Six1基因在肺癌组织表达水平及RNA干扰抑制其表达后对肺癌细胞生物学特性的影响

目的探讨Six1基因在肺癌组织表达及抑制其表达后对肺癌细胞增殖凋亡的影响。方法提取肺癌及癌旁组织蛋白,Western印迹检测Six1的表达; Six1-siRNA转染人肺癌A549细胞,分为空白组和阴性对照组(NC组)、Six1-siRNA组,转染48 h后通过Western印迹检测各组细胞Six1的表达; CCK8检测Six1-siRNA转染A549细胞24～72 h的细胞增殖;流式细胞术检测转染48 h的细胞凋亡率; Western印迹检测增殖相关蛋白细胞增殖核抗原(PCNA)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)家族Bcl-2相关X蛋白(Bax)及Notch1信号通路Notch1和Hes1的蛋白表达。结果 Six1在肺癌组织中的表达显著高于癌旁组织(P<0. 05); Six1-siRNA转染能明显降低A549细胞Six1的表达;与空白组比较,Six1-siRNA组细胞24～72 h的细胞增殖均显著降低,在48 h的细胞凋亡率显著升高,PCNA、Notch1和Hes1蛋白表达均显著降低,Bax蛋白表达显著升高(P<0. 05)。结论 Six1在肺癌组织中高表达,通过RNA干扰抑制其表达可通过下调Notch1信号通路降低肺癌细胞增殖及诱导细胞凋亡,对细胞增殖凋亡的影响方式是下调PCNA和上调Bax蛋白表达。     

SRCIN1基因表达对肺癌细胞生长及替莫唑胺化疗敏感性的影响

目的探讨SRC激酶信号抑制剂(SRCIN) 1基因过表达对肺癌细胞活力、侵袭能力、凋亡率及替莫唑胺化疗敏感性的影响。方法人肺癌A549细胞分为4个处理组(空白对照组、pc DNA3. 1-SRCIN1组、替莫唑胺组和pc DNA3. 1-SR-CIN1+替莫唑胺组),其中噻唑蓝(MTT)法、Transwell小室和流式细胞术分别检测细胞活力、侵袭能力及凋亡率。Western印迹法检测SRCIN1、增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、B细胞淋巴瘤(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)和β-catenin的蛋白表达。结果 pc DNA3. 1-SRCIN1组和替莫唑胺组均可抑制A549细胞活力、侵袭能力及PCNA、MMP-2和β-catenin的蛋白表达,诱导细胞凋亡及上调Bax表达,与空白对照组比较差异均有统计学意义(P<0. 05),pc DNA3. 1-SRCIN1+替莫唑胺组对细胞活力、侵袭能力及PCNA、MMP-2和β-catenin的表达抑制、细胞凋亡、Bax表达诱导作用更明显,且与pc DNA3. 1-SRCIN1组和替莫唑胺组比较差异均有统计学意义(P<0. 05)。结论 SRCIN1基因过表达可抑制肺癌细胞活力和侵袭能力,诱导细胞凋亡,增加替莫唑胺化疗敏感性,机制可能与Wnt信号下调有关。     

Fgl2基因对H9C2心肌细胞凋亡的影响

目的探讨纤维蛋白原样蛋白(Fgl)2基因对H9C2心肌细胞凋亡的影响及机制。方法空白试剂、阴性病毒和Fgl2 siRNA慢病毒感染H9C2心肌细胞,分别为空白对照组、阴性对照组、Fgl2-siRNA组,48 h后收集细胞,Western印迹检测各组细胞中Fgl2的蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western印迹检测酶切caspase3、Notch1、Hes1蛋白表达。结果空白对照组和阴性对照组Fgl2蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05),Fgl2-siRNA组Fgl2蛋白表达显著低于空白对照组(P<0.01);与空白对照组及阴性对照组比较,Fgl2-siRNA组H9C2细胞凋亡明显降低,酶切caspase3蛋白表达显著下调,Notch1、Hes1蛋白表达显著上调(P<0.01)。结论沉默Fgl2基因的表达可有效抑制H9C2心肌细胞凋亡,其机制与下调酶切caspase3蛋白表达、激活Notch1信号通路有关。     

补体应答基因32基因对心肌梗死心肌细胞凋亡及免疫机制的影响

目的探讨补体应答基因(RGC)32基因对心肌梗死心肌细胞凋亡及免疫机制的影响。方法建立心肌梗死模型,Western印迹检测心肌组织中RGC32的蛋白表达;从大鼠乳鼠获得原代心肌细胞,分为正常对照组、阴性对照组(转染不具有干扰作用的siRNA并进行缺血缺氧处理)、缺血缺氧组、缺血缺氧+RGC32-siRNA组(转染干扰RGC32表达的siRNA并进行缺血缺氧处理),细胞培养48 h后,通过Western印迹检测各组细胞中RGC32、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)3、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Notch1、Hes1的蛋白表达;TUNEL法检测各组细胞凋亡率;RT-PCR检测各组细胞炎症因子白细胞介素(IL)-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α表达。结果心肌梗死心肌组织中RGC32的蛋白表达显著高于正常心肌组织(P0.05);阴性对照组和缺血缺氧组RGC32、Caspase3、Bax、Notch1、Hes1、IL-6和TNF-α表达及细胞凋亡率差异无统计学意义(P0.05),缺血缺氧组RGC32、Caspase3、Bax、IL-6和TNF-α表达及细胞凋亡率均显著高于正常对照组和缺血缺氧+RGC32-siRNA组,Notch1和Hes1表达均显著低于正常对照组和缺血缺氧+RGC32-siRNA组(P0.05)。结论 RGC32基因在心肌梗死心肌组织表达升高,抑制心肌细胞RGC32基因表达可降低细胞凋亡,提高免疫及激活Notch1通路。     

ATF5基因siRNA对肺癌细胞凋亡及化疗增敏的机制

目的探讨转录激活因子(ATF5)基因siRNA对肺癌细胞活力、凋亡及化疗敏感性的影响。方法将ATF5的特异性siRNA(ATF5-siRNA组)转染人肺癌A549细胞,同时转染阴性对照siRNA(阴性组),并设置空白组。采用Western印迹检测ATF5表达沉默效果。噻唑蓝(MTT)、流式细胞术、Western印迹分别检测沉默ATF5表达后的细胞活力、凋亡率、紫杉醇敏感性及相关蛋白表达。结果 ATF5-siRNA组ATF5表达显著低于空白组(P0.05)。ATF5-siRNA组A549细胞活力明显降低,细胞凋亡率明显升高,增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达明显降低,Bcl-2相关X蛋白(Bax)和活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(cleaved caspase)3蛋白表达显著升高,细胞对紫杉醇敏感性显著升高,多药耐受相关蛋白基因(MRP)1蛋白表达明显降低,与空白组比较差异均具有统计学意义(P0.05)。结论利用siRNA沉默ATF5基因表达可抑制A549细胞活力,诱导细胞凋亡,增强紫杉醇敏感性,机制可能与下调PCNA和MRP1表达,上调Bax和cleaved caspase3表达有关。     

华蟾素联合多柔比星通过Fas/线粒体通路促进肺癌A549细胞凋亡

目的探究华蟾素联合多柔比星对肺癌A549细胞凋亡及Fas/线粒体通路的影响。方法用不同浓度华蟾素(0、0. 1、0. 2、0. 4、0. 8μg/m L)、不同浓度多柔比星(0、0. 25、0. 5、1. 0、2. 0μg/m L)或联合用药(多柔比星0. 5μg/m L分别与华蟾素0、0. 1、0. 2、0. 4、0. 8μg/m L联合使用)处理A549细胞。四甲基偶氮唑(MTT)法检测华蟾素联合多柔比星对A549细胞增殖的影响;流式细胞仪检测华蟾素联合多柔比星对A549细胞凋亡的影响;蛋白质印迹(Western blot)技术检测A549细胞Fas/线粒体凋亡通路相关蛋白的表达变化。结果 MTT结果显示,华蟾素和多柔比星对A549细胞均具有增殖抑制作用(P 0. 05),且呈时间-剂量依赖关系。0. 5μg/m L多柔比星分别与0. 1、0. 2、0. 4、0. 8μg/m L华蟾素联合处理下,A549细胞的增殖抑制率呈时间-剂量依赖性。(2)流式细胞仪结果显示,与空白对照组比较,单用0. 4μg/m L华蟾素或0. 5μg/m L多柔比星处理后A549细胞凋亡率显著上升(P 0. 05);与单独用药比较,两药联合处理后A549细胞凋亡率显著上升(P 0. 05)。(3)Western blot结果显示,与空白对照组比较,单用0. 4μg/m L华蟾素或0. 5μg/m L多柔比星处理后A549细胞Fas、Fas L、TNF-R1、Bax及Cyt-c表达显著上调、Bcl-2表达显著下调、裂解型Caspase-3/8/9显著增多(P 0. 05);与单独用药比较,两药联合处理后A549细胞Fas、Fas L、TNF-R1、Bax及Cyt-c表达显著上调、Bcl-2表达显著下调、裂解型Caspase-3/8/9显著增多(P 0. 05)。结论华蟾素联合多柔比星可显著促进肺癌A549细胞凋亡,其机制可能与Fas/线粒体凋亡通路强化有关。     

藤黄酸对非小细胞肺癌A549细胞凋亡及Bcl-2、Bax、P53基因表达的影响

目的探讨藤黄酸对非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞凋亡及B淋巴细胞瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、P53基因表达的影响。方法体外常规培养NSCLC A549细胞,取对数生长期的A549细胞加入不同浓度的藤黄酸进行干预,藤黄酸干预24 h后采用流式细胞术检测A549细胞凋亡率,干预24、48、72 h后采用MTT分析A549细胞生长情况;采用Western印迹实验分析藤黄酸干预对Bcl-2、Bax、P53基因表达的影响,同时分析PUMA表达情况。结果干预24 h后,A549细胞凋亡率随着藤黄酸浓度的增加而增加,均高于空白对照组(P<0.05)。不同浓度的藤黄酸对A549的生长均有一定的抑制作用,且存在剂量、时间关系,不同浓度的藤黄酸干预组A549细胞存活率均显著低于空白对照组(P<0.05);随着时间的推移,各干预组A549细胞存活率降低(P<0.05)。干预24 h后,P53、Bax、PUMA的相对表达量随着藤黄酸浓度的增加而增加,且不同浓度藤黄酸组均显著高于空白对照组(P<0.05);但Bcl-2的相对表达量显著低于空白对照组(P<0.05)。结论藤黄酸可抑制NSCLC A549细胞生长,促进其凋亡,其机制可能是通过活化促凋亡基因Bax、P53、PUMA表达和抑制抗凋亡基因Bcl-2表达实现。     

沉默转化生长因子β1表达与抑制肾小管上皮细胞(HK-2)Notch信号通路的相关性研究

目的探讨沉默转化生长因子β1(TGF-β1)表达与抑制肾小管上皮(HK-2)细胞Notch信号通路的相关性。方法检测TGF-β1在DN的表达;TGF-β1小干扰RNA(TGF-β1-siRNA)和阴性对照(siRNA-NC)转染HK-2,空脂质体转染细胞为对照,检测各组TGF-β1;将HK-2分为低糖、高糖、siRNA-NC+高糖和TGF-β1-siRNA组+高糖组,检测细胞存活,凋亡及Cleaved caspase 3、Notch1和Hes1表达。结果 TGF-β1在DN表达高于正常肾组织(P0.05);TGF-β1-siRNA组TGF-β1表达低于对照组(P0.05);高糖组细胞存活低于低糖组,凋亡率、Cleaved caspase 3、Notch1和Hes1高于低糖组(P0.05),siRNA-NC+高糖组细胞存活、凋亡及Cleaved caspase 3、Notch1和Hes1表达与高糖组相当(P0.05);TGF-β1-siRNA+高糖组细胞存活高于高糖组,凋亡及Cleaved caspase 3、Notch1和Hes1低于高糖组(P0.05)。加入GSI细胞存活、凋亡及Cleaved caspase 3、Notch1和Hes1表达与沉默TGF-β1一致。结论 TGF-β1在DN高表达,高糖能抑制HK-2的存活,促进凋亡,沉默TGF-β1能减弱这种效果,可能与Notch信号通路调控有关。     

ANXA2 siRNA对非小细胞肺癌细胞能量代谢及ROS水平影响研究

目的探讨膜联蛋白A2(ANXA2) siRNA对非小细胞肺癌细胞能量代谢及活性氧(ROS)水平影响。方法以非小细胞肺癌细胞株A549为探讨对象,在细胞内转染ANXA2 siRNA和siRNA阴性对照,用qRT-PCR和Western blot法分别测定细胞中ANXA2 mRNA和蛋白表达,流式细胞术测定A549细胞凋亡,Western blot测定A549细胞中剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白水平,试剂盒测定A549细胞中己糖激酶(HK)活性、丙酮酸激酶(PK)活性、乳酸脱氢酶(LDH)活性、琥珀酸脱氢酶(SDH)活性,二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯(DCFH-DA)法测定ROS含量,生物发光法测定三磷酸腺苷(ATP)含量。结果 ANXA2 siRNA可以下调A549细胞中ANXA2 mRNA和蛋白表达水平。A549细胞转染ANXA2 siRNA后凋亡率升高,细胞中Cleaved Caspase-3、Bax蛋白水平表达上调,细胞中HK活性、PK活性、LDH活性、SDH活性降低,ROS含量增加,ATP含量降低,与没有转染的A549细胞比较,差异有统计学意义(P 0. 05)。A549细胞转染siRNA阴性对照后细胞凋亡率和Cleaved Caspase-3、Bax蛋白水平没有变化,细胞中HK活性、PK活性、LDH活性、SDH活性也没有变化,细胞中ROS和ATP含量也没有变化,与没有转染的A549细胞比较,差异没有统计学意义(P 0. 05)。结论下调ANXA2细胞中ROS水平诱导非小细胞肺癌细胞凋亡并抑制细胞能量代谢。     

Galectin-3基因调控Wnt/β-catenin信号通路对肺癌细胞凋亡的影响

目的探讨半乳糖凝集素(Galectin)-3基因对肺癌细胞凋亡的影响及机制。方法将NC-siRNA、Galectin-3-siRNA1和Galectin-3-siRNA2转染人肺癌A549细胞,未转染任何的siRNA作为对照组,转染48 h后提取细胞中的蛋白,Western印迹检测各组细胞中Galectin-3蛋白表达;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western印迹检测酶切含半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶(Cleaved caspase)3、β-链蛋白(catenin)、细胞周期蛋白(Cyclin)D1蛋白表达。结果 NC-siRNA组Galectin-3蛋白表达与对照组差异无统计学意义(P>0.05),Galectin-3-siRNA1、Galectin-3-siRNA2组Galectin-3蛋白表达均显著低于对照组(P<0.01),Galectin-3-siRNA1组的抑制效果更明显,选择作为后续研究;与对照组及NC-siRNA组比较,Galectin-3-siRNA组β-catenin、Cyclin D1蛋白表达显著降低,细胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达显著升高(P<0.01)。结论抑制Galectin-3在肺癌细胞中的表达可诱导细胞凋亡,其机制与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。     

Thrombolysis by rotational thrombectomy followed by tissue plasminogen activator: Evaluation by angioscopy

Thrombus removal using percutaneous rotational thrombectomy (PRT), followed by tissue plasminogen activator (t-PA), was studied by contrast angiography and fiberoptic angioscopy in a canine femoral artery model of thrombosis. After thrombus induction and following each treatment, comparisons were made between angioscopy and angiography for the detection of thrombus and subintimal dissection. Angioscopic images were scored in a blinded fashion for lining, protruding, or occlusive thrombus (class 1, 2, or 3) as well as estimated wall coverage by thrombus. Angiograms were studied for percent diameter stenosis and the presence of flaps. Following external forceps crush Injury of 18 arteries, two hour occlusion, and injection of thrombin, mean angiographic stenosis was 66%, thrombus coverage by angioscopy was 81%, and mean angioscopy class was 2.5. Following PRT, stenosis decreased to 27% (p < 0.008), thrombus coverage was reduced to 49% (p < 0.02), and angioscopy class dropped to 2.0 (p < 0.07). After t-PA treatment, these values were further reduced to 25% (p = NS), 26% (p < 0.02), and 1.3 (p < 0.008), respectively. In comparison to angiography, subintimal dissection (seen as flaps) and thrombus (lining, protruding, or occlusive) were present significantly more often by angioscopy (p < 0.001). It is concluded that PRT results in significant thrombolysis, apparent by angiography and angioscopy. Follow-up t-PA can produce additional, incremental thrombolysis, apparent only by angioscopy. A beneficial role for t-PA following mechanical thrombolysis is suggested by this model. The superior sensitivity of angioscopy for detection of flaps and thrombus Is underscored by this study.