siRNA靶向沉默YAP1对卵巢癌细胞skov3增殖凋亡的影响

目的探讨小干扰RNA(si RNA)靶向沉默Yes相关蛋白(YAP)1基因表达对人卵巢癌细胞skov3增殖凋亡的影响。方法采用脂质体Lipofectamine~(TM)2000将靶向干扰YAP1的siRNA转染至对数生长期skov3细胞(siYAP1组),同时设不行转染处理的对照组和转染随机序列siRNA的转染对照组(si Control组),转染48 h后采用实时定量PCR(qPCR)检测各组的YAP1 mRNA水平;采用水溶性四氮唑(WST-1)法评价各组转染后的增殖情况,分别采用AnnexinⅤ-FITC/PI双染流式细胞术及qPCR检测转染后凋亡率及凋亡相关蛋白(抗凋亡蛋白Bcl-2、Mcl-1和促凋亡蛋白Bid、Bax)的mRNA水平,PI单染流式细胞术检测转染后的细胞周期分布情况。结果 qPCR法检测发现si YAP1组转染48 h后的YAP1 mRNA水平为(0.141±0.018),低于对照组和siControl组(均P<0.05),提示在skov3细胞中靶向沉默YAP1成功;skov3细胞经siRNA靶向沉默YAP1表达后的生长增殖受明显抑制、凋亡形态明显改变及发生G0/G1期细胞周期阻滞,与对照组和siControl组相比,siYAP1组的增殖抑制率、凋亡率、促凋亡蛋白水平及G0/G1期细胞比例均升高,而促凋亡蛋白水平及S期细胞比例均降低(P<0.05);对照组和siControl组增殖、凋亡及细胞周期相关指标的差异无统计学意义(P>0.05)。结论通过siRNA在基因水平上沉默YAP1表达可抑制skov3细胞的增殖并诱发凋亡和细胞周期阻滞,在卵巢癌的靶向治疗中可能有一定前景。     

长链非编码RNA CDRT8通过调控YAP1表达对食管癌TE-1增殖的影响

目的探讨长链非编码RNA CDRT8在食管癌组织中的表达及其对食管癌细胞增殖的影响。方法采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测13对食管癌组织和癌旁组织,比较CDRT8的表达水平。设计并合成针对CDRT8的特异性短发卡RNA(shRNA)模板,构建CDRT8-shRNA重组质粒,转染TE-1细胞,以转染阴性对照质粒为对照组。流式细胞术检测细胞周期,噻唑蓝(MTT)比色法和集落形成实验分别检测细胞活力和增殖能力。qPCR和Western blot检测细胞中Yes相关蛋白1(YAP1)、细胞周期蛋白E(Cyclin E)和细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)的表达水平。比较CDRT8-shRNZ组和对照组细胞周期进展情况、细胞活力、细胞增殖能力以及YAP1、Cyclin E和CDK2蛋白表达水平。结果食管癌组织中CDRT8表达水平显著高于癌旁组织(P0.01),CDRT8-shRNA组的CDRT8表达水平显著低于对照组(P0.05)。CDRT8-shRNA组细胞周期进展受到抑制(P0.05),细胞活力和增殖能力下降(P0.05),YAP1、Cyclin E和CDK2蛋白表达水平显著下调。结论 CDRT8在食管癌组织中呈高表达,干扰CDRT8表达可显著抑制TE-1细胞周期进展和细胞增殖,CDRT8可能通过YAP1基因参与调控食管癌的发生发展。     

三叶青黄酮通过调控miR-497表达对肺癌细胞增殖、凋亡的影响

目的 探讨三叶青黄酮(RTHF)对肺癌细胞增殖、凋亡的影响及其对miR-497的调控作用。方法 体外培养人肺癌细胞A549,加入不同剂量的RTHF处理细胞;miR-NC、miR-497 mimics转染至A549细胞,anti-miR-NC、anti-miR-497转染至A549细胞后加入RTHF处理细胞;采用噻唑蓝(MTT)实验与流式细胞术分别检测细胞增殖及细胞凋亡率;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测肺癌组织、癌旁组织及各组A549细胞中miR-497的表达量;Western印迹法检测B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达量。结果 RTHF可明显提高细胞增殖抑制率、凋亡率及p21、Bax蛋白水平明显降低细胞周期蛋(Cyclin)D1、Bcl-2蛋白水平(均P<0.05);与癌旁组织比较,肺癌组织中miR-497的表达水平明显降低(P<0.05);RTHF可明显提高A549细胞中miR-497的表达水平(P<0.05);转染miR-497 mimics可明显提高细胞增殖抑制率与凋亡率及p21、Bax蛋白水平,明显降低Cyc...     

miR-539通过靶向调控DCLK1抑制非小细胞肺癌的侵袭能力

目的 探讨非小细胞肺癌组织中miR-539的表达水平及其抑制肺癌细胞侵袭的作用机制.方法 通过基因表达数据库dbDEMC分析miR-539在非小细胞肺癌组织及正常肺组织中的表达量差异.根据235例miR-539高表达的非小细胞肺癌患者和102例miR-539低表达的非小细胞肺癌患者随访资料,分析miR-539与非小细胞...     

YAP1、miR-31与老年卵巢癌患者微血管密度的关系

目的研究Yes相关蛋白(YAP)1、miR-31与老年卵巢癌患者微血管密度的关系。方法选取老年卵巢癌患者105例作为卵巢癌组,选取行体检的63例作为卵巢良性病变组,采用荧光定量PCR检测YAP1、miR-31、微血管密度(MVD),采用酶联免疫吸附试验检测血管内皮生长因子(VEGF)水平;分析YAP1、miR-31与老年卵巢癌患者MVD的关系。结果与卵巢良性病变组相比,卵巢癌组YAP1、MVD、VEGF水平显著升高(P<0.05),miR-31表达量显著降低(P<0.05)。YAP1与miR-31呈负相关(r=-0.028,P=0.008),与MVD呈正相关(r=0.010,P=0.001);miR-31与MVD呈负相关(r=-0.017,P=0.003)。结论 YAP1在卵巢癌中异常高表达,miR-31异常低表达,且与MVD相关,可用于患者MVD改变的诊断。     

miR-637靶向调控FOXM1表达影响肺癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的 探讨肺癌细胞中miR-637对癌基因叉头框蛋白(FOX)M1的靶向调控作用及其对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,为肺癌的治疗提供新靶点.方法 qRT-PCR检测肺癌细胞A549、SPC-A1、NCl-H460和正常肺上皮细胞BEAS-2B中miR-637和FOXM1 mRNA表达,Western印迹检测FOXM1...     

LncRNA DANCR通过调控miR-758-3p对口腔鳞癌细胞增殖、侵袭能力的影响

目的 探讨长链非编码(Lnc)RNA分化拮抗非蛋白编码RNA(DANCR)通过调控miR-758-3p对口腔鳞癌(OSCC)细胞增殖、侵袭能力的影响。方法 以实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测体外培养的人口腔上皮细胞和人OSCC细胞CAL27、Tca8113、SCC9细胞中LncRNA DANCR与miR-758-3p表达。将体外培养的CAL27细胞给予LncRNA DANCR敲低质粒、miR-758-3p mimics、miR-758-3p inhibitor及相应的阴性对照转染后,检测LncRNA DANCR与miR-758-3p表达、细胞增殖活力、凋亡与侵袭能力及相关蛋白表达。于裸鼠背部右腋下皮下接种各组细胞构建OSCC移植瘤模型,饲养3 w后测量各组移植瘤裸鼠肿瘤体积与重量。以双荧光素酶报告基因实验检测CAL27细胞LncRNA DANCR对miR-758-3p的靶向调控。结果 相比人口腔上皮细胞,CAL27、Tca8113、SCC9中LncRNA DANCR表达显著升高,miR-758-3p表达显著降低(P<0.05)。敲低LncRNA DANCR或过表达m...     

circPDSS1通过靶向miR-1298调控肝癌细胞侵袭、迁移和凋亡的分子机制

目的 探讨环状RNA PDSS1(circPDSS1)对肝癌细胞凋亡、迁移和侵袭的影响及其机制.方法 实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测肝癌组织、癌旁组织中circPDSS1和miR-1298的表达.双荧光素酶报告基因实验、RT-qPCR确定circPDSS1对miR-1298的靶向调控作用.将circPDSS1...     

miR-34a靶向CD44对肺癌细胞干细胞表型的影响

目的探讨肺癌干细胞中miR-34a靶向CD44对干细胞表型的影响。方法利用免疫磁珠法分选CD44~+的肺癌干细胞;TargetScan预测靶向CD44的潜在miRNAs;双荧光素酶报告基因实验验证miR-34a对CD44靶向调控作用;qPCR检测miR-34a表达;Western印迹检测细胞CD44蛋白表达;干细胞成球实验检测干细胞成球能力;Transwell细胞侵袭实验检测细胞侵袭能力。结果与NC组比较,miR-34a组CD44-WT、CD44-Mut活性均显著降低(均P0.05);miR-34a组CD44 mRNA和蛋白表达及干细胞成球数、侵袭细胞数均显著低于NC组(均P0.05);与对照组比较,siRNA组干细胞成球数、侵袭细胞数均显著降低(均P0.05)。结论 miR-34a靶向调节CD44抑制肺癌干细胞成球和侵袭能力,miR-34a可能是治疗肺癌的潜在靶标。     

微小RNA-424-5P靶向调控HMGA1基因对胃癌细胞生长、侵袭的影响

目的 研究微小RNA(miR)-424-5P对高迁移率族蛋白(HMG)A1的靶向调控及对胃癌细胞增殖、迁移的作用。方法 将人胃癌BGC-823细胞复苏后,应用10%胎牛血清,在5%二氧化碳和37℃培养箱中进行培养,应用miR-424-5P抑制物(inhibitor)转染的BGC-823细胞列为anti-miR-424-5P组。应用阴性对照进行转染的BGC-823细胞列为anti-NC组,不进行转染的BGC-823细胞列为对照组,细胞转染后各组继续在培养箱中培养。应用qRT-聚合酶链反应(PCR)检测各组miR-424-5P的相对表达水平;应用四甲基噻唑蓝(MTT)研究miR-424-5P对细胞增殖的影响;应用划痕实验检测miR-424-5P对细胞迁移的影响;应用transwell实验研究miR-424-5P对细胞侵袭的影响。应用免疫印迹实验对各组HMGA1蛋白相对表达水平进行检测。结果 转染48 h后qRT-PCR结果表明,anti-miR-424-5P组miR-424-5P相对表达量明显低于对照组和anti-NC组(P<0.05)。对BGC-823细胞进行转染48 h后,miR...     

miR-577通过介导Notch信号通路抑制肺癌细胞的增殖、侵袭和耐药性

目的研究miR-577通过介导Notch信号通路抑制肺癌细胞的增殖、侵袭和耐药性。方法RT-PCR检测肺癌组织和细胞以及配对的正常组织和细胞中miR-577的表达量;CCK-8测定miR-577对肺癌细胞A549增殖的影响;荧光素酶报告实验验证miR-577和Notch是否结合;Western blot检测A549细胞中Notch、DSL以及耐药蛋白P-gp和MRP1的蛋白表达水平。结果RT-PCR结果显示,miR-577在肺癌组织和细胞中的表达量显著低于正常组织和细胞中的表达量;过表达miR-577能够显著抑制肺癌细胞A549的增殖和侵袭,并降低细胞的耐药性;荧光素酶报告实验结果表明miR-577能够靶向结合Notch的启动子序列;Western blot结果显示miR-577能够抑制Notch和DSL的蛋白表达水平;进一步的机制探究结果表明miR-577可通过下调Notch和DSL的蛋白表达抑制A549细胞增殖、侵袭以及耐药性。结论miR-577能够抑制肺癌细胞A549增殖、侵袭以及耐药性的产生,其作用机制是通过介导Notch信号通路来实现的。     

UCA1-miR-582-EZH2轴对肺癌细胞A549生物学功能的影响机制

目的 探究尿路上皮癌相关1基因(UCA1)调控miR-582-5p-Zeste增强子同源物(EZH)2信号轴在非小细胞肺癌(NSCLC)中的调控机制。方法 逆转录-聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测UCA1、miR-582-5p和EZH2在NSCLC组织及细胞系(NCI-H460、A549和NCI-H1299)中的表达;Western印迹检测EZH2在NSCLC组织中的蛋白表达;原位杂交(FISH)检测UCA1和miR-582-5p的信号强度;双荧光素酶报告基因检验miR-582-5p抑制剂靶向UCA1和EZH2的调控机制;qRT-PCR检测下调UCA1/miR-582-5p对EZH2 mRNA的调控关系;Transwell、TUNEL细胞凋亡和CCK8分别检测下调UCA1-miR-582-5p-EZH2轴对侵袭、凋亡和增殖的调控能力。结果 UCA1和EZH2在NSCLC组织和细胞系中高表达,miR-582-5p则相反为低表达。UCA1竞争性结合miR-582-5p,且miR-582-5p抑制剂可以回补siUCA1负调控EZH2。siUCA1-In-miR-582-5p-siEZH2...     

lncRNA DGCR5通过靶向调控miR-21抑制鼻咽癌细胞的增殖、侵袭和迁移

目的 探讨lncRNA DGCR5对鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法 将pcDNA-NC、pcDNA-DGCR5、anti-miR-NC、anti-miR-21质粒分别转染至CNE-1、HNE-1细胞中,记为pcDNA-NC组、pcDNA-DGCR5组、anti-miR-NC组、anti-miR-21组;将pcDNA-DGCR5分别与mimic-NC、mimic-miR-21共转染至CNE-1、HNE-1细胞中,记为pcDNA-DGCR5+mimic-NC组、pcDNA-DGCR5+mimic-miR-21组;采用qRT-PCR检测miR-21和DGCR5的表达水平;四甲基偶氮唑蓝(MTT)、Transwell、流式细胞术检测CNE-1、HNE-1细胞增殖活性、迁移、侵袭和凋亡;双荧光素酶报告实验检测DGCR5和miR-21靶向调控。结果 与癌旁组织和人永生化鼻咽上皮细胞NP69相比,鼻咽癌组织和鼻咽癌细胞SUNE-1、CNE-2、CNE-1、HNE-1、HONE-1中DGCR5表达水平显著降低(P<0.05),miR-21表达水平显著增加(P<0.05)...     

miR-200通过靶向PD-L1抑制非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的研究

目的 探讨miR-200对非小细胞肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭的影响及其与程序性死亡受体配体-1(Programmed death-ligand 1,PD-L1)的靶向关系.方法 选取非小细胞肺癌细胞株A549,正常肺成纤维细胞HLF-1为研究对象,根据A549细胞转染物质的不同,分为NC组(未进行任何处理的A5...     

LncRNA HAGLR靶向miR-143/Hedgehog信号通路对HPV16/18感染的宫颈癌细胞活性作用机制

目的 研究LncRNA HAGLR靶向miR-143/刺猬因子(Hedgehog)信号通路对人乳头瘤病毒(HPV)16/18感染的宫颈癌细胞活性作用机制。方法 CaSki细胞购自美国标准生物品收藏中心。选取宫颈癌患者的癌组织(符合宫颈癌确诊标准)与癌旁5 cm宫颈组织标本各10例。将LncRNA HAGLR转染到宫颈癌细胞中后分为宫颈癌组、NC组及转染组。实时荧光聚合酶链反应(RT-PCR)检测LncRNA HAGLR、miR-143水平。噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖。流式细胞仪检测细胞凋亡。Western印迹检测音猬因子重组蛋白(Shh)、神经胶质瘤相关基因同源蛋白(Gli)1蛋白水平。双荧光素酶报告检测LncRNA HAGLR、miR-143、Shh、Gli1靶向。结果 宫颈癌组织中LncRNA HAGLR表达明显高于在癌旁组织(P<0.05)。宫颈癌组与NC组各指标对比无明显差异(P>0.05)。与NC组相比,转染组LncRNA HAGLR、增殖能力、Shh、Gli1水平明显降低,miR-143、凋亡率明显增加(P<0.05)。结论 LncRNA HAGLR靶向...     

miR-155通过靶向调控TGFBR1和TGFBR2抑制AMI诱导的心肌纤维化

目的 探讨miR-155对急性心肌梗死(AMI)小鼠心肌纤维化进程及心肌成纤维细胞(CFs)细胞增殖和周期的影响,分析miR-155对转化生长因子(TGF)-β信号Ⅰ型/Ⅱ型跨膜受体(TGFBR1/TGFBR2)调控作用,阐明miR-155在AMI中的作用及其工作机制。方法 qRT-PCR检测miR-155在AMI患者和AMI小鼠血清中的表达。心脏超声,Masson染色和天狼星红染色分别检测miR-155对AMI小鼠左室射血分数及心肌纤维化程度的影响。Western印迹检测CFs细胞在缺氧条件下miR-155对TGFBR1,TGFBR2,P-smad2和P-smad3表达的影响。TargetScan和双荧光素酶报告基因试验筛选并验证TGFBR1和TGFBR2是否为miR-155的靶基因。qRT-PCR和Western印迹检测miR-155对TGFBR1和TGFBR2表达的影响。CCK8法和流式细胞法分别检测miR-155对CFs细胞增殖和周期的影响。结果 miR-155在AMI患者及AMI小鼠血清中的表达均明显降低,miR-155过表达能促使AMI小鼠左室射血分数升高,下调心肌组织中N...     

LncRNA LUCAT1通过靶向miR-199a-5p调控宫颈癌细胞活性、侵袭迁移及其分子机制

目的研究长链非编码RNA肺癌相关转录产物(LUCAT)1对宫颈癌细胞的活性、迁移和侵袭的影响,并探讨其机制。方法运用qRT-PCR法检测宫颈癌细胞Hela、正常宫颈细胞Ect1/E6E7中LUCAT1、miR-199a-5p的表达;将si-con组(转染si-con)、si-LUCAT1组(转染si-LUCAT1)、miR-199a-5p组(转染miR-199a-5p模拟物)、miR-NC组(转染miR-NC)、si-con+anti-miR-199a-5p组(共转染si-con和anti-miR-199a-5p)、si-LUCAT1+anti-miR-199a-5p组(共转染si-LUCAT1和anti-miR-199a-5p),均用脂质体法转染至Hela细胞;噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞的活性;Transwell法检测各组细胞的迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性。结果与正常宫颈细胞Ect1/E6E7相比,宫颈癌细胞Hela中LUCAT1表达显著升高,miR-199a-5p表达显著降低;敲减LUCAT1、过表达miR-199a-5p均可明显抑制Hela细胞的活性、迁移和侵袭;miR-199a-5p可抑制野生型LUCAT1细胞的荧光活性,且LUCAT1可负向调控miR-199a-5p的表达;抑制miR-199a-5p可逆转敲减LUCAT1对Hela细胞的活性、迁移、侵袭的抑制作用。结论 LUCAT1可促进宫颈癌细胞的活性、迁移、侵袭,其机制可能与靶向miR-199a-5p有关,将可为宫颈癌的治疗提供靶点。     

miR-202通过靶向EGFR抑制A549细胞的增殖和侵袭

目的探索miR-202对非小细胞肺癌A549细胞增殖和侵袭的影响及其分子机制。方法实验分为5组,包括miR-NC组,shNC组,miR-202组,shEGFR组和miR-202+EGFR组。五组细胞分别转染miR-NC,sh-NC,miR-202 mimics,shEGFR和miR202+pcDNA3.1-EGFR。采用双荧光酶报告基因法验证miR-202对EGFR的靶向性。实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法用于检测A549细胞中mRNA和蛋白的表达。采用流式细胞术检测细胞周期。细胞克隆形成和Transwell法用于检测细胞的增殖和侵袭能力。结果双荧光素酶报告基因实验证实miR-202与EGFR的3’-UTR片段结合。miR-202组的miR-202的表达显著高于miR-NC组(P0.05)。转染miR-202 mimics或shEGFR可以显著下调EGFR的mRNA和蛋白表达水平(P0.05),而转染pcDNA3.1-EGFR可以上调因转染miR-202 mimics而下调的EGFR mRNA和蛋白表达水平(P0.05)。过表达miR-202或者敲低EGFR可以使A549的细胞周期停滞在G0/G1期(P0.05),同时抑制A549细胞的增殖和侵袭能力(P0.05)。通过转染pcDNA3.1-EGFR可以逆转过表达miR-202对A549细胞增殖和侵袭的抑制(P0.05)。过表达miR-202通过靶向EGFR显著下调p-PI3K/PI3K,p-AKT/AKT和p-ERK1/2/ERK1/2等蛋白表达的比值(P0.05)。结论 miR-202靶向EGFR抑制PI3K/AKT和MAPK/ERK信号通路,影响A549细胞的增殖和侵袭,可能成为非小细胞肺癌临床治疗的新靶点。