青蒿琥酯诱导瘢痕成纤维细胞凋亡的实验研究

目的探讨青蒿琥酯（artesunate，Art）诱导皮肤瘢痕成纤维细胞凋亡的作用及机制。方法取自愿捐献的人耳垂增生性瘢痕，采用组织块贴壁法进行细胞培养。经免疫组织化学染色鉴定后，取第3～5代成纤维细胞，采用含60、120和240mg／LArt培养液各5ml培养作为实验组，仅加入等量的培养液作为对照组。于倒置显微镜及透射电镜观察，采用流式细胞仪观察细胞凋亡及细胞周期。另取第3～5代成纤维细胞，实验组采用30、60和120mg／LArt培养液，对照组仅加入等量的培养液，观察细胞内钙离子的变化。结果原代成纤维细胞呈典型的梭形贴壁生长，免疫组织化学鉴定细胞波形蛋白呈阳性表达；倒置显微镜下观察Art在60～240mg／L浓度范围内抑制成纤维细胞生长且呈剂量及时间依赖性，细胞出现凋亡征象；透射电镜观察，各实验组出现染色质浓缩，沿着核膜排列，甚至核碎裂现象。细胞周期分析显示各实验组与对照组比较，凋亡细胞比例、处于G0～G1、S、G2～M期细胞数差异均有统计学意义（P〈0．05），实验组均出现典型的凋亡峰，且随药物浓度增加，峰值越大。Art在30～120mg／L作用成纤维细胞24h可引起细胞内钙离子浓度持续增加，与对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论Art通过作用于成纤维细胞周期诱导细胞凋亡，细胞内钙离子浓度升高可能是其诱导成纤维细胞凋亡的机制之一。     

青蒿琥酯对脂多糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞凋亡及Bcl-2基因表达的影响

目的：观察青蒿琥酯（Art）对脂多糖（LPS）诱导的大鼠肾小球系膜细胞（glomerular mesangial cells,GMC）凋亡及Bcl-2基因表达的影响,并探讨其可能的作用机制。方法：用不同浓度的青蒿琥酯刺激脂多糖诱导增殖的大鼠肾小球系膜细胞,HE染色观察凋亡细胞形态,DAPI荧光染色观察细胞核凋亡情况,用流式细胞仪检测细胞凋亡率,免疫细胞化学结构和计算机图文分析系统检测Bcl-2的表达。结果：青蒿琥酯对系膜细胞凋亡有明显诱导作用,呈一定剂量依赖性;并能明显地抑制脂多糖诱导上调的Bcl-2基因的表达,且高浓度组的抑制作用强于低浓度组。结论：青蒿琥酯能够剂量依赖性的诱导大鼠系膜细胞凋亡,其机制可能与调控Bcl-2的表达有关。     

青蒿琥酯抑制增生性瘢痕成纤维细胞Smad3表达的研究

目的:研究青蒿琥酯(ART)抑制增生性瘢痕成纤维细胞的果蝇抗皮肤生长因子原体3(Smad3)的表达。方法:原代培养人皮肤增生性瘢痕成纤维细胞,以浓度为0,75,150,300,600μmol/L ART分别干预24h。荧光定量RT-PCR法检测其Smad3 mRNA的表达,Western blot法检测其Smad3蛋白表达。结果:各浓度ART作用于成纤维细胞后,荧光定量RT-PCR法检测发现Smad3 mRNA表达下调,与空白对照组比较,差异有统计学差异(P0.01)。Western blot法检测发现各干预组Smad3蛋白表达下调,与空白对照组比较,差异均有统计学差异(P0.01)。结论:ART能下调人皮肤增生性瘢痕成纤维细胞Smad3的mRNA及蛋白水平,通过抑制Smad3的表达从而减少胶原合成可能是ART抑制增生性瘢痕的机制之一。     

全反式维A酸对人原发性肝癌细胞诱导凋亡的研究

近年发现维A酸对某些肿瘤细胞具有增殖抑制作用。我们以原发性肝癌细胞株SMMC-7721为实验对象,探讨维A酸对原发性肝癌细胞生长的影响,现报道如下。     

高压氧联合顺铂对肺腺癌A549/DDP细胞增殖的影响

目的 观察高压氧(HBO)联合顺铂(DDP)对肺腺癌A549/DDP细胞增殖的影响以及高压氧对细胞周期和凋亡的影响.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测高压氧和顺铂对A549/DDP细胞是否有协同抑制作作用,流式细胞法(FCM)分析高压氧对细胞周期和细胞凋亡的影响.结果 单纯高压氧对A549/DDP细胞的抑制率为2.90％,与常压对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).不同浓度(3、6、12、24μg/ml)的顺铂对A549/DDP细胞的抑制率分别为1.87％、4.62％、11.15％、30.45％,各组间比较差异均有显著性(P＜0.01);高压氧联合不同浓度顺铂对A549/DDP细胞的抑制率分别为4.37％、8.92％、21.88％、48.71％,与顺铂组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).FCM结果显示,A549/DDP细胞经高压氧干预后,G0/G1期细胞减少,S期细胞增多,与对照组比较差异均有极显著性(P＜0.01).凋亡率由2.8％增至7.9％,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 高压氧与顺铂可起到协同抑制A549/DDP细胞增殖的作用,高压氧能阻滞细胞于S期,并促进细胞凋亡.     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导前列腺癌细胞凋亡的研究

目的 研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对前列腺癌细胞的凋亡诱导作用。方法 10μg/L-100μg/L的TRAIL处理培养的PC-3M细胞4～24h后，采用Annexin-V荧光染色、透射电镜、原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测肿瘤细胞凋亡；流式细胞术和MTT比色检测凋亡率、细胞生长抑制率与TRAIL的时间、浓度依赖关系。结果10μg/L～100μg/L TRAIL作用4～24h，肿瘤细胞出现典型的凋亡形态学改变，随着TRAIL浓度的增加或药物作用时间的延长，肿瘤细胞凋亡率也增加，为13．8％～79．6％，同时细胞生长抑制率出现明显增加，药物作用8h为7．5％～37．9％，12h为16．7％～87．9％，24h为39．7％～97．6％。结论 TRAIL能够迅速和显著地诱导PC-3M细胞凋亡，可能成为晚期前列腺癌治疗的新方法。     

维生素E琥珀酸酯诱导MCF 7乳腺癌细胞的凋亡

目的检测维生素E琥珀酸酯（VES）对MCF-7乳腺癌细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用，并分析凋亡诱导分子Fas表达的变化。方法人乳腺癌细胞株MCF-7[雌激素受体阳性，ER（＋）]以VES刺激12，24h和48h，VES浓度为5μg／mL，10μg／mL和20μg／mL，用MTT法测定VES对细胞增殖的抑制作用；以流式细胞仪分析细胞周期和细胞表面Fas的表达；Western蛋白印迹法检测VES作用后Fas蛋白水平的变化。结果VES对MCF-7乳腺癌细胞具有显著的抑制作用，并表现为时间和剂量依赖关系。MCF-7乳腺癌细胞的自然凋亡率为1．2％；5μg／mL，10μg／mL和20μg／mL的VES作用48h后凋亡率分别升高至11．2％，16．4％和41．2％。VES作用后乳腺癌细胞Fas蛋白水平和细胞表面Fas表达升高。结论VES对ER（＋）乳腺癌细胞具有显著的增殖抑制作用，并诱导细胞凋亡，其机制与细胞表面Fas表达上调有关。     

二甲基亚砜诱导人肺癌细胞凋亡的研究

目的：研究二甲基亚砜（DMSO）对人肺癌细胞凋亡的诱导作用。方法：用不同浓度的DMSO处理体外培养的人肺癌细胞A549,应用普通光镜,荧光显微镜,MTT分析方法和流式细胞技术（FCM）检测肺癌细胞凋亡的形态学变化,细胞存活率,凋亡百分率和细胞周期分布的变化。结果：DMSO诱导A549细胞核DNA凝缩和核片段化,最后形成凋亡小体,随着DMSO浓度的增加和处理时间的延长,细胞存活率明显下降,其IC50为3．2％,4％的DMSO处理细胞12h,凋亡率高达33．0％,同时G0／1期细胞明显增加,S期和G2／M期细胞明显下降。结论：DMSO可诱导人肺癌细胞凋亡,并使细胞受阻于G0／1期而进入凋亡程序。     

野生型P53基因诱导人胃腺癌MGC—803细胞凋亡的实验研究

目的 观察野生型P53基因诱导人胃腺癌MGC－803细胞凋亡的现象,探讨野生型P53基因导入抑制细胞增殖的机制。方法 构建含目的基因P53腺病毒载体（AdCMV P53),转染P53基因表达缺失的人胃腺癌细胞MGC－803。应用流式细胞仪分析细胞周期和细胞凋亡率,琼脂糖凝胶电泳图谱及脱氧核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记（TUNEL）技术检测细胞凋亡。结果 腺病毒介导的P53基因转染人胃腺癌细胞MGC－803后,流式细胞仪显示75．7％细胞生长停滞在G0／G1期,20．8％的细胞发生凋亡;琼脂糖凝胶电泳可观察到呈阶梯DNA区带图谱（DNA ladder);AdCMV P53转染组可见细胞凋亡,细胞核内有特异性的蓝黑色团块。结论 野生型P53基因通过诱导MGC－803细胞凋亡抑制细胞增殖。     

Ⅰ期细支气管肺泡癌和肺腺癌增殖凋亡和转移特性的研究

目的探讨新定义后的细支气管肺泡癌与肺腺癌生长和转移性的差异。方法采用流式细胞术检测15例工期细支气管肺泡癌和19例普通肺腺癌的DNA指数、增殖指数（PI）、总s期细胞比率（SPF）和凋亡细胞比率（PA），免疫组织化学检测E—Cadherin、Collagen Ⅳ和VEGFR2的表达。结果细支气管肺泡癌的PA大于普通肺腺癌，PI和SPF值在普通肺腺癌与细支气管肺泡癌中差异无统计学意义；细支气管肺泡癌的E-Cadherin、Collagen Ⅳ指标表达水平高于普通肺腺癌，VEGFR2在普通肺腺癌、细支气管肺泡癌中的表达差异无统计学意义。结论早期细支气管肺癌与普通肺腺癌相比，具有相同增殖水平，较高的凋亡水平和更低的转移倾向。     

光动力学疗法诱导人膀胱癌细胞凋亡的实验研究

目的:联合应用流式细胞仪和激光共聚焦显微镜研究叶绿素衍生物光动力学疗法诱导人膀胱癌细胞(T-24 and SCaBER)凋亡的现象.方法:光动力疗法体外作用于人膀胱癌T-24and SCaBER细胞,细胞凋亡指数采用双免疫荧光染色(Annexin V/PI)和流式细胞仪技术测定,凋亡细胞的形态学研究采用AO/EB双染色和激光共聚焦显微镜技术.结果:经光动力学作用后的膀胱癌细胞通过诱导凋亡而被抑制了细胞的活性.细胞被阻滞于G0～G1期.结论:叶绿素衍生物光动力学疗法通过诱导凋亡而抑制膀胱肿瘤的生长,激光共聚焦显微镜能提供更可靠的细胞早期凋亡的影像学资料.     

盐霉素对人肺腺癌A549细胞株生物学特性的影响

目的 观察盐霉素对人肺腺癌A549细胞株生物学特性的影响.方法 无血清培养A549干细胞,进行划痕、Transwell和细胞计数实验,运用流式细胞仪检测细胞侧群比例,采用Westernblot检测盐霉素对转录因子Oct4表达的影响.结果 空白对照组、30 mg/L、60 mg/L盐霉素组迁移距离分别为70、40、10μm,侵袭细胞数目分别为(32.3±2.5)、(21.4±1.8)、(1.3±0.3)个/HP,细胞存活率分别为98％、74％、50％;60 mg/L组、30 mg/L组、空白对照组、利血平阻断组侧群比例分别为3.4％、10.5％、12.5％、0.7％.Western blot示随着盐霉素浓度增加,Oct4的表达量下降.结论 盐霉素对人肺腺癌细胞株A549生物学特性具有重要影响.     

9-顺-维A酸诱导肺鳞、腺癌细胞株凋亡与CyclinD1和Rb基因表达的关系

目的　探讨 9 顺 维A酸 ( 9 cis retinoicacid 9 cisRA )诱导肺癌细胞株凋亡作用及其与CyclinD1、Rb基因表达的关系。 方法　体外培养肺鳞癌细胞株L78、肺腺癌细胞株PG ,随机分为两组 ,实验组加 9 cisRA使其终浓度为 5 μmol L ,对照组加入二甲亚砜使其终浓度为 0 .1% ,培养48h后用流式细胞仪技术分别检测CyclinD1、Rb基因表达率 ,同时用DNA凋亡分析法检测肿瘤细胞凋亡发生率 ,研究三者之间的相关关系。结果　L78、PG细胞实验组中细胞凋亡发生率显著增高 ,两株细胞中凋亡发生率与CyclinD1基因表达率之间负相关 (L78:r =-0 .70 7,P <0 .0 5 ;PG :r =-0 .785 ,P <0 .0 1) ,与Rb基因表达率之间明显正相关 (L78:r =0 .743 ,P <0 .0 1;PG :r =0 .75 5 ,P <0 .0 1)。结论　 9 cisRA可能通过Rb基因表达增加和CyclinD1基因表达减少途径使L78、PG细胞明显阻滞在G0 G1 期 ,并诱导肺癌细胞凋亡。     

异氟醚和七氟醚对人肺腺癌A549细胞迁移及细胞分裂周期蛋白42、成束蛋白表达的影响

目的 观察异氟醚和七氟醚对人肺腺癌A549细胞迁移及细胞分裂周期蛋白42(cell division cycle 42,Cdc42)和成束蛋白( Fascin)表达的影响.方法 人肺腺癌A549细胞接种于培养板,培养24 h后,按随机数字表法分为3组(每组6例):对照组(C组)、2.3％异氟醚组(Iso组)、3.4％七氟醚组(Sev组).Iso组和Sev组的A549细胞分别暴露于2.3％异氟醚或3.4％七氟醚2、4、6h.C组不接受异氟醚或七氟醚处理.3组处理结束后,继续培养24 h.于24 h时,采用Transwell法检测各组A549细胞处理2、4、6h后的迁移细胞数目,蛋白印迹法检测各组A549细胞处理4h的Cdc42和Fascin表达水平.结果 与C组和Iso组比较,Sev组的迁移细胞数目降低[(102±21)、(97±19)、(105±30)、(104±27)、(92±20)、(90±18) vs(81±16)、(65±11)、(42±9)](P＜0.05)；与C组和Iso组比较,Sev组的Cdc42表达下调[(75±l6)％,(79±13)％vs(31±7)％](P＜0.05)；与C组和Iso组比较,Sev组的Fascin表达下调[(71±13)％、(77±18)％vs(40±8)％](P＜0.05).结论 七氟醚能抑制人肺腺癌A549细胞的迁移,该效应可能与抑制Cdc42和Fascin表达有关.异氟醚无抑制A549细胞迁移的效应.     

Galectin-3在CD133+肺腺癌细胞中表达增高诱导CD8+T细胞凋亡

目的 检测肺腺癌CD133+细胞中Galectin-3的表达.方法 磁珠分选出10例患者肺腺癌中CD133+细胞.流式细胞术检测分选效率,荧光实时定量聚合酶链反应( fqRT-PCR)和Western blot检测CD133+细胞中Galectin-3的表达,并在体外检测了CD133+细胞上清诱导CD8+T细胞凋亡的能力.结果 流式细胞术结果表明磁珠分选出的细胞中CD133+细胞数为90％.fqRT-PCR 和Western blot结果发现Galectin-3在CD133+细胞中的表达量分别为CD133-细胞中的1.24倍和1.5倍,差异有统计学意义(P＜0.05).凋亡检测结果显示CD133+细胞的上清诱导CD8+T细胞凋亡率为(27.1±2.6)％,并且这种诱导凋亡的能力可被乳糖以及抗Galectin-3的抗体中和.结论 Galectin-3在肺腺癌CD133+细胞中高表达,并具有很强的生物学活性,在体外具有明显的诱导CD8+T细胞凋亡的功能.     

肿瘤坏死因子凋亡诱导配体诱导膀胱癌EJ细胞凋亡的研究

目的 探讨肿瘤坏死因子凋亡诱导配体(TRAIL)诱导膀胱癌细胞凋亡的效应。方法 10～100μg／L梯度浓度的TRAIL与培养的EJ细胞共孵育4～24h。采用Annexin V染色，DNA云梯实验和流式细胞技术检测诱导后EJ细胞凋亡发生的时期和程度。结果 TRAIL诱导4h即后可观察到早期细胞凋亡发生，8h后即可检测DNA片段化，24h后凋亡细胞最多达到66．29％。结论 TRAIL能够迅速诱导EJ细胞凋亡，可能成为膀胱癌治疗的新方法。     

青蒿琥酯通过NLRP3炎症小体抑制细胞焦亡减轻大鼠肾缺血-再灌注损伤

目的  探究青蒿琥酯对大鼠肾缺血-再灌注损伤（IRI）的作用及机制。 方法  将25只SD大鼠随机分为假手术组（Sham组）、模型组（IRI组）、低剂量青蒿琥组（ART-L组）、高剂量青蒿琥酯组（ART-H组）和NLRP3炎症小体抑制剂组（INF39组）,每组5只。分析各组大鼠血清肌酐（Scr）、血尿素氮（BUN）水平及肾组织病理损伤情况;检测各组大鼠血清肿瘤坏死因子（TNF）-α、白细胞介素（IL）-6水平;用免疫组织化学染色法检测各组大鼠肾组织IL-1β的表达;免疫荧光染色和蛋白质免疫印迹法检测焦亡相关蛋白的表达。 结果  与Sham组比较,IRI组Scr和BUN水平升高,肾组织损伤较重,炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β表达水平升高,肾损伤分子（KIM）-1及焦亡相关蛋白NOD样受体蛋白3（NLRP3）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（Caspase）-1、Gasdermin D（GSDMD）、IL-1β蛋白表达水平均升高;与IRI组比较,ART-L组、ART-H组和INF39组Scr和BUN水平均下降,肾组织损伤均较轻,TNF-α、IL-6、IL-1β表达水平均降低,KIM-1、NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-1β蛋白表达水平均下降。 结论  青蒿琥酯可抑制NLRP3炎症小体诱导的细胞焦亡,减少肾IRI后焦亡相关蛋白的表达及炎症因子的释放,减轻肾IRI。     

苦参碱诱导人乳腺癌细胞MCF-7/ADR的凋亡研究

目的 研究苦参碱对人乳腺癌MCF—7／ADR细胞的生长抑制作用及诱导凋亡机制。方法 四甲基噻唑蓝(MTT)法测定苦参碱对细胞的半数抑制浓度(IC50)，用荧光显微镜、电子显微镜、激光共聚焦显微镜、流式细胞仪和DNA凝胶电泳等技术观察细胞凋亡。结果 0．3—2．5g／L浓度苦参碱对MCF—7／ADR细胞有明显的抑制作用，并诱导发生凋亡，实验范围内细胞凋亡的比率与药物浓度呈一定相关。结论 苦参碱能抑制人乳腺癌MCF—7／ADR细胞的生长，其机制与阻止细胞周期的进程，启动细胞自身调控程序，诱导凋亡有关。     

香加皮杠柳苷对肺癌A549细胞凋亡及Survivin表达的影响

目的 研究香加皮杠柳苷（CPP）对人肺癌A549细胞凋亡及survivin表达的影响,探讨其抗肿瘤作用及作用机制。方法 采用噻唑蓝（MTT）法检测1.25,2.50,5.00,10.00,20.00 ng.mL-1 CPP处理24,48,72 h对人肺癌A549细胞的抑制作用;应用流式细胞术分析不同浓度CPP（2.50,5.00,10.00 ng.mL-1）分别作用于A549细胞6,12,24,48,72 h对细胞凋亡和凋亡率的影响;应用吖啶橙/溴乙啶（AO/EB）荧光染色法和透射电镜观察CPP处理前后A549细胞凋亡的形态学及超微结构变化;采用反转录聚合酶链反应（RT PCR）法检测CPP作用后A549细胞中凋亡抑制基因survivin的mRNA表达情况;应用Western blot检测CPP对A549细胞survivin蛋白表达的影响。结果 CPP能显著抑制人肺癌A549细胞的生长,最大抑制率（93.46±2.35）%。流式细胞术结果显示,CPP处理组可见典型的凋亡峰,与对照组比较,A549细胞的凋亡率明显升高（P<0.05）。荧光显微镜下可见CPP处理组A549细胞呈橘红色的凋亡细胞形态。透射电镜下可见经CPP处理的A549细胞体积变小,出现细胞质凝缩,核内染色质凝聚边集于核膜,内质网扩张,细胞质空泡化等凋亡细胞的特征性超微结构改变。RT PCR结果显示,经CPP处理的A549细胞中survivin mRNA表达降低（P<0.05）,10.0 ng.mL-1CPP组survivin mRNA表达由对照组的（0.928±0.016）降至（0.251±0.012）;Western blot结果显示CPP组细胞中survivin蛋白表达明显减弱。结论 CPP可诱导人肺癌A549细胞发生凋亡,可通过下调survivin基因的mRNA和蛋白表达而发挥诱导细胞凋亡作用。     

丝裂霉素诱导人肝癌细胞凋亡的研究

本研究旨在观察在体外丝裂霉素(ＭＭＣ)对人肝癌细胞凋亡的诱导作用 ,从凋亡的角度探讨其抗癌机理 ,现将结果报道如下。一、材料与方法1.细胞培养及实验分组 :人肝癌ＢＥＬ 740 2细胞株来自中国科学院上海细胞所 ,用含高糖的ＤＭＥＭ培养液 ,补充体积分数为 12 %的胎牛血清、青霉素 (10 4 Ｕ/Ｌ)、键霉素 (10 0 μｇ/Ｌ) ,于37℃ ,体积分数为 5 %的ＣＯ2 孵箱中培养。实验分药物处理组与对照组 ,处理组又分 2× 10 -2 、2× 10 -3 、2× 10 -4 ｇ/ＬＭＭＣ 3种浓度 ,作用时间为 2 4ｈ。2 .透射电镜 :将浓度为 2× 10 -2ｇ/Ｌ的ＭＭＣ处理Ｂ…