葛根素对臂丛神经根性撕脱伤脊髓前角iNOS、CGRP蛋白表达及PI3K/Akt信号通路的影响

目的　探讨葛根素对臂丛神经根性撕脱伤（brachial plexus root avulsion injury,BPRAI）脊髓前角iNOS、CGRP蛋白表达及PI3K/Akt信号通路的影响。 方法　将50只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、葛根素低、中、高剂量治疗组,每组10只。模型组,葛根素低、中、高剂量治疗组进行BPRAI造模,撕脱大鼠右侧C5~7脊神经前根,后根剪断,术后3个治疗组予腹腔注射葛根素,剂量分别为50、100、200 mg·kg-1·d-1,正常组、模型组腹腔注射等体积生理盐水,持续4周。采用尼氏染色、免疫荧光化学、Western blot方法,观察损伤侧脊髓前角α运动神经元（alpha motorneurons,α-MNs）的存活率,iNOS、CGRP、PI3K/Akt通路相关蛋白的表达。 结果　第4周时,低、中、高剂量的葛根素治疗可抑制α-MNs丢失（P<0.05或P<0.01）;中、高剂量的葛根素治疗可抑制iNOS表达（P<0.05）;高剂量的葛根素治疗可促进CGRP蛋白表达（P<0.05或P<0.01）;低、中、高剂量葛根素均可显著抑制p-Akt1/2/3表达（P<0.01）。 结论　葛根素可改善BPRAI造模引起的α-MNs死亡,其机制可能与葛根素能抑制iNOS蛋白的表达、促进CGRP蛋白的表达有关,并且PI3K/Akt信号通路参与其调控。     

银杏内酯B对帕金森病模型大鼠的保护作用

目的 探究银杏内酯B（ginkgolide B,GB）对帕金森病（Parkinson's disease,PD）模型大鼠的保护作用。 方法 采用脑内定位注射6-OHDA建立大鼠PD模型,随机分为Sham组、模型组、美多芭组（20 mg/kg）和GB低、中、高剂量组（15、30、60 mg/kg）,另将大鼠随机分为Sham组、Model组、GB 60 mg/kg组、LY294002组和（GB 60 mg/kg+LY294002）组,旋转实验检测大鼠行为学,试剂盒检测MDA、SOD、GSH水平,ELISA检测IL-6、IL-1β、TNF-α水平,Western blot检测大鼠黑质和纹状体组织PI3K/Akt信号通路蛋白表达情况。 结果 治疗后,美多芭组和GB中、高剂量组大鼠旋转圈数明显少于模型组（P<0.05）,MDA和IL-6、IL-1β、TNF-α水平明显低于模型组（P<0.05）,SOD、GSH水平、p-PI3K、p-Akt蛋白表达明显高于模型组（P<0.05）;与LY294002组比较,（GB 60 mg/kg+LY294002）组大鼠p-PI3K、p-Akt蛋白表达明显上调（P<0.05）,MDA和IL-6、IL-1β、TNF-α水平明显降低（P<0.05）,SOD、GSH水平明显升高（P<0.05）。 结论 高剂量GB可改善PD大鼠行为学,增强抗氧化应激能力,减轻炎性损伤,起到一定保护作用,其机制可能与调节PI3K/Akt信号通路有关。     

厄贝沙坦对高血压合并2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗IRS-1/PI3K/GLUT4信号通路的影响

目的　探讨厄贝沙坦对高血压合并2型糖尿病（T2DM）大鼠胰岛素抵抗的影响及其作用。 方法　自发性高血压大鼠（SHR）采用高糖高脂饮食联合链脲佐菌素（STZ）建立T2DM模型,随机分为模型组、厄贝沙坦低、高剂量组。以正常大鼠作为对照组。厄贝沙坦低、高剂量组每日分别按30、60 mg/kg剂量灌服厄贝沙坦,对照组和模型组灌服等量生理盐水。测量大鼠收缩压（SBP）、空腹血糖（FBG）、胰岛素抵抗模型评估指数（HOMA-IR）、胰岛素受体底物-1（IRS-1）、磷脂酰肌醇（-3）激酶p85亚基（PI3Kp85）、蛋白激酶B（AKT）、磷酸化蛋白（p-AKT）及葡萄糖转运蛋白4（GLUT4）的表达。 结果　与对照组相比,模型组SBP、FBG、FINS和HOMA-IR升高（P<0.05）,IRS-1、PI3Kp85、p-AKT和GLUT4降低（P<0.05）;与模型组相比,厄贝沙坦低、高剂量上述指标均发生逆转（P<0.05）。 结论　厄贝沙坦可通过IRS-1/PI3K/GLUT4信号通路改善高血压合并T2DM大鼠胰岛素抵抗。     

黏蛋白16基因通过磷酸肌醇3-激酶/蛋白激酶B通路调节胆囊癌细胞活力和迁移

目的 探讨黏蛋白16基因（MUC16）是否通过磷酸肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）通路调节胆囊癌细胞（GBC-SD）活力和迁移。 方法 过表达MUC16后,通过Real-time PCR筛选相关基质金属蛋白酶（MMP）家族的蛋白质。其次,过表达MUC16、敲低MUC16和PI3K/Akt通路抑制剂BKM120处理后,通过免疫印迹法检测PI3K/Akt通路和MMP-9的蛋白水平。最后,过表达MUC16或敲低MUC16,通过细胞计数试剂盒8（CCK-8）和刮伤实验检测GBC-SD的活力和迁移情况。 结果 过表达MUC16后,MMP-9 mRNA的相对表达量显著升高（P<0.05）。过表达MUC16后, MMP-9、p-Akt、PI3K的蛋白水平明显升高（P<0.05）,但是PI3K抑制剂BKM120可以避免这现象。而敲低MUC16后,发现MMP-9、p-Akt、PI3K的蛋白水平明显降低（P<0.05）。过表达MUC16后,GBC-SD的细胞活力和迁移能力明显增高（P<0.05）,而敲低了MUC16后,GBC-SD的细胞活力和迁移能力明显降低（P<0.05）。另外,敲低MMP-9后,GBC-SD的细胞活力和迁移能力也明显降低（P<0.05）。但是,在过表达MUC16的同时敲低MMP-9,发现GBC-SD的细胞活力和迁移能力与对照组相比差异无显著性（P>0.05）。 结论 MUC16激活PI3K/Akt通路促进MMP-9的蛋白表达,进而提升胆囊癌细胞GBC-SD的细胞活力和迁移能力。     

丙泊酚对人胶质瘤U251细胞株增殖、凋亡、侵袭和转移能力的调节作用

目的　探究丙泊酚对人胶质瘤U251细胞增殖、凋亡、侵袭和转移能力的作用和机制。 方法 将细胞随机分为U251组、Propofol（1 mM）组、Propofol（2 mM）组和Propofol（5 mM）组。除U251组外,其余组用相应浓度的丙泊酚处理,CCK8检测细胞增殖,流式检测细胞凋亡,Transwell检测细胞侵袭能力,划痕实验检测细胞迁移能力,Western blot检测Ki67、Caspase-3、血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor, VEGF）、磷脂酰肌醇-3-羟激酶（Phosphoinositide 3-kinase, PI3K）、Akt、p-PI3K和p-Akt的表达。 结果 与U251组比较,Propofol （1, 2, 5 mM）组细胞增殖速度明显降低,细胞凋亡率显著升高;同时,Propofol （1, 2, 5 mM） 组侵袭细胞数与U251组比较明显减少,Propofol（2, 5 mM） 组划痕闭合率明显低于U251组;此外,丙泊酚还能显著抑制细胞增殖和迁移相关蛋白Ki67和VEGF表达,诱导细胞凋亡相关蛋白Caspase-3表达;丙泊酚能明显降低p-PI3K/PI3K和p-Akt/Akt的比值。 结论 丙泊酚能降低胶质瘤U251细胞的增殖、侵袭和转移能力,抑制U251细胞凋亡,作用机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路激活有关。     

杜仲绿原酸通过PI3K/AKT/Nrf-2通路增强视网膜母细胞瘤细胞系HXO-Rb44放射敏感性

目的　探究杜仲绿原酸（CGA）通过调控PI3K/AKT/Nrf-2通路,对视网膜母细胞瘤细胞系HXO-Rb44放射敏感性的增强作用。 方法　通过不同浓度的CGA处理HXO-Rb44细胞,检测IC10,作为后续实验中CGA浓度。将细胞分为Ctrl、Radio、CGA、Radio+CGA组,Radio组给予4 MV X射线照射24 h,CGA组使用CGA处理24 h,Radio+CGA组在CGA处理24 h后再给予4 MV X射线照射24 h,流式细胞术检测细胞周期与细胞凋亡,蛋白质印迹检测Ki67、依赖还原型辅酶I/II醌氧化还原酶I（NQO1）、活化型半胱天冬酶（cl-caspase-3）、硫氧还蛋白还原酶1（TrxR1）、活化磷脂酰肌醇3-激酶（p-PI3K）、蛋白激酶B（AKT）、p-AKT、核因子E2相关因子2（Nrf2）蛋白表达。进一步通过PI3K激活剂740Y-P处理细胞,检测细胞周期、凋亡、增殖和相关蛋白表达、PI3K/AKT/Nrf2通路蛋白表达。 结果　随着CGA浓度的增高,细胞的相对存活率降低,药物毒性呈浓度依赖性,IC10为81.59 μmol/L。与Ctrl组相比,Radio和CGA组G2/M期细胞比例显著升高,细胞凋亡比率显著升高（P<0.01）;与Radio组相比,Radio+CGA组G2/M期细胞比例和细胞凋亡比率进一步显著升高（P<0.01）。同时在蛋白水平上,与Ctrl组相比,Radio和CGA组Ki67、NQO1、TrxR1、p-PI3K、Nrf2蛋白表达及p-AKT/AKT比率显著降低（P<0.01）;放射和CGA联合作用进一步降低以上各指标（P<0.01）。此外,PI3K激活剂可逆转放射对细胞周期、增殖、凋亡以及PI3K/AKT/Nrf2通路的作用,CGA可恢复放射引起的上述各指标的变化（P<0.01）。 结论　CGA可增强HXO-Rb44细胞的放射敏感性,其作用机制与抑制PI3K/AKT/Nrf2通路相关。     

蝙蝠葛碱抑制人胰腺癌SW1900细胞系增殖及诱导其凋亡

目的 探讨蝙蝠葛碱对人胰腺癌SW1900细胞增殖与凋亡的影响及其机制。方法 用不同浓度蝙蝠葛碱处理细胞系SW1900,采用MTT法检测细胞增殖,采用流式细胞术Annexin V-FITC/PI双染法测定细胞凋亡率。Real-time PCR和免疫印迹法分析蝙蝠葛碱处理SW1900细胞中凋亡蛋白及磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）的表达水平。结果 MTT实验显示,蝙蝠葛碱呈剂量依赖性地抑制SW1900细胞活力,F=783.7,P<0.001。流式细胞术结果显示,经0、6、12 mg/L蝙蝠葛碱处理的各组细胞凋亡率分别为（4.34±1.30）%、（14.94±1.94）%和（22.68±3.61）%,3组间均值差异有统计学意义,F=58.52,P<0.001,蝙蝠葛碱呈剂量依赖性促进细胞凋亡。Real-time PCR实验结果显示,蝙蝠葛碱可剂量依赖性下调PI3K、Akt、Bcl-2的基因表达（PI3K mRNA,F=101,P=0.01;Akt mRNA,F=1666,P<0.01;Bcl-2 mRNA,F=753,P<0.001）。免疫印迹法结果显示,蝙蝠葛碱呈剂量依赖性地下调PI3K、Akt和Bcl-2的蛋白表达。结论 蝙蝠葛碱对人胰腺癌SW1900细胞具有抑制其增殖和诱导其凋亡等作用,可能通过PI3K/Akt通路下调Bcl-2的表达诱导SW1900细胞凋亡。     

miRNA-7通过EGFR/PI3K/Akt通路抑制鼻咽癌5-8F细胞增殖

 目的:探讨过表达微小RNA（microRNA-7,miRNA-7）对鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma,NPC）5-8F细胞增殖能力的抑制作用及其与表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）/磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K）/蛋白激酶B（protein kinase B,PKB,也称Akt）通路的关联情况。方法:利用脂质体试剂Lipofectamine 2000将miRNA-7模拟物转染入人鼻咽癌5-8F细胞中;采用real-time PCR法检测转染后各组细胞中miRNA-7的表达情况;CCK-8法检测细胞增殖能力变化;细胞平板克隆形成实验观察转染后细胞克隆能力变化情况;real-time PCR法检测EGFR/PI3K/Akt通路各mRNA表达水平的变化;Western blotting法检测EGFR/PI3K/AKT通路各蛋白表达水平的变化。结果:real-time PCR结果显示,转染miRNA-7模拟物组细胞中的miRNA-7表达水平显著高于无关序列组和空白对照组（P<0.01）;5-8F细胞转染miRNA-7模拟物后,细胞增殖和平板克隆能力均呈明显下降（P<0.01）;real-time PCR及Western blotting结果显示,转染组的5-8F细胞中EGFR/PI3K/Akt通路中各主要成员的mRNA及相应蛋白表达水平均有明显降低(P<0.01)。结论: 过表达miRNA-7可以显著降低鼻咽癌5-8F细胞中EGFR/PI3K/Akt通路各主要成员mRNA和蛋白的表达水平,进而显著抑制其增殖和平板克隆形成能力。     

低强度脉冲超声通过PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制骨肉瘤细胞的增殖

目的:阐述低强度脉冲超声（LIPUS）对骨肉瘤细胞增殖的调控作用和机制,探索低强度脉冲超声治疗骨肉瘤的潜在价值。方法:在时间梯度实验中,将MG-63细胞分为LIPUS组和Control组,对LIPUS组加载1、6、12、18和24 h的低强度脉冲超声,CCK-8检测各组细胞增殖活力,Western Blots检测24 h低强度脉冲超声对PI3K/AKT/mTOR信号通路的影响。在机制实验中,将MG-63细胞分为Control组、LY294002组、LIPUS组和LIPUS+740Y-P组,对各组施加对应的干预措施后使用CCK-8检测各组细胞增殖能力,Western Blots检测各组增殖相关蛋白PCNA和Cyclin D1的表达情况。所有数据重复3次后使用单因素方差分析统计。结果:加载低强度脉冲超声18和24 h后,LIPUS组的细胞增殖活力较对照组显著降低（P<0.010, P<0.001）,这些结果表明LIPUS可抑制MG-63细胞的增殖。LIPUS可抑制p-PI3K、p-AKT和p-mTOR的表达（P<0.001）,即抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路的激活,而不影响PI3K、AKT和mTOR的表达。使用LIPUS就如同使用PI3K的抑制剂（LY294002）一样,可以抑制MG-63细胞的增殖（P<0.001）,在使用PI3K的激动剂740Y-P后,可逆转LIPUS对MG-63细胞增殖的抑制（P<0.001）。这些结果表明LIPUS可以通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路的激活来抑制骨肉瘤细胞的增殖。结论:低强度脉冲超声通过PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制骨肉瘤细胞的增殖,它可能是单独或联合放化疗治疗骨肉瘤的有效方法之一。     

红景天苷对内皮祖细胞功能及其PI3K/Akt通路的影响

 目的：研究红景天苷对人内皮祖细胞（EPCs）功能及其对磷酸肌醇3羟基激酶（PI3K）/Akt通路的影响。方法：体外培养正常人外周血EPCs,观察红景天苷或PI3K抑制剂的干预对EPCs增殖、黏附、迁移及一氧化氮（NO）分泌量的影响。MTT法检测细胞增殖、Western blotting检测Akt蛋白表达。结果：与对照组比较, 红景天苷能促进EPCs的增殖、黏附及迁移功能（P<0.05）,促进EPCs分泌NO,增加细胞内磷酸化Akt蛋白的水平。但这些作用均被PI3K抑制剂LY294002抑制（P<0.05）。结论：红景天苷通过PI3K/Akt通路调节EPCs的功能。     

白藜芦醇联合间充质干细胞改善损伤内皮细胞的代谢记忆效应

背景：白藜芦醇联合间充质干细胞是否能够进一步改善高糖诱导内皮细胞产生的不良记忆目前鲜有报道。 目的：验证不同浓度的白藜芦醇联合间充质干细胞对高糖诱导人脐静脉内皮细胞损伤代谢记忆效应的保护作用。 方法：将人脐静脉内皮细胞分为10组：正常对照组、甘露醇对照组、高糖组、白藜芦醇低剂量组(0.1 μmol/L)、白藜芦醇中剂量组(1 μmol/L)、白藜芦醇高剂量组(10 μmol/L)、干细胞组、白藜芦醇低剂量+干细胞组、白藜芦醇中剂量+干细胞组及白藜芦醇高剂量+干细胞组。分别于5.5 mmol/L葡萄糖培养第1,4,6天收集细胞培养上清液、提取细胞核蛋白,应用ELISA法检测细胞培养上清中血管细胞黏附分子1、单核细胞趋化蛋白1、纤溶酶原激活剂抑制剂1的表达水平,以Western blot法检测细胞内核因子κB的蛋白水平。 结果与结论：与正常对照组相比,高糖可诱导内皮细胞核因子κB表达上调,同时血管细胞黏附分子1 、单核细胞趋化蛋白1和纤溶酶原激活剂抑制剂1水平升高,且在糖浓度恢复正常后仍持续上升。与高糖组相比,白藜芦醇及其联合干细胞干预后可以使内皮细胞核因子κB表达及血管细胞黏附分子1、单核细胞趋化蛋白1和纤溶酶原激活剂抑制剂1水平呈白藜芦醇剂量依赖性降低。干细胞组上述指标与高糖组比差异无显著性意义,甘露醇组与正常对照组相比差异无显著性意义。结果提示白藜芦醇可能通过核因子κB通路降低血管细胞黏附分子1、单核细胞趋化蛋白1和纤溶酶原激活剂抑制剂1水平,改善高糖代谢记忆效应介导的内皮细胞损伤。而间充质干细胞发挥内皮细胞保护作用可能不仅有赖于核因子κB通路。     

小剂量超短波对脊髓损伤功能恢复及对血清iNOS、TNF-α、VEGF、BDNF表达的影响

目的　探讨小剂量超短波对脊髓损伤患者功能恢复效果及对血清诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、血管内皮生长因子（VEGF）、脑源性神经营养因子（BDNF）表达的影响。 方法　收集60例脊髓损伤患者，随机分为治疗组与对照组，每组30例。对照组给予基础康复治疗，治疗组加用小剂量超短波治疗，共治疗3个疗程。评估疗效并分析影响脊髓功能恢复的因素。 结果　治疗组总有效率高于对照组（P<0.05）；康复治疗后，治疗组ASIA量表运动功能、感觉功能评分高于对照组（P<0.05）；血清VEGF、BDNF表达含量高于对照组（P<0.05），iNOS、TNF-α表达含量低于对照组（P<0.05）；小剂量超短波治疗是脊髓损伤患者预后的保护因素（P<0.05）。 结论　小剂量超短波辅助治疗可明显促进患者脊髓功能恢复，其机制可能与下调血清iNOS、TNF-α表达，上调VEGF、BDNF表达有关。     

奥沙利铂调控PI3K/Akt信号通路抑制脑胶质瘤细胞株U87生长的作用研究

目的：研究奥沙利铂（Oxaliplatin,Ox）调控PI3K/Akt信号通路抑制脑胶质瘤细胞株U87生长的作用。方法：培养U87脑胶质瘤细胞,分别利用0、20、40、80 μg/ml的奥沙利铂处理U87细胞24、36、48、72 h,利用MTT检测各处理组细胞增殖情况;利用流式细胞仪检测40 μg/ml的奥沙利铂处理48 h对U87细胞周期及细胞凋亡的影响;Western blot检测40 μg/ml 的奥沙利铂处理48 h对U87细胞凋亡相关蛋白及PI3K/Akt信号通路蛋白表达的影响。结果：奥沙利铂处理抑制U87细胞增殖,与0 μmol/L处理相比,差异显著（P<0.01）,40 μg/ml的奥沙利铂处理48 h差异最显著。40 μg/ml的奥沙利铂处理48 h后,U87细胞周期被阻滞在S期,U87细胞凋亡显著增加（P<0.01）,抑凋亡因子Bcl-2蛋白表达明显下降,促凋亡因子Bax、Cleaved-caspase3蛋白表达明显升高（P<0.01）,PI3K及p-Akt的表达量明显降低（P<0.01）,Akt表达量无明显差异（P>0.05）。结论：奥沙利铂可能通过抑制PI3K/Akt信号通路抑制U87细胞增殖,阻滞细胞周期,促进细胞凋亡。     

小剂量超短波对脊髓损伤功能恢复及对血清iNOS、TNF-α、VEGF、BDNF表达的影响

目的　探讨小剂量超短波对脊髓损伤患者功能恢复效果及对血清诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、血管内皮生长因子（VEGF）、脑源性神经营养因子（BDNF）表达的影响。 方法　收集60例脊髓损伤患者,随机分为治疗组与对照组,每组30例。对照组给予基础康复治疗,治疗组加用小剂量超短波治疗,共治疗3个疗程。评估疗效并分析影响脊髓功能恢复的因素。 结果　治疗组总有效率高于对照组（P<0.05）;康复治疗后,治疗组ASIA量表运动功能、感觉功能评分高于对照组（P<0.05）;血清VEGF、BDNF表达含量高于对照组（P<0.05）,iNOS、TNF-α表达含量低于对照组（P<0.05）;小剂量超短波治疗是脊髓损伤患者预后的保护因素（P<0.05）。 结论　小剂量超短波辅助治疗可明显促进患者脊髓功能恢复,其机制可能与下调血清iNOS、TNF-α表达,上调VEGF、BDNF表达有关。     

丹参酮IIA对CCl4诱导小鼠急性肝损伤的保护作用

目的 研究丹参酮IIA(tanshinone ⅡA, Tan ⅡA)对CCl4诱导小鼠急性肝损伤的抗氧化、保护作用及其可能的作用机制。 方法 将C57BL/6J小鼠随机分成正常组、CCl4组以及Tan ⅡA保护组(Tan ⅡA 20 mg/kg+CCl4),每组10只。腹腔注射CCl4构建小鼠急性肝损伤模型。计算各组小鼠的肝脏指数,检测血清AST和ALT活性,测定肝组织SOD活性及GSH、MDA含量,HE染色观察肝组织病理变化,免疫组织化学法和Western blot检测肝组织PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、Nrf2和HO-1蛋白表达水平。 结果 与CCl4组相比,Tan ⅡA保护组肝脏指数显著下降(P<0.01),血清AST(P<0.01)和ALT活性降低(P<0.05),肝组织SOD活性(P<0.01)及GSH含量升高(P<0.05),MDA含量降低(P<0.05),肝组织病理变化得到显著改善。同时,Tan ⅡA使肝组织p-PI3K和p-Akt表达水平明显升高(P<0.01),显著诱导Nrf2转位入核(P<0.01),促使其下游靶蛋白HO-1表达水平明显升高(P<0.01)。 结论 Tan ⅡA能够显著改善CCl4诱导的急性肝损伤,其机制可能与PI3K/Akt/Nrf2/HO-1信号通路有关。     

右美托咪定在大鼠脊髓缺血再灌注损伤中的 保护作用及机制研究

目的 探讨右美托咪定对大鼠脊髓缺血/再灌注损伤的保护作用及PI3K/Akt传导通路在其中的作用。方法 30只成年雄性大鼠随机分为假手术组、模型组和右美托咪定治疗组,每组10只。建立大鼠脊髓缺血/再灌注损伤模型,对再灌注损伤后6 h、12 h、24 h、48 h实验大鼠后肢运动功能进行评分,检测缺血脊髓前角组织中P-AKT的表达水平及神经元的凋亡指数。结果 右美托咪定可改善脊髓缺血/再灌注损伤后实验大鼠的后肢运动功能(P＜0.05);提高脊髓前角P-AKT的表达水平(P＜0.05),抑制缺血/再灌注损伤所致的脊髓神经元的凋亡(P＜0.05)。结论 右美托咪定对脊髓缺血/再灌注损伤有一定的保护作用,其机制可能与激活PI3K/Akt传导通路,从而抑制神经元的凋亡有关。     

沙眼衣原体pORF5 蛋白通过激活PI3K / Akt 信号通路抑制细胞凋亡

目的:探讨沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)pORF5 蛋白对细胞凋亡的影响,并进一步分析其分子机制,为阐明Ct 致病机制提供实验依据。方法:pGEX-6p/ pORF5 重组质粒转化XL1-blue 大肠杆菌,IPTG 诱导表达GST-pORF5融合蛋白,融合蛋白经谷胱甘肽琼脂糖凝胶4B 纯化及蛋白酶切除GST 标签后得到pORF5 蛋白。用不同浓度的pORF5 蛋白刺激HeLa 细胞,Western blot 检测不同时间Bax 和Bcl-2 的表达水平以及PI3K/ Akt 磷酸化水平,Hoechst 33342 及流式细胞技术分析细胞凋亡情况;HeLa 细胞经PI3K/ Akt 特异性抑制剂LY294002 预处理1 h 后,再用pORF5 蛋白刺激24 h,测定细胞凋亡率,并进一步分析凋亡相关蛋白Bax 和Bcl-2 的表达水平及PI3K/ Akt 磷酸化水平。结果:凋亡相关蛋白Bax 和Bcl-2 的表达变化与pORF5 蛋白浓度呈现一定的浓度和时间依赖性,当pORF5 蛋白浓度达10 μg/ ml 时,Bax 表达下调,Bcl-2 的表达上调,当升高至15 μg/ ml 时,Bax 和Bcl-2 的表达量变化最明显;15 μg/ ml 的pORF5 蛋白刺激HeLa 细胞24 h,Bax 和Bcl-2 表达变化最明显;流式细胞检测结果显示:pORF5 蛋白刺激组较TNF鄄琢处理组和未处理组细胞凋亡率分别降低了27.3% (P<0.01)和8.4% (P<0.05);Akt 在pORF5 蛋白刺激15 min 后发生磷酸化,30 min 后磷酸化水平达到峰值,用PI3K 抑制剂LY294002 预处理Hela 细胞后,发现Akt 的磷酸化显著减少,Bax 蛋白表达明显上调,Bcl-2 表达明显下调;LY294002 处理组细胞凋亡率相比于对照组增加了13.0% (P<0.01)。结论:pORF5 蛋白通过激活PI3K/ Akt 信号通路调节Bcl-2 和Bax 蛋白的表达抑制细胞凋亡。