首页 | 本学科首页   官方微博 | 高级检索  
相似文献
 共查询到20条相似文献,搜索用时 46 毫秒
1.
目的探讨炎症因子TNF-α对滋养细胞中FOXO3a表达的影响及FOXO3a在TNF-α对滋养细胞的生物学功能影响中的作用及相关机制的研究。方法 RT-PCR及Western blot实验检测TNF-α是否影响滋养细胞HTR-8/SVneo中FOXO3a的mRNA及蛋白表达;应用siRNA抑制滋养细胞FOXO3a表达,采用CCK-8、Transwell和流式细胞术分别检测滋养细胞的增殖、侵袭和凋亡方面的影响,最后利用Western blot实验检测TNF-α对转染si-FOXO3a的滋养细胞中PI3K/AKT信号通路的影响。结果 TNF-α能够显著促进滋养细胞中FOXO3a的表达;细胞生物学行为实验结果表明TNF-α能够明显抑制滋养细胞的增殖、侵袭能力并促进其发生凋亡,而抑制细胞内FOXO3a的表达可显著削弱上述现象;Western blot实验结果表明TNF-α可明显促进滋养细胞内PI3K/AKT信号通路中p-PI3K、p-AKT蛋白的表达,而抑制细胞内FOXO3a的表达后,TNF-α对PI3K、p-AKT蛋白的促进作用明显被削弱。结论 FOXO3a可以通过PI3K/AKT信号通路介导TNF-α对滋养细胞增殖、侵袭能力抑制并促进其发生凋亡。  相似文献   

2.
放线菌素D/TNF-α诱导大鼠肝干细胞凋亡及HGF的拮抗作用   总被引:2,自引:0,他引:2  
目的 研究TNF-α、肝细胞生长因子(HGF)在肝干细胞的增殖、分化调控及凋亡中的作用。方法 用大鼠肝干细胞系WB F-344细胞进行实验,用MTT法检测细胞毒作用;用DNA凝胶电泳及流式细胞仪检测细胞凋亡;用Western blot方法检测磷酸化MAPK及PI3K蛋白的表达。结果 发现TNF-α单独对WB F-344细胞无明显作用;而TNF-α对放线菌素D(ActD)致敏的WB F-344细胞有明显细胞毒作用。进一步,发现TNF-α能够诱导ActD致敏的WB F-344细胞发生凋亡,在作用9h即出现细胞凋亡(13.60%),48h达高峰(51%),并且这种凋亡呈剂量效应关系。我们还发现,HGF可以明显拮抗ActD/TNF-α诱导的WB F-344细胞凋亡,并且呈剂量效应关系。Western blot结果显示,HGF刺激后,磷酸化MAPK蛋白高表达,表明HGF激活了MAPK途径。我们进一步用PI3K特异的抑制剂WT阻断PI3K途径,发现HGF的抗凋亡作用被阻断;然而,用MAPK特异抑制剂U0126阻断MAPK途径后,却并不影响HGF的抗凋亡作用。结论 TNF-α能诱导ActD致敏的肝干细胞发生凋亡,而HGF则对这种细胞凋亡有明显的拮抗作用;虽然HGF能够激活PI3K及MAPK 2条途径,但其抗凋亡作用是由PI3K途径传导的。  相似文献   

3.
PI3K/AKT途径在HGF介导肝干细胞抗凋亡调控中的作用   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的研究PI3K(磷脂酰肌醇3激酶)和MAPK(丝裂原活化蛋白激酶)途径如何参与肝干细胞的凋亡调控;探讨PI3K和MAPK信号途径在HGF介导的抗凋亡信号中的调控。方法用大鼠肝干细胞系WBF-344细胞进行实验;用流式细胞仪检测细胞及DNA凝胶电泳及流式细胞仪检测细胞凋亡;用Western blot方法检测磷酸化MAPK及PI3K蛋白的表达。结果发现TNF-α对ActD致敏的WBF-344细胞能诱导凋亡,并且这种细胞凋亡呈现剂量效应关系;HGF对ActD/TNF—α诱导Vd3F-344细胞凋亡具有保护作用,并且这种保护作用呈剂量效应关系;Western blot结果显示,在WB细胞,HGF确实能够激活ERK、p38MAPK、PI3K/AKT信号转导途径;进一步用特异的抑制剂阻断ERK及p38MAPK途径后,并不能改变HGF对TNF-α诱导凋亡的拮抗作用,而阻断PI3K/AKT途径后,HGF的抗凋亡作用被抑制。结论TNF-α能诱导ActD致敏的肝干细胞发生凋亡,而HGF则对这种细胞凋亡有明显的拮抗作用;ERK1/2和p38MAPK途径的激活并不参与HGF介导的抗凋亡作用,HGF的抗凋亡作用是通过PI3K途径转导的。  相似文献   

4.
目的 探讨磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K)抑制剂LY-294002对心梗大鼠心肌肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)表达的影响。方法 45只SD大鼠,随机分为假手术组、心肌梗死组和PI3K抑制剂组。分别用Western blot和RT-PCR方法检测各组大鼠梗死区及其周围心肌TNF-α蛋白和TNF-α mRNA表达变化。结果 心肌梗死组心肌梗死区及其周围心肌TNF-α蛋白、TNF-α mRNA表达水平显著高于假手术组(p<0.05),PI3K抑制剂组心肌梗死区及其周围心肌TNF-α蛋白、TNF-α mRNA表达水平则明显低于心肌梗死组(p<0.05)。结论 PI3K能够上调心肌梗死大鼠TNF-α的表达。  相似文献   

5.
目的 探讨磷脂酰肌醇3激酶(PI3-K)对TNF-α诱导的大鼠气道平滑肌细胞(ASMC)增殖、凋亡和转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响.方法 以肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及PI3-K特异性抑制剂wortmannin作为工具药,分别将TNF-α、TNF-α+wortmannin接种ASMC,置37℃,5%CO2培养箱中培养.逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测PI3-Kp85α、TGF-β1 mRNA表达,免疫细胞化学染色法检测PI3-Kp85α、PCNA、Bcl-2蛋白表达及定位,Sandwich ELISA检测NF-κB活性,四甲基偶氮唑蓝(MTT)微量比色法测定ASMC增殖,AnnexinV/PI双标记流式细胞仪分析法检测细胞凋亡,ELISA测定TGF-β1蛋白质含量.结果 (1)培养的ASMC PI3-K p85α的阳性定位在胞浆.TNF-α组ASMC PI3-Kp85α mRNA及蛋白表达水平均显著高于对照组及TNF-α+wortmannin组(P<0.01);(2)TNF-α组ASMCNF-κB活性与对照组相比显著增高(P<0.01),TNF-α+wortmannin组NF-κB活性与TNF-α组相比显著降低(P<0.01);(3)TNF-α组ASMC的增殖反应与对照组及TNF-α+wortmannin组相比显著增加(P<0.01);TNF-α组细胞凋亡率与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05),TNF-α+wortmannin组细胞凋亡率显著高于TNF-α组及对照组(P<0.01).(4)TNF-α组ASMC的PCNA、Bcl-2蛋白表达量均显著高于对照组及TNF-α+wortmannin组(P<0.01);(5)TNF-α组ASMC的TGF-β1的mRNA表达水平、培养液上清TGF-β1的蛋白质含量均显著高于对照组及TNF-α+wortmannin组(P<0.01).结论 PI3-K可能参与调控TNF-α诱导的大鼠气道平滑肌细胞的增殖、凋亡及TGF-β1的表达和分泌,NF-κB作为PI3-K的下游信号参与此过程.  相似文献   

6.
目的研究前列腺素D2(PGD2)通过D类前列腺素受体2(DP2)对人气道上皮细胞黏液分泌的效应及其作用机制。方法用PGD2刺激人气道上皮16HBE细胞,以DP2拮抗剂AZD6430、DP1拮抗剂BWA868C及三磷酸肌醇蛋白激酶(PI3K)抑制剂LY294002为干预因素,将细胞分为对照组、PGD2刺激组、PGD2刺激+AZD6430组、PGD2刺激+BWA868C组、PGD2刺激+LY294002组。ELISA检测细胞中肿瘤坏死因子(TNF)-α、白介素(IL)-4和IL-13的蛋白含量,激光共聚焦技术检测细胞内黏蛋白(MUC)5AC含量;Western blot检测DP2、DP1、PI3K和磷酸化AKT(p-AKT)表达水平;实时荧光定量PCR检测TNF-α、IL-4、IL-13和MUC5AC mRNA表达水平。结果 PGD2刺激后MUC5AC、TNF-α、IL-4、IL-13、DP2、PI3K和p-AKT表达显著高于对照组(P0.05);AZD6430拮抗组中MUC5AC、TNF-α、IL-4、IL-13、PI3K及p-AKT表达较PGD2刺激组明显减弱(P0.05);LY294002组TNF-α、IL-4、IL-13和MUC5AC表达较PGD2组亦显著减弱(P0.05)。结论 PGD2激活人气道上皮细胞的DP2受体,活化PI3K/AKT引起黏液高分泌。  相似文献   

7.
目的研究PI3K p85α在大肠癌侵袭和转移过程中的表达及意义。方法用免疫组织化学二步法检测试剂盒检测123例大肠病变组织标本中PI3K p85α的表达情况,用等级相关的秩和检验分析PI3K p85α在大肠病变组织中表达的意义及其与临床病理特征间的关系;培养已成功沉默PI3K p85α表达的大肠癌Lovo细胞(PI3K p85α/RNAi-Lovo)及Lovo对照组细胞,肿瘤细胞侵袭实验(transwell)和划痕愈合实验观察PI3K p85α对lovo细胞的侵袭和转移能力的影响,明胶酶谱检测基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的表达。结果 PI3K p85α蛋白在大肠癌癌变过程中表达阳性率呈递增趋势,差异有统计学意义(P〈0.05)。PI3K p85α/RNAi-Lovo细胞组侵袭和转移能力明显低于对照组;MMP-2表达量及活性显著降低。结论 PI3K p85α蛋白可能在大肠癌的侵袭和转移中起重要作用,沉默PI3K p85α基因可以显著抑制其侵袭、转移和基质金属蛋白酶的分泌及活性,因而PI3K p85α影响lovo细胞的侵袭和转移可能与调控基质金属蛋白酶分泌密切相关。  相似文献   

8.
目的探究磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)的不同亚型在三型酪氨酸激酶受体KIT突变介导的信号传递及细胞增殖中的作用。方法在BaF3细胞中稳定表达野生型KIT及胃肠间质瘤中常见的KIT突变V560D、 W557K558del,分别用PI3Kα、 PI3Kβ、 PI3Kδ亚型特异性抑制剂或者广谱PI3K抑制剂处理细胞,免疫沉淀法和Western blot法检测KIT及其下游信号活化情况。胃肠间质瘤GIST-T1细胞采用相同药物及浓度处理,免疫共沉淀和Western blot法检测KIT及其下游信号的活化情况,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡。结果与对照组相比,在表达野生型KIT及其突变体的BaF3细胞中, PI3Kδ亚型特异性抑制剂对KIT及其下游信号分子蛋白激酶B(AKT)和胞外信号调节激酶(ERK)活化的抑制作用最强,其次为PI3Kα和PI3Kβ亚型特异性抑制剂。在GIST-T1细胞中, PI3Kβ亚型特异性抑制剂对KIT及其下游信号活化的抑制作用最强,其次为PI3Kδ和PI3Kα亚型特异性抑制剂。结论在BaF3细胞中, PI3Kδ亚型在KIT活化及其下游信号传递中起主要作用,而在GIST-T1细胞中, PI3Kβ亚型在KIT活化及其下游信号传递中起主要作用,这些结果表明不同PI3K亚型在KIT突变介导的细胞转化中起不同作用,且在不同的细胞中其作用也有不同。  相似文献   

9.
目的 探讨TLR4、PI3K和NF-kB在气道上皮细胞诱导的哮喘气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cells,ASMCs)迁移中的作用.方法 细胞消化法培养原代哮喘ASMCs,TNF-α刺激上皮细胞系RTE细胞收集细胞培养上清液,ELISA检测上清液中IL-8和RANTES的含量,以TLR4抗体、渥曼青霉素(Wortmannin)、二硫代氨基吡咯烷(PDTC)作为工具药,改良Boyden趋化小室检测其在上皮细胞诱导的哮喘ASMCs跨膜迁移中的作用.结果 各TNF-α组RTE培养上清液中IL-8和RANTE水平均显著增高(P<0.01),20 ng/ml组较其他组显著增高(P<0.01).各哮喘组ASMCs的跨膜迁移数较正常组均显著增加(P<0.01),各处理组哮喘ASMCs的跨膜迁移数亦较哮喘组明显增加(P<0.01),TNF-α+TLR4抗体组、TNF-α +Wortmannin组和TNF-α+Wortmannin+PDTC组哮喘ASMCs跨膜迁移数较TNF-α组明显减少(P<0.01);TNF-α+Wortmannin +PDTC组ASMCs跨膜迁移数亦低于Wortmannin组(P<0.05).结论 TLR4/PI3K信号相关分子参与哮喘气道上皮细胞诱导的ASMCs跨膜迁移,可能是哮喘气道重塑的机制之一.  相似文献   

10.
目的主要研究巨噬细胞中核受体结合SET结构域蛋白3(NSD3)对脂多糖(LPS)触发的肿瘤坏死因子α(TNF-α)的调控作用,并探讨其调控机制。方法以小鼠腹腔巨噬细胞和RAW264. 7细胞作为细胞模型。100 ng/m L LPS刺激小鼠腹腔巨噬细胞,采用实时定量PCR检测NSD3 mRNA水平,Western blot法检测NSD3蛋白水平;在RAW264. 7细胞中过表达NSD3或采用RNA干扰技术敲低腹腔巨噬细胞中NSD3的表达,ELISA检测NSD3对LPS触发的TNF-α分泌的影响; Western blot法检测敲低NSD3对LPS触发的核因子κB p65(NF-κBp65)信号通路的影响;荧光素酶法检测NSD3对NF-κBp65介导的TNF-α基因转录活性的影响;染色质免疫沉淀实验检测TNF-α基因启动子区组蛋白H3的36位赖氨酸(H3K36)甲基化的募集。结果 LPS抑制巨噬细胞中NSD3的表达;过表达NSD3抑制LPS触发的TNF-α的产生,敲低NSD3则促进LPS触发的TNF-α的产生,但对NF-κB活化无影响; NSD3抑制NF-κBp65介导的TNF-α基因的转录活化,促进TNF-α基因启动子区的H3K36二甲基化。结论 NSD3促进TNF-α基因启动子区H3K36的双甲基化,抑制TNF-α的表达。  相似文献   

11.
目的探究巨噬细胞表面Toll样受体2(TLR2)在介导金黄色葡萄球菌(SA)诱导哮喘炎症反应中的分子机制。方法通过SA刺激小鼠RAW264.7巨噬细胞系建立炎症反应模型,分别用TLR2小干扰RNA(si RNA)和磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)处理。Western blot法检测细胞裂解液中TLR2、髓样分化因子88(My D88)、PI3K、核因子κBp65(NF-κBp65)磷酸化的NF-κBp65(p-NF-κBp65)以及自噬蛋白beclin-1和微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)的水平,ELISA检测细胞上清液肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)的分泌水平,激光共聚焦显微镜观察自噬溶酶体的数量。结果 SA刺激巨噬细胞活化TLR2等多种信号通路。TLR2 si RNA显著抑制PI3K、p-NF-κBp65以及自噬蛋白beclin-1和LC3B的表达,此外,自噬溶酶体的数量和TNF-α和IL-6的分泌也显著减少。3-MA在抑制自噬和炎症反应方面与TLR2 si RNA的作用效果相同。结论 TLR2通过PI3K信号通路调控金黄色葡萄球菌诱导巨噬细胞的炎症反应和自噬。  相似文献   

12.
目的 探讨磷酸肌醇-3激酶/蛋白激酶B(phosphoinositide 3-kinase/protein kinaseB,P13K/Akt)通路对脂多糖 (lipopolyssacride,LPS)预处理体外培养大脑皮质小胶质细胞高迁移率族蛋白1(high mobility group box-1protein 1,HMGB-1)表达的影响.方法 体外分离纯化小鼠大脑皮质小胶质细胞,纯度鉴定后按未刺激对照组、0.01μg/mL LPS单次刺激组(18 h)、1μg/mL LPS刺激组(24 h)、预处理组、PI3K/AKT通路抑制组(2 h)分别进行处理.收获各组细胞与培养上清,采用酶联免疫吸附试验(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法检测肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)分泌水平,免疫荧光法检测HMGB-1在细胞中的定位情况,Western blot 检测 HMGB-1和磷酸化Akt的表达水平.结果 PI3K/Akt通路抑制后,LPS预刺激小胶质细胞产生的TNF-α水平较1μg/mL单次刺激组、预刺激组水平降低(P=0.043;P=0.046);磷酸化Akt表达降低,小胶质细胞HMGB-1表达以及向胞浆中转位呈现降低趋势.结论 PI3K/Akt通路在LPS预激诱导的HMGB-1活化中起正性调节作用,这些分子及调节通路的变化参与LPS耐受诱导的重新调配过程,从而共同影响小胶质细胞的最终效应.  相似文献   

13.
目的探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导PC12细胞凋亡以及对bax和bcl-xl基因表达的影响。方法以PC12细胞作为多巴胺神经元细胞模型,用MTT法测定不同浓度TNF-α对PC12细胞增殖的作用;用PI和AnnexinV进行细胞的双染凋亡检测及电镜检测PC12细胞凋亡;应用RT-PCR检测bax和bcl-xl基因mRNA表达的变化,用Westernblot检测bax和bcl-xl蛋白表达的变化。结果 TNF-α(1~100ng/ml)呈浓度依赖方式抑制PC12细胞增殖。30ng/mlTNF-α作用PC12细胞,PI双染及电镜均显示PC12细胞凋亡。RT-PCR表明药物作用后bcl-xlmRNA表达减少而baxmRNA表达增多;免疫印迹显示药物作用后bcl-xl蛋白表达减少而bax蛋白表达增多。结论 TNF-α诱导PC12细胞凋亡且呈量效关系,可能与bax和bcl-xl相关。  相似文献   

14.
目的 评价淫羊藿苷对七氟醚诱发的术后认知功能障碍(POCD)的影响,探讨其作用机制。方法 将小鼠分为对照组、模型组(七氟醚麻醉+剖腹探查术建立小鼠POCD模型)、淫羊藿苷组、PI3K抑制剂组、淫羊藿苷+抑制剂组、PI3K激活剂组,每组12只。分别采用条件恐惧实验、Y迷宫实验评价小鼠认知功能障碍;ELISA检测血清TNF-α、IL-1β及BDNF水平;取海马组织,尼氏染色观察神经元形态变化;TUNEL染色检测神经元凋亡率;免疫荧光法检测M1型、M2型激活小胶质细胞及其标志物表达水平;Western blot检测TNF-α、IL-1β、IL-10、GSK-3β磷酸化蛋白、Bcl-2表达。结果 与对照组相比,模型组小鼠出现认知功能损伤,海马神经元损伤及凋亡严重,海马组织中小胶质细胞M1型极化介导的促炎反应高于M2型极化介导的抗感染反应,PI3K/Akt-GSK-3β通路及其介导的抗感染及抗凋亡蛋白表达降低(P<0.05)。淫羊藿苷及PI3K激活剂干预处理,均可促进PI3K/Akt-GSK-3β通路及其介导的抗感染及抗凋亡反应,促进海马小胶质细胞M2型极化介导的抗感染反应,缓解海马神经元...  相似文献   

15.
目的:探讨内源性硫化氢(hydrogen sulphide,H_2S)对重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)肠道动力的调控及相关机制。方法:构建SAP大鼠模型,观察大鼠粪便颗粒的排出情况及肠道炎症水平;采用SAP大鼠血浆、TNF-α和IL-6处理大鼠肠道平滑肌细胞,RT-qPCR、Western blot和免疫荧光染色等方法检测H_2S合成酶胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionine-γ-lyase,CSE)、胱硫醚-β-合成酶(cystathionine-β-synthase,CBS)、转录因子Sp1和PI3K/Akt信号通路关键蛋白的表达;采用PI3K特异性抑制剂LY294002处理细胞或转染Sp1的干扰序列至细胞中,以验证PI3K/Akt/Sp1信号通路在肠道H_2S产生过程中的调控作用。结果:SAP大鼠排便减少(P0.05),内源性H_2S生成增加(P0.05),血清TNF-α和IL-6含量增加(P0.05)。SAP大鼠血浆、TNF-α和IL-6可诱导肠道平滑肌细胞CSE和CBS的表达上调(P0.05)。阻断PI3K/Akt/Sp1信号通路可以显著抑制肠道平滑肌细胞CSE和CBS的表达(P0.05)。结论:炎症反应介导的PI3K/Akt/Sp1信号通路激活和内源性H_2S产生增多是SAP肠道动力减退的潜在机制。  相似文献   

16.
目的:探讨下调微丝附着梁蛋白(Girdin)基因表达对肺癌细胞增殖凋亡、免疫因子IL-8和TNF-α及顺铂化疗敏感性的影响。方法:以人胚肺成纤维细胞MRC5作为对照细胞,RT-PCR及Western blot分别检测Girdin在PC9、SPC-A-1、H322、H1299、A549肺癌细胞中的表达; SPC-A-1细胞分为空白对照组、阴性对照组、Girdin-siRNA组、顺铂组和Girdin-siRNA+顺铂组,各组细胞培养48 h,Western blot检测Girdin-siRNA转染SPC-A-1细胞的效果; MTT法检测各组细胞活力;流式细胞术检测各组细胞凋亡率; RT-PCR检测IL-8和TNF-α的mRNA表达; Western blot检测增殖相关蛋白细胞增殖核抗原(PCNA)、凋亡相关蛋白含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)及PI3K/AKT信号通路磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)和磷酸化的丝氨酸苏氨酸激酶(p-AKT)的蛋白表达。结果:肺癌细胞中Girdin的mRNA及蛋白表达均明显高于在MRC5细胞表达(P0. 05); Girdin-siRNA转染SPC-A-1细胞后Girdin的表达显著降低(P0. 05);与空白对照组比较,Girdin-siRNA组和顺铂组OD值及IL-8、TNF-α、PCNA、PI3K、p-AKT的表达均显著降低,细胞凋亡率及Caspase-3和Bax表达均显著升高(P0. 05); Girdin-siRNA+顺铂组OD值及IL-8、TNF-α、PCNA、PI3K、p-AKT的表达均显著低于Girdin-siRNA组和顺铂组,细胞凋亡率及Caspase-3和Bax表达均显著高于Girdin-siRNA组和顺铂组(P0. 05)。结论:抑制肺癌细胞Girdin表达可通过降低癌细胞增殖、诱导细胞凋亡和提高免疫增强乳腺癌顺铂化疗敏感性,对细胞增殖凋亡的机制可能与下调PI3K/AKT信号通路有关。  相似文献   

17.
目的研究肺炎链球菌热休克蛋白40(heat shock protein 40,HSP40)诱导巨噬细胞免疫应答的机制。方法表达重组HSP40蛋白,并在体外诱导培养小鼠骨髓来源巨噬细胞(bone marrow derived macrophage,BMDM);使用NF-κB、PI3K和JAK的抑制剂预处理BMDM后,ELISA检测其对HSP40诱导的TNF-α和IL-6表达的影响;HSP40刺激BMDM后,Western blot法检测NF-κBp65和Akt的磷酸化水平。结果 NF-κB和PI3K抑制剂可显著下调IL-6和TNF-α的表达,而JAK抑制剂无此效果。HSP40可增强NF-κBp65和Akt磷酸化水平。结论 NF-κB和PI3K-Akt通路参与调控肺炎链球菌HSP40诱导BMDM免疫应答的过程。  相似文献   

18.
目的探究白细胞介素37(IL-37)对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的内皮祖细胞损伤和炎症的影响。方法从健康人的外周血中分离并培养内皮祖细胞,使用不同质量浓度的ox-LDL刺激后以CCK-8检测细胞活力,并用real-time PCR和Western blot检测IL-37 mRNA和蛋白水平表达。然后将内皮祖细胞分成3组:对照组、ox-LDL组和ox-LDL+IL-37组,其中对照组中细胞不进行任何处理,ox-LDL组细胞使用适宜质量浓度的ox-LDL处理24 h,ox-LDL+IL-37组细胞先使用10 ng/ml IL-37重组蛋白预处理2 h后,再加入适宜质量浓度的ox-LDL刺激24 h。CCK-8检测各组细胞活力,BrdU检测细胞增殖情况,Western blot检测凋亡相关蛋白剪切型Caspase-3、Bax、Bcl-2,NF-κB活化相关蛋白NF-κB p65、磷酸化NF-κB p65(p-p65)以及PI3K/Akt通路蛋白表达水平,ELISA检测细胞上清液中IL-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α的含量。结果 ox-LDL显著抑制内皮祖细胞的活力,降低细胞中IL-37 mRNA和蛋白表达,且具有剂量依赖性(P0.05)。与对照组相比,ox-LDL组中细胞活力和BrdU阳性细胞数目均降低,剪切型Caspase-3和Bax表达、p-p65/p65以及IL-6和TNF-α含量增加,Bcl-2表达、p-PI3K/PI3K和p-Akt/Akt降低(P0.05)。与ox-LDL组相比,ox-LDL+IL-37组细胞活力和BrdU阳性细胞数目均增加,剪切型Caspase-3和Bax表达、p-p65/p65以及IL-6和TNF-α含量降低,Bcl-2表达、p-PI3K/PI3K和p-Akt/Akt增加(P0.05)。结论 IL-37通过抑制炎症减弱ox-LDL诱导的内皮祖细胞损伤,这可能是通过激活PI3K/Akt通路发挥作用的。  相似文献   

19.
目的探讨炎症环境下磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B (PI3K/AKT)通路对SW620~(Lgr5+)结肠癌干细胞(CSC)增殖的影响。方法以人结肠癌SW620、 SW480、 HT29、 HCT116细胞为材料, Western blot法检测四株细胞中干细胞标志物富含亮氨酸重复序列的G蛋白偶联受体5(Lgr5)的表达水平;选用Lgr5表达量最高的SW620细胞,采用荧光激活细胞分选技术(FACS)分析Lgr5~+细胞的比例;无血清悬浮培养得到结肠癌球细胞, FACS分选获得结肠癌Lgr5~+ CSC,集落形成实验、 5-氟尿嘧啶(5-FU)耐药实验鉴定分选得到的结肠癌Lgr5~+CSC生物学特征的变化;肿瘤坏死因子α(TNF-α)处理Lgr5~+ CSC建立炎症模型, CCK-8法筛选TNF-α的最适作用浓度及最佳作用时间;采用PI3K/AKT通路抑制剂MK2206处理Lgr5~+ CSC,分为空白对照组、 MK2206组、 TNF-α组、 MK2206联合TNF-α组;集落形成实验检测细胞增殖情况,异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(AnnexinⅤ-FITC/PI)双标记结合流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western blot法检测AKT、磷酸化的AKT(p-AKT)、糖原合酶激酶3β(GSK-3β)、磷酸化的GSK-3β(p-GSK-3β)蛋白水平。结果 SW620细胞中Lgr5的蛋白表达量显著高于其他细胞系;FACS分析得到SW620细胞中Lgr5~+细胞比例为6.9%,无血清培养基悬浮培养后,分选得到SW620~(Lgr5+) CSC的比例为34.5%;与SW620细胞相比, SW620~(Lgr5+) CSC的增殖能力与耐药性显著提高;1 ng/mL TNF-α作用24 h时,SW620~(Lgr5+) CSC具有最高的细胞活力;与对照组相比, TNF-α显著增加SW620~(Lgr5+) CSC的集落形成能力,但MK2206显著性降低SW620~(Lgr5+) CSC的集落形成能力,增加SW620~(Lgr5+) CSC的凋亡率;同时MK2206显著降低TNF-α诱导的SW620~(Lgr5+) CSC的集落形成能力,增加其凋亡比例。TNF-α处理增加SW620~(Lgr5+) CSC中AKT和GSK-3β的磷酸化水平,但MK2206可抑制TNF-α诱导的AKT和GSK-3β的磷酸化水平。结论 TNF-α通过激活PI3K/AKT信号通路促进SW620~(Lgr5+) CSC增殖。  相似文献   

20.
目的:探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)能否诱导小鼠长骨骨样细胞株MLO-Y4发生程序性坏死及其发生机制。方法:将MLO-Y4细胞分为正常对照(control)组、TNF-α处理组、TNF-α+necrostatin-1(Nec-1)处理组、TNF-α+Z-VAD处理组和TNF-α+受体相互作用蛋白3(RIP3)-siRNA组。用流式细胞术检测各组细胞凋亡或坏死率,透射电镜鉴定细胞形态学变化,用Western blot法测定RIP1、RIP3和cleaved caspase-3的蛋白水平,应用激光共聚焦显微镜观察RIP1和RIP3蛋白的共表达,应用荧光标记法检测各组细胞活性氧(ROS)水平。结果:TNF-α诱导MLO-Y4细胞24 h,凋亡和坏死率明显高于control组(P0.01)。与TNF-α组相比,Nec-1、Z-VAD和RIP3-siRNA均能降低细胞的凋亡或坏死率(P0.01)。在TNF-α组可见大量坏死样细胞,在Z-VAD组仍可见到坏死样细胞,而在Nec-1和RIP3-siRNA组未见到坏死样细胞。Western blot实验结果显示Nec-1可有效抑制RIP1蛋白表达,而Z-VAD对RIP1和RIP3蛋白表达无影响,RIP3-siRNA可有效降低RIP3蛋白表达(P0.01)。与TNF-α组比较,Nec-1可有效降低RIP1-RIP3蛋白共表达阳性细胞百分率(P0.01),而Z-VAD对其无影响。与control组相比,TNF-α组的ROS水平明显增高(P0.01);与TNF-α组相比,Nec-1、Z-VAD及RIP3-siRNA均能有效抑制ROS水平(P0.01)。结论:TNF-α能诱导MLO-Y4细胞发生RIP3介导的程序性坏死;ROS可能是MLO-Y4细胞程序性坏死的执行者。  相似文献   

设为首页 | 免责声明 | 关于勤云 | 加入收藏

Copyright©北京勤云科技发展有限公司  京ICP备09084417号