甲型流感病毒核蛋白单克隆抗体制备及其初步应用

目的 制备甲型流感病毒核蛋白(NP)单克隆抗体,为甲型流感病毒诊断试剂盒以及相关研究提供材料.方法 大肠埃希菌BL21 (DE3)表达NP作为免疫原,免疫Balb/c小鼠后取脾脏细胞与SP2/0细胞融合,筛选获得阳性细胞株,注射小鼠腹腔得到单克隆抗体,纯化后进行Western印迹法、ELISA法、细胞免疫染色和荧光法、双抗夹心ELISA法确定NP抗体的生物学特性,探索应用范围.结果 从Western印迹法、ELISA和细胞免疫染色法的结果可得知,抗NP单克隆抗体可以与免疫原特异性结合,也可以与H1N1、H3N2亚型流感病毒的NP特异性结合,具备检测流感病毒的能力.双抗夹心ELISA法进一步提升了抗体对抗原的检测灵敏度至128 pg.同时,通过细胞免疫荧光法观察到抗体可在细胞内显示NP从细胞核扩散到细胞质的过程.结论 制备的抗体成功检测H1N1、H3N2两种亚型的流感病毒,可作为用于流感防治的流感病毒诊断试剂盒的材料.     

两种甲型流感病毒抗原检测方法的比较

目的 比较两种甲型流感病毒抗原检测的临床诊断效能.方法 分别用免疫渗滤法和胶体金法甲型流感病毒抗原检测试剂盒检测500例流感样患者的鼻咽部拭子,以甲型流感病毒核酸检测结果为标准,评价病毒抗原检测法的临床诊断效能.结果 免疫渗滤法与胶体金法检测的灵敏度分别为96.77%和82.26%、特异性分别为90.41%和91.32%,两种方法在甲型流感病毒检测中差异有统计学意义(X0=4.64,P<0.05).结论 两种甲型流感病毒抗原检测试剂盒均具有较好的临床应用价值,其中免疫渗滤法灵敏度更高,更适合临床诊断,而胶体金法操作更简便快速,适用于较大样本量的筛查或现场检测.     

应用胶体金免疫层析法检测人群甲型流感病毒抗原阳性率

目的 应用胶体金免疫层析法调查无锡地区甲型流感病毒(FLUA)的流行状况.方法 采用以胶体金标记的双抗体夹心免疫学检测方法,对无锡地区2009年6月-2010年3月,15 890例鼻咽拭子样本进行特异性FLUA抗原检测.结果 应用胶休金免疫层析法检测15 890例鼻咽拭子样本,FLUA抗原总阳性率为4.29%;按年龄分组统计,1～3、4～6、7～9、10～12、13～15、16～18、19～20、21～25、26～30、31～40、41～50、≥51岁年龄组FLUA抗原总阳性率分别为3.31%、2.67%、3.99%、4.10%、4.86%、4.84%、7.19%、5.39%、3.57%、3.06%、3.83%、2.36%,其中19～20岁组中FLUA抗原阳性率最高,统计学分析显示,不同年龄组间阳性率差异有统计学意义(P＜0.05),不同性别间阳性率差异无统计学意义;按时间段统计,200g年6-12月和2010年1-3月FLUA抗原总阳性率在0～6.88%之间,其中8月份FLUA抗原阳性率最高.结论 采用胶体金免疫层析法检测呼吸道标本中的FLUA抗原,可用于人群FLUA病例筛查和疫情监测,为预防控制流感疫情提供流行病学资料.     

粗壮女贞提取物抗甲型流感病毒的作用及机制初探

目的 探讨粗壮女贞提取物体外不同作用方式下抗甲型流感病毒的作用及机制。方法 以狗肾上皮（Madin-Darby Canine Kidney,MDCK）细胞建立甲型H1N1流感病毒感染模型,采用粗壮女贞提取物对MDCK细胞最大无毒浓度（0.8mg/ml）进行实验,CCK-8法测定提取物预防式、治疗式和共同式干预下MDCK细胞存活率;荧光定量PCR法、间接免疫荧光法检测预防式干预下细胞内病毒核蛋白（nucleoprotein, NP）基因表达、蛋白定位;荧光法检测病毒神经氨酸酶（neuraminidase, NA）荧光强度;ELISA法测定细胞内炎症因子IL-6、IL-8、IFN-γ、IP-10表达水平。结果 与病毒对照组相比,治疗式、共同式干预下实验组细胞存活率差异无统计学意义（ q =2.658, P >0.05; Z =1.547, P >0.05）;预防式干预下,实验组中细胞存活率上升（ Z = 4.195, P <0.001）,病毒NP多定位于细胞核内,且基因表达下降（ Z =-2.662, P< 0.05）;NA活性降低（ Z =-2.405, P< 0.05）;IL-6（ Z =-2.772, P <0.05）、IL-8（ q =8.493, P <0.001）和IFN-γ（ Z =-2.863, P <0.05）蛋白表达量下降。结论 预防式干预下粗壮女贞提取物具有抗甲型H1N1流感病毒作用,其机制可能与干扰病毒NP功能、抑制NA活性以及减轻炎症反应有关。     

多维尺度法在上海地区近年来人群甲型流感病毒抗原进化研究中的应用

目的 探讨多维尺度法在近年上海地区人群甲型流感病毒抗原进化过程中的应用,为流感的有效防控提供科学依据.方法 采用非度量多维尺度分析技术以图形化的方式形象地描述了上海地区近年来甲型流感病毒的抗原进化过程,构建了抗原图谱.结果 上海地区H3甲型流感病毒在2005年以后到现在流行株抗原进化相对比较缓慢,而甲型流感H1亚型2008年上半年流行株较之以前的疫苗株和流行株均发生了较大的抗原变异,所以在以后的流感防控工作中要警惕H1亚型的流行.结论 多维尺度分析技术得到的抗原图谱可以更直观地筛选出有流行病学意义的病毒株,为更好地推荐流感疫苗株提供科学依据.     

甲型流感病毒的动物间传播和遗传重组

甲型流感病毒的变异是引起世界性流感大流行的主要因素。流感病毒的变异形式有两种,一种是甲、乙、丙三型流感病毒所共有的抗原漂流;另一种是甲型流感病毒所特有的抗原转变。甲型流感病毒结构中的表面抗原血凝素（ＨＡ）和神经氨酸酶（ＮＡ）可以在自然界中不断地发生变...     

单克隆抗体对甲_1型流感病毒的抗原分析和快速诊断的研究

用宁夏地区分离的甲,型流感毒株宁防86—27(H_1N_1)制备了抗甲_1型流感病毒血凝素的McAb39株,其血抑滴度在1:2000—1:256000,Ig亚类为IgG_1、IgG2a、IgG2b。用自制的McAb对宁夏历年分离的甲_1型毒株的抗原分析表明:抗原漂移存在,且以1981和1987年的毒株抗原漂移明显。用我们的McAb对甲_1型毒株的间接免疫荧光试验,证实此法特异性好,敏感性高,确有早期快速诊断的意义。     

30只鸭子中甲型流感病毒的检测

目的：了解近期禽宰场流感病毒在鸭子中的携带情况。方法：在禽宰场随机选择正常健康状况待宰鸭子30只，分别取咽和肛门混合拭子，使用鸡胚培养扩增，血凝法切筛，甲型流感病毒核蛋白（NP）蛋白保守核酸序列作扩增鉴定。结果：在30份样品中，经鸡胚培养扩增，1：50的血凝法初筛50％为阳性，经核酸聚合酶链反应扩增鉴定10份样品中，9份为甲型流感病毒。结论：用本方法在正常鸭子中甲型流感病毒的可检出携带率约为45％。     

国产甲型H1NI流感病毒裂解疫苗预防接种不良反应观察

目的了解公众对甲型H1NI流感病毒裂解疫苗的接受程度及预防接种后的临床异常表现。方法统计甲型H1NI流感病毒裂解疫苗的接种率及接种后24h内所出现的异常反应。结果共有13600人自愿按程序要求实施预防接种,占应接种人数的90.67%,共观察到126例临床不良反应(30min内出现的有110例、24h内出现的有16例),占接种人群的0.93%,其中孕妇有2例,占不良反应人群的1.59%,临床表现为头痛、头晕、腹痛、四肢关节痛、瘙痒、发热、疲劳乏力、胸闷、呼吸困难。所有反应均在24h内消失。结论甲型H1NI流感疫苗产品质量是安全的、可控制的、有效的,应加强健康教育工作,提高预防接种率。     

甲型流感病毒宿主特异性研究进展

大量证据显示，哺乳动物甲型流感病毒可能来源于野生水禽。甲型流感病毒由水禽传播给家禽和哺乳动物是近年流感爆发的根源；但不同物种来源的甲型流感病毒不能在其他物种中有效繁殖，表明甲型流感病毒存在宿主特异性。本文简要概述了近年来流感病毒宿主特异性的相关知识及研究进展，重点介绍宿主受体唾液酸衍生物种类、唾液酸一半乳糖基连接键型对病毒感染宿主特异性的影响以及流感病毒血凝素的受体特异性。     

Vaccine-mediated protection of pigs against infection with pandemic H1N1 2009 swine influenza A virus requires a close antigenic match between the vaccine antigen and challenge virus

Swine influenza A virus (SwIV) infection has considerable economic and animal welfare consequences and, because of the zoonotic potential, can also have public health implications. The 2009 pandemic H1N1 ‘swine-origin’ infection is now endemic in both pigs and humans. In Europe, avian-like H1_avN1, human-like H1_huN2, human-like swine H3N2 and, since 2009, pandemic H1N1 (pH1N1) lineage viruses and reassortants, constitute the dominant subtypes. In this study, we used a swine pH1N1 challenge virus to investigate the efficacy of whole inactivated virus vaccines homologous or heterologous to the challenge virus as well as a commercial vaccine. We found that vaccine-mediated protection was most effective when vaccine antigen and challenge virus were homologous and correlated with the specific production of neutralising antibodies and a cellular response to the challenge virus. We conclude that a conventional whole inactivated SwIV vaccine must be antigenically matched to the challenge strain to be an effective control measure.     

甲型流行性感冒病毒感染患者免疫学指标的观察

目的 探讨甲型流行性感冒(流感)病毒感染患者免疫学指标的变化,为其临床研究提供参考依据.方法 共纳入52例甲型流感病毒感染患者作为病例组,同时随机选取50名健康人作为对照组,比较两组患者免疫学指标的差异.结果 病例组CD3+ CD4+ (409.6±167.2)细胞/μl及CD3+ CD8+ (323.3±146.5)细胞/μl,对照组分别为(659.6±198.4)细胞/μl及(413.3±175.5)细胞/μl,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05);病例组血小板计数(172.6±2.2)×109/L、白细胞计数(4.3±0.5)×109/L,对照组分别为(213.7±2.4)×109/L、(5.5±0.7)×l09/L,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05);病例组嗜中性粒细胞(56.6±9.2)％、补体C3(1.1±0.2) g/L、C4(0.3±0.1)g/L,对照组患者分别为(50.7±7.4)％、(0.9±0.3)g/L、(0.2±0.1)g/L,两组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 甲型流感病毒感染后常有多种免疫学指标的改变,因此在临床工作中需要严密观察该类指标的变化,以便更好地了解患者的病情.     

Surveillance of influenza A virus in migratory waterfowl in northern Europe

We conducted large-scale, systematic sampling of influenza type A virus in migratory waterfowl (mostly mallards [Anas platyrhynchos]) at Ottenby Bird Observatory, southeast Sweden. As with previous studies, we found a higher prevalence in fall than spring, and among juveniles compared with adults. However, in contrast to other studies, we found that prevalence in spring was sometimes high (mean 4.0%, highest 9.5%). This finding raises the possibility that ducks are capable of perpetuating influenza A virus of different subtypes and subtype combinations throughout the year and from 1 year to the next. Isolation of the H5 and H7 subtypes was common, which suggests risk for transmission to sensitive domestic animals such as poultry. We argue that wild bird screening can function as a sentinel system, and we give an example of how it could have been used to forecast a remote and deadly outbreak of influenza A in poultry.     

Eliciting neutralizing antibodies against the membrane proximal external region of HIV-1 Env by chimeric live attenuated influenza A virus vaccines

Despite significant efforts directed toward research on HIV-1 vaccines, a truly effective immunogen has not been achieved. However, the broadly neutralizing antibodies (BnAbs) 2F5 and 4E10, targeting the highly conserved membrane proximal external region (MPER) of HIV-1, are two promising tools for vaccine development. Here we engrafted the MPER into the linker domain between the trimeric core structure and the transmembrane domain of influenza A virus HA2 to investigate the potential of such chimeric viruses to elicit HIV-1 neutralizing antibodies. In the context of proliferating attenuated influenza A viruses, these HIV-1 neutralizing antibody epitopes could be continuously expressed and mimicked their native conformation to induce humoral immune responses. While MPER-specific antibodies could be detected in serum of guinea pigs vaccinated with the chimeric viruses, they exhibited only weakly neutralizing activities. These antisera from vaccinated animals neutralized viruses of clades B and BC (tier 1), but not of clades AE (tier 1) and C (tier 2). These results suggest that influenza A virus can be used as a vehicle for displaying MPER and inducing BnAbs, but it provides limited protection against HIV-1 infection. In the future development of HIV-1 vaccines by rational design, a more effective live virus vector or multiple antigens should be chosen to facilitate the process of neutralizing antibody maturation.     

A型流感病毒核蛋白噬菌体单链抗体体外表达鉴定

目的　从构建的A型流感病毒核蛋白(Nucleoprotein)噬菌体单链抗体库中筛选阳性克隆,在大肠杆菌HB2 15 1中表达流感病毒核蛋白噬菌体单链抗体,为研究A型流感病毒免疫渗漏试剂盒建立基础。方法　经过连续三轮固相“亲和-洗脱-富集”筛选,丰富噬菌体抗体库中阳性克隆的比例,采用ELISA、SDS PAGE和Western blot方法对大肠杆菌培养上清液和细菌周质腔蛋白进行分析目的产物。采用亲和层析方法对细菌周质腔蛋白进行分离纯化并进行单链抗体滴度分析。结果　从96个克隆中筛选到10个阳性克隆,其中三个阳性信号较强,分别为A1、E1和G3。其A4 50 分别达到0 . 4 6 9、0 . 5 82和0 . 5 0 7。A型流感病毒核蛋白噬菌体单链抗体主要表达于细菌周质腔中,亲和纯化产物稀释4 0 .96倍,ELISA结果仍为阳性。结论　利用噬菌体抗体库技术,初步在大肠杆菌中表达了A型流感病毒噬菌体单链抗体。     

Seasonal influenza A virus in feces of hospitalized adults

In a cohort of hospitalized adults with seasonal influenza A in Hong Kong, viral RNA was frequently (47%) detected in stool specimens. Viable virus was rarely isolated. Viral RNA positivity had little correlation with gastrointestinal symptoms and outcomes. In vitro studies suggested low potential for seasonal influenza viruses to cause direct intestinal infections.     

2018 - 2019年云南省昭通市A型流感病毒基因特征分析

目的 分析2018 - 2019年云南省昭通市新甲型H1N1、H3N2亚型流感病毒流行情况及基因进化特征,为流感防控提供科学依据。方法 收集2018年1月 - 2019年10月昭通地区哨点医院流感样病例咽拭子标本2 863份进行real - time RT–PCR检测,用狗肾传代细胞( Madin - Darby canine kidney cell,MDCK)对核酸阳性样本进行病毒分离,分离得到的流感毒株采用血凝抑制实验进行鉴定分型。最终选取43株新甲型H1N1亚型流感毒株,及15株H3N2亚型毒株进行全基因组测序,使用MEGA 5.2软件进行序列分析。结果 系统发生分析表明95.35%(41 / 43)昭通新甲型H1N1分离株属于6B.1A支系, 93.33%(14/15)H3N2分离株属于3C.2a1b支系。与参考株A／California／07／2009相比,新甲H1N1分离株HA蛋白有7处抗原位点和1处受体结合位点发生变异,H3N2分离株有5处抗原位点和4处受体结合位点发生变异。结论 2018 - 2019年昭通地区流行的新甲型H1N1和H3N2亚型流感病毒毒株与WHO推荐的当年北半球的疫苗组分匹配,但H3N2亚型与WHO推荐的2019 - 2020年H3亚型疫苗株发生偏离,需加强监测。     

Discovery of highly potent agents against influenza A virus

We previously reported several new M2 inhibitors as active as amantadine against influenza A virus and validated by three types of in vitro assays. Herein, we further modified one of the most potent hits in a viral inhibition assay and conducted structure-activity relationship studies on this scaffold. As a result, compound 8e was identified to be the most potent inhibitor against wild-type influenza A virus, being nearly 240-fold more active than amantadine.     

流行性感冒病毒裂解疫苗质量控制与稳定性研究

[目的 ]　研制安全有效的流行性感冒病毒裂解疫苗。　 [方法 ]　将A1,A3和B三株流感病毒分别接种鸡胚 ,收取尿囊液 ,经乙醚裂解病毒 ,制成疫苗。　 [结果 ]　该疫苗主要技术指标均符合WHO规程要求 ,并具有良好的免疫效果 ,同时稳定性试验取得令人满意的结果。　 [结论 ]　该疫苗是安全有效的     

Transmission of equine influenza virus to English foxhounds

We retrospectively demonstrated that an outbreak of severe respiratory disease in a pack of English foxhounds in the United Kingdom in September 2002 was caused by an equine influenza A virus (H3N8). We also demonstrated that canine respiratory tissue possesses the relevant receptors for infection with equine influenza virus.