循环抗原 (SjCAg)。初步应用该法检测了不同感染度的兔血清 ,发现频移值变化在一定范围内与感染度成正比。     

日本血吸虫感染BALB／c小鼠脾脏细胞学的变化

目的观察BALB／c小鼠感染日本血吸虫（Schistosoma japonicum，$）6．8周后脾脏细胞学的改变情况。方法用日本血吸虫尾蚴腹贴法建立日本血吸虫感染的小鼠模型。6～8周后观察肝脏、脾脏大小．称重：做脾脏淋巴细胞计数；用流式细胞仪检测脾脏淋巴细胞的大小、密度和T、B细胞分类以及Th细胞亚群睛况：用酶联免疫吸附实验（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）检测血清中可溶性虫卵抗原（soluble egg antigen，SEA）所诱导的特异性抗体IgG的产生情况。结果日本血吸虫感染BALB／c小鼠6～8周后，脾脏体积明显增大，重量增加，细胞数量明显增多。流式细胞仪检测发现脾脏中出现一群体积明显增大的细胞群，该群细胞表达少量的CD4、CD8、CD19和DX－5分子；Th1／Th2轴发生偏移，Th17细胞数量增多；ELISA结果表明血清中SEA特异性抗体IgG水平明显升高。结论日本血吸虫感染的BALB／c小鼠脾脏出现明显的细胞学改变，尤其是Th1细胞数目下降，浆细胞、Th2细胞及Th17细胞数目增多，为研究日本血吸虫感染后期虫卵肉芽肿形成的免疫病理机制奠定了基础。     

抗日本血吸虫SEA特异性IgY应用于循环抗原检测的研究

本研究应用抗日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)的鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)建立敏感、特异的检测循环抗原的双抗体夹心酶联免疫吸附试验( ELISA).用SEA皮下多点注射法免疫海蓝鸡,水稀释法制备IgY抗体,以辣根过氧化物酶标记纯化的IgY抗体(IgY-E)和兔抗IgG抗体(IgG-E)分别作为检测抗体,IgY抗体和兔抗...     

日本血吸虫肾病动物实验的研究

本文报道了急性感染日本血吸虫家兔肾病的免疫病理研究。用酶标抗体间接法在10只感染兔中5只的肾脏切片上显示出血吸虫抗原定位,并用 IHA、ELISA 测到肾匀浆中的特异性抗原和抗体,与肾脏大体标本及光镜下所见病理改变相一致,提示日本血吸虫肾病可能由免疫复合物致病。进一步用肾脏中特异性抗原组分作酶标定位分析,表明有虫卵抗原、成虫表膜相关抗原、肠相关抗原,以及特异性 IgG 参与肾脏内免疫复合物形成。     

单克隆抗体识别日本血吸虫循环虫卵抗原表位的初步研究

本文采用免疫印迹试验对抗日本血吸虫卵可溶性糖蛋白单克隆抗体SM_(21-2)识别感染兔血清中循环虫卵抗原表位作了初步的分析。将Dot-ELISA检测呈阳性反应的感染兔血清进行SDS凝胶电泳,再转移至NC膜上,采用间接ELISA染色。结果发现SM_(21-3)能识别感染10、100、1000条尾蚴兔血清中27kDa的循环虫卵抗原表位,而正常血清无此区带。同时发现在46kDa处存在非特异性反应。不同的封闭剂对印迹效果有一定的影响,用0.3％Tween-PBS获得了较好的结果。     

斑点ELISA与环幼沉淀试验诊断旋毛虫病的研究

目的比较斑点ELISA法（Dot—ELISA）和玻片环幼沉淀试验（CPT）检测感染旋毛虫大鼠血清抗体的敏感性和特异性。方法采用Dot-ELISA和CPT两种免疫学诊断技术检测实验感染旋毛虫大鼠血清特异性抗体。结果Dot．ELISA和CPT法检测阳性率分别为97．5％和95．O％,差异无统计学意义（x2=0．3463,P〉0．05）。同时用此两种血清学方法检测正常大鼠、斯氏狸殖吸虫感染大鼠、日本血吸虫感染兔及蛔虫病人血清,除1例蛔虫病人CPT阳性外,其他均为阴性。从第2周开始旋毛虫感染大鼠Dot—ELISA和CPT均能测出抗体,第5周达高峰。结论Dot．ELISA和CPT对旋毛虫特异性IgG抗体的检测均有较好的敏感性和特异性。     

检测可溶性TREM-1的ELISA法的建立及初步应用

目的:建立定量检测可溶性TREM-1的抗体夹心ELISA法。方法:采用抗人TREM-1单克隆抗体(mAb)包被酶标板,以兔抗鼠TREM-1多克隆抗体为夹心抗体、HRP标记羊抗兔IgG为检测抗体、重组小鼠可溶性TREM-1为标准品,建立检测可溶性TREM-1的ELISA法,并对30例正常人和30例急性肺部感染患者血清样本进行了检测。结果:建立的夹心ELISA法检测TREM-1的线性范围为0.78～200μg/L,批内、批间变异系数分别为6.52%和9.46%。30例正常人和30例血清急性肺部感染患者TREM-1的含量分别为(0.69±0.18)μg/L和(1.16±0.42)μg/L,两者比较差异有统计学意义(P<0.001)。结论:成功建立了一种灵敏度高、稳定性好的检测可溶性TREM-1的抗体夹心ELISA法。     

感染小鼠用吡喹酮治疗后其体内血吸虫体表抗原的显露

应用间接荧光抗体试验法对整体血吸虫检测的结果表明,感染日本血吸虫的小鼠一次口服吡喹酮300毫克/公斤后10～30分钟,其体内两性血吸虫的体表抗原即开始显露,16小时后虫的体表抗原大部分已显露。治后3～7天,残留血吸虫体表抗原的检测转为阴性。本文就经吡喹酮作用后血吸虫体表抗原显露的意义进行了一些讨论。     

整体虫间接免疫荧光法检测抗血吸虫抗体

本文介绍一种检测抗血吸虫抗体的免疫荧光技术。用氯化钙溶液处理日本血吸虫成虫,使其皮层脱落。暴露出的血吸虫皮层下体表抗原即可与抗血吸虫抗体发生反应,用间接免疫荧光法显示。用本法测定血吸虫病人、病兔的血清可见到脱皮血吸虫体表出现特异的荧光,正常人和正常兔血清的试验均为阴性。本文还报道了血吸虫脱皮前后的电子显微镜扫描图象。     

日本血吸虫24-26KD和90KD蛋白质“靶抗原”的抗原性

作者从日本血吸虫成虫抽提出两种国际公认在诱导保护性免疫力中起重要作用的24-26KD和90KD蛋白质“靶抗原”,用以免疫小鼠.结果表明上述两种“靶抗原”具有明显的抗原性.表现在(1)上述“靶抗原”免疫后可刺激宿主血清IgM升高,特别是IgG中的IgG1明显升高;(2)免疫鼠血清中的抗体能在成虫的表皮和实质层定位;(3)以ELISA和IFA检测免疫血清中的抗体水平时,均表现特异性抗体滴度明显增高(ELISA:90KD 1:5/20,24-26KD/:640;IFA:90KD1:80～1:2560,24-26KD1:40～1:160);(4)免疫血清中均存在着针对上述两种“靶抗原”的特异性抗体,免疫印渍试验结果进一步表明上述“靶抗原”免疫鼠血清中抗体均能特异地分别识别日本血吸虫抗原中分子量90KD和24-26KD的抗原决定簇。     

反向间接血凝检测血吸虫病循环抗原(CSA)的研究——Ⅰ.抗原提纯、抗体制备及抗原抗体的鉴定

从血吸虫成虫体外培养与重感染家兔血清中(感染后30天)提取循环抗原;将成虫经冻干、脱脂、反复冻融处理,20,000 rpm离心提取的成虫抗原;分别经人工免疫家兔获得相应抗体,纯化后致敏醛化血球,检测血吸虫病的感染与考核疗效。初步证明日本血吸虫循环抗原为耐热、耐酸、耐硷、分子量大于45,000,沉降系数S=2.27的多糖体。抗体为IgG成分。     

柯萨奇B组病毒IgM抗体特性研究

目的 研究柯萨奇B组病毒（CVB）感染后患者急性期CVB－IgM抗体的反应特性。方法 对临床确诊为CVB感染的患者急性期血清用免疫印迹法检测CVB－IgM抗体。结果 患者的急性期血清IgM抗体均仅针对CVB的VP1抗原反应。经ELISA与免疫印迹方法的比较表明：用免疫印迹法检测的CVB－IgM抗体可对CVB各型病毒抗原反应,具有CVB各型病毒之间的交 叉反应性。而同时,在16例ELISA检测反应阴性的健康人血清中未见有CVB的VP1特异性的IgM抗体存在。结论 临床感染CVB的患者急性期,其血清中的特异性的IgM抗体是针对CVB的VP1抗原,而且,此类抗体对各型的CVB抗原具有交叉反应性。     

广州管圆线虫成虫尿素溶解性抗原分析及其诊断价值的探讨

目的分析广州管圆线虫成虫尿素溶解性抗原,探讨其诊断价值。方法广州管圆线虫成虫匀浆后沉渣经尿素溶解,与成虫水溶解性抗原同时进行SDS-PAGE和Western-blot,分析蛋白谱与抗原谱;用ELISA检测不同样本中相应抗体。结果SDS-PAGE结果显示尿素抗原蛋白条带少于水溶解性抗原;尿素抗原与感染大鼠血清、免疫兔血清和广州管圆线虫病患者血清在32000Mr处均出现强反应带,尿素抗原的反应带条数较水溶性抗原少。两种抗原包被ELISA检测广州管圆线虫病疑似病人血清和感染大鼠血清的阳性率相同;尿素抗原用于检测血吸虫感染小鼠血清的交叉阳性率明显低于水溶性抗原,检测正常大鼠血清、献血员血清及其他非广州管圆线虫感染血清时,假阳性数较水溶性抗原少。结论广州管圆线虫成虫尿素抗原含有32000Mr抗原;广州管圆线虫尿素抗原用于诊断时,与水溶性抗原有同样的敏感性,而特异性高于水溶解性抗原。     

血吸虫病免疫诊断的研究——放射免疫检测循环抗原初报

为了提高血吸虫病免疫诊断的敏感性与特异性,试以同位素(~(125)I或~(131)I)标记抗循环原抗体(抗CSA IgG),进行检测血吸虫病循环抗原试验,现分三部分小结如下。 一、抗循环抗原体IgG制备,同位素标记及标记物的鉴定: 以日本血吸虫尾蚴5,000条感染家兔,感染后30天心脏取血,分离血清,用三氯醋酸沉淀血清蛋白。离心后取上清液透析。再经超滤取样,冰冻干燥获取循环抗原。再将此循环抗原加甲基化兔白蛋     

应用单克隆抗体Dot—ELISA检测血吸虫循环抗原的初步研究

检测感染宿主体内的循环抗原和循环免疫复合物可以确诊寄生虫感染和考核疗效。国内已有多篇检测血吸虫循环抗原方法的报道,但应用单克隆抗体检测血吸虫循环抗原的研究尚未见诸国内文献。作者应用抗日本血吸虫排泄分泌抗原(S·ESA)单克隆抗体进行斑点酶联免疫吸附试验 (Dot-ELISA)检测感染宿主血清循环抗原,结果表明:本法具有较高的敏感性和特异性。 材 料 和 方 法     

CpG协同calpain DNA疫苗诱导BALB/c鼠TH1免疫应答和抗日本血吸虫感染

目的 探讨含非甲基化CpG单核苷酸(cpG-ODN)协同calpain DNA疫苗抗日本血吸虫感染的保护性作用、诱导的免疫应答类型及其免疫机理。方法 calpain基因从原核表达载体pGEX-2TK亚克隆到含小鼠IL-2基因启动序列的真核表达载体pVAC，构建含日本血吸虫疫苗候选分子calpain基因的真核表达体系pVAC-calpain的DNA疫苗，构建的DNA疫苗与CpGODN免疫BALB/c小鼠，在不同阶段采血测定免疫鼠抗体的动态变化、RT-PCR分析免疫鼠细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-12的表达，加强免疫1周后用日本血吸虫尾蚴攻击感染免疫鼠，用减虫率、减卵率及其病理组织学指标考核保护性免疫的效果。结果 pVAC-calpain的DNA疫苗体系诱导了IgG抗体的产生，免疫3周后细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-12的表达表现出差异。特别是在CpG-ODN和pVAG-calpain免疫组IFN-γ、IL-12有高度表达，而IL-4的表达受到相对抑制，对攻击感染的日本血吸虫表现出了45％的减虫效果，虫卵肉芽肿的面积显著性的减少。结论 Cp GODN协同日本血吸虫calpain DNA疫苗诱导了THl为主的免疫应答，并能部分抵抗日本血吸虫感染和减轻感染鼠由于TH2免疫应答所导致的虫卵肉芽肿反应，提示CpG ODN能够协同calpain DNA疫苗抗日本血吸虫感染和缓解日本血吸虫免疫病理反应。     

沙鼠IgG兔抗血清的制备及其在IgG抗体检测中的应用

目的用纯化的蒙古沙鼠血清IgG制备相应兔抗血清,并用于幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,Hp）疫苗免疫后沙鼠血清中抗原特异性IgG的检测。方法采用饱和硫酸铵沉淀法和Q sepharose high performance阴离子交换层析法纯化蒙古沙鼠血清IgG,免疫日本大白耳兔制备兔抗沙鼠IgG抗血清并进行rProtein A亲和纯化,建立间接ELISA方法用于检测Hp疫苗注射免疫蒙古沙鼠后血清抗原特异性IgG水平。结果以纯化的蒙古沙鼠血清IgG（纯度大于98％）免疫日本大白耳兔获得相应兔抗血清,经亲和层析后其纯度大于90％,回收率约为85％,双扩效价为1：16,ELISA效价为1：320000;ELISA检测结果显示Hp疫苗注射免疫蒙古沙鼠于第2次免疫后产生高水平IgG,第4次免疫后第7天IgG水平达到高峰,随后几周仍然保持高水平。结论所制备的兔抗沙鼠IgG抗体可以用于蒙古沙鼠血清中抗原特异性IgG的检测。     

日本血吸虫病感染小鼠的T细胞辅助活力变动的初步观察

体外测定T细胞辅助活力是近年来发展起来的一种细胞免疫观察方法。Ramalho-Pinto等(1979)在曼氏血吸虫感染小鼠上首先研究了这种感染早期的应答——对童虫的辅助T细胞应答。本文对Ramalho-Pinto等法改进后,在正常小鼠建立了T细胞辅助活力测定方法,并用此观察小鼠感染日本血吸虫和以日本血吸虫抗原免疫后,对半抗原-载体免疫应答的影响。结果表明:①小鼠感染日本血吸虫后早期存在对童虫的辅助T细胞应答;3周后应答水平渐降,反映小鼠感染后,辅助T细胞功能部分地受到抑制;②小鼠用日本血吸虫卵可溶性抗原(SEA)免疫后,T细胞辅助应答的规律和日本血吸虫感染小鼠者相似,但其应答水平比感染小鼠者低。用新鲜虫卵、冰冻干燥虫卵、成虫抗原免疫小鼠,亦能诱导出对童虫的辅助T细胞应答,初步表明来自日本血吸虫生活史不同发育阶段的抗原物质(如虫卵、成虫)和血吸虫童虫表面可能含有共同的抗原决定簇成份。