肿瘤外泌体促进高糖难愈创面的愈合

目的:评价小鼠乳腺癌4T1细胞分泌的外泌体(即肿瘤来源的细胞外囊泡,tumor-derived extracellular vesicles,tEVs)促进糖尿病小鼠创面愈合的效果,并探讨其作用机制。方法:差速离心法提取tEVs,透射电镜观察其形态,Western blot检测外泌体特异性蛋白TSG101和CD9的表达;用tEVs处理体外培养的小鼠成纤维细胞系L929和人脐静脉内皮细胞,探讨其对成纤维细胞活力和迁移,以及血管内皮细胞成管能力的影响。取20只6周龄C57BL/6雄性小鼠,腹腔注射链脲佐菌素诱导形成高血糖小鼠后,在其背部建立直径约0.7 cm的高血糖创面模型,之后将小鼠分为实验组和对照组(n=10),于第0、3和6天在创面四周的真皮层注射0.2 mL tEVs(含50μg)和等体积PBS。第1、7、18和25天观察并记录创面愈合情况;第7和14天,取创面皮肤组织常规石蜡切片,HE染色,评价创面愈合效果;免疫荧光检测血管标志物CD31的表达,探讨创面愈合过程中血管生成的变化。结果:tEVs呈圆形或杯状且比较均一,粒径大小约为40～150 nm,外泌体特异性蛋白TSG101和CD9均为阳性。体外细胞实验表明,tEVs能够促进L929细胞的生长和迁移,且可以促进人脐静脉内皮细胞的成管能力。动物体内实验表明,tEVs可以促进高血糖小鼠难愈创面愈合,且愈合效果良好。同时tEVs组可见创面新生组织中CD31的表达升高。结论:tEVs可以促进糖尿病小鼠创面的愈合,该过程可能与其参与增强成纤维细胞的活力和迁移能力以及促进血管生成有关。     

皮肤成纤维细胞在创面愈合中的研究进展

皮肤成纤维细胞是参与创面愈合的主要修复细胞,近年来其异质性及其与周围细胞间的通讯正逐渐引起重视.真皮成纤维细胞亚群主要包括乳头状成纤维细胞和网状成纤维细胞,对创面愈合发挥不同的作用.成纤维细胞通过自分泌和旁分泌信号分子与周围细胞之间相互作用构成创面微环境,影响创面愈合.慢性创面中的成纤维细胞表现出多种功能障碍.本文就成...     

表皮生长因子联合血糖控制对糖尿病创面愈合的影响:成纤维细胞生长因子蛋白及其mRNA表达的变化

背景:有研究表明急性创伤可导致内源性的重组人表皮生长因子(recombinant human epidermal growth factor,rhEGF)表达下调,导致不愈合的发生。目的:观察局部应用rhEGF联合血糖控制下对糖尿病大鼠烫伤创面成纤维细胞生长因子表达的影响。方法:将Wistar糖尿病大鼠制备背部深Ⅱ度烫伤模型。联合治疗组于烫伤前1周控制血糖至对照组水平,并在烫伤24h内创面喷洒rhEGF;rhEGF组仅创面喷洒rhEGF;血糖控制组仅控制血糖;对照组不制备糖尿病模型,烫伤后处理同联合治疗组。烫伤后1,3,5,7,11,15,21d取创面皮肤组织采用免疫组织化学染色及原位杂交法检测成纤维细胞生长因子蛋白及mRNA的表达,并观察各组大鼠创面愈合情况。结果与结论:烫伤后各组大鼠创面成纤维细胞生长因子蛋白及mRNA表达均明显增多,分别在5～7d及7～11d达高峰,且联合治疗、对照组峰值较rhEGF、血糖控制组高(P0.05)。烫伤后7～21d,联合治疗、对照组创面愈合率高于rhEGF、血糖控制组(P0.05)。说明局部应用rhEGF在联合血糖控制下可促进糖尿病大鼠烫伤创面的愈合,可能与促进创面成纤维细胞生长因子表达有关。     

正常与糖尿病小鼠脂肪间充质干细胞移植促进皮肤创伤愈合的比较

目的比较正常和糖尿病小鼠脂肪间充质干细胞(Adipose mesenchymal stem cells,ADSCs)移植促进皮肤创伤愈合疗效差别。方法无菌条件下获取正常小鼠及糖尿病小鼠的ADSCs,应用流式细胞术对3代细胞表面抗原CD34、CD45、CD90、CD105进行表型鉴定。应用WST法和Transwell迁移实验检测细胞增殖和迁移情况。应用ELISA对正常小鼠及糖尿病小鼠的ADSCs条件培养液中VEGF、HGF和IGF-1蛋白含量进行检测。建立小鼠皮肤创伤模型并随机分为3组,分别以皮内注射方式将3代正常小鼠或糖尿病小鼠来源ADSCs的细胞混悬液移植到小鼠创面四周,空白对照组注射生理盐水,于伤后14d观察创面愈合情况;Western blot检测伤后14d创面组织Bcl-2蛋白表达。结果小鼠ADSCs表达CD90和CD105,不表达CD34和CD45,与正常小鼠相比,糖尿病小鼠来源的ADSCs增殖和迁移能力下降,条件培养液中VEGF、HGF和IGF-1蛋白含量明显降低。糖尿病小鼠ADSCs移植组于创伤后第14d伤口愈合率为(79.6%±6.2%),均显著低于正常小鼠移植组14d的(97.1%±4.1%),两者均高于对照组14d的(64.6%±2.9%,0.05)。与正常小鼠移植组相比,糖尿病小鼠移植组伤后14d创面组织Bcl-2表达水平降低,高于对照组创面组织Bcl-2表达水平。结论正常小鼠来源ADSCs较糖尿病小鼠ADSCs更能促进小鼠皮肤创面愈合。     

黄芪多糖对糖尿病足溃疡成纤维细胞胶原合成的影响

目的 研究黄芪多糖(Astragalus Polysaccharides,APS)对糖尿病足溃疡(diabetic foot ulcers,DFUs)成纤维细胞(fibroblasts,Fb)增殖和胶原合成的影响,并探讨其与溃疡愈合的关系.方法 取非糖尿病创面及糖尿病足溃疡皮肤进行Fb培养后,分为对照组、DFUs组及A...     

AICAR通过提高MSC移植存活率促进糖尿病溃疡创面愈合的研究

目的探讨AICAR通过提高间充质干细胞(MSC)在生物材料中移植存活率的机制及对糖尿病溃疡的治疗效果。方法将40只5~8周雄性C57BL/6J小鼠腹腔注射链脲佐菌素造成糖尿病小鼠模型,然后结扎股动脉,制备小鼠糖尿病足溃疡模型。实验分为对照组、MSCs组、阿卡地新(AICAR)组以及AICAR-MSCs组,每组10只。利用流式细胞实验、Transwell迁移实验观察AICAR对MSCs抗凋亡和迁移的影响,检测条件培养基中VEGF含量。制备小鼠糖尿病足溃疡模型,含AICAR刺激的MSCs覆盖创面,2周后CD31染色,分别观察创面血管新生状况。结果与空白对照组和MSCs对照组相比,细胞实验结果显示,AICAR刺激的MSCs实验组具有较低的MSCs凋亡率、良好的MSCs迁移能力和较高的VEGF分泌作用。动物实验结果显示AICAR刺激的MSCs覆盖糖尿病足溃疡创面可促进血管新生,加速溃疡愈合。结论 AICAR通过抑制高糖对MSCs的凋亡影响,促进MSCs的存活和旁分泌作用,从而促进血管新生,加速溃疡愈合。     

碱性成纤维细胞生长因子对小鼠口腔唇部创伤的促愈合作用

本研究用外科手术方法切除小鼠口腔唇部皮肤及粘膜,造成局部创伤,使用以基因工程方法生产的碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)涂擦创面。经病理组织学检查,创面完全愈合时间为4--5天,对照组、肝素组及碱性成纤维细胞生长因子加肝素联合使用组时间为9--10天。本文提示,碱性成纤维细胞生长因子有促进口腔唇部软组织创伤愈合的作用,肝素对碱性成纤维细胞生长因子的生物学活性有明显的抑制作用。     

碱性成纤维细胞生长因子与小儿烧伤创面的愈合

背景：皮肤创面愈合是一个复杂的病理过程,对于创伤和创伤后感染等引起皮肤难愈合的研究一直是临床创面修复的难题,对于碱性成纤维细胞生长因子促进皮肤创面愈合的基础研究相对较多,临床应用研究较少。 目的：对碱性成纤维细胞生长因子促进皮肤创面愈合研究的文献资料趋势进行多层次分析,探讨在小儿烧伤创面愈合中的应用疗效。 方法：以电子检索方式对CNKI数据库学术期刊2002-01/2011-12收录有关碱性成纤维细胞生长因子促进皮肤创面愈合研究的文献进行分析,采用检索词为“碱性成纤维细胞生长因子;创面愈合”,运用数据库的分析功能和Excel软件图表的功能分析数据特征。 结果与结论：CNKI数据库学术期刊2002/2011收录碱性成纤维细胞生长因子促进皮肤创面愈合研究的文献共228篇,文献数量处于平稳发展趋势。《中国组织工程研究与临床康复》杂志收录的文献数量最多为26篇。解放军第304医院产出的文献最多。碱性成纤维细胞生长因子促进皮肤创面愈合研究文献的基金资助项目有16项,基金资助项目的文献共76篇,以国家重点基础研究发展计划(973)项目和国家自然科学基金资助项目的文献最多。碱性成纤维细胞生长因子在小儿烧伤创面愈合中应用的文献虽然较少,但实验结果均显示治疗效果较好,有促进小儿Ⅱ度烧伤创面愈合的作用,而且无不良反应出现。     

脂肪间充质干细胞上清液对小鼠皮肤创伤的作用及可能机制

目的观察小鼠脂肪间充质干细胞(Adipose mesenchymal stem cells,ADSCs)上清液经尾静脉注射治疗小鼠皮肤创伤的效果并探讨其作用机制。方法无菌条件下分离培养正常小鼠的ADSCs取3-5代细胞通过免疫荧光法检测间充质干细胞相关的细胞表面标记物CD34、CD45、CD90、CD105的表达。建立小鼠全皮层皮肤创伤模型并随机分为2组,注射生理盐水的对照组和注射上清液的实验组,分别于伤后7天,14天观察创面愈合情况。分离小鼠成纤维细胞(Fibroblast,Fb),将小鼠ADSCs上清液作用于Fb不同时间后,应用WST法和Transwell迁移实验检测Fb细胞增殖和迁移情况,应用real-time PCR和Western blot检测Fb中碱性成纤维细胞生长因子(basci fibroblast growth factor,b FGF)在转录和蛋白水平的表达。结果小鼠ADSCs表达CD90和CD105,不表达CD34和CD45。ADSCs上清液注射组于创伤后第7天,14天的伤口愈合率分别为(65%±3.4%),(95.6%±5.2%),均显著高于7天、14天生理盐水对照组的(55%±4.4%),(77.1%±3.1%)。ADSCs上清液作用于Fb后,能促进Fb的增殖和迁移以及上调生长因子b FGF在转录和蛋白水平的表达。结论小鼠ADSCs上清液促进小鼠皮肤创面愈合可能与上调b FGF表达相关。     

TGF-β3基因转染成纤维细胞促进大鼠深Ⅱ度烫伤创面愈合的实验研究

目的观察TGF-β3基因转染的成纤维细胞对深Ⅱ度大鼠烫伤模型创面愈合的影响。方法将90只Wistar成年大鼠随机分为模型对照组(C组)、表皮转化生长因子组(EGF组)和TGF-β3转基因成纤维细胞组(TGF-β3组),制作10% TBSA烫伤模型,各组给予对应治疗,检测各组大鼠的创面愈合率,HE染色观察烫伤创面组织变化,SP法观察烫伤皮肤组织中TGF-β3蛋白表达情况。结果烫伤后14d、21d,创面愈合率TGF-β3组最高,与EGF组及C组之间的差异有统计学意义(分别为P0.05,P0.01);烫伤后14d及21d,C组、EGF组与TGF-β3组之间TGF-β1及TGF-β2蛋白表达差异有统计学意义(分别为P0.05,P0.01);烫伤后1d到21d,TGF-β3组与C及EGF组之间的TGF-β3蛋白表达的差异均有统计学意义(P0.01)。结论 TGF-β3转基因转染成纤维细胞可能通过在创面上持续分泌TGF-β3蛋白,降低TGF-β1及TGF-β2的水平,从而促进创面的愈合。     

c-Jun氨基末端激酶选择性抑制剂对哮喘小鼠肺组织IL-8表达的影响

目的探讨c-Jun氨基末端激酶选择性抑制剂(SP600125)对哮喘小鼠肺组织白介素-8(IL-8)表达的影响。方法 30只BALB/c小鼠随机分为对照组、哮喘组和SP600125组,制作哮喘模型及干预处理后,处死小鼠,取肺组织,采用免疫组织化学方法和Western blot方法检测各组小鼠肺组织内IL-8的表达。结果免疫组化结果显示,哮喘组小鼠肺组织IL-8表达的平均光密度值为(0.75±0.12),显著高于对照组(0.25±0.03,p0.01),而SP600125组小鼠明显低于(0.44±0.06,p0.01)哮喘组。Western blot结果显示,哮喘组小鼠肺组织IL-8表达的平均光密度值为(0.51±0.08),显著高于对照组(0.15±0.02,p0.01);而SP600125组与哮喘组相比明显降低(0.29±0.04,p0.01)。结论 c-Jun氨基末端激酶选择性抑制剂能降低哮喘小鼠肺组织IL-8的表达。     

大豆异黄酮酊干预Ⅱ度烫伤模型小鼠创面的愈合

背景：雌激素具有促进创面愈合的作用,大豆异黄酮能与雌激素受体结合,具有明显的雌激素样效应。 目的：探索大豆异黄酮酊的制备、观察其对小鼠烫伤创面愈合的影响。 方法：用冷浸渍法制备大豆异黄酮酊,筛选最佳有效浓度。用昆明小鼠造Ⅱ度烫伤模型,随机分为6组。药物组分别应用0.100,0.361,1.000,3.610 g/L的大豆异黄酮酊局部涂抹;溶剂对照组应用体积分数75%乙醇局部涂抹;空白对照组不作任何处理。从第 3 天起,隔天记录创面面积、计算未愈合创面占原始创面的百分比,于造模后第 3,9,14 天取创面组织做病理切片,观察形态学改变和创面愈合情况。 结果与结论：大豆异黄酮酊的最佳效应浓度是3.61 g/mL。在创伤后第 5,7,9,11,13 天,大豆异黄酮酊组的未愈合创面占原始创面的百分比明显小于溶剂对照组和空白组(P < 0.05)。病理组织切片显示,第 9 天,大豆异黄酮酊组的成纤维细胞明显多于溶剂对照组和空白组,第 14 天,大豆异黄酮酊组的表皮生长情况比溶剂对照组和空白组好。表明以75%乙醇为溶剂制备大豆异黄酮酊是可行的;  3.61 g/L的大豆异黄酮酊对小鼠创面的愈合具有明显的促进用。     

藻酸盐银联合水凝胶敷料对慢性创面愈合的作用

背景：研究发现藻酸盐及水凝胶敷料等均可促进创面愈合,而新型敷料藻酸盐银联合水凝胶敷料,对于难治慢性创面的愈合作用尚不清楚。 目的：观察藻酸盐银联合水凝胶敷料对慢性创面治疗的作用。 方法：选择江苏省人民医院烧伤整形科住院慢性创面患者34例,随机分为2组：治疗组应用藻酸盐银联合水凝胶敷料序贯换药;对照组采用1%磺胺嘧啶银冷霜抹在凡士林纱布上外敷,于治疗后7,10,14,17,21 d进行创面分泌物细菌培养、观察创面愈合情况及速度、药物不良反应、换药时创面痛感、肉芽破坏等情况。 结果与结论：治疗组创面细菌检出率明显低于对照组(P < 0.05)。治疗组创面愈合时间比对照组平均缩短约6 d,创面愈合速度较对照组明显加快(P < 0.05)。两组均无药物不良反应,治疗组创面换药时无明显疼痛感,肉芽组织无明显破坏。提示藻酸盐银联合水凝胶敷料序贯治疗慢性创面具有显著抗菌及促进创面肉芽组织和上皮再生、促进创面愈合的作用,且无不良反应。     

Transplantation of endothelial progenitor cells accelerates dermal wound healing with increased recruitment of monocytes/macrophages and neovascularization

Endothelial progenitor cells (EPCs) act as endothelial precursors that promote new blood vessel formation and increase angiogenesis by secreting growth factors and cytokines in ischemic tissues. These facts prompt the hypothesis that EPC transplantation should accelerate the wound-repair process by facilitating neovascularization and the production of various molecules related to wound healing. In a murine dermal excisional wound model, EPC transplantation accelerated wound re-epithelialization compared with the transplantation of mature endothelial cells (ECs) in control mice. When the wounds were analyzed immunohistochemically, the EPC-transplanted group exhibited significantly more monocytes/macrophages in the wound at day 5 after injury than did the EC-transplanted group. This observation is consistent with enzyme-linked immunosorbent assay results showing that EPCs produced in abundance several chemoattractants of monocytes and macrophages that are known to play a pivotal role in the early phase of wound healing. At day 14 after injury, the EPC-transplanted group showed a statistically significant increase in vascular density in the granulation tissue relative to that of the EC-transplanted group. Fluorescence microscopy revealed that EPCs preferentially moved into the wound and were directly incorporated into newly formed capillaries in the granulation tissue. These results suggest that EPC transplantation will be useful in dermal wound repair and skin regeneration, because EPCs both promote the recruitment of monocytes/macrophages into the wound and increase neovascularization.     

Extracellular matrix powder protects against bleomycin-induced pulmonary fibrosis

Pulmonary fibrosis refers to a group of lung diseases characterized by inflammation, fibroblast proliferation, and excessive collagen deposition. Although the mechanisms underlying pulmonary fibrosis are poorly understood, current evidence suggests that epithelial injury contributes to the development of fibrosis. Regenerative medicine approaches using extracellular matrix (ECM) scaffolds have been shown to promote site-specific tissue remodeling. This led to the hypothesis that particulate ECM would promote normal tissue repair and attenuate bleomycin-induced pulmonary fibrosis. C57BL/6 mice were treated intratracheally with bleomycin or saline with or without a particulate form of ECM scaffold from porcine urinary bladder matrix (UBM-ECM) or enzymatically digested UBM-ECM. Mice were sacrificed 5 and 14 days after exposure. Compared to control mice, bleomycin-exposed mice had similar increases in inflammation in the bronchoalveolar lavage fluid regardless of UBM-ECM treatment. However, 14 days after exposure, lung histology and collagen levels revealed that mice treated with bleomycin and the particulate or digested UBM-ECM had negligible fibrosis, whereas mice given only bleomycin had marked fibrosis. Administration of the particulate UBM-ECM 24 h after bleomycin exposure also significantly protected against pulmonary injury. In vitro epithelial cell migration and wound healing assays revealed that particulate UBM-ECM promoted epithelial cell chemotaxis and migration. This suggests that promotion of epithelial wound repair may be one mechanism in which UBM-ECM limits pulmonary fibrosis.     

碱性成纤维细胞生长因子促进大鼠硬腭穿孔的愈合

目的:研究碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)对硬腭穿孔愈合的影响。方法:在大鼠硬腭部制作早期硬腭穿孔动物模型,外用bFGF治疗硬腭穿孔。采用肉眼观察、病理学检查的方法进行评价。结果:肉眼观察发现bFGF组伤口愈合率明显高于对照组(P＜0.01); 病理学检查表明bFGF能刺激肉芽组织的增长,成纤维细胞分裂增殖; bFGF组成纤维细胞的核仁形成区嗜银蛋白颗粒数目为3.73±0.52,对照组为2.11±0.31(P＜0.05)。结论: bFGF有助于肉芽组织的生长,具有显著促进硬腭穿孔创伤愈合的作用,有助于硬腭穿孔的修复。     

微孔化羊ADM复合hUCMSC促进创面修复的机制研究

目的 探讨微孔化羊脱细胞真皮基质(ADM)复合人脐带间充质干细胞(hUCMSC)促进全层损伤皮肤创面愈合的治疗机制.方法 将hUCMSC种植于微孔化羊ADM上共培养,形成复合生物敷料.选用72只裸鼠制作成皮肤全层损伤模型,按随机数字表法分为3组,每组24只,hUCMSC种植于微孔化羊ADM上治疗全层损伤创面组(hUCM...     

c—Jun氨基末端激酶选择性抑制剂对哮喘小鼠肺组织IL-2表达的影响

目的探讨c-Jun氨基末端激酶选择性抑制剂（SP600125）对哮喘小鼠肺组织白介素-2（IL-2）表达的影响。方法30只BALB／c小鼠随机分为对照组、哮喘组和SP600125组，制作哮喘模型及干预处理后，处死小鼠，取肺组织，采用免疫组织化学方法和Western blot方法检测各组小鼠肺组织内IL-2的表达。结果免疫组化结果显示，哮喘组小鼠肺组织IL-2表达的平均光密度值为0．76＋0．11，显著高于对照组0．25±0．04，P〈0．01；而SP600125组小鼠肺组织IL-2表达的平均光密度值为0．45±0．08，与哮喘组相比明显降低，P〈0．01。Westernblot结果显示，哮喘组小鼠肺组织IL-2表达的平均光密度值为1．26±0．21，显著高于对照组0．36±0．05，P〈0．01；而SP600125组小鼠肺组织IL-2表达的平均光密度值为0．88±0．11，与哮喘组相比明显降低，P〈0．01。结论c．Jun氨基末端激酶选择性抑制剂能降低哮喘小鼠肺组织IL-2的表达。