RNA干扰TRAF4表达下调Notch1信号通路增强肺癌替莫唑胺化疗敏感性

目的探讨RNA干扰(RNAi)技术沉默肿瘤坏死因子受体相关因子(TRAF) 4表达对肺癌替莫唑胺化疗敏感性的影响。方法 RT-PCR检测SPC-A-1、A549、H322、H1299肺癌细胞相对于人胚肺成纤维细胞MRC5中TRAF4的表达量;TRAF4的siRNA转染和替莫唑胺处理A549细胞,细胞被分为空白对照组、阴性对照组、TRAF4-siRNA组、替莫唑胺组和TRAF4-siRNA+替莫唑胺组,细胞培养48 h,RT-PCR及Western印迹检测各组A549细胞TRAF4的表达; CCK8法及流式细胞术分别检测各组细胞活力(OD值)及凋亡率; Western印迹检测含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-3、Bcl-2相关X蛋白(Bax)及Notch神经同源蛋白(Notch) 1前体信号中Notch1和下游重要靶基因发状分裂相关增强子(Hes) 1的蛋白表达。结果 TRAF4在4个肺癌细胞中的表达水平均显著高于其在MRC5细胞中的表达(P<0. 05); TRAF4-siRNA转染A549细胞后,TRAF4的表达显著低于空白对照组(P<0. 05); TRAF4-siRNA组和替莫唑胺组细胞凋亡率及Caspase-3和Bax的表达均显著高于空白对照组,OD值及Notch1和Hes1表达显著低于空白对照组,TRAF4-siRNA+替莫唑胺组凋亡率及Caspase-3和Bax的表达显著高于TRAF4-siRNA组和替莫唑胺组,OD值及Notch1和Hes1表达显著低于TRAF4-siRNA组和替莫唑胺组(P<0. 05)。结论抑制肺癌细胞TRAF4表达可通过下调Notch1信号通路降低肺癌细胞活力及诱导细胞凋亡,并可增强替莫唑胺化疗敏感性。     

靶向抑制乳腺癌细胞GLS1基因表达对癌细胞凋亡的影响

目的探讨抑制乳腺癌细胞谷氨酰胺酶(GLS) 1基因表达对癌细胞凋亡的影响。方法参照Lipofectamine~(TM) 2000说明将合成的GLS1 siRNA及无干扰作用的siRNA转染MCF-7细胞,分别为GLS1-siRNA组和阴性对照组,并设置空白对照组,转染48 h后,Western印迹检测GLS1、凋亡相关蛋白survivin、p53及磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/丝氨酸苏氨酸激酶(AKT)信号通路PI3K和磷酸化(p-AKT)的蛋白表达; 3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测GLS1-siR-NA转染24、48和72 h的细胞活力;流式细胞仪检测GLS1-siRNA转染48 h的细胞凋亡率。结果转染GLS1-siRNA的MCF-7细胞GLS1蛋白表达显著低于空白对照组(P<0. 05);与空白对照组比较,GLS1-siRNA组细胞在转染24、48和72 h的细胞活力均显著降低,细胞凋亡率显著升高,survivin、PI3K和p-AKT蛋白表达均显著降低,p53蛋白表达显著升高(P<0. 05)。结论抑制GLS1基因在乳腺癌中的表达可降低细胞活力,促进细胞凋亡及下调PI3K/AKT信号通路,其中诱导细胞凋亡的方式是下调survivin表达和上调p53表达。     

PBX3基因调控p38MAPK信号对肝癌细胞生长及5-氟尿嘧啶化疗敏感性的影响

目的探讨前B细胞白血病同源盒基因(PBX)3基因对肝癌细胞活力、凋亡及5-氟尿嘧啶(5-FU)化疗敏感性的影响及机制。方法以人正常肝细胞HL-7702为对照细胞,Western印迹法检测肝癌Huh7、HepG2、MHCC97H和SMMC7721细胞中PBX3的蛋白表达。以LipofectamineTM2000为载体,参照其转染说明将设计合成的PBX3的特异性siRNA(si-PBX3组)及阴性对照siRNA(NC组)转染SMMC7721细胞,仅加入脂质体的为空白对照组,Western印迹检测转染后的细胞PBX3的蛋白表达。SMMC7721细胞分为NC组、si-PBX3组、5-FU组和si-PBX3+5-FU组,细胞处理48 h,噻唑蓝(MTT)及流式细胞术分别检测4组细胞活力和凋亡率。Western印迹检测细胞增殖核抗原(PCNA)、Bax、p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)和p-p38MAPK的蛋白表达。结果 PBX3在肝癌细胞中的蛋白表达均显著高于在HL-7702细胞(P0.05)。与空白对照组相比,si-PBX3组细胞中PBX3蛋白表达显著降低(P0.05)。与NC组相比,si-PBX3组和5-FU组细胞活力及p-p38MAPK、PCNA蛋白表达水平均显著降低,而细胞凋亡率和Bax蛋白表达水平均显著升高(P0.05);si-PBX3+5-FU组细胞活力及PCNA和p-p38MAPK蛋白表达均显著低于si-PBX3组和5-FU组,细胞凋亡率及Bax的蛋白表达均显著高于si-PBX3组和5-FU组(P0.05)。结论抑制PBX3基因表达可降低肝癌细胞活力,诱导细胞凋亡,增强肝癌5-FU化疗敏感性,机制可能与下调p38MAPK信号通路有关。     

BRMS1在肺癌中的表达及其对肺癌细胞侵袭转移的影响

目的探讨乳腺癌转移抑制因子1(BRMS1)在肺癌中的表达及对肺癌细胞侵袭转移能力的影响。方法 Western blot及RT-PCR法检测肺癌及癌旁组织中BRMS1的表达,并将真核表达质粒p CMV-mycBRMS1及空白质粒转染到肺癌细胞A549。Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力;Western blot检测核因子-κB(NF-κB)磷酸化水平及下游蛋白基质金属蛋白酶(MMP2),MMP9,骨桥蛋白(Osteopontin),E-钙粘蛋白(Ecadherin)的表达量。结果肺癌组织中BRMS1的蛋白及mRNA表达量都显著低于癌旁组织。与空白质粒组比较,真核表达质粒组中细胞迁移及侵袭能力降低,比值分别为[(0.98±0.10)及(0.17±0.03)],[(1.29±0.14)及(0.22±0.04)];NF-κB p65磷酸化水平降低,MMP2,MMP9,Osteopontin表达量下降,E-cadherin表达量上升(P0.01)。结论 BRMS1在肺癌组织中低表达,其过表达能显著抑制肺癌细胞A549侵袭转移,推测恢复肺癌组织BRMS1表达可能是转移性肺癌治疗方式之一。     

Cyclin D1反义寡核苷酸对胃癌细胞化疗敏感性的影响

目的 研究Cyclin D1反义寡核苷酸（ASODN）对胃癌细胞SGC-7901和HS-746T化疗敏感性的影响,并探讨其内在机制。方法 在给予Cyclin D1 ASODN和Cyclin D1反义寡核苷酸转染细胞24h后,分别给予梯度浓度的5-氟尿嘧啶（5-FU）、氨甲喋呤（MTX）、顺铂（CDDP）,观察各组的量效反应,计算IC50。Cyclin D1 ASODN转染细胞后24h、48h时应用RT—PCR分别检测各组细胞中胸苷酸合酶（TS）、胸腺嘧啶磷酸化酶（TP）、二氢叶酸还原酶（DHFR）的表达情况。结果 Cyclin D1 ASODN转染增加了两种胃癌细胞对5-FU、MTX、CDDP的敏感性,ASODN＋化疗组对各化疗药物的lc50与对照组相比均有显著下降。RT—PCR显示Cyclin D1 ASODN转染后24h时Cyclin D1、TS、DHFR mRNA表达较对照组下降,而TP mRNA表达较对照组升高,在48h时各种酶mRNA表达的改变更加明显。结论 Cyclin D1 ASODN能提高胃癌细胞对多种化疗药物的敏感性,可能是由于影响了化疗药物代谢相关酶表达的改变所致。     

腺病毒介导的CIAPIN1基因对肺癌细胞生长和细胞周期的影响

目的 以重组腺病毒载体介导细胞因子诱导的凋亡抑制分子1(cytokine induced apoptosis inhibitor 1,CIAPIN1)基因转染人肺腺癌细胞系A549,观察并鉴定该基因在腺癌细胞中的表达及其对细胞生长和细胞周期的影响.方法 构建腺病毒载体介导CIAPIN1基因(Ad-CIAPIN1),转染到低水平表达CIAPIN1的人肺腺癌细胞系A549,采用Western blot检测目的蛋白的表达;台盼蓝染色计数活细胞数,绘制细胞生长曲线;流式细胞术(FCM)分析细胞周期及细胞凋亡的变化.结果 外源性CIAPIN1基因在A549肺癌细胞获得高水平的表达;CIAPIN1能显著抑制A549的生长(P＜0.01);流式细胞仪检测显示肺癌细胞发生凋亡,并出现明显的G1/S期阻滞现象.结论 以腺病毒为载体介导CIAPIN1基因在A549细胞内表达,可发挥抑制细胞生长、诱发细胞凋亡及参与细胞周期调控的作用.提示Ad-CIAPIN1基因可能在人肺癌基因治疗中发挥重要作用.     

ATF5基因siRNA对肺癌细胞凋亡及化疗增敏的机制

目的探讨转录激活因子(ATF5)基因siRNA对肺癌细胞活力、凋亡及化疗敏感性的影响。方法将ATF5的特异性siRNA(ATF5-siRNA组)转染人肺癌A549细胞,同时转染阴性对照siRNA(阴性组),并设置空白组。采用Western印迹检测ATF5表达沉默效果。噻唑蓝(MTT)、流式细胞术、Western印迹分别检测沉默ATF5表达后的细胞活力、凋亡率、紫杉醇敏感性及相关蛋白表达。结果 ATF5-siRNA组ATF5表达显著低于空白组(P0.05)。ATF5-siRNA组A549细胞活力明显降低,细胞凋亡率明显升高,增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达明显降低,Bcl-2相关X蛋白(Bax)和活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(cleaved caspase)3蛋白表达显著升高,细胞对紫杉醇敏感性显著升高,多药耐受相关蛋白基因(MRP)1蛋白表达明显降低,与空白组比较差异均具有统计学意义(P0.05)。结论利用siRNA沉默ATF5基因表达可抑制A549细胞活力,诱导细胞凋亡,增强紫杉醇敏感性,机制可能与下调PCNA和MRP1表达,上调Bax和cleaved caspase3表达有关。     

Six1基因在肺癌组织表达水平及RNA干扰抑制其表达后对肺癌细胞生物学特性的影响

目的探讨Six1基因在肺癌组织表达及抑制其表达后对肺癌细胞增殖凋亡的影响。方法提取肺癌及癌旁组织蛋白,Western印迹检测Six1的表达; Six1-siRNA转染人肺癌A549细胞,分为空白组和阴性对照组(NC组)、Six1-siRNA组,转染48 h后通过Western印迹检测各组细胞Six1的表达; CCK8检测Six1-siRNA转染A549细胞24～72 h的细胞增殖;流式细胞术检测转染48 h的细胞凋亡率; Western印迹检测增殖相关蛋白细胞增殖核抗原(PCNA)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)家族Bcl-2相关X蛋白(Bax)及Notch1信号通路Notch1和Hes1的蛋白表达。结果 Six1在肺癌组织中的表达显著高于癌旁组织(P<0. 05); Six1-siRNA转染能明显降低A549细胞Six1的表达;与空白组比较,Six1-siRNA组细胞24～72 h的细胞增殖均显著降低,在48 h的细胞凋亡率显著升高,PCNA、Notch1和Hes1蛋白表达均显著降低,Bax蛋白表达显著升高(P<0. 05)。结论 Six1在肺癌组织中高表达,通过RNA干扰抑制其表达可通过下调Notch1信号通路降低肺癌细胞增殖及诱导细胞凋亡,对细胞增殖凋亡的影响方式是下调PCNA和上调Bax蛋白表达。     

蛋白激酶B、Caspase-9通路活化对胃癌细胞生长及化疗敏感性的影响

目的 探讨蛋白激酶B（PKB）、Caspase-9信号通路活化对胃癌细胞生长的影响及其与胃癌细胞对足叶乙甙化疗敏感性的关系.方法 分别用足叶乙甙、足叶乙甙和PKB通路特异性抑制剂Wortmannin在不同时间段处理胃癌肿瘤细胞SGC7901后,采用四甲基偶氮唑蓝法检测细胞对药物的敏感性,流式细胞仪检测肿瘤细胞的凋亡情况,非放射性免疫沉淀法检测PKB活性,Western-blot法检测Caspase-9磷酸化程度和Caspase-3蛋白的表达.结果 足叶乙甙对SGC7901有明显的增殖抑制作用,能明显诱导肿瘤细胞凋亡,但在12 h时,其增殖抑制作用和凋亡诱导作用较6 h时均明显降低,细胞对足叶乙甙敏感性降低,24 h时有所上升.足叶乙甙作用SGC7901后PKB活性逐渐增强,Caspase-9活性和Caspase-3表达12 h时明显降低.加用Wortmannin预处理后,PKB活性明显降低,Caspase-9活性和Caspase3表达呈上升趋势,12 h时上升最明显;足叶乙甙对SGC7901的增殖抑制作用和凋亡诱导作用持续增强,肿瘤细胞对足叶乙甙持续较高敏感性.结论 蛋白激酶B、Caspase-9信号通路活化可促进胃癌细胞生存,降低其化疗敏感性,特异性的PKB通路抑制剂可增强胃癌细胞的化疗效果.     

RNAi沉默STAT3基因表达对Lewis肺癌细胞生长影响的实验研究

目的 探讨RNA干扰技术沉默转录信号传导子与激活子家簇3（STAT3）对Lewis肺癌细胞凋亡、细胞生长抑制的影响。方法 应用真核细胞转染技术将Psilencer2.1-U6一siRNA—STAT3重组质粒转入小鼠Lewis肺癌细胞，同时分别设立转染空质粒阴性对照组和转染试剂阴性对照。于72h后收集细胞，分别提取细胞总蛋白及总RNA，分别用Western blot和RT—PCR测定STAT3基因在蛋白水平及mRNA水平的表达，用MMT法测定细胞的生长抑制状态，通过流式细胞仪检测Lewis肺癌细胞凋亡情况。结果 重组质粒明显抑制STAT3蛋白的表达、降低STAT3 mRNA水平并诱导Lewis肺癌细胞凋亡、使肿瘤细胞生长明显受抑。结论 Psilencer2.1-U6-siRNA—star3 Lewis转染肺癌细胞后，可有效抑制STAT3蛋白表达和STAT3 mRNA的表达，诱导Lewis肺癌细胞凋亡和肿瘤细胞生长抑制。     

Livin基因沉默对大肠癌细胞凋亡和化疗敏感性的影响

目的 观察沉默Livin基因对大肠癌HT-29细胞凋亡和化疗敏感性的影响.方法 采用脂质体转染技术将化学合成的Livin siRNA转入HT-29细胞,RT-PCR和Western印迹法检测转染效果.选用5-氟尿嘧啶(5-FU)作用于转染和未转染的细胞,MTT检测各组细胞的增殖、流式细胞仪检测细胞的凋亡.结果 si-Livin1转染组Livinα mRNA、Livinβ mRNA和Livin蛋白表达水平较其余干扰组和对照组显著降低(P<0.01).5-FU对HT-29细胞的生长抑制作用强于si-Livin1转染组(P<0.01),而si-Livin1+5-FU组对细胞的生长抑制率显著高于单独si-Livin1转染组和单独5-FU作用组(P<0.01).与空白对照组比较,si-Livin1转染可使细胞出现明显凋亡现象(P<0.01),5-FU对细胞的促凋亡作用强于si-Livin1转染组(P<0.01),si-Livin1+5-FU组的凋亡率显著高于单独si-Livin1转染组和单独5-FU作用组(P<0.01).结论 siRNA沉默Livin基因能够抑制HT-29细胞的生长,促其凋亡,提高5-FU的化疗敏感性.Livin基因有望成为大肠癌治疗的新靶点.     

慢病毒介导的SUMO1P3基因表达对胃癌细胞侵袭、迁移、黏附能力及EMT的影响

目的探讨小泛素样修饰物基因(SUMO)1P3基因siRNA慢病毒对胃癌细胞侵袭、迁移、黏附能力及上皮细胞间质转化(EMT)的影响。方法将人胃癌BGC-823细胞分为空白组、NC组(转染阴性对照慢病毒载体)和si-SUMO1P3组(转染SUMO1P3基因的siRNA慢病毒载体)。Western印迹检测SUMO1P3下调效果及EMT相关E-钙黏蛋白(cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和α-SMA蛋白表达。噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力及黏附能力;Transwell小室检测细胞侵袭和迁移能力。结果 si-SUMO1P3的组SUMO1P3蛋白表达明显低于空白组(P<0.05)。si-SUMO1P3组BGC-823细胞24～72 h细胞活力均明显低于空白组(P<0.05);si-SUMO1P3组在接种的30 min和60 min细胞黏附能力均明显低于空白组(P<0.05);si-SUMO1P3组细胞侵袭能力、迁移能力均显著低于空白组,E-cadherin蛋白表达显著高于空白组,Vimentin和α-SMA蛋白显著表达低于空白组(P<0.05)。结论抑制SUMO1P3基因表达可能通过阻碍EMT降低胃癌细胞侵袭、迁移和黏附能力。     

Chk1基因沉默对人卵巢癌细胞 A2780放疗敏感性的影响

目的：探讨Chk1基因沉默对人卵巢癌细胞A2780放疗敏感性的影响。方法构建Chk1基因的短发夹RNA（shRNA）质粒转染人卵巢癌细胞A2780,同时以转染空载体和未转染组作为对照组,运用RT-PCR、蛋白免疫印迹方法观察转染前后Chk1基因表达的差异;四甲基偶氮唑蓝试验绘制细胞生长曲线;克隆形成试验观察细胞的放射敏感性变化。结果与对照组相比,构建shRNA表达载体可抑制人卵巢癌细胞A2780中Chk1 mRNA转录和蛋白的表达;Chk1基因沉默后细胞生长明显慢于对照组;并通过解除G2/M期阻滞,显著提高肿瘤细胞对放射线的敏感性。结论靶向Chk1的shRNA能有效抑制人卵巢癌细胞A2780的Chk1基因表达,促进细胞凋亡,增强肿瘤对放疗的敏感性。     

高表达的Wnt分泌蛋白1促进肺癌化疗耐受

目的探讨Wnt分泌蛋白(WISP)1在肺癌中的表达量及作用。方法生物信息学分析WISP1在肺癌及癌旁组织中的表达量,qRTPCR检测肺癌组织及癌旁组织中WISP1 mRNA的表达。在肺癌细胞中干预WISP1的表达,检测处理后细胞化疗敏感性的变化。结果生物信息学分析免疫组化数据库联合qRT-PCR结果发现,WISP1 mRNA在肺癌中的表达量显著高于癌旁组织,且WISP1在肺癌化疗耐受组的表达量显著高于化疗敏感组。在肺癌细胞中敲低WISP1对化疗药物奥沙利铂的敏感性增加,反之亦然。结论 WISP1在肺癌中高表达且促进肺癌化疗耐受。     

肺癌铂类药物化疗敏感性与基因多态性的研究进展

铂类药物是非小细胞肺癌最常用的化疗药物。研究表明不同个体间对铂类药物化疗敏感性有显著性差异,这可能与个体遗传基因的多态性有关。因此,探讨非小细胞肺癌患者铂类药物化疗敏感性与基因多态性关系的研究对于临床个体化疗方案的制定具有重要的意义。     

膀胱癌组织中PAK2表达及对癌细胞活性的影响

目的探讨p21激活激酶(PAK)2在膀胱癌组织中的表达及对癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法行手术治疗的膀胱癌患者108例,收集膀胱癌组织标本108份,癌旁正常膀胱上皮组织标本24份;免疫组化检测标本组织中PAK2表达情况,并分析其与临床病理指标的关系;RT-PCR和Western印迹检测人膀胱癌细胞系BIU-87、人正常膀胱上皮细胞系SV-HUC-1中PAK2 mRNA和蛋白表达情况;通过慢病毒载体转染技术在体外构建PAK2基因沉默的膀胱癌细胞株(PAK2基因沉默组)和含无义序列的慢病毒载体(对照组),检测两组细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结果膀胱癌组织中PAK2阳性表达率(51.85%)明显高于癌旁正常膀胱上皮组织(8.33%,P<0.05,P<0.01,P<0.001);不同肿瘤直径、病理分级、病理分期、淋巴结转移情况的膀胱癌患者中PAK2阳性率差异有统计学意义(P<0.05)。BIU-87细胞中PAK2 mRNA和蛋白相对表达量明显高于SV-HUC-1细胞(P<0.05)。随着转染时间的延长,对照组和PAK2基因沉默组细胞增殖水平均逐渐增加,转染48 h、72 h后PAK2基因沉默组细胞增殖情况明显低于对照组(P<0.01)。Transwell细胞迁移和侵袭实验显示,PAK2基因沉默组迁移和侵袭细胞数明显低于对照组(P<0.01)。结论膀胱癌组织中存在PAK2高表达,且与病理指标明显相关;沉默PAK2基因可有效降低膀胱癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。     

microRNA-99b过表达对宫颈癌细胞增殖、侵袭及化疗敏感性的影响

目的：探讨上调microRNA-99b（miR-99b）表达对宫颈癌细胞增殖、侵袭及化疗敏感性的影响。方法选取24例宫颈癌患者,采用qRT-PCR法分别检测宫颈癌组织、癌旁组织、正常宫颈上皮组织及宫颈癌细胞（ HeLa细胞系、C4-1细胞系、CaSki细胞系、SiHa细胞系）中miR-99b的表达;将miR-99b转染至宫颈癌细胞株,采用CCK-8法、Transwell法分别检测转染后宫颈癌细胞的增殖、侵袭能力,CCK-8法检测转染后宫颈癌细胞对顺铂、卡铂的半数有效抑制浓度（IC50）。结果宫颈癌HeLa细胞系、C4-1细胞系、CaSki细胞系、SiHa细胞系中miR-99b的表达水平分别为0．64±0．08、0．31±0．06、0．45±0．07、0．23±0．04,均低于正常宫颈上皮组织（1．00±0．00）（P均＜0．05）,C4-1细胞系和SiHa细胞系中miR-99b的表达水平较HeLa细胞系和CaSki细胞系更低。转染miR-99b后宫颈癌HeLa细胞系、C4-1细胞系、CaSki细胞系、SiHa细胞系增殖能力降低、侵袭能力被明显抑制,细胞对顺铂、卡铂的敏感性明显增强。结论上调miR-99b表达能够抑制宫颈癌细胞的增殖和侵袭能力,增强肿瘤细胞的化疗敏感性。     

AEG-1-shRNA阻断AEG-1对肝癌细胞BEL-7402侵袭性的影响

目的 探索星形细胞上调基因(AEG)-1-shRNA阻断AEG-1对肝癌细胞BEL-7402侵袭性的影响.方法 应用pU6mRFP AEG-l-shRNA阻断肝癌细胞BEl-7402的AEG-1表达,设立阴性质粒对照组和空白对照组.半定量RT-PCR法比较侵袭相关基因金属基质蛋白酶(MMP)2、MMP9、血管内皮生长因子(VEGF) mRNA的表达;Millicell检测细胞侵袭能力.结果 pU6mRFP AEG-1-shRNA组与对照组相比AEG-1的表达显著降低(P＜0.05);细胞侵袭能力下降,侵袭相关基因MMP2、MMP9、VEGF表达减少(P＜0.05).结论 shRNA沉默AEG-1明显抑制了人肝癌细胞BEL-7402的侵袭性及其相关基因的表达,AEG-1是有效治疗肝细胞癌的靶点.     

解毒通利方对肺癌荷瘤小鼠肿瘤的抑制作用及ASK1/JNK通路的调节作用

目的 研究解毒通利方对肺癌荷瘤小鼠肿瘤的抑制作用及对凋亡信号调节激酶(ASK)1/c-Jun氨基末端激酶(JNK)通路的调节作用。方法 采用接种NCI-H358细胞法建立肺癌荷瘤小鼠模型,小鼠随机分为生理盐水组、解毒通利方低、中、高剂量组及顺铂组各6只,解毒通利方低、中、高剂量组分别按照10、20、40 g/kg(以生药含量计)灌胃给予小鼠解毒通利方,顺铂组按照5 mg/kg腹腔注射给予顺铂,生理盐水组灌胃给予生理盐水,1次/d,连续30 d,末次给药24 h后,分离肿瘤组织,测定肿瘤体积及重量,苏木素-伊红(HE)染色法检查肿瘤组织病理学,原位末端转移酶标记技术(TUNEL)染色测定肿瘤组织细胞凋亡率,实时定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)及Western印迹测定肿瘤组织ASK1、JNK mRNA及蛋白水平,免疫组化法测定肿瘤组织ASK1及JNK的平均积分光密度(IOD)值。结果 与生理盐水组比较,解毒通利方低、中、高剂量组及顺铂组肿瘤体积及重量显著降低,而肿瘤组织细胞凋亡率、肿瘤组织ASK1及JNK mRNA及蛋白水平、肿瘤组织ASK1及JNK免疫组化水平均显著升高(均P<...     

过表达HSF1及ASK1基因对H2O2刺激后心肌细胞内ROS水平的影响

目的研究热休克因子1(HSF1)及凋亡信号调节激酶1(ASK1)对过氧化氢(H_2O_2)刺激后心肌细胞内活性氧簇水平(ROS)变化的影响。方法对不同组培养心肌细胞分别单独转染质粒HSF1,ASK1,及共转染HSF1 ASK1,48h待其充分表达后用1 mmol/LH_2O_2刺激心肌细胞30min,检测细胞内ROS水平,并与相应转染后未刺激组及未转染的对照组比较,观察ROS水平的变化。结果(1)所有H_2O_2刺激组心肌细胞内ROS水平均高于相同转染条件下的非刺激组(P<0.05);(2)相同H_2O_2刺激条件下,各组ROS水平:HSF1组低于对照组(P<0.05),ASK1组与对照组无显著差异,HSF1 ASK1组与单转HSF1组相比有升高的趋势;(3)相同H_2O_2刺激条件下,各组刺激后比刺激前ROS水平增高的幅度:HSF1组低于对照组(P<0.05),ASK1组与对照组无显著差别,HSF1 ASK1组与单转HSF1组相比有升高的趋势。结论在H_2O_2刺激条件下,HSF1可通过降低心肌细胞内的ROS水平来发挥细胞保护作用,而ASK1对细胞内ROS水平无影响,但其可干扰HSF1对ROS的抑制作用。