在高于米氏常数的底物浓度下用积分法测定尿酸酶活性

目的:以尿酸酶为模型,考察在底物浓度高于酶米氏常数(Km)时用积分法测定酶活性(Vm)的可靠性. 方法:用293 nm光吸收记录尿酸酶反应曲线. 用以反应时间为自变量的积分速度方程,以尿酸酶Km为常数而本底为非线性参数拟合尿酸酶反应曲线,搜寻对应最好拟合的Vm. 结果:此积分法测定Vm主要受剩余底物浓度影响,本底基本没有干扰. 剩余底物低于2.5 μmol/L时用10～70 μmol/L起始底物所得Vm无差异. 用25和70 μmol/L起始底物浓度时初速度和Vm都与酶量呈正比. 在此两种底物浓度下积分法的下限相同,且与初速度法下限无明显差异. 但用积分法测定酶活性的上限明显高于初速度法,而且起始底物浓度越低则差异越显著. 结论:在积分法中使用以反应时间为自变量的积分速度方程拟合酶反应曲线,在高于Km的底物浓度下能可靠测定酶活性.     

4NQO诱发大鼠舌黏膜癌变过程中胎盘型谷胱甘肽S-转移酶的表达

目的:观察大鼠实验性舌癌癌变过程中胎盘型谷胱甘肽S-转移酶(GST-P)的表达特点.方法:6周龄雄性SD大鼠42只,随机分为2组.实验组动物(n=30)的饮水中加入体积分数为0.001%的4-硝基喹啉-1-氧化物(4NQO)水溶液7 mg/(kg·d).对照组(n=12)则仅给予饮用水.实验第2周、4周、8周、12周、16周和26周末,处死大鼠,其中实验组各5只,对照组各2只.处死动物后,从会厌部至口底前缘整体分离舌体,观察其大体形态,常规组织处理,免疫组化法检测舌黏膜组织内GST-P.结果:对照组大鼠未出现任何舌黏膜病变,舌体标本均呈GST-P阴性.实验第8周末,实验组大鼠舌黏膜开始出现上皮异常增殖,实验第16周末即有1只大鼠发生舌癌,26周实验组大鼠均出现舌癌.2周时实验组大鼠舌黏膜内开始出现GST-P阳性细胞,随着时间的推移,GST-P阳性灶数目和大小逐渐增加.结论:GST-P可能与舌癌的发生有关.GST-P阳性反应早于大鼠舌黏膜的形态学改变,可作为反映癌前细胞代谢特点的良好标记.     

谷胱甘肽转硫酶P1基因型对溃疡性结肠炎易感性的影响

目的：探讨谷胱甘肽转硫酶（GST）P1基因型对溃疡性结肠炎（UC）易感性的影响。方法：用聚合酶链反应技术（PCR）检测56例溃疡性结肠炎（UC）和120例健康人群的GSTP1基因型，采用χ^2检验，分析比较GSTP1基因型频率在UC组和健康对照组之间的分布差异。结果：GSTP1突变基因型（VaL／VaL）频率在UC组中增高，与健康对照组相比较，差异有显著性（P=0．045）；根据临床特征对UC组进行分层分析，发现VaL／VaL基因型在远端UC中的分布频率高于广泛UC（P=0．022）。结论：GSTP1基因型与UC的易感性相关。     

Kinetic method for enzymatic analysis by predicting background with uricase reaction as model

Objective：To investigate the reliability for kinetic assay of substance with background predicted by the integrated method using uricase reaction as model. Methods： Absorbance before uricase action （Δ0） was estimated by extrapolation with given lag time of steady-state reaction. With Km fixed at 12.5μmol/L, background absorbance （Δb） was predicted by nonlinearly fitting integrated Michaelis-Menten equation to Candida utilis uricase reaction curve. Uric acid in reaction solution was determined by the difference （ΔA） between Δ0 and Δb. Results .Ab usually showed deviation 〈3% from direct assay with residual substrate done fifth of initial substrate for analysis. ΔA showed CV 〈5% with resistance to common interferences except xanthine, and it linearly responded to uric acid with slope consistent to the absorptivity of uric acid. The lower limit was 2.0 μmol/L and upper limit reached 30 μmol/L in reaction solution with data monitored within 8 min reaction at 0. 015 U/ml uricase. Preliminary application to serum and urine gave better precision than the direct equilibrium method without the removal of proteins before analysis. Conclusion .This kinetic method with background predicted by the integrated method was reliable for enzymatic analysis, and it showed resistance to common interferences and enhanced efficiency at much lower cost.     

抗生素致双硫仑样反应患者的临床表现及还原型谷胱甘肽干预的疗效探讨

目的探讨抗生素导致双硫仑样反应的临床表现及还原型谷胱甘肽治疗双硫仑样反应的疗效。方法分析23例双硫仑样反应患者应用抗生素与饮酒的关系及临床表现,观察还原型谷胱甘肽静脉滴注干预并辅以GICK液、补液扩容等治疗的疗效。结果本组23例患者中15例在应用还原型谷胱甘肽后10～30min内症状缓解,其余8例在使用GICK液辅助治疗过程中（30—180min）恢复。结论应用还原型谷胱甘肽治疗双硫仑样反应显效快,笔者认为有研究推广价值。     

维生素E对大鼠肝、肾和脑组织过氧化脂质含量及谷胱甘肽过氧化物酶活性的影响

本文探讨了维生素Ｅ（Ｖ＿Ｅ）对大鼠肝、肾和脑组织中过氧化脂质（ＬＰＯ）及谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ－Ｐｘ）活性的影响。结果表明，５．０×１０￣（－５），１．０×１０￣（－４），２．０×１０￣（－４），４．０×１０（－４），６．０×１０￣（－５）Ｖ＿Ｅ，各剂量组大鼠肝、肾中ＬＰＯ含量均低于对照组，而脑组织中仅２．０×１０￣（－４）和６．０×１０￣（－４）组与对照组间有差异。ＧＳＨ－Ｐｘ活性只有２．０×１０￣（－４）和４．０×１０￣（－４）组与相应对照组有差异。结果提示：Ｖ＿Ｅ有降低ＬＰＯ的作用，但Ｖ＿Ｅ所致的ＧＳＨ－Ｐｘ活性升高与ＬＰＯ降低有一致性的原因有待进一步研究。     

应用抛物线拟合法初探薄荷醇的最佳促透皮吸收浓度

目的 运用抛物线拟合法探讨薄荷醇的最佳促透皮吸收浓度.方法 以双氯芬酸钠为模型药物,采用不同浓度的薄荷醇通过离体大鼠皮肤渗透释药试验,在不同时间点取样,测定接受液中双氯芬酸钠的浓度,计算累积渗透量、渗透速率和增渗倍数等指标,运用抛物线拟合法评价不同浓度的薄荷醇的促渗效果.结果 不同浓度薄荷醇对双氯芬酸钠的透皮吸收均有促进作用,1.00％、2.00％、4.00％薄荷醇组与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01),而0.25％、0.50％薄荷醇组与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 经抛物线拟合法计算得出薄荷醇的最佳质量浓度为3.22％.     

金银花抗氧化活性整合指纹图谱的建立及其在质量评价中应用

[目的]建立评价金银花抗氧化活性的方法,比较不同产地金银花药材抗氧化活性大小,确定抗氧化活性成分的贡献率。[方法]采用在线快速活性筛选高效液相色谱-二极管阵列检测器-1,1-二苯基-2-苦基肼(HPLC-DAD-DPPH)甲醇枸橼酸在线体系,建立金银花抗氧化活性指纹图谱。[结果]确定了绿原酸和异绿原酸A为其主要的抗氧化活性成分,以金银花中8个主要活性成分为抗氧化活性指标对不同产地金银花的质量进行控制,确定了广州野生金银花质量最佳。[结论]该方法简便可行,基于活性整合指纹图谱技术筛选药材中的抗氧化活性成分并以活性成分为指标,为全面有效评价中药质量提供了可借鉴的模式。     

化学发光法测定白果白蛋白的体外抗氧化活性

目的研究白果白蛋白的体外抗氧化活性、对DNA损伤的保护作用及其作用机制。方法以莲房原花青素和小牛血清蛋白为对照,分别采用邻苯三酚-鲁米诺化学发光体系测定了白果白蛋白对超氧阴离子的清除作用,硫酸铜-邻菲啉-抗坏血酸-双氧水、硫酸亚铁-鲁米诺-双氧水和硫酸亚铁-鲁米诺3个体系测定了白果白蛋白对羟自由基的清除作用,双氧水-鲁米诺体系测定了白果白蛋白对体外双氧水的清除作用,采用硫酸铜-邻菲啉-抗坏血酸-双氧水-脱氧核糖核酸体系测定了白果白蛋白对体外DNA损伤的保护作用。结果白果白蛋白具有较好的体外清除活性氧和保护DNA损伤的活性,但在硫酸亚铁-鲁米诺-双氧水和双氧水-鲁米诺化学发光体系中表现出"促氧化"作用。结论采用化学发光体系衡量白果白蛋白的抗氧化活性具有选择性。     

PCR-EIA法检测端粒酶活性及其临床应用

目的 :探讨用PCR EIA法检测人端粒酶活性及其临床应用。方法 :利用kim法处理细胞和组织标本及扩增端粒酶产物 ,引物TS用生物素标记 ,CX用地高辛标记 ,PCR产物与包被有链亲和素的酶标板结合 ,并与酶标抗地高辛抗体反应 ,用TMB显色。结果 :PCR EIA法与TRAP 银染色法有很好的相关性 ,批内变异系数CV为 4 .138% ,在 30例各种恶性肿瘤组织中端粒酶活性检出率为 90 % ,2 8例癌旁组织中为 7.1%。结论 :该法具有较好的灵敏度与重复性 ,无同位素污染 ,较银染色法更为简便、快速 ,检测成本低 ,无需特殊仪器 ,适合于各级医院推广。     

标准曲线法测定强碱弱酸盐含量

一般认为弱一元碱的ＣｂＫｂ大于１０－８时可直接用盐酸标准溶液滴定．在ＣｂＫｂ小于１０－８的情况下，根据在溶液中的电荷平衡推导出滴定消耗的酸标准溶液摩尔数与弱一元碱摩尔数之间的线性关系及分析误差△Ｖｅ／Ｖｅ小于１．０％的滴定终点范围，以此为依据提出标准曲线法测定强碱弱酸盐含量的方法．实验结果表明，ＣｂＫｂ大于１０－１２的条件下可以获得满意的结果．     

人胰淀素类似物普兰林肽体外活性测定方法的建立

建立体外人胰淀素类似物普兰林肽活性测定的方法,为普兰林肽及其制剂的质量控制提供可靠的细胞检测方法。将L6细胞培养并分化成有明显肌管的成熟骨骼肌细胞,采用葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法(GOD-POD)检测普兰林肽对高糖培养环境下骨骼肌细胞葡萄糖吸收的影响。结果显示,在1×10-9～1×10-5mol/L的浓度范围内,普兰林肽能显著增加分化后的L6细胞的糖吸收量,在16 h达到最大值。普兰林肽浓度的负对数(x)与细胞糖吸收增加量(y)间呈现出良好的线性关系(y=-4.750x+59.54,R2=0.991 9)。应用本实验建立的方法检测了市售普兰林肽醋酸盐注射剂的活性,结果显示1×10-6、1×10-7和1×10-8mol/L的普兰林肽注射剂作用于分化的L6细胞16 h,细胞的糖吸收增加率为(61.89±9.54)%,(43.68±10.06)%和(33.30±13.03)%(P<0.01);与单用胰岛素组对比,普兰林肽与胰岛素联合使用能显著提高分化后的L6细胞的糖吸收量(P<0.05),与普兰林肽注射剂的临床使用结果一致。本实验为普兰林肽的活性测定提供了一种稳定可靠的细胞替代模型。     

小鼠脂肪组织中免疫细胞分离方法的优化及亚群在肥胖小鼠中的作用

目的 尝试提供一种高效的、低损伤的分离脂肪组织免疫细胞的方式,以期为肥胖过程中免疫学机制的研究提供技术支持。方法 首先分离正常小鼠附睾周围的脂肪组织,并采用机械研磨或酶消化(包括Ⅱ型/Ⅳ胶原酶、Liberase酶)的方式分离其中的免疫细胞,并结合流式细胞检测技术筛选最高效的免疫细胞分离方式。再通过高脂饮食(high fat diet,HFD)建立肥胖小鼠模型,并进一步分析肥胖过程中,小鼠脂肪组织中巨噬细胞及T淋巴细胞的比例及亚群变化。结果 比较不同酶消化及机械研磨方式发现,通过高纯度的Liberase酶消化的方式获得CD45⁺免疫细胞死亡率最低,活细胞数最多;而通过机械研磨方式获得免疫细胞死亡率最高,活细胞数最低。与正常饮食小鼠相比,肥胖小鼠脂肪组织中固有免疫细胞如中性粒细胞、巨噬细胞比例增加,尤其是M1型巨噬细胞比例增加,M2型降低,同时巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)增加,髓样细胞表达激发受体1(triggering receptor expressed on myeloid cells 1,TREM1)表达增加。而适应性免疫细胞中,T淋巴细胞比例增加,特别是Th1/Treg细胞的比例增加最为明显。结论 建立了一种从小鼠脂肪组织中高效获取有活力的免疫细胞的方法,并证实肥胖小鼠脂肪组织中巨噬细胞、T淋巴细胞比例增加,促炎作用增强,它们在诱发脂肪组织炎症反应中发挥重要作用。     

HPLC标准曲线法测定氟康唑杂质校正因子的测量不确定度评定

通过对HPLC标准曲线法测定氟康唑杂质校正因子的实验过程进行不确定度评定,探索影响杂质校正因子测定准确性的主要共性因素,为提高测定结果的准确性提供研究思路。首先分别建立了氟康唑及其杂质A、B、C、D、F、I相应的拟合直线,计算各杂质及其对应主成分的拟合直线斜率之比作为该杂质的校正因子。接着以GUM法为基础,根据已经建立的校正因子测定过程的不确定度评定方案,分别计算得到标准曲线法测定各杂质校正因子的不确定度。氟康唑杂质A、B、C、D、F、I校正因子分别为1.068±0.046、0.102±0.005、0.0582±0.003、1.382±0.121、0.802±0.067和1.383±0.119,其中包含因子k=2。最后计算各不确定度分量的贡献率,氟康唑杂质A、B、C、D、F、I校正因子测定的相对合成标准不确定度urel(f)中主成分和杂质的线性方程斜率不确定度urel(K)贡献率之和占比均大于85%;在线性方程斜率不确定度urel(K)中,12组数据中的8组溶液浓度不确定度贡献率占比在80%以上,其中由对照品含量在溶液浓度中引入的不确定度贡献率约为80%。由此可见,标准曲线法测定杂质校...     

上海地区正常牙合Tweed-Merrifield法X线头影分析

目的：为正畸临床诊断和矫治设计提供参考。方法：采用Ｔｗｅｅｄ－Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ法对上海地区６６例恒牙期正常牙合人Ｘ线头影测量分析。结果：得出Ｔｗｅｅｄ－Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ法头影测量正常值范围，并发现ＦＭＡ女大于男、后面高及面高比率男大于女。结论：男性下颌支发育大于女性。     

NCCLS微量法测定妇康乐洗剂体外抗菌活性

目的：对妇康乐洗剂进行体外抗菌试验,测定其ＭＩＣ值和ＭＢＣ值。方法：采用美国国家临床试验标准化委员会（ＮＣＣＬＳ）建议的《酵母菌的液基稀释法抗真菌药物敏感试验参考方案》进行试验。结果：测得妇康乐洗剂最低抑菌浓度（ＭＩＣ）为１．８～１９５．３ｍｇ／ｌ和最低杀菌浓度（ＭＢＣ）为１．８～１１５８．５ｍｇ／ｌ。结论：妇康乐洗剂对妇康乐洗液对常见细菌具有显的抗菌作用;对铜绿假单胞菌无作用（ＭＩＣ＞１８７５     

A study of the effect of magnetized water on enzyme activities by potentiometric enzyme electrode method

Summary A very promising glutamate decarboxylase electrode, which has linear response range of 5.6 × 10^™5 ™ 1.2 × 10^™2 mol/L, Nernstian slope of 50 mV/decade, detection limit of 3.2 ×10^™5 mol/L and response time less than 3 min, has been designed to observe and evaluate quantitatively the effect of magnetized water on enzyme activities by potentiometric enzyme electrode method. It was found that the activity of glutamate decarboxylase can increase by 30 % in magnetized water. The mechanism of increased enzyme activity was discussed in the present paper. Such a new finding will probably lead to some new explanations for the physiological and biological mechanism of the effect of magnetized water on living organisms, thus providing a new approach to the study of the effect of magnetized water.     

应用正交设计探讨肾虚胚胎着床障碍小鼠病症结合模型制作中药物的最佳配比

目的探索羟基脲及米非司酮在肾虚胚胎着床障碍小鼠病症结合模型制作中的最佳配比。方法以羟基脲、米非司酮作为影响因素,选择L9(34)表安排实验,观察羟基脲及米非司酮不同剂量配比组合对小鼠肾虚胚胎着床障碍模型的影响。结果研究范围内,当羟基脲因素A取1水平、米非司酮因素B取1水平时(AⅠBⅠ),妊娠第5天、第8天时子宫内胚胎着床点数、子宫指数是最少的。在肾虚胚胎着床障碍小鼠模型的制作中,米非司酮的贡献度最大,羟基脲的贡献度次之,一定程度上,胚胎的着床点和子宫指数与羟基脲和米非司酮的用量成反比。结论综合多项指标,在研究范围内,AⅠBⅠ较为合适作为肾虚胚胎着床障碍小鼠模型用于药物干预研究。     

皂角刺气化爆鸣液体外抑菌作用及成分的初步研究

目的研究皂角刺药材气化爆鸣液的抑菌作用及成分。方法采用体外抑菌实验对皂角刺气化爆鸣提取液抑菌效果进行测定,并与其水煎液和醇提液进行了比较;同时采用HPLC法对3种提取液进行了分析比较,并对皂角刺气化爆鸣液成分进行了质谱扫描。结果气化爆鸣法提取的皂角刺药材的有效成分抑菌效果较好,且其成分与另2种提取液的成分不同。结论采用专利技术＂气化爆鸣法＂所提取的药材有效成分质量浓度较高,且提取液颗粒直径为50～100 nm,这对于纳米中药的发展是个很好的尝试。     

肝癌瘤苗激活的TIL对K562细胞杀伤活性的研究

目的：为也提高ＴＩＬ的抗肿瘤细胞活性。方法；使用冷冻方法制成肝癌瘤苗。用于激活ＴＩＬ，观察基杀伤Ｋ５６２细胞活性的改变。结果：经瘤苗激活的ＴＩＬ在培养扩增１０天，２０天，３０天和４０天对Ｋ５６２细胞的杀伤率均有明显提高，其中以培养扩增３０天时为最高。