两点单侧注射前脑内侧束建立PD大鼠模型及其行为学评价

目的 6-羟基多巴胺(6-OHDA)两点单侧注射前脑内侧束建立帕金森病(PD)大鼠模型,从行为学角度对模型进行评价.方法 104只SD大鼠随机分为正常对照组(n=14),生理盐水对照组(n=35)和模型组(n=55).模型组SD大鼠以6-OHDA立体定向两点单侧注射至前脑内侧束.术后不同时间点(第7、14、21、28天)进行行为学分析(姿势不对称性、前肢始动不能试验);术后第1周开始,每周1次腹腔注射阿朴吗啡(Apo)诱发大鼠旋转行为,连续6周,分别计数阳性大鼠例数.结果 模型组大鼠姿势不对称性和前肢始动不能试验指标与正常对照组和生理盐水对照组比较,有显著差异(P＜0.01);其行为学不对称性随时间延长而逐渐加重,至28 d后趋于稳定.第1、2、3、4周Apo诱发模型组大鼠旋转行为的阳性例数分别为9、12、12、1.结论 前脑内侧束单侧注射6-OHDA诱发大鼠的行为学改变与PD患者临床表现有相似之处.Apo诱发的PD模型大鼠旋转行为次数随损毁时间延长而增加,与其行为不对称性随时间延长加重的表现一致.实验为深入研究帕金森病发病机制奠定了基础.     

两点单侧注射前脑内侧束建立PD大鼠模型及其行为学评价

目的6-羟基多巴胺(6-OHDA)两点单侧注射前脑内侧束建立帕金森病(PD)大鼠模型,从行为学角度对模型进行评价。方法104只SD大鼠随机分为正常对照组(n=14),生理盐水对照组(n=35)和模型组(n=55)。模型组SD大鼠以6-OHDA立体定向两点单侧注射至前脑内侧束。术后不同时间点(第7、14、21、28天)进行行为学分析(姿势不对称性、前肢始动不能试验);术后第1周开始,每周1次腹腔注射阿朴吗啡(Apo)诱发大鼠旋转行为,连续6周,分别计数阳性大鼠例数。结果模型组大鼠姿势不对称性和前肢始动不能试验指标与正常对照组和生理盐水对照组比较,有显著差异(P<0.01);其行为学不对称性随时间延长而逐渐加重,至28 d后趋于稳定。第1、2、3、4周Apo诱发模型组大鼠旋转行为的阳性例数分别为9、12、12、1。结论前脑内侧束单侧注射6-OHDA诱发大鼠的行为学改变与PD患者临床表现有相似之处。Apo诱发的PD模型大鼠旋转行为次数随损毁时间延长而增加,与其行为不对称性随时间延长加重的表现一致。实验为深入研究帕金森病发病机制奠定了基础。     

选择性毁损帕金森病大鼠模型的建立

目的探讨提高 6 -羟基多巴胺 (6 -OHDA)帕金森病 (PD)大鼠模型成功率的方法 ,并对模型进行评价。方法 :取SD大鼠 90只 ,将 6 -OHDA立体定向微量注射于左侧黑质区及黑质纹状体通路 ,观察大鼠行为及黑质细胞形态学变化。结果 :90只大鼠中经阿朴吗啡诱导后有 6 4只 (占 71.1% )恒定转向右侧且结果稳定 ,旋转圈数 >2 10r/ 30min ,被视为成功PD大鼠模型 ;免疫组化观察发现注射侧黑质区多巴能神经元 (NDN)较对侧明显减少 ,电镜观察发现其普遍存在凋亡及坏死样改变。结论 :用 6 -OHDA选择性损毁NDN可较快建立稳定的类似于人类中晚期PD行为病理的大鼠模型 ,但在病理和行为学等方面同自然PD病人仍有较多差异     

帕金森病模型大鼠苍白球多巴胺D2样受体的表达

目的观察帕金森病(PD)模型大鼠苍白球多巴胺D2样受体的表达情况。方法采用免疫组织化学染色方法,分别检测正常大鼠及6-羟基多巴胺(6-OHDA)PD模型大鼠苍白球多巴胺D2样受体的表达。结果正常大鼠、PD模型大鼠苍白球均有多巴胺D2样受体的表达,表达主要位于神经元胞浆、胞膜及神经纤维上。PD模型大鼠损毁侧苍白球多巴胺D2样受体表达明显高于损毁对侧及正常大鼠(F=3.436,q=7.561、6.262,P<0.05),而损毁对侧与正常大鼠相比无明显变化。结论 PD模型大鼠损毁侧苍白球多巴胺D2样受体表达高于正常大鼠,可能与损毁侧苍白球内多巴胺减少诱导多巴胺D2样受体代偿性上调有关。     

P2X4受体对帕金森病大鼠脑黑质中脑源性神经营养因子表达的影响

目的 探讨P2X4受体(P2X4R)对帕金森病(PD)大鼠脑黑质中脑源性神经营养因子(BDNF)表达的影响。方法 采用随机数字表法将120只Wistar雄性大鼠随机分为对照组、6-羟基多巴胺(6-OHDA)组、P2X4组、P2X4-阴性对照(NC)组、P2X4+6-OHDA组、P2X4-NC+6-OHDA组，每组20只。对照组大鼠于左侧黑质注射2μL含体积分数0.02%抗坏血酸的生理盐水；6-OHDA组大鼠于左侧黑质注射2μL 6-OHDA构建PD模型；P2X4组大鼠于左侧黑质注射2μL携带过表达P2X4基因的慢病毒；P2X4-NC组大鼠于左侧黑质注射2μL空载阴性病毒；P2X4+6-OHDA组大鼠于左侧黑质注射2μL携带过表达P2X4基因的慢病毒，1周后注射2μL 6-OHDA;P2X4-NC+6-OHDA组大鼠于左侧黑质注射2μL空载阴性病毒，1周后注射2μL 6-OHDA。采用免疫荧光染色法检测各组大鼠左侧黑质中酪氨酸羟化酶(TH)阳性多巴胺能神经元数量，Western blot法检测各组大鼠左侧黑质中P2X4R、BDNF蛋白表达。结果 与对照组比较，6-OHDA组大鼠左侧黑质中...     

神经干细胞条件培养液对帕金森病模型神经元损伤的保护作用

目的:探究神经干细胞条件培养液(neural stem cell-conditioned medium, NSC-CM)对6-羟基多巴胺(6-hydroxydopamine, 6-OHDA)诱导的帕金森病(Parkinson′s disease, PD)体内外模型中神经元损伤的影响及可能机制。方法:采用6-OHDA脑立体定位注射SD大鼠的内侧前脑束建立体内PD模型,并在黑质和纹状体中注射NSC-CM进行治疗;免疫组织化学染色检测黑质和纹状体中多巴胺能神经元(dopaminergic neuron, DAN)丢失情况,免疫印迹实验检测黑质中线粒体融合蛋白1(mitofusin1,Mfn1)的表达水平。采用6-OHDA处理大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤PC12细胞建立体外PD细胞模型,并用NSC-CM进行预处理;检测PD细胞模型的乳酸脱氢酶(LDH)活性、细胞活性氧水平,免疫印迹实验检测Mfn1表达水平。液相色谱-串联质谱(liquid chromatography-tandem mass spectrometry, LC-MS/MS)检测NSC-CM成分并进行生物信息学分析;流式细胞术和激光共...     

培高利特对帕金森病大鼠保护作用的初步研究

目的 初步观察培高利特对大鼠黑质多巴胺神经元的保护作用，并探讨其可能的机制。方法 通过立体定位注射6—羟基多巴胺(6-OHDA)制作帕金森病大鼠模型，观察预先注射培高利特对阿朴吗啡诱发的旋转行为及受损侧黑质病理变化的影响。结果 大鼠持续注射培高利特7d后可明显减轻PD大鼠的旋转行为，并对抗6-OHDA所致只质多巴胺神经元的减少。而选择性D2受体桔抗剂氨黄酰基苯甲酰胺化合物(Sulpiride)可阻断培高利特的保护效应。结论 培高利特对多巴胺神经元具有保护作用，其机制可能与刺激多巴胺D2受体有关。     

6-羟基多巴胺微量注射对大鼠黑质抗氧化系统的影响

目的黑质内微量注射6-羟基多巴胺（6-OHDA）复制帕金森病（PD）动物模型并观察其对黑质抗氧化系统的影响。方法应用6—OHDA立体定向微量注射技术制备PD大鼠模型。观察不同天数用不同药物诱发对动物行为学的影响,45d后分别测定各组黑质区GsH—Px、MDA和ROS水平。结果①单侧黑质致密部6-OHDA8μg注射可以成功制备PD动物模型;②6-OHDA使GSH—Px活性降低．ROS、MDA水平升高（P均〈0．01）。结论6-OHDA黑质内微量注射可以建立PD动物模型,其症状稳定;6-OHDA打乱了黑质抗氧化系统的平衡。     

早期帕金森病大鼠模型的建立

目的 探索建立早期帕金森病（Parkinson disease,PD）大鼠模型.方法 成年大鼠单侧纹状体内注射6-羟多巴胺（6-hydroxydopamine,6-OHDA）.注射后第7天,通过姿势不对称性、前肢始动不能、前肢使用不对称性、阿朴吗啡诱发旋转实验进行行为学评估.观察组织学变化,取鼠脑黑质节段（n=6）,固定、石蜡包埋、连续冠状切片.焦油紫（Nissl）染色显示黑质神经细胞;抗酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroxylase,TH）抗体免疫组织化学染色显示黑质多巴胺（DA）能神经元,光镜下观察并进行细胞计数,统计学分析处理数据.而且,使另一部分模型动物（n=6）继续存活到第28天,鉴定所选动物模型的可靠性.结果 纹状体内注射6-OHDA后第7天,动物行为学出现有意义改变,黑质内神经细胞出现肿胀等变性坏死的早期形态变化,DA能神经元出现有意义减少;注射后的第28天,行为学改变更加显著,神经细胞大量减少,DA能神经元数量减少到92%.结论 纹状体内注射6-OHDA后第7天,通过行为学方法能确定早期PD动物模型.     

6-OHDA所致帕金森病模型大鼠黑质FP1基因表达及启动子甲基化状态变化

目的研究6-羟基多巴胺(6-OHDA)所致帕金森病(PD)模型大鼠黑质膜铁转运蛋白1(FP1)基因表达及其启动子甲基化状态的变化。方法采用6-OHDA单侧损毁大鼠内侧前脑束(MFB),免疫组化方法观察脑黑质区酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元细胞存活情况,半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测黑质区FP1mRNA表达的变化,甲基化特异性PCR(MSP)检测FP1基因启动子区甲基化状态的变化。结果 6-OHDA单侧损毁大鼠MFB后,与未损毁侧及对照组相比,损毁侧中脑黑质区TH阳性细胞显著减少(t=20.619、18.404,P0.01),FP1表达下调(t=8.123、7.609,P0.01);与对照组相比,实验组注射侧FP1基因启动子区甲基化阳性率增高,差异有显著性(χ2=20.0,P0.01)。结论 6-OHDA所致PD大鼠模型中黑质FP1基因表达降低,该基因启动子区甲基化可能参与FP1的表达下调。