基因重组质粒pBudCE4.1_Cx43转染骨髓间充质干细胞及其表达和功能的测定

目的用重组质粒pBudCE4.1_Cx43转染大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs),观察缝隙连接蛋白43(connexin43,Cx43)的mRNA和蛋白的表达及细胞间隙连接通讯功能的变化。方法用脂质体转染的方法将重组表达质粒pBudCE4.1_Cx43转染细胞;用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测Cx43mRNA表达,免疫细胞化学法检测Cx43蛋白的表达,划痕染料示踪法检测细胞间通讯功能。结果转染Cx43基因后的细胞在形态学、生长能力等方面的特征与未转染的细胞比较没有明显变化;Cx43mRNA与蛋白的相对表达量和对照组相比差异显著(P<0.01);转染组细胞传递的荧光强度与对照组相比亦差异显著(P<0.01)。结论转染Cx43基因的BMSCs能表达有生物学活性的基因产物,改善细胞间通讯功能,能为细胞性心肌成形术提供较理想的基因工程细胞。     

Cx43基因修饰对人肺鳞癌NCI-H226细胞增殖和迁移能力的影响

目的通过重组质粒p Bud CE4.1-Cx43转染人肺鳞癌NCI-H226细胞,探讨Cx43基因对细胞的生长、细胞周期及肿瘤迁移等的作用。方法用LipofectamineTM2000转染的方法将重组表达质粒p Bud CE4.1-Cx43转染人肺鳞癌NCI-H226细胞,通过RT-PCR、Western印迹检测Cx43在转染后的mRNA和蛋白的表达情况,划痕染料示踪法检测细胞间通讯功能,流式细胞仪检测细胞周期并通过CCK-8增殖实验、划痕愈合实验、细胞侵袭实验评价转染Cx43基因对人肺鳞癌NCI-H226细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响。结果实验组Cx43 mRNA和蛋白表达较对照组和空白组显著升高(P<0.05);细胞传递的荧光强度较对照组和空白组显著升高(P<0.01),实验组细胞的生长速度明显减慢,细胞周期被阻滞在G0/G1期,S期细胞数明显减少(P<0.05)。与对照组和空白组相比,实验组NCI-H226细胞增殖受到明显抑制(P<0.001),尤以72 h为著。实验组迁移能力、NCIH226细胞的侵袭能力显著下降(P<0.05)。结论转染Cx43基可抑制人肺鳞癌NCI-H226细胞的迁移能力,并抑制肿瘤细胞增殖。     

下调VEGF基因表达对人大肠癌细胞株SW480的增殖抑制作用

目的利用RNA干扰技术特异性抑制人大肠癌细胞株SW480的VEGF基因表达,并进行大肠癌的基因治疗。方法体外合成带有T7启动子的VEGF基因DNA片段、转录针对VEGF mRNA的siRNA、利用脂质体转染法导入SW480细胞内,MTT染色法观察转染后的SW480细胞增殖抑制率,ELISA法检测蛋白表达水平。RT-PCR检测转染后VEGF mRNA表达水平的变化。结果设计的两个靶位点siRNA能有效抑制SW480细胞生长,VEGF mRNAR的表达受到有效抑制,而阴性对照的错义序列组siRNA细胞生长良好。结论体外合成的VEGF siRNA可有效抑制SW480细胞增殖和VEGF mRNA蛋白表达水平。     

小鼠β-防御素2对结肠癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探究小鼠β-防御素(mBD)2对结肠癌细胞SW480细胞增殖、凋亡作用及可能作用机制,为结肠癌的临床治疗提供新思路。方法体外培养SW480细胞,转染mBD2重组质粒分为空白组(Control组)、阴性转染组(NC组)、mBD2转染组,CCK8法检测细胞增殖情况;平板细胞克隆实验检测细胞克隆形成数目情况;Hoechst33342染色法观察细胞形态变化;流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期情况;Western印迹法检测凋亡有关蛋白Bax、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(caspase)3、Bcl-2蛋白表达情况。结果随着细胞培养时间延长,mBD2转染组细胞增殖抑制率逐渐升高,在同一时间点,与Control、NC组相比,mBD2转染组细胞增殖抑制率显著升高(P0.05)。与Control、NC组相比,mBD2转染组细胞克隆形成数目均降低,mBD2转染组细胞凋亡率显著升高(P0.05)。与Control、NC组相比,mBD2转染组细胞G1期DNA量均显著升高(P0.05)。3组G2期、S期DNA量无明显变化(P0.05)。与Control、NC组相比,mBD2转染组细胞中Bax、活化caspase3蛋白表达均显著升高,Bcl-2蛋白表达显著降低(P0.05)。结论 mBD2可能通过使细胞阻滞于G1期,上调凋亡蛋白表达,进而抑制SW480细胞增殖,促进其凋亡,发挥抗肿瘤作用。     

C-FLIPsiRNA对大肠癌细胞株SW480凋亡的影响

目的探讨C-FLIP siRNA对大肠癌细胞株SW480凋亡的影响。方法常规方法培养大肠癌SW480细胞,待细胞处于对数生长期时,进行转染,分别转染C-FLIP siRNA重组体(观察组)和nonsilencing空载体(NC组),转染后24 h,将细胞传至96孔板中,两组转染细胞各传32孔,每8孔为一组平行孔,分别检测16 h、24 h、48 h、72 h细胞的增殖情况,并检测两种转染细胞中GHR受体mRNA和蛋白的表达情况。结果 C-FLIP siRNA重组体转染率达75%;大肠癌SW480培养后各时间点的吸光度值相比,差异有统计学意义(F=7.329,P=0.016),观察组的吸光度值均小于对照组,并且随着时间的延长,观察组吸光度值增加越来越慢,直至不增加;两组GHR受体蛋白水平相比,对照组高于观察组,差异有统计学意义(t=73.140,P=0.000);GHR mRNA表达观察组高于对照组,差异有统计学意义(t=12.685,P=0.000)。结论 C-FLIP siRNA重组体能够有效抑制大肠癌细胞株中SW480的增殖。     

Fas相关死亡结构域蛋白增强5-氟尿嘧啶抑制结肠癌细胞生长作用的研究

目的 通过体外和体内实验研究结肠癌细胞在稳定转染Fas相关死亡结构域蛋白(FADD)基因后对5-氟尿嘧啶的敏感性,探讨FADD基因与5-氟尿嘧啶联合治疗结肠癌的可行性.方法 ①RT-PCR和Western印迹法检测稳定转染FADD基因的结肠癌细胞SW480/FADD、稳定转染空载体的结肠癌细胞SW480/neo和正常结肠癌细胞SW480中FADD基因的mRNA和蛋白表达水平.②MTT法检测3种细胞对5-氟尿嘧啶的敏感性.TUNEL法和流式双染法检测细胞凋亡率.Western印迹法检测caspase-8和caspase-3的表达.③裸鼠成瘤实验观察瘤体生长曲线,病理学和TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡.结果 ①SW480/FADD细胞FADD基因mRNA和蛋白表达水平明显较SW480和SW480/neo增高(P＜0.05).②5-氟尿嘧啶对SW480/FADD的抑制率明显高于SW480和SW480/neo,差异有统计学意义(P＜0.05).③5-氟尿嘧啶(10 mg/L)干预48 h后,SW480/FADD凋亡率达(33.3±4.5)%,与SW480[(13.9±3.2)%]和SW480/neo[(14.1±3.4)%]间差异有统计学意义(P＜0.05).④5-氟尿嘧啶(10 mg/L)干预48 h后,SW480、SW480/neo的procaspase-8和procaspase-3表达比SW480/FADD增高,而cleaved easpase-8和cleaved caspase-3的表达比SW480/FADD降低(P＜0.05).⑤SW480/FADD对5-氟尿嘧啶更加敏感,瘤体体积增加幅度明显小于SW480和SW480/neo,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 稳定转染FADD基因可明显增加结肠癌细胞对5-氟尿嘧啶的敏感性,二者联合应用在结肠癌治疗中有潜在的价值.     

白藜芦醇通过SDF-1/CXCR4信号通路诱导大肠癌细胞株SW480凋亡

[目的]探讨白藜芦醇(Res)对大肠癌细胞株SW480增殖、凋亡的影响,并研究Res对SDF-1/CXCR4信号通路的作用。[方法]以20、40、80μmol/L Res处理SW480细胞后,采用CCK8方法检测细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western Blot方法分析细胞中凋亡相关蛋白Cleaved caspase-3、Bax、Bcl-2及SDF-1/CXCR4信号通路相关蛋白的表达水平。[结果]Res处理SW480细胞后,细胞增殖抑制率明显升高,且呈时间和剂量依赖性(P0.05);Res处理后SW480细胞凋亡率也显著升高(P0.05);药物处理组中促凋亡蛋白Cleaved caspase-3、Bax表达显著升高,而抗凋亡蛋白Bcl-2及SDF-1、CXCR4蛋白表达水平显著降低,表现出剂量依赖性(P0.05)。[结论]Res抑制大肠癌细胞株SW480增殖、诱导其凋亡,其作用机制可能与降低SDF-1/CXCR4信号通路活化相关。     

PDCD5因子增强顺铂抑制结肠癌细胞生长作用的体内研究

目的通过体内实验研究稳定转染程序性细胞死亡5(PDCD5)因子的结肠癌细胞对顺铂的敏感性,探讨PDCD5因子与顺铂联合治疗结肠癌的可行性。方法稳定转染PDCD5因子的结肠癌细胞SW480/PDCD5、稳定转染空载体的结肠癌细胞SW480/Neo及正常结肠癌细胞SW480分别接种到裸鼠皮下,形成皮下移植瘤后,顺铂(10 mg/kg)腹腔内注射,绘制移植瘤生长曲线;组织学观察皮下移植瘤,TUNEL法检测皮下移植瘤的凋亡情况;Western印迹法检测皮下移植瘤caspase-9和caspase-3的表达水平。结果 SW480/PDCD5对顺铂更加敏感,肿瘤体积增加幅度低于SW480和SW480/Neo(P0.05);SW480/PDCD5有更多的细胞出现变性坏死,更多的细胞染色体边集并出现凋亡小体,出现凋亡细胞的比例高于SW480和SW480/Neo(P0.05);SW480/PDCD5中caspase-9和caspase-3的活化片段较SW480和SW480/Neo更多(P0.05)。结论稳定转染PDCD5因子可以增加结肠癌细胞对顺铂的敏感性,二者联合应用在结肠癌治疗中有潜在的价值。     

抑制iASPP基因对大肠癌细胞凋亡作用的实验研究

目的通过构建针对p53凋亡抑制蛋白(inhibitory member of the apoptosistimulating protein of p53,i ASPP)的RNAi质粒,研究在体内外抑制i ASPP基因表达后对大肠癌细胞HT-29凋亡的影响。方法构建i ASPP的腺病毒RNAi质粒p Ad-i ASPP-RNAi,体外转染HT-29细胞,同时建立HT-29的裸鼠移植瘤模型;采用RT-PCR和Western blotting检测转染后瘤细胞i ASPP基因在mRNA和蛋白质水平的变化;采用流式细胞仪检测转染前后瘤细胞凋亡的变化。结果转染i ASPP RNAi后,与阴性对照组、空载病毒对照组相比,HT-29细胞的i ASPP mRNA及蛋白表达量均降低;i ASPP-RNAi组HT-29细胞的凋亡率、坏死率与阴性对照组及空白病毒对照组相比显著增加,差异有统计学意义(P0.01)。裸鼠移植瘤细胞在病毒转染后,细胞体积增大,核染色质浓集,出现凋亡;移植瘤细胞的凋亡率、坏死率与阴性对照组、空载病毒对照组相比显著增加,差异有统计学意义(P0.01)。结论在体内外抑制i ASPP基因的表达能够促进大肠癌细胞HT-29的凋亡,i ASPP有可能成为大肠癌分子免疫治疗的靶标。     

程序性细胞死亡5因子增强顺铂抑制结肠癌细胞生长作用的体外研究

目的通过体外实验研究稳定转染程序性细胞死亡5(PDCD5)因子的结肠癌细胞对顺铂的敏感性,探讨PDCD5因子与顺铂联合治疗结肠癌的可行性。方法实时定量RT-PCR和Western印迹法检测稳定转染PDCD5因子的结肠癌细胞SW480/PD-CD5、稳定转染空载体的结肠癌细胞SW480/Neo以及正常结肠癌细胞SW480的PDCD5因子的mRNA和蛋白表达水平。MTT法检测3种细胞对顺铂的敏感性。Hoechst 33258法和流式双染法检测3种细胞在顺铂干预下的凋亡率。Western印迹法检测3种细胞在顺铂干预下Bcl-2、Bax、Bcl-xL和Cyt c的表达水平。结果 SW480/PDCD5中PDCD5因子mRNA和蛋白表达水平较SW480和SW480/Neo增高(P<0.05)。SW480/PDCD5增殖抑制率高于SW480和SW480/Neo,生存率低于SW480和SW480/Neo(P<0.05)。顺铂(10 mg/L)干预24 h后,SW480/PDCD5凋亡率高于SW480和SW480/Neo(P<0.05)。顺铂(10 mg/L)干预24 h后,SW480、SW480/Neo的Bcl-2、Bcl-xL以及核内Cyt c表达较SW480/PDCD5增高(P<0.05),而Bax和胞浆Cyt c的表达较SW480/PDCD5降低(P<0.05)。结论稳定转染PDCD5因子可以增加结肠癌细胞对顺铂的敏感性,二者联合应用在结肠癌治疗中有潜在价值。     

过表达KLF17对结直肠癌细胞SW480上皮-间质转化和体外侵袭能力的影响

目的研究KLF17基因转染对人结直肠癌细胞株SW480上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)和体外侵袭能力的影响.方法将带有绿色荧光蛋白的重组KLF17表达质粒PIRES-EGFP-KLF17转染至SW480细胞中,以未转染质粒的SW480细胞作为对照,转染空载质粒的S W480细胞作为阴性对照.荧光定量PCR和Western blot法检测转染前后KLF17 mRNA和蛋白表达水平.采用QPCR和Western blot检测转染前后SW480细胞EMT上皮标志物E钙黏素(E-cadherin)和间质标志物波形蛋白(Vimentin)的表达变化.用Transwell小室实验检测KLF17基因转染对SW480细胞的体外侵袭能力的影响.结果 KLF17转染48 h后S W480细胞中KLF17mRNA和蛋白表达水平(2.5087±0.0288;0.6 1 0 0±0.0 5 7 9 0)均较对照组(1.0 0 0 0±0.0 1 9 8;0.3 5 4 3±0.0 3 4 0)明显升高(均P0.01);转染KLF17基因后,SW480细胞中E-cadherin mRNA和蛋白的表达量(2.0704±0.0620;0.5446±0.0245)较对照组均(1.0000±0.0106;0.3952±0.0430)均显著升高(均P0.01),Vimentin mRNA和蛋白的表达量(0.4622±0.0279;0.3290±0.0367)较对照组(1.0000±0.0780;0.5229±0.0496)均显著降低(均P0.01);转染KLF17基因后SW480细胞的体外侵袭能力(86.67个±10.97个)较对照组(145.30个±11.37个)及阴性对照组(135.33个±12.66个)均显著降低(均P0.01).结论 KLF17基因可能通过抑制结直肠癌细胞EMT而降低其侵袭能力.     

TPARM对人结直肠癌细胞株SW480增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响

目的 探讨四肽重复结构域(TTC)12,也被称为TPARM,其表达对人结肠癌细胞SW480增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响。方法 将人结肠癌SW480细胞株分为3组：NC组、TPARM-siRNA组和Scr-siRNA组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)法和Western印迹法检测各组TPARM mRNA和蛋白表达。细胞计数试剂盒(CCK)8法、平板克隆法测定各组TPARM表达对SW480细胞增殖的影响。Western印迹法检测TPARM表达对各组周期相关蛋白及凋亡相关蛋白的表达。流式细胞术检测各组TPARM表达对SW480细胞凋亡的影响。Transwell小室侵袭实验和划痕实验观察TPARM表达对SW480细胞侵袭、迁移能力的影响。结果 与NC组、Scr-siRNA组比较,转染TPARM-siRNA后,SW480细胞中TPARM mRNA及蛋白表达水平均明显降低(P<0.05)。分别与NC组和Scr-siRNA组比较,TPARM-siRNA转染组SW480细胞增殖明显减少(P<0.05),周期蛋白依赖性激酶(CDK)2、CDK4、CDK6的蛋白表达明显下降(P<...     

上调miR-124表达诱导甲状腺癌细胞凋亡的作用及其机制

目的探讨上调微小RNA(miR)-124表达对甲状腺癌细胞凋亡的影响及其作用机制。方法采用实时荧光定量(qRT)-PCR检测正常甲状腺Nthy-ori3-1细胞和甲状腺乳头状癌SW579细胞中miR-124的表达差异;利用脂质体转染Has-miR-124mimics上调miR-124表达,并通过qRT-PCR检测其转染效果;流式细胞仪检测过表达miR-124对SW579细胞凋亡的影响;Western印迹检测过表达miR-124对SW579细胞中磷脂酰肌醇-3-激酶催化亚单位α(PIK3CA)蛋白、蛋白激酶B(AKT)蛋白、磷酸化AKT(p-AKT)蛋白、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)蛋白及Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达的影响。结果 miR-124在甲状腺癌SW579细胞中的表达明显低于正常甲状腺Nthy-ori3-1细胞(P0.05)。转染Has-miR-124 mimics后,miR-124模拟组细胞中miR-124表达明显高于空白对照组(P0.05),阴性对照组和空白对照组差异无统计学意义(P0.05)。流式细胞仪检测结果显示,与空白对照组相比,miR-124模拟组细胞凋亡率显著升高(P0.05),而阴性对照组与空白对照组差异无统计学意义(P0.05)。Western印迹检测结果显示,与空白对照组相比,miR-124模拟组中PIK3CA、p-AKT和Bcl-2蛋白表达量均显著降低,Bax蛋白表达量显著升高(P0.05),而AKT蛋白的表达量变化不明显(P0.05);阴性对照组和空白对照组PIK3CA、AKT、p-AKT、Bcl-2及Bax蛋白表达量差异均无统计学意义(P0.05)。结论上调miR-124表达可诱导SW579细胞凋亡,其作用机制可能与抑制磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/AKT信号通路活性,上调Bax蛋白表达和下调Bcl-2蛋白表达有关。     

STAT3基因沉默对人胰腺癌SW1990细胞的裸鼠移植瘤生长的影响

目的 观察信号转导与转录激活因子3（STAT3）基因表达沉默后对人胰腺癌SW1990细胞的裸鼠移植瘤生长的影响,探讨其机制.方法 构建靶向STAT3短发卡RNA（shRNA）表达载体,稳定转染胰腺癌SW1990细胞（SW1990-RNAi组）,以转染阴性对照shRNA表达载体细胞（SW1990-Con组）及亲本SW1990细胞（SW1990组）作为对照.应用蛋白质印迹法检测各组细胞STAT3、血管内皮生长因子（VEGF）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）蛋白的表达.建立各组细胞的裸鼠皮下移植瘤模型,观察移植瘤的生长,应用免疫组化法检测移植瘤的CD34表达,计算肿瘤的微血管密度（MVD）.结果 SW1990组、SW1990-Con组、SW1990-RNAi组细胞的STAT3蛋白表达量分别为84.69±9.31、82.00±7.76、7.93±1.24,VEGF蛋白表达量分别为82.94±8.97、80.86±10.28、39.04±6.23,MMP-2蛋白表达量分别为40.88±5.09、38.26±5.71、12.54±2.15,SW1990-RNAi组均显著低于其他两组（P值均＜0.05）,而SW1990-Con组与SW1990组细胞的3种蛋白表达量差异均无统计学意义.SW1990组、SW1990-Con组、SW1990-RNAi组裸鼠移植瘤的重量分别为（2.2±0.4）、（2.2±0.3）、（0.5±0.3）g,瘤组织的MVD分别为每高倍视野（20.35±2.41）、（18.79±1.94）、（9.62±1.06）个,SW1990-RNAi组均显著低于其他两组（P值＜0.05或＜0.01）,而SW1990组与SW1990-Con组间的差异均无统计学意义.结论 STAT3基因表达被抑制后SW1990细胞的裸鼠移植瘤生长减缓,其机制可能是通过下调VEGF及MMP-2的表达、抑制肿瘤血管形成所致.     

MicroRNA-486-5p通过下调Neuropilin-2的表达抑制人大肠癌中微淋巴管的生成

目的:探讨过表达micro RNA-486-5p(mi R-486-5p)对人大肠癌细胞系SW620体内生长的作用及其作用机制的研究.方法:构建mi R-486-5p的过表达质粒,体外脂质体法瞬时转染人大肠癌细胞SW620;建立人大肠癌裸鼠皮下移植瘤模型,实验组每3 d瘤周注射mi R-486-5p过表达质粒,对照组注射等量的空白载体.每天观察肿瘤的生长情况并每3 d测量肿瘤的体积;实时荧光定量-PCR(Real-time PCR)检测各组肿瘤组织中mi R-486-5p的表达水平;免疫组织化学技术检测移植瘤内神经纤毛蛋白-2(neuropilin-2,NRP2)及微淋巴管的的分布情况;Western blot技术检测各组移植瘤中NRP2蛋白的表达.结果:转染后,实验组中mi R-486-5p的相对表达量较对照组提高12.57±2.31倍,过表达m i R-486-5p后实验组裸鼠皮下移植瘤的生长速度较对照组明显减缓(P0.05),瘤体质量明显减轻(P0.05).过表达mi R-486-5p可明显抑制NRP2蛋白的表达(P0.05),此外,mi R-486-5p组微淋巴管密度降低.结论:过表达mi R-486-5p可明显抑制大肠癌细胞的生长,抑制微淋巴管的生成,这可能与下调NRP2蛋白的表达有关.     

RNAi对结肠癌SW480细胞Nucleostemin基因表达的影响

目的:探求RNA技术干扰人结肠癌SW480细胞Nucleostemin(NS)基因后,结肠癌SW480细胞NucleosteminmRNA和蛋白水平的表达,及细胞增殖情况变化.方法:构建Nucleostemin特异性真核表达载体,和脂质体共同转染SW480细胞后,采用Real-timePCR和Westernblot方法检测NS基因mRNA和蛋白变化,MTT法检测细胞的增殖情况.结果:与对照组相比较,RNAi干扰细胞后NSmRNA表达明显下降;NS蛋白表达亦明显下降(1.069±0.368,1.003±0.313,1.901±0.817,P<0.05;1.069±0.368,1.003±0.313,2.035±0.665,P<0.05),空白对照组(仅加入脂质体)和阴性对照组(RNAi错义序列)间无显著差异(2.035±0.665,1.9001±0.817,P>0.05).MTT显示RNA干扰后细胞增殖明显受到抑制.结论:通过特异性RNA干扰NS基因后,结肠癌SW480细胞增殖受到抑制.     

缝隙连接蛋白26基因修饰对人高转移性肝癌细胞增殖和侵袭能力的影响

目的探讨缝隙连接蛋白(Cx)26基因对人高转移性肝癌细胞株(HCCLM3)细胞增殖和侵袭能力的影响。方法采用慢病毒载体(LV)转染法将载体LV-Cx26转染高转移性HCCLM3细胞为研究组,仅转染空载体LV-NC-Cx26为对照组,未转染的HCCLM3细胞为空白组。RTPCR和Western印迹测定转染后Cx26 mRNA和蛋白表达;划痕荷载染料传输实验检测细胞通讯功能;流式细胞术检测细胞周期并通过CCK-8增殖实验、Transwell细胞侵袭实验检测细胞增殖、侵袭能力。结果研究组Cx26 mRNA和蛋白表达量均明显高于对照组和空白组(P<0.05)。研究组转染慢病毒载体LV-Cx26后的细胞通讯功能明显强于对照组、空白组,即划痕细胞中的荧光染料可传递到相邻的3~4列细胞。研究组G0/G1期细胞数明显多于对照组和空白组,S期细胞数明显少于对照组和空白组(P<0.05)。M期三组细胞数无统计学差异(P>0.05)。CCK-8法检测显示,72 h起研究组细胞增殖速度明显低于同期对照组和空白组(P<0.05);对照组和空白组各时间点细胞增殖情况无统计学差异(P>0.05)。Transwell细胞侵袭实验显示,研究组穿膜细胞数明显少于对照组和空白组(P<0.05)。结论转染Cx26基因可有效抑制HCCLM3细胞的增殖和侵袭能力,降低恶性生物学特征,可成为晚期肝癌治疗的新思路。     

STAT3靶向短发夹RNA干扰重组载体对结肠癌SW480细胞的沉默作用

目的 探讨STAT3基因短发夹RNA(shRNA)表达质粒对结肠癌SW480细胞STAT3基因的干扰作用.方法 根据siRNA设计原则,构建靶向STAT3基因的短发夹RNA干扰质粒(pGPU6/GFP/STAT3),使用脂质体法转染人结肠癌细胞系(SW480),通过RT-PCR和 Western 印迹检测结肠癌SW480细胞STAT3基因mRNA和蛋白表达水平.结果 pGPU6/GFP/STAT3重组质粒经限制性内切酶酶切及测序证明基因插入正确.质粒成功转染SW480细胞后,该细胞的STAT3 mRNA和蛋白表达明显下降(P<0.05).结论 成功构建靶向STAT3基因的shRNA表达载体,转染SW480细胞,能有效抑制细胞的STAT3 mRNA和蛋白表达,为STAT3基因靶向治疗提供前期的实验依据.     

雷替曲塞对人结肠癌细胞SW480增殖、凋亡的影响及其机制

目的观察雷替曲塞对人结肠癌细胞(SW480)细胞增殖及细胞凋亡的影响,并探讨其机制。方法将SW480随机分为A组、B组、C组与对照组,A组加入雷替曲塞0. 1μg/mL,B组加入雷替曲塞0. 5μg/mL,C组加入雷替曲塞2. 5μg/mL,对照组加入等量培养液。培养24、48、72 h后采用CCK-8试剂盒检测各组SW480增殖活性;培养10 d后,计算各组SW480克隆形成率;培养72 h后,采用实时荧光定量PCR检测Bax、Bcl-2及Caspase-3 mRNA,采用Western Blotting法检测Bax、Bcl-2及Caspase-3蛋白。结果随着雷替曲塞浓度的增加以及干预时间的延长,SW480的增殖速度减慢(P均<0. 05),且在浓度达到一定程度后,该现象不再明显;孵育10 d后,各组SW480克隆形成率组间两两比较,P均<0. 05;随着雷替曲塞浓度的增加,SW480 Bax及Caspase-3蛋白及mRNA表达升高,Bcl-2蛋白及RNA表达降低(P均<0. 05)。结论雷替曲塞可通过调节SW480 Bax、Caspase-3和Bcl-2蛋白及...     

苦参碱对大肠癌细胞增殖和表达增殖诱导配体的影响

目的 通过研究苦参碱对大肠癌细胞株SW480增殖和表达增殖诱导配体(a proliferation-inducing ligand,APRIL)水平的影响,为苦参碱和APRIL的抗癌研究提供理论基础.方法 采用MTT法检测苦参碱对大肠癌细胞株SW480增殖的抑制率.免疫组化法和实时荧光定量PCR检测大肠癌SW480细胞株的APRIL表达,用实时荧光定量PCR检测加入不同终浓度(0.5、1.0、2.0 mg/ml)的苦参碱后24、48、72 h SW480细胞表达APRIL mRNA的水平,设氟尿嘧啶为对照组及不加药为空白对照组.结果 苦参碱对大肠癌SW480细胞的增殖有明显的抑制作用,并且呈剂量和时间依赖.SW480细胞有明显的APRIL表达,加入不同浓度(50、100、200 ug/ml)的氟尿嘧啶后,SW480细胞APRIL mRNA的水平均逐渐升高,至72 h表达最高并与空白对照组相比差异均有统计学意义(P<0.001),而加入不同浓度苦参碱,在药物作用后24 h,SW480细胞的APRIL mRNA水平升高并与空白对照组相比差异有统计学意义(P<0.001),而后逐渐下降,至药物作用后72 h,其水平与空白对照组间差异无统计学意义(P>0.05).结论 氟尿嘧啶在抑制SW480细胞增殖的同时,残存癌细胞的增殖能力有可能因为APRILmRNA水平的高表达而增强,故同时辅予对抗APRIL功能的治疗措施可能具有潜在的重要作用,而苦参碱不会引起SW480细胞APRIL mRNA水平的持续升高.可望成为一个有益的抗大肠癌辅助治疗手段.