苦杏仁甙抑制大鼠肾脏纤维化的实验研究

目的:观察苦杏仁甙治疗单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的效果。方法:用单侧输尿管梗阻的方法建立大鼠肾脏间质纤维化模型。60只Wistar大鼠随机分为假手术组、单侧输尿管梗阻组、苦杏仁甙3mg腹腔注射组和苦杏仁甙5mg腹腔注射组,分别于术后7、14、21d处死动物,观察各组大鼠肾脏病理损害程度。结果:除假手术组外其余各组随着时间的延长,肾间质纤维化的程度越来越严重。苦杏仁甙治疗组在7、14d时与单侧输尿管梗阻组差异无统计意义,在21d时大鼠肾脏纤维化程度明显低于单侧输尿管梗阻组。结论:苦杏仁甙具有明显抑制大鼠肾间质纤维化作用。     

大黄素延缓狼疮性肾炎肾间质纤维化作用的研究

目的：探讨中药大黄的活性提取成分－大黄素对狼疮性肾炎肾间质成纤维细胞增殖,凋亡的影响。方法：将ＬＮ患者肾活检组织培养分离出成纤维细胞,分别用＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法和流式细胞仪检测不同浓度的大黄素对人肾成纤维细胞的增殖和凋亡情况。结果：大黄素能有效地抑制人肾成纤维细胞的分裂增殖,并能促使其细胞发生凋亡,两者均呈剂量依赖关系。     

芦荟大黄素对瘢痕成纤维细胞增殖的时间-剂量依赖性效应

目的:观察中药大黄活性成分芦荟大黄素对瘢痕成纤维细胞增殖的影响。方法:实验于2001-06/2004-12在广东医学院整形外科研究所完成。成纤维细胞取自广东医学院附属医学整形外科患者手术切除的增生性瘢痕组织,瘢痕组织经处理后进行成纤维细胞原代及传代培养至第3～8代细胞。分别用不同浓度芦荟大黄素处理对数生长期成纤维细胞犤(0为对照组),24,48,72h犦,观察成纤维细胞生长状况以倒置相差显微镜下观察并拍照。观察加入不同浓度(0,20,40,60,80mg/L)芦荟大黄素后24、48、72h对成纤维细胞增殖的影响采用四甲基偶氮唑盐比色法。不同浓度芦荟大黄素作用24h后对成纤维细胞周期的影响采用流式细胞术检测。结果:①体外培养成纤维细胞的形态学改变:正常存活的成纤维细胞生长增殖旺盛分布密集,平行极性排列连接成片,细胞清晰。细胞呈梭形,胞体饱满,有两三个扁平而长的突起相联系。胞核较大、呈卵圆形,染色质结构疏松。用药组随药物浓度加大、作用时间延长,活细胞数量逐渐减少,细胞间隔增宽。细胞突起明显缩短,甚或消失。细胞变圆,胞体缩小。细胞质减少,有的呈空泡状,染色质浓缩边聚,胞核模糊或断裂成块状。②芦荟大黄素对成纤维细胞增殖的量效及时效影响:四甲基偶氮唑盐比色法显示芦荟大黄素对成纤维细胞的抑制率呈现浓度依赖性增高(F=6602.102,38214.554,46427.565,P<0.01),且随着时间的延长,同一浓度情况下抑制率明显增高。③芦荟大黄素对成纤维细胞细胞周期调节的剂量依附性趋势:随着用药浓度增大DNA合成前期细胞百分数增多,DNA合成期、DNA合成后期的细胞含量逐渐减少(F=6813.961,1064.506,1654.187,P<0.01),成纤维细胞增殖指数呈剂量依赖性降低趋势(51.56±1.21,34.50±1.43,25.30±2.11,14.71±0.82,F=6963.487,P<0.01)。结论:芦荟大黄素以剂量、时间依赖性的方式抑制瘢痕成纤维细胞生长,还可剂量依赖性降低成纤维细胞增殖指数并诱导成纤维细胞发生凋亡。通过调节细胞周期并诱导细胞凋亡从而抑制瘢痕成纤维细胞的生长增殖。     

人肾间质成纤维细胞体外增殖及胶原的合成

背景：肾间质成纤维细胞体外研究时间点的选取多在72h以内,但对于体外长时间动态观察培养过程中成纤维细胞增殖及胶原分泌规律少见报道。目的：观察人肾间质纤维化来源的成纤维细胞体外增殖及胶原蛋白合成的规律。方法：采用组织块培养法获取、纯化并鉴定肾间质纤维化来源的人肾间质成纤维细胞,选取第3代对数生长期细胞用于实验。MTT比色法及Masson三色染色结合图像分析法分别检测体外培养第1,3,5,7,9天细胞的吸光度值和成纤维细胞胶原蛋白染色阳性细胞的平均吸光度值。结果与结论：肾间质成纤维细胞体外生长曲线呈＂S＂形,体外培养第3～5天为细胞倍增时间,随培养时间延长,胶原蛋白由线状分布转变成片状分布,其中以第3～5天增长最快（P〈0.05）。结果证实,肾间质成纤维细胞在体外培养第3～5天增殖能力和胶原合成活性最强。     

人肾间质成纤维细胞体外增殖及胶原的合成

背景:肾间质成纤维细胞体外研究时间点的选取多在72h以内,但对于体外长时间动态观察培养过程中成纤维细胞增殖及胶原分泌规律少见报道。目的:观察人肾间质纤维化来源的成纤维细胞体外增殖及胶原蛋白合成的规律。方法:采用组织块培养法获取、纯化并鉴定肾间质纤维化来源的人肾间质成纤维细胞,选取第3代对数生长期细胞用于实验。MTT比色法及Masson三色染色结合图像分析法分别检测体外培养第1,3,5,7,9天细胞的吸光度值和成纤维细胞胶原蛋白染色阳性细胞的平均吸光度值。结果与结论:肾间质成纤维细胞体外生长曲线呈"S"形,体外培养第3～5天为细胞倍增时间,随培养时间延长,胶原蛋白由线状分布转变成片状分布,其中以第3～5天增长最快(P<0.05)。结果证实,肾间质成纤维细胞在体外培养第3～5天增殖能力和胶原合成活性最强。     

己酮可可碱对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响

背景:近年来发现己酮可可碱有广泛的抗纤维化作用,但己酮可可碱对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的抑制作用却少见报道,且其最大抑制剂量尚无定论.目的:观察己酮可可碱对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的作用,并筛选己酮可可碱的最大抑制浓度.方法:以人瘢痕疙瘩组织作成纤维细胞原代培养,传至第5～8代后将细胞分为实验组和对照组,实验组加入质量浓度为0.1,0 25,0.5,1.0,2.0,3.0 g/L的己酮可可碱,利用MTT比色法检测成纤维细胞的增殖活性.结果与结论:与对照组相比,实验组成纤维细胞增殖抑制率较高(P＜0.05),质量浓度在0.1～2.0 g/L范围内呈明显的量效、时效关系,96 h处于较高水平.实验组最大抑制率为53.37%,最大抑制质量浓度为2.0 g/L.结果表明己酮可可碱对瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖有明显的抑制作用,最适抑制质量浓度为2.0 g/L,发挥抑制作用最强的时间为给药后96 h.     

苦参碱对瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡的影响

目的:研究苦参碱对人瘢痕疙瘩成纤维细胞(fibroblast,FB)作用的机制。方法:实验于2000-01/2004-06在武装警察部队总医院烧伤整形科实验室完成。将苦参碱以不同浓度梯度作用于体外培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞,采用四唑盐比色法检测苦参碱对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响,采用免疫组织化学检测增殖性细胞核抗原(proliferativecellnuclearantigen,PCNA)的表达,采用流式细胞仪对异硫氰荧光素-连接素V/碘化丙啶双染情况(FITC-AnnexinⅤ/PI)检测细胞凋亡率。结果:苦参碱在0.10～10g/L对人瘢痕疙瘩成纤维细胞呈剂量依赖性增殖抑制作用;增殖性细胞核抗原经苦参碱作用后表达明显减弱;FITC-AnnexinⅤ/PI示苦参碱组的凋亡率为40.7,对照组为1.6(P<0.01)。结论:苦参碱在体外能明显抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖活性,并促进其凋亡。     

芦荟大黄素对瘢痕成纤维细胞增殖的时间-剂量依赖性效应

目的：观察中药大黄活性成分芦荟大黄素对瘢痕成纤维细胞增殖的影响方法：实验于2001-06／2004-12在广东医学院整形外科研究所完成成纤维细胞取自广东医学院附属医学整形外科患者手术切除的增生性瘢痕组织，瘢痕组织经处理后进行成纤维细胞原代及传代培养至第3～8代细胞分别用不同浓度芦荟大黄素处理对数生长期成纤维细胞[(0为对照组)，24，48，72h]，观察成纤维细胞生长状况以倒置相差显微镜下观察并拍照。观察加入不同浓度(0，20，40，60，80mg／L)芦荟大黄素后24、48、71h对成纤维细胞增殖的影响采用四甲基偶氮唑盐比色法。不同浓度芦荟大黄素作用24h后对成纤维细胞周期的影响采用流式细胞术检测。结果：①体外培养成纤维细胞的形态学改变：正常存活的成纤维细胞生长增殖旺盛分布密集，平行极性排列连接成片，细胞清晰。细胞呈梭形，胞体饱满，有两三个扁平而长的突起相联系：胞核较大、呈卵圆形，染色质结构疏松。用药组随药物浓度加大、作用时间延长，活细胞数量逐渐减少，细胞间隔增宽。细胞突起明显缩短，甚或消失。细胞变圆，胞体缩小。细胞质减少，有的呈空泡状，染色质浓缩边聚，胞核模糊或断裂成块状。②芦荟大黄素对成纤维细胞增殖的量效及时效影响：四甲基偶氮唑盐比色法显示芦荟大黄素对成纤维细胞的抑制率呈现浓度依赖性增高(F=6602．102．38 214．554，46 427．565，P&;lt;0．01)，且随着时间的延长，同一浓度情况下抑制率明显增高。③芦荟大黄素对成纤维细胞细胞周期调节的剂量依附性趋势：随着用药浓度增大DNA合成前期细胞百分数增多，DNA合成期、DNA合成后期的细胞含量逐渐减少(F=6813．961，1064．506，1654．187．P&;lt;0．01)，成纤维细胞增殖指数呈剂量依赖性降低趋势(51.56&;#177;1．21，34．50&;#177;1．43，25．30&;#177;2．11，14．71&;#177;0．82，F=6963．487，P&;lt;0.01)。结论：芦荟大黄素以剂量、时间依赖性的方式抑制瘢痕成纤维细胞生长，还可剂量依赖性降低成纤维细胞增殖指数并诱导成纤维细胞发生凋亡。通过凋节细胞周期并诱导细胞凋亡从而抑制瘢痕成纤维细胞的生长增殖。     

姜黄素对大鼠肺成纤维细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨姜黄素对肺纤维化大鼠肺成纤维细胞增殖、凋亡的影响。方法:将体外培养的正常大鼠肺成纤维细胞(NLF)和肺纤维化大鼠肺成纤维细胞(MLF)分别于不同浓度的姜黄素中孵育;观察细胞生长状态变化;MTT法检测吸光值,计算细胞抑制率;流式细胞仪测定细胞凋亡率。结果:姜黄索对MLF有抑制作用,存在剂量依赖(r=0.723;P<0.01)与时间依赖性(r=0.625,P<0.05)。流式细胞分析显示,姜黄素处理组MLF凋亡率较阴性对照组(4.29%)显著升高(P<0.01),并呈药物浓度依赖性。姜黄素不能抑制NLF增殖,对其凋亡影响无显著性。结论:姜黄素在体外对MLF具有抑制增殖、诱导凋亡的作用;而对NLF无明显影响。提示姜黄素可以通过诱导肌成纤维细胞的凋亡而起到抗纤维化的作用。     

羟基喜树碱与人病理性瘢痕成纤维细胞的增殖

背景:课题组前期实验表明病理性瘢痕成纤维细胞中拓扑异构酶Ⅰ存在高表达,实验以此设想作为拓扑异构酶Ⅰ抑制剂的羟基喜树碱能否抑制体外培养的人病理性瘢痕成纤维细胞的增殖?目的:探讨羟基喜树碱对人病理性瘢痕成纤维细胞增殖的影响.方法:体外培养人病理性瘢痕成纤维细胞.选取羟基喜树碱2～1 000 μg/L共10个药物质量浓度梯度,分别选取给药后24,48和72 h时间点,采用MTT法检测羟基喜树碱对成纤维细胞生长的抑制作用.结果与结论:低质量浓度(2～8 μg/L)下羟基喜树碱对成纤维细胞的增殖有抑制作用,质量浓度8～125 μg/L时出现平台期,质量浓度125～500 μg/L时抑制作用进一步增强,说明羟基喜树碱对成纤维细胞的增殖的抑制作用具有明显的剂量依赖性.药物作用质量浓度和成纤维细胞抑制率呈正相关(r=0.87,P＜0.05).随着作用时间延长,细胞抑制率无明显增加,药物作用24,48和72 h后,半数抑制率(IC50)分别为233,176及103 μg/L.因此实验推论羟基喜树碱能够抑制体外培养的人病理性瘢痕成纤维细胞的增殖.