非小细胞肺癌Bcl-2基因蛋白表达及其与细胞凋亡和增殖的关系

目的探讨非小细胞肺癌Bcl-2蛋白表达与细胞凋亡和增殖的关系。方法采用SAB免疫组化法检测43例非小细胞肺癌及20例癌旁正常肺组织石蜡包埋标本Bcl-2蛋白及增殖细胞核抗原（PCNA）表达;用TUNEL法检测细胞凋亡。结果肺癌组织Bcl-2蛋白的表达显著高于癌旁肺组织,P〈0．05;肺癌组织中凋亡指数和增殖指数均明显高于癌旁正常肺组织,P〈0．01,Bcl-2表达阳性的肺癌组织细胞凋亡指数明显低于Bcl-2表达阴性组,P〈0．05;高细胞凋亡、增殖指数提示肺癌预后不良,P〈0．05。结论肺癌存在Bcl-2表达上调,Bcl-2异常表达在肺癌发生过程中可能起重要作用。     

紫草素对肺腺癌H1975细胞作用的实验研究

目的 观察紫草素对肺腺癌细胞H1975增殖的影响,并初步探讨其可能的抗癌机制.方法 不同浓度紫草素作用于肺腺癌H1975细胞,MTT实验观察紫草素作用24、48、72 h对肺腺癌细胞增殖的影响,相差显微镜下观察细胞形态,流式细胞术检测细胞凋亡和周期,Western blot检测细胞中EGFR信号通路下游关键分子EGFR、AKT、ERK表达及磷酸化水平以及凋亡相关蛋白Bcl-2表达和DNA修复酶PARP的变化.结果 紫草素能够抑制非小细胞肺癌细胞增殖并呈浓度和时间依赖性;流式细胞术显示紫草素诱导H1975细胞发生凋亡,阻滞细胞于S期;EGFR、AKT和ERK蛋白表达下降,p-EGFR、p-AKT和p-ERK磷酸化水平降低,凋亡相关蛋白Bcl-2表达减少,PARP发生剪切.结论 紫草素能够抑制非小细胞肺癌细胞株H1975增殖、诱导凋亡,其机制可能与其下调EGFR、AKT和ERK的表达及其磷酸化水平和降低凋亡相关蛋白Bcl-2表达和促使PARP发生剪切有关.     

紫杉醇和微小RNA对非小细胞肺癌的协同抑制作用

目的探讨表皮生长因子受体抑制性微小RNA和紫杉醇在非小细胞肺癌中的协抑制效应。方法人非小细胞肺癌细胞株A549和HCC827进行体外培养过程中,将miR-545前体转染入细胞,转染48 h后,以不同浓度的紫杉醇处理细胞72 h,以MTT法检测细胞生长抑制。结果紫杉醇对A549和HCC827非小细胞肺癌细胞的增殖均表现出显著的抑制作用。在0.1⁵.0 nmol/L的剂量区间内,抑制效应随剂量的增加表现出近乎线性的同步增加。miR-545对紫杉醇的细胞生长抑制作用具有增强效应,在HCC827中的增效(IC50减少41.6%)高于A549(IC50减少27.3%)。结论在非小细胞肺癌中,miR-545对紫杉醇生长抑制作用具有协同加强效应,为改善非小细胞肺癌化疗的耐药问题提供新的探索途径。     

吉非替尼诱导p27核转位并激活半胱天冬酶8促进NSCLC细胞凋亡的机制

目的探讨吉非替尼诱导的p27蛋白表达改变和核转位及半胱天冬酶(Caspase)8的激活对表皮生长因子受体(EGFR)突变的非小细胞肺癌(NSCLC)细胞周期阻滞和细胞凋亡的影响及作用机制。方法选取存在19号外显子缺失突变的对吉非替尼敏感的NSCLC细胞系HCC827,采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法和流式细胞术分别检测吉非替尼在不同浓度和时间下对细胞活性的影响。利用Western印迹检测p27蛋白和Caspase及其他相关蛋白的相对含量。通过免疫荧光法观察p27蛋白的亚细胞定位。采用蛋白免疫共沉淀验证p27蛋白和Caspase8之间的相互作用。结果吉非替尼浓度-时间依赖性促进了HCC827细胞凋亡。当吉非替尼干预18 h后,细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)抑制因子p27蛋白表达开始出现显著升高(P<0.05),且p27蛋白在此过程中伴随从细胞核到细胞质的核转位现象,而促凋亡蛋白B细胞淋巴瘤(Bcl)-2相关x蛋白(Bax)和Bad及抗凋亡蛋白Bcl-2和Bcl/白血病-x基因长片段(Bcl-xl)在吉非替尼干预后表达并未发生显著改变。此外,细胞质中p27蛋白与Caspase8的降解中间体p43/p41结合从而抑制其自身细胞质向细胞核易位。结论推断吉非替尼通过调节p27蛋白的亚细胞定位及Caspase8之间的相互作用,从而达到促EGFR突变的NSCLC细胞凋亡的效果。     

三氧化二砷对非霍奇金淋巴瘤细胞的增殖抑制及凋亡作用

目的:探讨三氧化二砷(ATO)对非霍奇金淋巴瘤(NHL)细胞株Raji和Jurkat增殖和凋亡的影响及其相关机制。方法:运用CCK-8法、Annexin V FITC/PI双染流式检测法、蛋白免疫印迹法分别检测ATO对Raji和Jurkat的增殖、凋亡以及凋亡相关蛋白caspase-3、PARP、caspase-8和caspase-9表达的变化。结果:ATO能明显抑制Raji细胞和Jurkat细胞生长增殖,且呈时间依赖性和浓度依赖性; ATO可诱导Raji细胞和Jurkat细胞凋亡,且呈现一定的时间依赖性; ATO可引起Raji细胞cleaved-caspase-3、cleaved-PARP、cleaved-caspase-9表达增加(均P 0. 05),而对caspase-8的影响无明显差别; ATO可引起Jurkat细胞cleaved-caspase-3、cleaved-PARP、cleaved-caspase-8、cleaved-caspase-9表达增加(均P 0. 05)。结论:ATO明显抑制Raji细胞和Jurkat细胞的增殖,并诱导细胞凋亡,Raji细胞凋亡效果较弱,主要由线粒体途径介导,而Jurkat细胞凋亡明显,由线粒体途径和死亡受体途径共同介导。     

S100A4在非小细胞肺癌中的表达及对肺癌A549细胞生物学行为的影响

目的观察肺癌组织中钙离子结合蛋白A4(S100A4)对肺癌A549细胞增殖的影响。方法免疫组织化学方法分别检测67例飞小细胞肺癌及其配对的正常肺组织中S100A4的表达水平。CCK-8法检测不同浓度(0¹0μg/ml)S100A4对肺癌A549细胞活力的影响,并分析对细胞周期的影响。结果 S100A4在非小细胞肺癌中显著高表达,表达强度与临床病理分期密切相关(P<0.01)。S100A4蛋白可以促进肺癌A549细胞的增殖,且呈浓度依赖性(P<0.05)。结论 S100A4蛋白可以增加肺癌细胞活性,可能与非小细胞肺癌的发生与发展相关。     

芹菜素对膀胱癌T24细胞增殖、凋亡和CyclinD1、Caspase-3表达的影响

目的研究芹菜素(apigenin)诱导膀胱癌T24细胞凋亡的作用,探讨其作用机制。方法 CCK8法测定不同浓度芹菜素对T24细胞生长情况的影响;流式细胞术检测T24细胞周期情况;AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞术观察T24细胞凋亡情况;Western印迹法检测CyclinD1和Caspase-3蛋白表达的变化。结果芹菜素能诱导T24细胞凋亡(P<0.05),并明显抑制CyclinD1的表达(P<0.05,P<0.01),同时上调Caspase-3的表达(P<0.05,P<0.01)。结论芹菜素在体外可抑制T24细胞增殖,诱导其发生凋亡。其作用机制可能与CyclinD1的表达下降,Caspase-3的表达增加有关。     

环氧合酶-2抑制剂吡罗昔康对结肠癌细胞生长的影响

目的观察非甾体类抗炎药、环氧合酶(COX)-2抑制剂吡罗昔康(Piroxicam)对结肠癌细胞的影响，并结合COX-2蛋白表达和细胞凋亡情况探讨结肠癌的预防。方法细胞株选用SW1116结肠腺癌细胞；细胞增殖实验时，用MTT法测定细胞增殖活性；用免疫组化及Western Blot方法检测细胞内COX-2蛋白表达；用DNA云梯电泳法检测细胞凋亡。结果吡罗昔康能够抑制结肠腺癌细胞的增殖，其效应与浓度呈正相关；浓度≥1．0mmol／L时呈现细胞毒作用。吡罗昔康作用12h即可显著抑制COX-2蛋白的表达；作用24h后，蛋白水平恢复程度与浓度成负相关。吡罗昔康浓度≥0．1mmol／L时可以诱导SW1116细胞的凋亡。结论吡罗昔康抑制结肠腺癌细胞的增殖与抑制COX-2过度表达和促进细胞凋亡有关，由于吡罗昔康的效应呈现浓度和时间依赖性，在进行预防或治疗结肠癌的临床研究时，要考虑其有效剂量和用药间隔。     

塞来昔布对不表达环氧合酶-2的胃癌细胞生长的影响

目的: 探讨选择性COX-2抑制剂celecoxib抑制不表达COX-2的胃癌细胞MGC-803生长的机制.方法: 采用MTT法研究celecoxib对细胞存活率的影响;流式细胞术检测celecoxib处理后细胞DNA含量的变化, 免疫组织化学方法检测Bax及Bcl-2的表达, Elisa法检测VEGF蛋白表达水平, Western blot法检测COX-2及NF-κB蛋白的表达.结果: MGC-803中未检测到COX-2的表达;选择性COX-2抑制剂celecoxib呈浓度和时间依赖性抑制MGC-803细胞生长( r = 0.985,P<0.05), 流式细胞仪检测DNA图谱上表现为G0/G1期前出现一个代表凋亡细胞的亚G1峰. Bax及Bcl-2无表达, celecoxib对细胞分泌VEGF( r = 0.928, P<0.01)及NF-κB蛋白均有抑制作用, 并且NF-κB蛋白的表达和celecoxib呈浓度和时间依赖性( r = 1).结论: celecoxib可诱导不表达COX-2的胃癌细胞MGC-803凋亡, 可能通过抑制IKKβ-NF-κB信号通路影响MGC-803细胞的凋亡, 而不依赖COX-2途径.     

环氧化酶-2抑制剂对非小细胞肺癌抗肿瘤作用机制的研究进展

肺癌目前位于全世界癌症死因的首位,约占全部恶性肿瘤的19％。每年约有超过100万人死于肺癌,严重威胁着人类的健康和生命。其中,非小细胞肺癌约占80％～85％。研究显示环氧化酶-2（cycl00xygenase-2,COX-2）在非小细胞肺癌组织中表达上调,并且与肿瘤细胞的增殖、侵袭和远处转移有关。近年来COX-2抑制剂在非小细胞肺癌治疗中的作用日益受到关注。特异性COX～2抑制剂（尼美舒利、塞来昔布、罗非昔布、NS398等）和非特异性COX-2抑制剂（吲哚美辛、布洛芬等）对非小细胞肺癌均有抗肿瘤作用,可增加非小细胞肺癌化疗及放疗的敏感性。实验研究表明COX-2抑制剂可抑制非小细胞肺癌细胞的增殖,诱导细胞的凋亡,抑制肿瘤新生血管的生成,抑制肿瘤远处转移等。国外临床研究表明COX-2抑制剂可提高化疗药物的临床疗效,并减弱化疗不良反应。COX-2抑制剂显著的抗肿瘤作用为非小细胞肺癌的治疗带来了新的曙光。     

Frat1通过Wnt/β-catenin信号通路对非小细胞肺癌A549细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨Frat1能否通过Wnt/β-catenin信号通路对非小细胞肺癌A549细胞的增殖、凋亡产生影响。方法 RT-PCR检测非小细胞肺癌组织及正常肺组织中Frat1、β-catenin的表达;CCK-8试验检测Frat1沉默组和Frat1正常表达组非小细胞肺癌A549细胞的增殖;TUNEL免疫荧光法检测Frat1沉默组和Frat1正常表达组非小细胞肺癌A549细胞的凋亡;Western Blot检测Frat1沉默组和Frat1正常表达组非小细胞肺癌A549细胞β-catenin蛋白的表达。结果非小细胞肺癌组织中Frat1、β-catenin基因的表达显著高于正常肺组织(P0.05);Frat1沉默组细胞的增殖能力显著弱于Frat1正常表达组(P0.05);Frat1沉默组细胞的凋亡显著高于Frat1正常表达组(P0.05);Frat1正常表达组细胞β-catenin蛋白的表达显著高于Frat1沉默组(P0.05)。结论 Frat1与β-catenin在非小细胞肺癌的表达被激活;Frat1能促进非小细胞肺癌A549细胞的增殖,抑制其凋亡,这种作用可能是通过激活Wnt/β-catenin信号通路而实现的。     

乳香通过PTEN/Akt/COX-2通路诱导胃癌细胞SGC7901凋亡

目的研究乳香对人胃癌细胞SGC7901增殖、凋亡和迁移的影响及其可能的作用机制。方法不同浓度乳香处理SGC7901细胞不同时间,噻唑兰比色法检测乳香对SGC7901细胞增殖的影响,流式细胞术分析乳香对SGC7901细胞凋亡的影响,蛋白质印迹法(Western blotting)分析乳香对SGC7901细胞中同源性磷酸张力蛋白(PTEN)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、蛋白激酶B(PKB,亦称Akt)和环氧化酶2(COX-2)蛋白表达影响,划痕实验检测细胞迁移能力,裸鼠移植瘤实验验证乳香在裸鼠体内抑制肿瘤的效果。采用Graphpad Prism 6.0统计软件对数据进行分析。结果乳香能够抑制SGC7901细胞的增殖和迁移能力,呈现剂量依赖和时间依赖性。乳香诱导SGC7901细胞的凋亡,呈现剂量依赖性。乳香能够诱导SGC7901细胞中PTEN的表达,抑制p-Akt和COX-2的蛋白表达。此外,乳香能够抑制裸鼠体内胃癌移植瘤的生长。结论乳香可以抑制胃癌细胞SGC7901的增殖和迁移,诱导细胞凋亡,这可能与PTEN/Akt/COX-2信号通路相关。     

舒林酸诱导胃癌BGC-823细胞凋亡的研究

目的 探讨舒林酸诱导人胃癌BGC-823细胞株凋亡的作用及其机制。方法将舒林酸作用于人胃癌BGC-823细胞,并设置不同的作用浓度和作用时间,应用流式细胞术、TUNEL法检测胃癌细胞的凋亡率;免疫组化（S-P）法检测凋亡基因蛋白bcl-2、Sru—vivin的表达以及环氧合酶-2（COX-2）蛋白的表达情况。结果 流式细胞仪检测出凋亡峰;其凋亡检测率及TUNEL法检测的细胞凋亡率均高于对照组（P〈0.05）;免疫组化结果显示凋亡基因蛋白bcl-2、survivin等在胃癌细胞表达下降,COX-2蛋白的表达阳性率也显著低于对照组,均呈时间和剂量依赖性（P〈O.05）。结论舒林酸可诱导胃癌BGC-823细胞凋亡,其机制与抑制凋亡抑制基因bcl-2和survivin的表达及下凋COX-2蛋白的表达有关。     

金莲花黄酮对A549细胞生长及凋亡的影响

目的观察金莲花黄酮对人非小细胞肺癌A549生长及凋亡的影响及其体外抗肿瘤效应。方法体外培养A549细胞,以不同浓度的金莲花黄酮作用为实验组,并设对照组,应用CCK8法测细胞增殖抑制效应、DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡、流式细胞术检测A549细胞中p53和bcl-2蛋白表达情况。结果不同浓度金莲花黄酮作用A549细胞24 h增殖抑制明显(P<0.05),其抑制效应具有剂量依赖的特点并可诱导A549细胞凋亡,同时上调p53基因表达、下调bcl-2基因表达(P<0.05)。结论金莲花黄酮可剂量依赖性抑制A549细胞的生长并可诱导肿瘤细胞凋亡,其抗肿瘤效应可能与细胞凋亡相关基因表达的调控有关。     

大鼠血管平滑肌细胞中以COX-2/JAK2/STAT3为靶向的信号转导分子调控机制的研究

目的:研究转录信号转导子和激活子3(STAT3)信号转导通路与选择性环氧化酶2(COX-2)抑制剂调控血管平滑肌细胞(VSMC)增殖凋亡的关系,明确COX-2抑制剂作用的细胞内信号转导机制。方法:将选择性COX-2抑制剂NS-398,作用于鼠VSMCs,运用MTT法检测细胞增殖状态;流式细胞仪观察NS-398对细胞凋亡的影响,进一步用RT-PCR检测药物作用前后VSMCs中COX-2mRNA表达;Westernblot检测药物作用前后STAT3通路相关蛋白JAK2、STAT3、CyclinD1、Bcl-2的表达及磷酸化活性。结果:鼠VSMCs中COX-2mRNA呈高表达,NS-398呈时间、剂量依赖性方式抑制VSMCs细胞增殖,促进其凋亡。加入NS-398的VSMCs中COX-2mRNA表达水平显著下降(P<0·01)。同时P-JAK2、P-STAT3、CyclinD1、Bcl-2表达水平随作用时间延长而下降(P<0·01)。结论:选择性COX-2抑制剂NS-398对VSMCs作用与COX-2mRNA水平相关,癌基因Stat3信号转导通路调控了NS-398对VSMCs作用的细胞内信号转导机制,最终通过其下游靶基因CyclinD1、Bcl-2影响VSMCs的增殖与凋亡。     

survivin与非小细胞肺癌关系的研究进展

生存素(survivin)作为一种凋亡抑制因子,具有抑制细胞凋亡和调节细胞分裂双重功能,它通过作用于细胞凋亡途径中的酶促进细胞增殖,参与血管形成,且survivin在大多数肿瘤组织中特别是非小细胞肺癌中表达而在成人正常组织中不表达或低表达.因此无论是通过病理组织还是近几年的对于非小细胞肺癌患者外周血的检测均发现,survivin有望在在非小细胞肺癌的诊断、治疗及预后的评估等方面有广阔的临床应用前景.本文主要综述了实验和临床研究的各种证据,总结survivin与非小细胞肺癌关系的研究进展.     

ZNF217在非小细胞肺癌细胞中的表达及其对细胞增殖活性和克隆形成能力的影响

目的研究锌指蛋白(ZNF)217在非小细胞肺癌细胞中的表达及其对细胞增殖活性及克隆形成能力的影响。方法以Real-time PCR和Western印迹检测ZNF217在非小细胞肺癌细胞和正常人肺上皮细胞中的表达变化。短发夹RNA(shRNA)-ZNF217慢病毒干扰载体感染非小细胞肺癌细胞,Real-time PCR和Western印迹检测干扰效果。MTT检测细胞增殖变化,细胞克隆实验检测细胞克隆能力变化,流式细胞术检测细胞周期和凋亡变化,Western印迹检测细胞中p21、细胞周期蛋白(Cyclin)D1、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白水平。结果非小细胞肺癌细胞中ZNF217表达水平明显高于正常人肺上皮细胞(P0.05)。shRNA-ZNF217慢病毒干扰载体可以成功下调非小细胞肺癌细胞中ZNF217的表达水平。沉默ZNF217后的非小细胞肺癌细胞的增殖能力降低,细胞克隆能力也降低,细胞G1期比例升高,细胞凋亡率也升高,细胞中p21蛋白水平升高,Cyclin D1蛋白水平下降,Bax蛋白水平也升高。结论 ZNF217在非小细胞肺癌细胞中高表达,沉默其表达可以抑制非小细胞肺癌细胞增殖和克隆形成能力,阻碍细胞G1期向S期进展,诱导细胞凋亡。     

Six1基因在肺癌组织表达水平及RNA干扰抑制其表达后对肺癌细胞生物学特性的影响

目的探讨Six1基因在肺癌组织表达及抑制其表达后对肺癌细胞增殖凋亡的影响。方法提取肺癌及癌旁组织蛋白,Western印迹检测Six1的表达; Six1-siRNA转染人肺癌A549细胞,分为空白组和阴性对照组(NC组)、Six1-siRNA组,转染48 h后通过Western印迹检测各组细胞Six1的表达; CCK8检测Six1-siRNA转染A549细胞24～72 h的细胞增殖;流式细胞术检测转染48 h的细胞凋亡率; Western印迹检测增殖相关蛋白细胞增殖核抗原(PCNA)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)家族Bcl-2相关X蛋白(Bax)及Notch1信号通路Notch1和Hes1的蛋白表达。结果 Six1在肺癌组织中的表达显著高于癌旁组织(P<0. 05); Six1-siRNA转染能明显降低A549细胞Six1的表达;与空白组比较,Six1-siRNA组细胞24～72 h的细胞增殖均显著降低,在48 h的细胞凋亡率显著升高,PCNA、Notch1和Hes1蛋白表达均显著降低,Bax蛋白表达显著升高(P<0. 05)。结论 Six1在肺癌组织中高表达,通过RNA干扰抑制其表达可通过下调Notch1信号通路降低肺癌细胞增殖及诱导细胞凋亡,对细胞增殖凋亡的影响方式是下调PCNA和上调Bax蛋白表达。     

lncRNA ADPGK-AS1通过调控miR-217表达对非小细胞肺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的研究lncRNA ADPGK-AS1和miR-217在非小细胞肺癌中的表达及其对非小细胞肺癌A549细胞增殖和凋亡的影响。方法以癌旁组织为对照,qRT-PCR检测lncRNA ADPGK-AS1和miR-217在116例非小细胞肺癌组织中的表达水平,双荧光素酶报告系统验证ADPGK-AS1和miR-217的调控关系,在A549细胞中转染si-ADPGK-AS1和miR-217以抑制lncRNA ADPGK-AS1和过表达miR-217,MTT法和流式细胞术检测A549细胞增殖和凋亡,Western blot检测细胞中CyclinD1、p21、Bax和Bcl-2的蛋白表达水平。结果与癌旁组织相比,在116例非小细胞肺癌组织中lncRNA ADPGK-AS1的含量显著升高(P0.05),miR-217的含量则显著下降(P0.05);lncRNA ADPGK-AS1靶向负调控miR-217的表达;抑制ADPGK-AS1表达和过表达miR-217均可抑制非小细胞肺癌A549细胞增殖并促进细胞凋亡,使细胞中CyclinD1和Bcl-2含量降低(P0.05),p21和Bax含量升高(P0.05);干扰miR-217表达逆转了抑制ADPGK-AS1表达对A549细胞增殖、凋亡的作用。结论 LncRNA ADPGK-AS1可能通过靶向miR-217促进非小细胞肺癌A549细胞增殖,抑制细胞凋亡。LncRNA ADPGK-AS1可能是非小细胞肺癌的潜在分子靶点。     

Survivin蛋白在非小细胞肺癌中表达的研究

目的探讨Survivin、突变型P53、Bcl-2蛋白在非小细胞肺癌组织中的表达及其三者之间的关系。方法用链霉菌生物素蛋白-过氧化物酶免疫组织化学法(SP法)检测71例手术切除的非小细胞肺癌(NSCLC)组织和30例正常肺组织中Survivin、突变型P53、Bcl-2蛋白的表达;用原位末端标记(TUNEL)法检测凋亡指数(AI)。结果在NSCLC组织中Survivin、突变型P53、Bcl-2蛋白的表达率分别为61.97%、52.52%、22.54%;30例正常肺组织中无Survivin、突变型P53蛋白表达(P<0.001),Bcl-2蛋白表达率为3.33%(P<0.005);肺癌Survivin阳性、阴性表达组织、正常肺组织的平均凋亡指数分别为11.86±4.67‰、18.67±7.93‰、23.32±6.98‰,肺癌Survivin阳性表达组织与正常肺组织的平均AI相比(P<0.001),肺癌Survivin阴性表达组织与正常肺组织的平均AI相比(P<0.05),差异有显著的统计学意义。结论Survivin蛋白在肺癌组织中的表达,提示该凋亡抑制蛋白在肺癌的发生发展中起抑制癌细胞凋亡的重要作用,AI显示出了Survivin蛋白的抗凋亡作用,Survivin基因有望成为基因治疗的新靶点。