姜黄素抑制单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的实验研究

目的:观察姜黄素(Curcumin)对单侧输尿管梗阻(UUO)模型大鼠肾间质纤维化的拮抗作用。方法:30只雄性大鼠随机分为假手术组、UUO模型组和姜黄素组,每组10只,术后第6天检测24 h尿蛋白定量,于术后7 d处死大鼠,留取梗阻侧肾组织,检测血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、胱胺酸蛋白酶抑制剂C(Cystain C)、行Masson染色观察肾间质纤维化程度,免疫组化染色检测肾间质Ⅰ型胶原(ColⅠ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达。结果:与模型组相比较,姜黄素组Scr、BUN、Cystain C水平显著降低(P0.05),肾间质纤维化相对面积显著减少(P0.05),α-SMA及ColⅠ的表达明显降低(P0.05)。结论:姜黄素可以减少输尿管梗阻后α-SMA及ColⅠ的表达,从而改善UUO所致的肾脏损伤,发挥其抗肾间质纤维化作用。     

杜仲对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的影响

目的观察杜仲对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化的影响并探讨其可能机制。方法采用UUO肾间质纤维化模型。将32只大鼠随机分为4组,每组8只,即假手术组、UUO组、厄贝沙坦组和杜仲组。厄贝沙坦组给予厄贝沙坦10 mg/(kg.d)、杜仲组给予杜仲6 g/(kg.d)治疗。术后2周处死大鼠,光镜下观察Masson和HE染色肾间质纤维化指数,观察肾组织病理改变,并应用免疫组织化学方法检测肾组织结缔组织生长因子(CTGF)和基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的表达。结果①UUO组与假手术组相比,BUN、Scr水平均显著增加;杜仲组较UUO组呈下降趋势;厄贝沙坦组作用效果与杜仲组相似(P>0.05)。②与假手术组相比,肾组织HE染色UUO组可见弥漫的肾小管上皮细胞空泡变性、扩张、部分萎缩,偶见坏死、肾间质增宽、大量炎细胞浸润和间质纤维化,肾小球病理改变不明显;杜仲组上述改变均有所减轻;厄贝沙坦组病理改变与杜仲组相似(P>0.05)。③与假手术组相比,Masson染色结果显示UUO组肾间质增宽、大量胶原纤维增生、肾小球病变不明显;杜仲组上述改变均有所减轻;厄贝沙坦组病理改变与杜仲组相似(P>0.05)。④假手术组大鼠肾间质有少量CTGF表达,染色为颗粒状,着色稀疏;UUO组CTGF表达明显增多,呈不均匀棕黄色颗粒状,肾小球表达不明显;杜仲组CTGF表达较UUO组明显降低;厄贝沙坦组CTGF表达与杜仲组相似(P>0.05)。⑤MMP-2在假手术组大鼠肾间质中呈棕黄色颗粒状表达;UUO组中大鼠肾间质仅有少量表达且着色稀疏;杜仲组MMP-2表达较假手术组减轻,但其表达仍高于UUO组;厄贝沙坦组与杜仲组相似(P>0.05)。结论杜仲可抑制CTGF的过度表达和增强MMP-2的表达,进而减缓肾纤维化的病程进展。     

螺内酯抑制大鼠单侧输尿管梗阻后肾间质纤维化

目的探讨螺内酯对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化的影响。方法2004-12～2005-03对UUO大鼠给予螺内酯20mg·kg-1·d-1及50mg·kg-1·d-1灌胃,观察第14天血清钾、钠、肌酐、血压的变化及肾间质纤维化程度、转化生长因子-β1(TGF-β1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),纤维连接蛋白(FN)的表达。结果与UUO组相比,两治疗组血清钾、钠、肌酐、血压差异均无显著性(P>0.05),肾小管间质纤维化程度,TGF-β1、α-SMA、FN的表达与UUO组差异有显著性(P<0.05),两治疗组之间差异无显著性(P>0.05)。结论螺内酯可通过抑制细胞因子释放和肾小管-间质细胞的表型转化等非血压依赖机制延缓肾间质纤维化。     

尿毒清颗粒对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化中氧化应激变化的影响

目的 观察尿毒清颗粒对单侧输尿管结扎模型大鼠肾小管间质的转化生长因子β1及肾组织氧化应激指标的改变,探讨氧化应激在肾间质纤维化中的作用.方法 将24只大鼠分为正常对照组(n=6);假手术组(n=6);手术组[单侧输尿管梗阻(UUO)n=6];尿毒清组(n =6),14d后处死,检测各组大鼠的肾功能及总超氧化物歧化酶(T-SOD)活力、丙二醛(MDA)含量.采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测TGF-β1mRNA表达水平.观察肾脏病理变化.结果 与假手术组比较,UUO组尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)升高,肾组织匀浆中MDA含量增加,T-SOD活性降低,TGF-β1 mRNA的表达明显上调,肾脏病理改变加重,尿毒清治疗后以上指标明显好转(均P＜0.05).结论 UUO可以诱导大鼠肾间质纤维化,氧化应激参与肾间质纤维化的形成,尿毒清治疗可明显改善.     

红花对肾间质纤维化实验大鼠肾小管上皮细胞表型转化的抑制作用

目的 目的观察红花对结扎单侧输尿管诱导的肾间质纤维化实验大鼠肾小管上皮细胞表型转化的抑制作用.方法 结扎单侧输尿管方式复制肾间质纤维化实验动物模型,分别给以红花4.0 g*kg-1*d-1、缬沙坦10 mg*kg-1*d-1经口灌服,采用免疫组化、原位杂交方法检测大鼠肾脏肾小管上皮细胞表型转化标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及Ⅲ型胶原的表达.结果 单侧输尿管结扎大鼠肾脏α-SMA动蛋白和Ⅲ型胶原的阳性面积及积分光密度较假手术组明显增强,红花及缬沙坦可显著性抑制其表达.结论 红花可以通过抑制肾小管上皮细胞的表型转化拮抗肾间质纤维化.     

秋水仙碱对肾间质纤维化大鼠细胞表型改变的影响

目的 :明确细胞表型改变在肾间质纤维化中的作用和意义 ,以及秋水仙碱对细胞表型改变的影响。　 方法 :通过经典的单侧输尿管梗阻 (UUO)肾间质纤维化模型 ,利用RT PCR和免疫组化法分别观察模型组、秋水仙碱治疗组实验第 3天、第 7天、第 14天和第 2 1天肾组织α 平滑肌肌动蛋白 (α SMA)mRNA和蛋白表达、分布规律。　 结果 :①UUO后肾皮质α SMAmRNA表达于实验第 3天、第 7天、第 14天、第 2 1天分别上调 2 1倍 (2 5 1± 3 6vs11 9± 31 7)、3 9倍 (46 4± 3 0vs 12 0± 1 8)、4 4倍 (5 3 1± 2 9vs 12 1± 2 1)和 3 7倍 (47 5± 3 1vs 12 8± 1 5 ) ;α SMA肾间质阳性表达指数进行性增加 ,分别为 :19 9± 2 6、32 6± 3 1、5 4 8± 4 4、6 3 5± 4 6 (模型组组间比较 ,F =113 3,P <0 0 0 1)。秋水仙碱治疗组在整个实验过程中肾皮质仅微弱表达α SMA ,其mRNA和蛋白表达水平均极显著低于同期模型组 (P <0 0 0 1)。②正常肾组织仅在肾间质血管壁见α SMA表达 ,肾小管上皮细胞、间质以及肾小球均未见表达。第 7天开始肾小管上皮细胞见α SMA明显表达并进行性加重。模型组皮质肾小管α SMA阳性细胞数第 7、14、2 1天分别为 :(12 5± 2 1)个 /HP、(5 8 9± 4 6 )个 /HP、(6 7 3± 4 5 )     

实验性大鼠肝纤维化模型中细胞外基质成份的变化

应用大鼠肝纤维化模型,通过光镜、电镜观察肝组织学改变,并应用放免法测定肝匀浆中Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)水平和测定肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量,结合计算机图像分析研究肝纤维化中细胞外基质成分的动态变化。结果发现,随着肝纤维化向肝硬变的发展,PCⅢ、HA、LN逐渐沉积于肝实质内,在肝纤维化早、中期以Ⅲ型胶原增长为主,在肝纤维化高峰期及肝硬变期则以Ⅰ型胶原增生为主。研究提示细胞外基质在肝纤维化发生发展中起重要作用。     

左卡尼汀对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的保护作用

目的 探讨左卡尼汀(LC)对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠模型肾间质纤维化的保护作用机制.方法 38只雄性SD大鼠建立UUO模型后随机分为UUO7组(n=8)、UUO7+LC组(n=8)、UUO14组(n=8)、UUO14+LC组(n=8)和假手术组(n=6),其中UUO7+LC组、UUO14+LC组给予腹腔注射LC〔2...     

化瘀泻浊方对肾间质纤维化大鼠骨形态发生蛋白-7的影响

目的 观察化瘀泄浊方对肾间质纤维化(RIF)大鼠骨形态发生蛋白 (BMP)-7的影响.方法 选用健康、雌性SD大鼠50只,用单侧输尿管结扎方法复制大鼠RIF模型,将其随机分为假手术组、化瘀泄浊方组(化瘀泄浊方5.7 g·kg-1·d-1经口灌服)、阿魏酸哌嗪分散片组(予阿魏酸哌嗪分散片6.7 mg·kg-1·d-1)、缬沙坦组(予缬沙坦5.3 mg·kg-1·d-1经口灌服)及模型组(予同等量生理盐水经口灌服),每组10只大鼠.行HE、Masson染色观察梗阻侧肾脏组织形态学改变并用免疫组化方法检测观察梗阻侧肾脏BMP-7表达水平.结果 模型组及各治疗组与假手术组相比均呈现程度不同的病理损害,梗阻肾间质BMP-7蛋白表达也明显减少(P<0.01).各治疗组与模型组比较,BMP-7表达明显增加(P<0.01).治疗各组间比较,化瘀泄浊方组优于阿魏酸哌嗪分散片组(P<0.01),其他各组间均无明显差异(P>0.05).结论 输尿管梗阻后肾组织呈现程度不同的病理损害,肾纤维化面积明显增加,这可能与BMP-7表达减少有关,化瘀泄浊方对其有一定的上调作用.     

对比G-CSF及阿托伐他汀干预对毛细血管及肾间质纤维化的影响及其机制

目的 探讨粒细胞集落刺激因子(G-CSF)和阿托伐他汀干预对毛细血管及肾间质纤维化的影响及机制。方法 选取雄性SD大鼠160只,随机分为假手术组、模型组、G-CSF组和阿托伐他汀组,每组40只,分别于造模后1、2、3和4 w随机抽取处死10只大鼠,采用CD34⁺细胞免疫组化染色法检测毛细血管密度,采用Masson染色法检测肾间质纤维化,采用免疫组化法检测细胞间黏附分子(ICAM)-1和结缔组织生长因子(CTGF)表达。结果 模型组、G-CSF组和阿托伐他汀组造模后2 w、3 w和4 w肾小管周围毛细血管密度显著低于假手术组(P<0.05),其中G-CSF组和阿托伐他汀组造模后2 w、3 w和4 w肾小管周围毛细血管密度显著高于模型组(P<0.05);模型组、G-CSF组和阿托伐他汀组造模后1 w、2 w、3 w和4 w肾间质纤维化评分显著高于假手术组(P<0.05),其中G-CSF组和阿托伐他汀组造模后2 w、3 w和4 w肾间质纤维化评分显著低于模型组(P<0.05);模型组、G-CSF组和阿托伐他汀组造模后2 w、3 w和4 w肾间质I...     

牛磺酸抑制实验性肝纤维化大鼠细胞外基质沉积

目的研究牛磺酸抗肝纤维化作用。大法用四氯化碳（ＣＣＩ４）制备肝纤维化模型;免疫组化检测肝Ⅰ、Ⅲ、Ⅵ型胶原和透明质酸、层粘连素沉积;Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交检测肝Ⅰ、Ⅲ型前胶原、组织金属蛋白酶抑制因子－１（ＴＩＭＰ—１）ｍＲＮＡ含量。结果ＣＣＩ４肝纤维化大鼠肝脏Ⅰ、Ⅲ、Ⅵ型胶原、透明质酸和层粘连素染色明显增多;Ⅰ、Ⅲ型前胶原、ＴＩＭＰ－１ｍＲＮＡ显著增加。牛磺酸处理的大鼠,上述各指标的阳性染色明显减少,并可明显抑制Ⅰ、Ⅲ型前胶原基因表达,而对ＴＩＭＰ—１ｍＲＮＡ却无明显影响。结论牛磺酸对ＣＣＩ４诱导的大鼠肝纤维化具有保护作用,可明显抑制纤维生成与沉积。提示它对防治肝纤维化有一定的临床意义。     

引经药柴胡对胰腺纤维化大鼠细胞外基质合成调控增效的作用

[目的]观察引经药柴胡对大黄丹参调控胰腺纤维化大鼠细胞外基质(ECM)合成增效的作用。[方法]50只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、柴胡组、大黄丹参组和柴胡大黄丹参组,每组10只。假手术组开腹后关腹,其他各组通过结扎胰胆管联合腹腔注射雨蛙素3d建立胰腺纤维化模型;柴胡组、大黄丹参组、柴胡大黄丹参组分别于术前、后3d用对应药物灌胃(剂量分别为1.38g.kg-1.d-1、3.04g.kg-1.d-1、4.11g.kg-1.d-1)。术后第4天取材用苏木精-伊红染色观察胰腺病理学变化,免疫组化检测胰腺α-平滑肌肌动蛋白及Ⅰ型胶原表达,ELISA测定血清纤维连接蛋白(FN)、层结合蛋白(LN)含量。[结果]与模型组相比,柴胡组、大黄丹参组和柴胡大黄丹参组均可改善胰腺病理变化,降低α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原表达,降低血清LN及FN含量,均P0.01;其中柴胡大黄丹参组FN含量降低更显著。[结论]柴胡、大黄丹参、柴胡大黄丹参均可通过抑制ECM合成来发挥抗胰腺纤维化的作用,其中柴胡大黄丹参在降低血清FN含量方面效果最优,提示柴胡在抑制胰腺ECM合成方面对大黄丹参存在一定的增效作用。     

Liver fibrosis and extracellular matrix

Liver fibrosis and extracellular matrix play a central role in liver function impairment. Little information is available on the dynamic aspects and the natural history of fibroplasia, even if there is growing evidence that extracellular matrix accumulation (collagen I, III, IV, fibronectin, laminin, proteoglycans, etc.) is not to be considered only a passive structural support for damaged hepatic tissue, but may actively modulate liver cell behaviour. Clinicians need to date liver fibrosis and to monitor connective tissue synthesis and degradation, but attempts to develop reliable serological markers for collagen metabolism are hampered by the absence of a well defined golden standard to validate them. Nevertheless, serum type III aminoterminal procollagen peptide, at the moment, seems to be the most acceptable parameter of fibrogenesis. The data concerning the mechanisms of collagen production-degradation are becoming so precise and numerous that even if they have not, to date, led to 'routine' advantages for patients, they will end up becoming important tools in the clinical practice and management of liver fibrosis.     

Taurine inhibits deposition of extracellular matrix in experimental liver fibrosis in rats]

OBJECTIVE: To study the effect of taurine on liver fibrosis and its mechanism. METHODS: Fibrosis was induced by the administration of carbon tertrachloride(CCl4) in rats. Some of the animals were treated with taurine. The rats were killed after 12 weeks of CCl4 treatment. Depositions of type I, III and IV collages, laminin and hyaluronic acid were studied in liver sections by immunohistochemical technique using specific antibody. The hepatic contents of type I, III procollage and tissue inhibitor of metalloproteinase-1(TIMP-1) mRNA were determined by Northern blot hybridization. RESULTS: A significant elevations of hepatic collagen I, III, IV, laminin and hyaluronic acid were observed after 12 weeks of liver injury in animals without taurine treatment, and a definite increase in the amounts of hepatic type I, III procollagen and TIMP-1 mRNA was noted. Taurine prevented increases in type I, III procollagen mRNA expression as well as the accumulation of the collagens, laminin and hyaluronic acid in the liver. CONCLUSION: The data indicate that taurine has a protective effect in CCl4-induced hepatic fibrosis. The results suggest taurine might be of potential value in clinical practice.     

大黄蛰虫胶囊对肝纤维化大鼠MMP-2活性的影响

目的探讨大鼠肝纤维化中大黄蛰虫胶囊对基质金属蛋白酶-2(MMP-2)活性的影响。方法采用明胶酶谱法检测肝组织MMP-2活性,采用天狼猩红染色法判断肝纤维化程度。结果随着肝纤维化程度的加重,大黄蛰虫胶囊组MMP-2活性升高幅度明显低于模型组(P0.05),但高于空白组(P0.05)。结论大黄蛰虫胶囊可能通过降低MMP-2活性抑制大鼠肝纤维化发展。     

Cellular sources of extracellular matrix in hepatic fibrosis

The deposition of increased and abnormal extracellular matrix is the hallmark of liver fibrosis. Hepatic stellate cells are well known as the major source of the fibrillar collagens and other components of the liver scar, but are now appreciated to be only one of many potentially fibrogenic cell populations in the diseased liver. Portal fibroblasts and circulating mesenchymal cells derived from the bone marrow are also important sources of matrix proteins in fibrosis. Recent data suggest that hepatocytes and biliary epithelial cells undergo an epithelial to mesenchymal transition, similarly assuming a fibrogenic phenotype. Sinusoidal endothelial cells and hepatocytes produce specific matrix proteins important in liver health and disease. The future challenge will be to define more explicitly the roles of these different fibrogenic cell populations in fibrosis in a disease-specific way.     

大鼠阿霉素肾病肾间质纤维化介导因子表达及莫索尼定的影响

目的探讨大鼠阿霉素肾病(ADR)肾组织转化生长因子β1(TGF-β1)、血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)、结缔组织生长因子(CTGF)的表达与肾间质纤维化的关系及莫索尼定对其影响。方法2004年8月至2004年11月选取哈尔滨医科大学动物实验中心的60只雄性健康Wistar大鼠随机分为健康对照组、模型组及莫索尼定(MOX)治疗组,两次阿霉素尾静脉注射建立模型,治疗组给予MOX1·5mg/(kg·d);分别于4、8、12周末留取标本,测定24h蛋白尿、血生化、肾组织分别进行透射电镜及HE、Mas-son染色,应用免疫组织化学方法检测肾组织中的TGF-β1、PDGF-BB、CTGF蛋白的表达。结果血压、生化指标在治疗组和模型组差异无显著性,模型组24h尿蛋白排泄率高于对照组,差异有显著性(P<0·05),治疗组24h蛋白尿明显低于模型组,差异有显著性(P<0·05),与对照组比较模型组肾小管、肾间质呈明显病理改变,差异有显著性(P<0·05),治疗组损伤较模型组减轻,差异有显著性(P<0·05)。PDGF-BB蛋白表达于第4周,TGF-β1、CTGF蛋白表达第8周开始明显上调,与肾间质纤维化程度呈正相关,莫索尼定治疗组上述生长因子表达下调,差异均有显著性(P<0·05)。结论在大鼠阿霉素肾病肾组织中,肾间质纤维化与TGF-β1、PDGF-BB、CTGF蛋白高表达有关,莫索尼定通过下调促纤维化因子的表达,从而发挥其延缓肾纤维化及肾小球硬化作用。     

肾小球疾病中肾小管间质纤维化的研究

目的 研究肾小球疾病中肾小管间质纤维化的发生机制。方法 通过对44例病因、病理类型和肾功能损伤程度不同的原发性和继发性肾小球疾病的临床和病理分析研究(包括硬化性肾小球肾炎15例、结节性硬化性糖尿病肾病10例，膜性肾病19例)肾小球、肾小管和肾间质的损伤，并进行TGFβ1、α-SMA、I、Ⅲ型胶原蛋白表达的回顾性分析，探讨它们与肾小管间质损伤之间的关系。结果 肾小球的损伤与肾小管间质纤维化密切相关;TGFβ1的表达位于损伤的肾小管上皮细胞，Ⅰ、Ⅲ型胶原和肌纤维母细胞(α—SMA阳性细胞)主要位于增生的肾间质，其中，Ⅰ、Ⅲ型胶原还见于部分肾小管上皮细胞。它们的表达均与肾小管间质损伤程度相关。肾小管TGFβ1的表达还与肾间质肌纤维母细胞及Ⅲ型胶原的表达相关。肾间质肌纤维母细胞的表达又与肾间质Ⅰ、Ⅲ型胶原表达相关。结论 损伤的肾小管是肾小管间质纤维化的中心环节。受缺血缺氧、尿蛋白和尿糖损伤的肾小管上皮细胞通过自分泌和旁分泌的途径，产生多种细胞因子(TGFβ1等)和表型转化(产生Ⅰ、Ⅲ型胶原等)，在人类肾小球疾病进行性发展至肾纤维化的过程中起重要作用。