新型m6A阅读器IGF2BP1在非小细胞肺癌组织中的表达及临床意义

目的本研究拟分析新型m6A阅读器-胰岛素样生长因子2(IGF2)mRNA结合蛋白1(IGF2BP1)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达水平、临床意义及对人非小细胞肺癌细胞增殖水平的影响。方法利用癌症基因组图谱(TCGA)数据库下载NSCLC相关数据集,分析肿瘤组织与正常组织之间IGF2BP1表达的差异;利用Kaplan-Meier曲线进行患者生存分析;MTT方法检测细胞增殖水平。结果IGF2BP1蛋白主要表达于肿瘤细胞的胞浆和细胞膜。TCGA分析发现与癌旁组织比较,IGF2BP1在NSCLC组织中的表达明显增加(P<0.05);Kaplan-Meier分析发现,IGF2BP1表达与非小细胞肺癌患者OS时间相关,IGF2BP1高表达的非小细胞肺癌患者,OS时间明显缩短(P<0.05)。转染IGF2BP1 siRNA至非小细胞肺癌细胞后发现,与阴性质粒转染组比较:转染siRNA-IGF2BP1的非小细胞肺癌细胞,IGF2BP1表达明显降低;IGF2BP1表达下调后细胞增殖水平减慢。结论IGF2BP1是一个新的NSCLC生物标记物,可作为潜在的治疗新靶点。     

CDK2 RNA干扰后HepG2细胞蛋白表达的变化

目的 探讨稳定转染CDK2干扰RNA对人肝癌细胞株HepG2细胞生物活性及细胞核蛋白质的改变.方法 构建稳定转染pGenesil-1-CDK2的HepG2细胞系,MTT法检测细胞增殖、流式细胞术检测细胞周期的改变.通过RT-PCR和双向凝胶电泳-质谱技术-数据库搜索,比较转染前后CDK2 mRNA的表达和细胞核蛋白质的变化.并通过Western blot法对显著差异蛋白进行验证.结果 与空质粒组PHK-siRNA-HepG2细胞和未转染组HepG2细胞相比,pCDK2-siRNA-HepG2组细胞的生长速度减慢(P＜0.01),稳定转染CDK2 RNAi组细胞的CDK2 mRNA表达水平显著下降.通过双向电泳-质谱技术得到4个稳定转染CDK2 siRNA的HepG2细胞不表达的蛋白质,Westem blot法证实双向电泳结果的可信性.结论 CDK2干扰RNA可明显降低HepG2细胞CDK2 mRNA的表达,抑制HepG2细胞的增殖,干扰后的HepG2细胞不表达的蛋白质分别是类核糖体蛋白S12、β-肌动蛋白、锌指蛋白276和伴侣蛋白10相关蛋白.     

肝癌HepG2细胞株胰岛素样生长因子1和表皮生长因子受体基因沉默后放疗增敏及机制

目的:探讨同时沉默胰岛素样生长因子1(IGF1)和表皮生长因子(EGF)二受体基因的抗瘤放疗增敏及机制.方法:分别构建靶向EGFR、IGF1R及两受体的小分子干扰RNA(siRNA-EGFR、siRNA-IGF1R、siRNA-EGFR& IGF1R),构建与任何基因无同源的阴性对照质粒(siRNA-HK),分别转染48照射肝癌HepG2细胞株.成克隆实验测定细胞存活分数,采用单击多靶模型和线性二次函数模型拟合细胞存活曲线,求出放射生物学参数Do、Dq、N和α、β、SF2值.流式细胞仪检测细胞周期和凋亡变化,细胞周期及相关蛋白、细胞凋亡及相关蛋白采用蛋白印迹.结果:同时沉默EGFR和IGF1R组与对照组及单基因干扰组相比抑制了细胞增殖、诱导细胞凋亡,阻滞细胞周期G1/S期的进程,bcl-2和cdk2表达明显下调,而p21和bax表达增加.且同时沉默EGFR和IGF1R组和对照组细胞的耽值分别为0.588、2.070 4Gy; Dq值分别为0.562 5、2.030 7Gy;α值分别为0.515、0.021 6Gy-1;SF2值分别为0.22、0.619.同时沉默EGFR和IGF1R组Do、Dq和SF2值均减小,α值增大.结论:同时沉默EGFR和IGF1R基因具有更有效地干扰肝癌HepG2细胞株增殖、诱导细胞凋亡,其机制可能与bcl-2和cdk2表达下调和p21与bax表达增加有关,结合干扰多个受体分子可能是一种十分有前途的新的肝癌治疗途经.     

RNAi介导的IGF1R基因沉默对肝癌细胞生长、迁移与侵袭的影响

 目的: 研究RNA干扰(RNAi)介导的胰岛素样生长因子1受体 (IGF1R) 基因沉默对肝癌细胞生长、迁移与侵袭的影响。方法: 设计并筛选抑制IGF1R mRNA表达效率最高的siRNA序列,构建该序列的慢病毒表达载体,转染293T细胞进行病毒包装。将包装好的慢病毒感染Huh7和Hep3B肝癌细胞,筛选沉默 IGF1R 基因表达的稳定细胞株。将上述稳定细胞株扩大培养,检测细胞IGF1R mRNA表达变化,细胞生长、迁移与侵袭能力变化,以及Ki-67、p-AKT、p-ERK1、Gli1、β-catenin、cyclin D1、p21、BCL-XL的蛋白表达水平变化。结果: 与空白及阴性对照组比较,感染携带 IGF1R 干扰序列慢病毒的Huh7和Hep3B肝癌细胞IGF1R mRNA表达水平显著下调,细胞增殖活性明显降低,细胞凋亡显著增加,细胞迁移和侵袭能力明显受到抑制,细胞中IGF1R、Ki-67、p-AKT、p-ERK1、Gli1、β-catenin、cyclin D1、p21及BCL-XL蛋白表达水平均显著降低。结论: RNAi介导的 IGF1R 基因沉默可明显抑制Huh7和Hep3B肝癌细胞生长及恶性生物学特征,这可能与IGF1R表达水平显著下调而引起上述调控细胞增殖、抗凋亡基因以及相关信号通路基因的蛋白表达水平显著降低有关。     

姜黄素对肝癌HepG2细胞增殖和侵袭转移的影响及相关机制

目的探讨姜黄素对人肝癌HepG2细胞增殖和侵袭转移的影响及其相关机制。方法应用10、20、40、60μmol/L姜黄素处理肝癌细胞株HepG2;采用MTT检测不同浓度的姜黄素对HepG2细胞增殖的影响;运用Transwell侵袭转移实验测定不同浓度的姜黄素对HepG2细胞体外侵袭能力的影响。采用Western blot方法检测经不同浓度姜黄素处理后,HepG2细胞内细胞周期素D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase2, MMP-2)和E-钙黏素(E-cadherin)蛋白表达。结果姜黄素能明显抑制肝癌HepG2细胞的增殖和体外侵袭能力,且具有显著剂量依赖性。肝癌HepG2细胞中CyclinD1、MMP-2蛋白表达随着姜黄素的浓度的增多而明显的降低,而E-cadherin蛋白表达则随着姜黄素剂量的增多而显著升高。结论姜黄素明显抑制肝癌HepG2细胞的增殖和侵袭转移能力,与下调CyclinD1、MMP-2和上调E-cadherin的蛋白表达相关。     

AZD5363诱导肝癌细胞凋亡与自噬的实验研究

目的:研究新型Akt抑制剂AZD5363对人肝癌HepG2和Huh7细胞活力、凋亡和自噬的影响,并探讨其抗肿瘤活性的分子机制。方法:采用不同浓度AZD5363作用于体外培养的HepG2和Huh7细胞,MTT法检测细胞活力;TUNEL标记法检测肝癌细胞凋亡的变化;Western blot实验分析细胞凋亡相关蛋白多腺苷二磷酸核糖聚合酶[poly(ADP-ribose) polymerase,PARP]及自噬标志蛋白LC3-II的表达水平;细胞转染GFP-LC3绿色荧光蛋白融合表达质粒检测细胞自噬。结果:AZD5363能够剂量依赖性地抑制HepG2和Huh7细胞活力,并通过促进PARP的切割而诱导肝癌细胞发生凋亡;肝癌细胞给予AZD5363后,细胞内GFP-LC3融合蛋白斑点增多,同时LC3-II的表达水平增加(P 0.05);当用氯喹阻断自噬后,AZD5363对肝癌细胞凋亡的诱导作用明显增强。结论:AZD5363可促进HepG2和Huh7细胞发生凋亡和保护性自噬。抑制自噬促进了AZD5363诱导的肝癌细胞凋亡。     

基于肿瘤组织与血清miRNA表达数据的肝癌诊断模型构建

目的 探究肝癌患者组织及血清中共同差异表达的miRNA,构建肝癌诊断模型.方法 从美国国立生物技术信息中心数据库(Gene Expression Omnibus)下载芯片数据,从癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)下载肝癌及正常样本的miRNA表达数据和mRNA表达数据,利用R软件...     

辛伐他汀对肝癌细胞生物学特性与脂质代谢的影响

目的 探讨辛伐他汀对肝癌细胞系HepG2细胞生物学特性与脂质代谢的影响.方法 体外培养肝癌细胞系HepG2,分别给予不同浓度辛伐他汀(0、5、10、20及40μM),CCK-8方法检测各组肝癌细胞系HepG2细胞活力;细胞克隆实验观察各组细胞群落形成情况;流式细胞仪检测细胞凋亡率;细胞划痕与Transwell实验观察细胞侵袭与迁移能力;Real-time PCR检测脂质代谢相关基因SREBP1、SREBP2、FASN、SQLE、HMGCS1 及HMGCR表达;Western blot检测SREBP1、SREBP2、FASN、SQLE、HMGCS1 及HMGCR蛋白表达.结果 不同浓度辛伐他汀均抑制了HepG2细胞活力;抑制了HepG2细胞群落形成,促进细胞凋亡,抑制细胞侵袭与迁移;辛伐他汀还下调SREBP1、SREBP2、FASN、SQLE、HMGCS1及HMGCR基因与蛋白表达(P＜0.05).结论 辛伐他汀能够抑制肝癌细胞系HepG2增殖,促进凋亡,并抑制细胞迁移与侵袭,其作用机制可能与抑制脂质代谢相关基因与蛋白表达有关.     

STC2促进人肝癌细胞HepG2增殖和EMT相关的迁移

目的:探讨斯钙素2(STC2)对人肝癌细胞HepG2增殖、迁移以及上皮-间充质转化(EMT)进程的影响。方法:Western blot法检测不同肝癌细胞株及正常肝细胞株的STC2蛋白表达情况;集落形成实验分析STC2对HepG2细胞增殖的影响,同时进一步采用实时荧光定量PCR及Western blot法检测STC2对cyclin D1等增殖相关基因的表达变化;Transwell实验分析STC2对肝癌细胞HepG2迁移能力的影响,采用实时荧光定量PCR和Western blot法检测过表达和沉默STC2的细胞中EMT分子标志物vimentin和E-cadherin的表达情况。结果:与正常肝细胞系相比,STC2蛋白在肝癌细胞中高表达。集落形成实验结果说明STC2促进HepG2细胞的增殖,同时STC2可以显著影响cyclin D1等增殖相关基因的表达。Transwell实验结果说明STC2增强HepG2细胞的迁移能力,同时显著影响肝癌细胞的EMT过程。结论:STC2能够促进肝癌细胞系HepG2的增殖并且影响增殖相关基因的表达,进一步研究表明STC2能够影响肝癌细胞的EMT过程,促进肝癌细胞的迁移。     

辛二酰苯胺异羟肟酸通过内质网应激凋亡通路诱导HepG2细胞凋亡

目的:探讨辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)对人肝癌细胞株HepG2增殖与凋亡的影响及其可能的机制。方法:分别给予不同浓度的SAHA处理HepG2细胞48 h,采用实时无标记细胞分析法检测细胞增殖情况;Western blot法检测组蛋白H3K9和H3K27的乙酰化水平,以及葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)和p-PERK蛋白水平的变化;流式细胞术检测细胞凋亡。结果:与对照组相比,0.1和1μmol/L SAHA处理48 h对HepG2细胞增殖无明显抑制作用,6和12μmol/L SAHA组HepG2细胞增殖率明显下降(P0.05);Western blot检测发现,与对照组比较,不同浓度的SAHA处理细胞48 h后,ac H3K9和ac H3K27表达水平明显升高,GRP78蛋白表达显著上调,PERK蛋白表达显著下调,而p-PERK的蛋白水平显著增加(P0.05);流式细胞术检测发现,随着SAHA浓度的增高,HepG2细胞的凋亡逐渐增加。结论:SAHA可上调HepG2细胞中组蛋白H3K9和H3K27的乙酰化修饰水平,并通过激活内质网应激相关凋亡通路来诱导HepG2细胞发生凋亡。