羽扇豆醇联合miR-145-5p对前列腺癌细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨羽扇豆醇(lupeol)联合微小RNA-145-5p(miR-145-5p)对前列腺癌细胞株LNCaP增殖与凋亡的影响。方法:将hsa-miR-145-5p和lupeol作用于LNCaP细胞24、48和72 h后用MTT法检测细胞活力抑制率;PI单染流式细胞术检测细胞周期;annexin V/PI双染流式细胞术和TUNEL实验检测细胞凋亡;Transwell法检测细胞迁移和侵袭;划痕愈合实验检测细胞迁移能力;细胞集落形成实验计算集落形成抑制率。结果:细胞对照组、非特异性对照组和溶剂组未出现有效的LNCaP细胞活力抑制、迁移抑制和侵袭抑制,而hsa-miR-145-5p组和lupeol组细胞活力、迁移和侵袭受到显著抑制,并出现早期凋亡;联合用药(hsa-miR-145-5p+lupeol)组比单独用药组出现更有效的生长抑制作用。结论:hsa-miR-145-5p和lupeol均可抑制LNCaP细胞增殖、迁移和侵袭,并诱导体外早期凋亡;lupeol可增强hsa-miR-145-5p对LNCaP细胞的抑增殖和促凋亡作用。     

miR-1468-3p靶向JAK2调控乳腺癌细胞的凋亡

目的探讨miR-1468-3p分子通过Janus激酶2(JAK2)蛋白调控乳腺癌细胞的凋亡。方法运用TargetScan在线分析miR-1468-3p与JAK2的相关性;将JAK2的3′UTR构建进PmirGLO质粒,利用luciferase assay检测miR-1468-3p是否靶向调控JAK2;用脂质体梯度转染miR-1468-3P mimics或miR-1468-3P inhibitor转入乳腺癌MCF7细胞,通过Western blot检测JAK2的表达量和乳腺癌MCF7细胞凋亡标志蛋白表达情况。结果通过TargetScan分析,miR-1468-3p在3个区域与JAK2具有较高匹配度;通过luciferase assay发现,miR-1468-3p靶向JAK2的3′UTR;梯度转染miR-1468-3P mimics时,JAK2的表达量梯度下降,细胞凋亡标志蛋白cleaved-caspase3/caspase3、cleaved-caspase9/caspase9、BAX表达量上升,Bcl-2表达量下降(P<0.05);而用梯度转染miR-1468-3P inhibitor进乳腺癌MCF7细胞时,JAK2的表达量梯度上升,cleaved-caspase3/caspase3、cleaved-caspase9/caspase9和BAX表达量下降,Bcl-2表达量上升(P<0.05)。结论 miR-1468-3p能通过降低JAK2的表达来促进乳腺癌MCF7细胞的凋亡。     

miR-425-5p靶向FOXJ3对乳腺癌细胞的作用研究

目的 探讨微小RNA-425-5p(miR-425-5p)靶向FOXJ3对乳腺癌细胞的作用.方法 用Lipofiectamine2000分别将miR-425-5p inhibitor及NC转染至MDA-MB-231乳腺癌细胞作为miR-425-5p inhibitor组和NC组,不做任何处理的为对照组.通过RT-qPC...     

BDNF-AS/miR-145-5p轴对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响

目的探讨脑源性神经营养因子反义RNA(brain-derived neurotrophic factor-antisense, BDNF-AS)对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响和可能机制。方法体外培养肾小管上皮细胞HK-2, 分别转染BDNF-AS小干扰RNA、miR-145-5p模拟物或共转染BDNF-AS小干扰RNA和miR-145-5p抑制剂, 之后采用30 mmol/L葡萄糖干预转染后的细胞24 h, 用RT-qPCR法检测细胞中BDNF-AS和miR-145-5p的表达, 用CCK-8法检测细胞增殖, 流式细胞术检测细胞凋亡, Western印迹法检测细胞中Bcl-2和Bax蛋白的表达, 酶联免疫吸附法检测细胞培养上清中IL-1β和IL-6的水平。用双荧光素酶报告基因实验验证BDNF-AS和miR-145-5p的调控关系。结果高糖处理促进了HK-2细胞中BDNF-AS的表达(P<0.05), 而抑制了miR-145-5p的表达(P<0.05)。干扰BDNF-AS或过表达miR-145-5p降低了高糖诱导的HK-2细胞抑制率、凋亡率及Bax蛋白、IL-1β和IL-6的表达(P<0.05), 促进了Bcl-2蛋白的表达(P<0.05)。干扰miR-145-5p逆转了干扰BDNF-AS对高糖诱导的HK-2细胞增殖、凋亡及IL-1β和IL-6表达的影响。BDNF-AS可靶向结合并负调控miR-145-5p。结论干扰BDNF-AS可能通过靶向负调控miR-145-5p促进高糖诱导的肾小管上皮细胞增殖, 并抑制细胞凋亡及炎症因子表达。     

BDNF-AS/miR-145-5p轴对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响CSCD

目的探讨脑源性神经营养因子反义RNA(brain-derived neurotrophic factor-antisense, BDNF-AS)对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响和可能机制。方法体外培养肾小管上皮细胞HK-2, 分别转染BDNF-AS小干扰RNA、miR-145-5p模拟物或共转染BDNF-AS小干扰RNA和miR-145-5p抑制剂, 之后采用30 mmol/L葡萄糖干预转染后的细胞24 h, 用RT-qPCR法检测细胞中BDNF-AS和miR-145-5p的表达, 用CCK-8法检测细胞增殖, 流式细胞术检测细胞凋亡, Western印迹法检测细胞中Bcl-2和Bax蛋白的表达, 酶联免疫吸附法检测细胞培养上清中IL-1β和IL-6的水平。用双荧光素酶报告基因实验验证BDNF-AS和miR-145-5p的调控关系。结果高糖处理促进了HK-2细胞中BDNF-AS的表达(P<0.05), 而抑制了miR-145-5p的表达(P<0.05)。干扰BDNF-AS或过表达miR-145-5p降低了高糖诱导的HK-2细胞抑制率、凋亡率及Bax蛋白、IL-1β和IL-6的表达(P<0.05), 促进了Bcl-2蛋白的表达(P<0.05)。干扰miR-145-5p逆转了干扰BDNF-AS对高糖诱导的HK-2细胞增殖、凋亡及IL-1β和IL-6表达的影响。BDNF-AS可靶向结合并负调控miR-145-5p。结论干扰BDNF-AS可能通过靶向负调控miR-145-5p促进高糖诱导的肾小管上皮细胞增殖, 并抑制细胞凋亡及炎症因子表达。     

过表达miR-136-5p对子宫内膜癌HEC-1A细胞增殖、侵袭以及凋亡的影响

目的 探讨miR-136-5p和E2F1在子宫内膜癌中的表达以及过表达miR-136-5p对子宫内膜癌细胞增殖、侵袭和凋亡的影响.方法 通过生物信息学网站分析TCGA数据库中子宫内膜癌miR-136-5p以及E2F1 mRNA和蛋白的表达.采用miR-136-5p模拟物转染子宫内膜癌HEC-1A细胞,设置空白组(未进行转染)、miR-136-5p阴性对照组(转染无义序列)、miR-136-5p模拟物转染组(转染miR-136-5p模拟物),采用CCK-8方法检测各组HEC-1A细胞的增殖能力,Transwell实验检测各组HEC-1A细胞的侵袭能力,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Western blot检测HEC-1A细胞E2F1蛋白表达,应用Targetscan软件预测E2F1是否为miR-136-5p的靶基因,应用双荧光素酶报告基因实验验证.结果 生物信息学分析显示,与正常组相比,子宫内膜癌组织中miR-136-5p表达下调,E2F1的mRNA和蛋白表达上升.miR-136-5p模拟物转染组HEC-1A细胞中miR-136-5p表达上升,细胞增殖能力下降、侵袭能力下降,细胞凋亡率上升.miR-136-5p过表达组HEC-1A细胞中E2F1蛋白表达下降,生物信息学分析结果显示,E2F1是miR-136-5p的靶基因,双荧光素酶实验证实E2F1为miR-136-5p的靶基因.结论 过表达miR-136-5p可以抑制HEC-1A细胞增殖与侵袭,促进凋亡,其机制可能与调控E2F1的表达相关.     

沉默LncRNA TUG通过上调miR-24-5p表达增加乳腺癌细胞的放射敏感性

目的:探讨长链非编码RNA牛磺酸上调基因1(LncRNA TUG1)对乳腺癌细胞放射敏感性的影响并探究其可能作用机制.方法:选取2015年4月至2016年3月于本院就诊的45例乳腺癌患者为研究对象,根据放疗后病灶变化情况分为放射敏感组(25例)与放射抵抗组(20例),qRT-PCR检测两组患者乳腺癌组织中TUG1表达水...     

LINC00667靶向miR-154-5p调控乳腺癌细胞增殖及凋亡的分子机制研究

目的 探讨LINC00667调控乳腺癌细胞增殖及凋亡的可能作用机制。方法 收集2020年5月至2020年8月邯郸市中心医院收治的51例乳腺癌患者的癌组织及其癌旁组织标本,采用qRT-PCR法检测LINC00667、miR-154-5p的表达量;体外培养人乳腺癌细胞T-47D,si-NC、si-LINC00667、miR-NC、miR-154-5p mimics分别转染至T-47D细胞,si-LINC00667和anti-miR-NC、si-LINC00667和anti-miR-154-5p分别共转染至T-47D细胞;MTT法、平板克隆形成实验与流式细胞术分别检测细胞增殖、克隆形成及凋亡;双荧光素酶报告实验检测miR-154-5p过表达对野生型载体WT-LINC00667与突变型载体MUT-LINC00667荧光素酶活性的影响;Western blot检测Bax、Bcl-2蛋白表达量。结果与癌旁组织比较,乳腺癌组织中LINC00667的表达量升高（P<0.05）,miR-154-5p的表达量降低（P<0.05）;转染si-LINC00667或转染miR-154-5p mimi...     

miR-145过表达对宫颈癌细胞辐射敏感性的影响

目的:探讨微小RNA(miR)-145过表达增强宫颈癌细胞放疗敏感性的分子机制。方法:运用Lipofectamine 2000将miR-145-mimic转染4株宫颈癌细胞系He La、Ca Ski、C33A和Si Ha,以NC-mimic为阴性对照,并以real-time PCR检测子宫内膜基质细胞(ESC)和4株宫颈癌细胞中miR-145的表达水平;转染的细胞经电离辐射照射后于不同时点运用MTT法和Annexin V-FITC/PI染色法联合流式细胞术分别测定细胞活力和细胞凋亡率;运用免疫荧光检测组蛋白γH2AX的表达水平;Western blot检测细胞中螺旋酶样转录因子(HLTF)的蛋白表达水平。结果:miR-145在ESC中高表达,而在4株宫颈癌细胞中均呈低表达,转染miR-145-mimic后4株宫项癌细胞中miR-145的表达水平显著高于NC-mimic组细胞(P0.05)。相同条件下,辐照后miR-145过表达的宫颈癌细胞的活力显著低于NC-mimic组细胞,72 h的细胞凋亡率明显增加(P0.05)。免疫荧光观察结果显示miR-145过表达显著促进电离辐射诱导的γH2AX激活;Western blot结果显示,miR-145过表达显著抑制HLTF的表达,与NC-mimic比较差异有统计学意义(P0.05)。结论:miR-145在正常子宫内膜上皮细胞中高表达,而在宫颈癌细胞系中低表达;miR-145过表达可显著抑制宫颈癌细胞的活力,促进电离辐射诱导的细胞凋亡。miR-145过表达增强宫颈癌细胞的辐射敏感性,其机制可能与下调HLTF表达、抑制DNA损伤修复、促进细胞凋亡有关。     

过表达miR-5195-3p对结直肠癌细胞凋亡的影响

目的探讨miR-5195-3p对Runx相关转录因子3(RUNX3)的靶向调节作用及对结直肠癌细胞凋亡的影响。方法 RT-qPCR和Western blot分别检测结直肠癌组织与癌旁组织中miR-5195-3p和RUNX3蛋白的表达。将人结肠癌细胞系SW480随机分为5组:对照组(control)、miR-5195-3p mimic组、mimic control组、miR-5195-3p inhibitor组、inhibitor control组。Wetsern blot检测RUNX3的蛋白表达;流式细胞仪检测细胞凋亡。在SW480细胞中转染RUNX3过表达质粒后检测细胞凋亡。结果与癌旁组织中相比,miR-5195-3p在结直肠癌组织中的表达显著升高,RUNX3的蛋白表达明显降低(P0.05)。过表达miR-5195-3p显著下调了SW480细胞中RUNX3的表达,并降低细胞凋亡水平(P0.05);抑制miR-5195-3p明显上调RUNX3的表达,并上调细胞凋亡水平(P0.05)。此外与miR-5195-3p mimic组相比,RUNX3过表达质粒的共转染组显著降低细胞凋亡水平(P0.05)。结论 miR-5195-3p可能作为促癌基因在结直肠癌中发挥作用,其作用与靶向调节RUNX3相关。     

miR-145-5p suppresses proliferation,metastasis and EMT of colorectal cancer by targeting CDCA3

MicroRNAs play a critical role in regulating the carcinogenesis of colorectal cancer (CRC). Even though its role is unclear in CRC, miR-145-5p has been reported to have anti-oncogene properties in several tumors. Our research examined the function of miR-145-5p in CRC and the potential underlying mechanism. From the bioinformatics and qRT-PCR analysis, miR-145-5p levels were lower in CRC samples and cell lines. LoVo and SW480 cells were treated with miR-145-5p mimics and inhibitor, respectively. Cell cycle, CCK-8 and EdU assays revealed that overexpression of miR-145-5p suppressed cell viability and G1/S phase transition. Conversely, miR-145-5p inhibitor promoted cell growth and cell cycle transition. Elevated miR-145-5p expression also suppressed the migration, invasion and EMT of CRC cells, while miR-145-5p reduction had a reverse effect. CDCA3 was identified as a downstream effector of miR-145-5p and had a negative correlation with the miR-145-5p expression in CRC. In addition, co-transfection of miR-145-5p inhibitor and si-CDCA3 showed that CDCA3 in SW480 cells could reverse the effect caused by miR-145-5p. In conclusion, our findings demonstrated that miR-145-5p could act as a tumor suppressor in CRC by targeting CDCA3, and serve as a diagnostic and therapeutic biomarker of CRC.     

miR-155-5p在宫颈癌血清中的表达及其对宫颈癌细胞的影响

 目的：检测miR-155-5p在不同宫颈疾病患者血清中的表达差异,并分析其对宫颈癌细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响,探讨miR-155-5p在宫颈癌发生、发展中的可能作用机制。方法：采用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR法,检测并分析比较miR-155-5p在不同宫颈疾病患者血清中的表达差异。利用miR-155-5p mimic或inhibitor提高或降低宫颈癌细胞中miR-155-5p的表达。CCK-8法和流式细胞术检测宫颈癌细胞的增殖、细胞周期和凋亡。结果：宫颈癌组血清中miR-155-5p的表达高于宫颈炎组和健康对照组（P<0.05）,宫颈上皮内瘤样病变组和宫颈癌组血清中miR-155-5p的表达差异无统计学意义（P>0.05）。与空白组、脂质体组和阴性对照组相比,转染100 nmol/L和200 nmol/L miR-155-5p mimic的SiHa细胞中,S期细胞比例升高,凋亡细胞比例降低（P<005）。转染100 nmol/L和200 nmol/L miR-155-5p inhibitor的SiHa细胞中,G2/M期细胞比例明显增多（P<005）。结论：(1)宫颈癌患者血清中miR-155-5p表达较健康对照人群上调,可能作为宫颈癌早期诊断的肿瘤分子标志物。(2)miR-155-5p对宫颈癌HeLa细胞增殖、细胞周期和凋亡无明显影响。(3)miR-155-5p可促进宫颈癌SiHa细胞进入S期,并抑制SiHa细胞凋亡,提示miR-155-5p可能在宫颈鳞癌发生、发展中起作用。     

miR-145-5p靶向TPM3通过ERK信号通路抑制甲状腺癌TPC-1细胞侵袭和转移

目的 探讨miR-145-5p对甲状腺癌细胞侵袭和转移的影响.方法 将miR-145-5p mimic质粒、mimic-NC质粒、TPM3质粒分别或联合转入甲状腺癌细胞,RT-qPCR检测miR-145-5p与TPM3 mRNA的表达,双荧光素酶报告检测靶向关系,Transwell法检测细胞侵袭能力,划痕实验检测细胞迁...     

miR-593-5p inhibit cell proliferation by targeting PLK1 in non small cell lung cancer cells

Worldwide, lung cancer has the highest rates of mortality and morbidity, with the majority of its pathology attributable to non-small cell lung cancer (NSCLC). MicroRNAs are pivotal in the occurrence and development of cancer. However, the role of miRNA-593-5p in the progression of NSCLC is not clear. In this study, we investigate, in vitro, whether miRNA-593-5p inhibits NSCLC cell proliferation. To clarify its specific mechanism of inhibition, we used bioinformatics to predict its target genes and identified PLK1. Luciferase reporter assay confirmed the binding of miR-593-5p to the PLK1 3′-UTR in a sequence-specific manner in NSCLC cells. Additionally, we also found through Western blot and quantitative RT-PCR that miR-593-5p down-regulates the expression of PLK1 protein. Finally, PLK1 overexpression was shown to disinhibit NSCLC cell proliferation. Taken together, this evidence suggests that miR-593-5p inhibits NSCLC cell proliferation by inhibiting PLK1 expression.     

LncRNA HEIH通过miR-98-5p调节肺癌细胞增殖和凋亡

目的探讨lncRNA HEIH对肺癌细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法培养人正常肺上皮细胞BEAS-2B和肺癌细胞系A549、A427、H1299和TKB-1,RT-qPCR检测细胞中HEIH表达水平;分别转染si-HEIH和miR-98-5p mimics至A549细胞,沉默A549细胞中HEIH表达或过表达miR-98-5p;MTT法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测CCND1、caspase-3、SHH、GLI-1、PTCH和SUFU蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证HEIH与miR-98-5p之间的关系。结果与正常肺上皮细胞BEAS-2B相比,肺癌细胞系A549、A427、H1299和TKB-1中HEIH表达水平显著升高(P<0.05).其中A549细胞中的HEIH表达最高。因此,后续实验选择A549细胞为研究对象。沉默HEIH表达或过表达miR-98-5p均可降低A549细胞培养12、48和72 h后吸光度值(A值)(P<0.05)(MTT法);升高凋亡率(P<0.05);抑制CCND1蛋白表达(P<0.05),促进caspase-3蛋白表达(P<0.05)。并且过表达miR-98-5p还抑制了A549细胞中SHH和GLI-1的mRNA和蛋白表达(P<0.05),促进了PTCH和SUFU的mRNA和蛋白表达水平(P<0.05)。过表达HEIH逆转了过表达miR-98-5p对A549细胞增殖、凋亡以及SHH、GLI-1、PTCH和SUFU的mRNA和蛋白表达的影响。结论沉默HEIH表达可能通过靶向miR-98-5p经Hedgehog信号通路抑制肺癌细胞的增殖,并促进其凋亡。     

miR-142-5p regulates pancreatic cancer cell proliferation and apoptosis by regulation of RAP1A

Pancreatic cancer, one of the fatal and aggressive malignancies, leads the sixth cancer-associated death in China. microRNAs are believed to exert function in the diagnosis and treatment of pancreatic cancer. In the present study, we firstly found that miR-142-5p was downregulated in pancreatic cancer tumor tissues while Ras-related protein Rap-1 A (RAP1A) was upregulated compared with para-carcinoma non-tumor tissues. Then, we found that RAP1A could be a putative target gene of miR-142-5p by bioinformatics tool TargetScan. Furthermore, we conducted luciferase reporter assay, RT-qPCR, western blot and correlation analysis to demonstrate that miR-142-5p could negatively regulate RAP1A expression by binding to its 3′UTR. In addition, cell-counting kit 8 (CCK-8) and flow cytometry assays certified that miR-142-5p overexpression may inhibit pancreatic cancer cell proliferation but promote cell apoptosis; while the variation could be reversed by co-transfected with pcDNA3.1-RAP1A. Finally, miR-142-5p overexpression downregulated p-ERK1/2, phosphate p38 mitogen-activated protein kinases (p-p38); however, the variation induced by miR-142-5p mimic could be reversed by co-transfected with pcDNA3.1-RAP1A. In conclusion, our findings indicate that targeting miR-142-5p may provide a novel strategy for the treatment of pancreatic cancer.     

宫颈癌组织miR-574-5p的表达及其下调后对宫颈癌SiHa细胞的影响

目的探讨宫颈癌患者组织中miR-574-5p的表达及其下调时对宫颈癌Si Ha细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法用实时荧光定量PCR测定80例宫颈癌组织中miR-574-5p水平。将miR-574-5p抑制物转染宫颈癌Si Ha细胞,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Tanswell迁移实验检测细胞侵袭能力。结果宫颈癌组织中miR-574-5p相对表达水平高于正常宫颈组织(P0.05);高表达的miR-574-5p与肿块大小、临床分期、病理分级和淋巴结转移有关(P0.05);转染miR-574-5p抑制物组与空白组及阴性对照组相比,Si Ha细胞增殖能力下降(P0.05);细胞凋亡率明显增加(P0.05);转染后细胞穿膜能力明显减弱(P0.05)。结论 miR-574-5p的高表达与宫颈癌的进展有关,下调miR-574-5p的表达抑制了宫颈癌Si Ha细胞的增殖和迁移,促进其凋亡,有望成为宫颈癌基因治疗的靶点。