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相似文献
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1.
原发性肝癌多药耐药基因的表达及意义   总被引:10,自引:1,他引:10  
目的 探讨5种多药耐药(MDR)基因在肝癌组织中的表达,建立MDR的基因诊断标准。方法 用逆转录PCR、流式细胞术检测肝癌组织中5种MDR基因mRNA和蛋白质的表达,用MTT法检测抗癌药物对肝癌原代细胞的IC50值。结果 肝癌耐药涉及mdr1、MRP、LRP、GSTP1和TopoⅡα基因。mdr1 mRNA≥0.5、MRP mRNA≥0.6、LRP mRNA≥0.8、GSTP1 mRNA≥0.7T TopoⅡαmRNA≤0.4为耐药联合诊断标准,符合率为98.00%。结论 多重MDR是肝癌耐药的主要形式。用逆转录PCR方法联合检测5种MDR基因mRNA表达在肝癌化疗敏感性预测中具有必要性和可行性。  相似文献   

2.
原发性肝癌多药耐药基因的表达及其意义   总被引:6,自引:3,他引:6  
目的 探讨5种多药耐药(MDR)基因肝癌组织中的表达,建立MDR的基因诊断标准。方法 用逆转录-聚合酶链(RT-PCR)方法,流式细胞术检测肝癌组织中5种MDR基因mRNA和蛋白质的表达,用四氮唑蓝快速比色(MTT)法检测抗癌药物对肝癌原代细胞的IC50值。结果 肝癌耐药涉及mdr1,MRP,LRP,GSTp1和TopoⅡα基因,mdr1 mRNA≥0.5、MRPmRNA≥0.6、LRP mrnA  相似文献   

3.
肝癌多药耐药基因表达的临床研究   总被引:12,自引:0,他引:12  
目的 探讨肝癌多药耐药基因 (MDR1)mRNA表达与癌分化、临床病理学特征、化疗效果、转移复发及预后的关系。方法 收集肝癌组织及癌旁 2cm肝组织 4 7例 ,正常肝组织 12例 ,采用荧光定量RT PCR方法检测MDR1mRNA的表达。结果 MDR1mRNA表达强度在 1 4× 10 3 ~3 6× 10 6copy/ μgRNA ,癌组织阳性率为 72 % ,明显高于癌旁肝组织 (5 1% )和正常肝组织 (4 2 % )(P <0 0 5 )。癌组织MDR1mRNA表达与癌灶直径、有无转移、Okuda分期、癌结节数目呈正相关 ,与复发时间、有无包膜及患者的生存期呈负相关关系。回归分析表明MDR1mRNA主要与癌灶转移潜能有关 (B =1 82 3,OR =6 187,P <0 0 5 )。MDR1mRNA阳性组化疗与疗效间无相关性 ,而MDR1mRNA阴性组术后局部化疗能明显改善肝癌的疗效 (r =0 773,P <0 0 5 ) ,其生存曲线明显高于MDR1mRNA阳性组。结论 MDR1mRNA基因表达与肝癌原发性耐药及癌灶转移潜能有关。  相似文献   

4.
目的观察多药耐药(MDR1)基因保护骨髓进行大剂量化疗杀伤肿瘤及在体内表达情况。方法BALB/C小鼠H22肝癌模型,^60Co-γ照射,移植转染MDR1的骨髓造血细胞后化疗,计数白细胞,测定瘤体大小;外周血、骨髓、脾、肿瘤等行P-糖蛋白免疫组织化学,流式细胞术以及MDR1RT-PCR。PCR检测。结果MDR1转染小鼠白细胞明显较高(P〈0.01),单纯骨髓移植小鼠白细胞前3周高于BC组,第4周后差异无统计学意义;化疗剂量较大抑瘤率高。MDR1转染后肿瘤组织无P-糖蛋白表达;外周血,肾PCR检测有特异条带而RT-PCR检测未发现。结论MDR1保护骨髓支持大剂量化疗可抑制肿瘤生长。外源MDR1仅在骨髓有效表达。  相似文献   

5.
目的观察乙肝病毒(HBV)X蛋白对肝癌多耐药性产生的影响,探讨肝癌多药耐药的形成与乙肝病毒感染的关系。方法应用脂质体介导技术稳定转染peDNA3/HBX质粒至HepG2人肝癌细胞株,噻唑蓝(MTr)法检测阿霉素及丝裂霉素作用下转染前后细胞的存活率,An—nexin/PI法流式细胞分析术检测转染前后细胞在受到5-氟尿嘧啶(5-Fu)作用后的凋亡指数(AJ),逆转录.聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot技术分别检测转染前后HepG2内多药耐药相关基因在mRNA和蛋白水平的表达。结果MTr法显示阿霉素和丝裂霉素作用下,转染了peDNA3/HBX质粒的HepG2细胞的IC50明显高于对照组(P〈0.05)。5-Fu作用后转染组和对照组的AJ分别是(9.83±1.50)%VS(17.79±1.70)%,两者差异有统计学意义(P〈0.05)。整合了HBX基因的HepG2细胞内多药耐药相关基因在mRNA和蛋白水平的表达也均高于未转染细胞,转染前后比较在mRNA水平mdrl、MRPl、LRP基因的表达分别提高了190%、68%、95%;而在蛋白水平p—gp、MRPl、LRP的表达分别提高了64.3%、87.5%和90.8%。结论乙肝病毒X蛋白可上调HepG2细胞内多药耐药相关基因的表达,从而促进肝癌多药耐药性的产生。  相似文献   

6.
Twist基因表达与肝癌多耐药细胞侵袭的相关性研究   总被引:9,自引:0,他引:9  
目的研究胚胎发育相关基因Twist在人肝癌多药耐药细胞系HepG2/ADM中的表达及意义。方法建立肝癌多药耐药细胞系HepG2/ADM,利用荧光定量PCR技术及免疫印记法分别检测Twist mRNA及Twist蛋白;多药耐药相关基因MDR 1mRNA在HepG2/ADM及其亲本细胞HepG2中表达的差异。结果Twist在HepG2/ADM中表达上调,与亲本细胞 HepG2相比,mRNA(9.34 vs 1,P<0.05),蛋白(10.64±0.56 vs1,P<0.05),具有显著性差异,MDR1mRNA表达在HepG2/ ADM中显著上调,是其亲本细胞的348.99倍(P<0.05)。结论 Twist在HepG2/ADM中表达上调,这可能使得HepG2/ ADM转移扩张能力增加。  相似文献   

7.
多药耐药相关蛋白在肝癌多药耐药细胞系HePG2/ADM中的作用   总被引:2,自引:0,他引:2  
目的研究4种耐药蛋白:多药耐药蛋白(multi—drug resistance protein 1,MDR1),多药耐药相关蛋白1(multi—drug resistance related protein 1,MRP1),肺耐药蛋白(lung resistance protein,LRP),乳腺癌耐药蛋白(breast cancer resistance protein,BCRP)在肝癌多药耐药中的作用。方法通过培养液中阿霉素(adriamycin,ADM)浓度递增诱导法筛选培养,建立HePG2/ADM肝癌多药耐药细胞株;采用real time荧光定量PCR检测四种耐药蛋白mRNA在正常肝细胞系L02、肝癌细胞系HePG2及HePG2/ADM中的表达差异;Western blot检测3种细胞系中4种耐药蛋白的表达。结果(1)建立HePG2/ADM细胞系。MTT法检测阿霉素对HePG2/ADM细胞IC50为亲本细胞的282倍(P〈0.05)。(2)HePG2/ADM中MDR1和BCRP mRNA表达分别是HePG2的400倍(F=87.49,P〈0.05)和9倍(F=1006,P〈0.05)。MRP1和LRP mRNA表达差异无统计学意义(FMRPI=3.43,FLRP=2.44,Pall〉0.05)。(3)L02和HePG2中4种耐药蛋白mRNA的表达均无差异(FMDRI=1006,FBCRP=87.49,FMRPI=3.43,FLRP,=2.44,Pall〉0.05)。(4)Western blot检测发现HePG2/ADM细胞中MDR1,BCRP,LRP蛋白表达显著高于HePG2和L02细胞(FMDHI=28.68,FBCRP=18.60,FLRP=6.28,Pall〈0.05),MRP1蛋白表达不增高(FMRPI=0.70,P〉0.05)。(5)4种耐药蛋白表达在HePG2和L02细胞差异均无统计学意义(FMDRI=28.68,FBCRP=18.60,FMRPI=0.70,FLRP=6.28,Pall〉0.05)。结论MDR1和BCRP在HePG2/ADM多药耐药中起重要作用,HePG2/ADM多药耐药与MRP1和LRP可能无关。  相似文献   

8.
MDR1特异性核酶逆转肝癌多药耐药的实验研究   总被引:2,自引:0,他引:2  
目的探讨MDR1核酶(N2A+tRNAi^met-iMDRl-sRz,sRz)在裸鼠体内逆转人肝癌组织多药耐药(MDR)的可行性。方法将原发性MDR人肝癌组织裸鼠原位移植模型第2代随机分为A组(空白对照组:生理盐水40μl+Lipofect AMINE^TM2000 10μ1)、B组(阴性对照组:N2A+tRNAi^met 10μg/40μl+Lipofect AMINE^TM2000 10μl)和C组(核酶组:sRz 10μg/40μl+LipofectAMINE^TM2000 10μl),均开腹瘤内注射。瘤内注药1周后用表阿霉素15mg/kg腹腔注射,每周1次,连续4周。彩色B超测量肿瘤体积。化疗结束后1周处死裸鼠,RT-PCR、Western blot法检测肿瘤中MDR1 mRNA及其蛋白P-gp的表达。结果C组每次化疗后肿瘤体积均较前缩小(F=659.99,P〈0.05)。除第1次化疗外,其余各次化疗后C组的抑制率均高于A、B组(F=35.36,12.77,97.60,P〈0.05)。化疗结束后,C组与瘤源以及A、B组相比,肿瘤组织中MDR1 mRNA和P-gp的表达明显降低(F=45.36,3590.40,P〈0.05)。结论sRz可有效降低肝癌细胞表达MDR1 mRNA和P-gp,一定程度上逆转MDR,提高E-ADM的化疗效果。单纯E-ADM化疗可使肝癌组织MDR1 mRNA和P-gp表达升高,诱导MDR的产生。  相似文献   

9.
多药耐药基因mdr1在肝细胞性肝癌中的表达及其意义   总被引:3,自引:2,他引:1  
目的 探讨肝细胞性肝癌 (HCC)中多药耐药基因mdr1的表达及其与肝癌临床病理特征、肿瘤多药耐药和患者预后的关系。方法 用免疫组化染色方法检测 5 6例HCC细胞中mdr1基因的表达 ,并结合临床病理指标进行统计分析。结果  5 6例HCC病例中mdr1基因的表达 :癌旁组织中 19例阳性 (3 3 .9% ) ,癌组织中 3 0例阳性 (5 3 .6% ) ,两者比较差异有显著性 (χ2 =4.3 9,P<0 .0 5 )。 48例初治患者中 2 2例阳性 (4 5 .8% ) ,8例复发者均为阳性 (10 0 % )。按肿瘤大小、数目、包膜有无、癌栓有无、分化程度、HBsAg等分组 ,其间mdr1表达差异无统计学意义。mdr1表达阳性组与阴性组 1、2、3年生存率比较 ,其差异无统计学意义。结论 mdr1在HCC中表达阳性率为 5 3 .6% ,其表达与肿瘤大小、数目、包膜有无、癌栓有无、分化程度、HBsAg和肝硬变情况无关 ;HCC具有原发性耐药。  相似文献   

10.
目的 探讨短发夹RNA/MDR1(shRNA/MDR1)干扰技术能否体内逆转肝细胞癌多药耐药.方法 建立肝细胞癌耐药细胞株HepG2/MDR1和敏感细胞株HepG2裸鼠移植瘤模型,分腹腔注射组和瘤体内注射组,以表达载体pSUPER-shRNA/MDR1转染,阴性对照组以阴性载体pSUPER转染,72 h后行腹腔内阿霉素化疗试验,每周2次,共2周,然后处死动物,测量化疗前后肿瘤体积差,瘤体制成细胞悬液和组织切片,分别以流式细胞术和免疫组织化学检测细胞膜P-gp表达.结果 成瘤率100%,HepG2/MDR1组和HepG2组成瘤时间和化疗前肿瘤体积差异无统计学意义,HepG2/MDR1组化疗前后肿瘤体积差(mm3)与阴性对照组比较差异有统计学意义(700.14±25.61比1659.70±152.54,P<0.01);腹腔注射组和瘤内注射组差异无统计学意义.流式细胞术检测发现治疗组细胞膜蛋白P-gp表达率(%)较阴性对照组明显下调(65.1%比94.1%,P<0.05),腹腔注射组和瘤内注射组差异无统计学意义(94.1%比92.8%,P>0.05).瘤体组织病理切片和免疫组织化学分析也有同样的结果.结论 表达载体pSUPER-shRNA/MDR1体内转染可以逆转肝细胞癌多药耐药.  相似文献   

11.
原发性肝细胞癌中错配修复基因hMLH1的表达及其意义   总被引:3,自引:0,他引:3  
目的 探讨错配修复基因hMLH1在原发性肝细胞癌(HCC)组织中的表达及其意义。方法 采用免疫组织化学和逆转录 聚合酶链反应(RT PCR)检测48例肝癌组织、2 3例癌旁组织和2 5例正常肝组织中hMLH1蛋白和mRNA的表达情况,同时采用原位末端标记法测定癌组织的细胞凋亡指数。结果 48例肝癌组织、2 3例癌旁组织和2 5例正常肝组织的hMLH1mRNA表达分别为62 .5 % (3 0 /4 8)、10 0 .0 % (2 3 /2 3 )和10 0 .0 % (2 5 /2 5 ) ,蛋白表达分别为60 .41% (2 9/4 8)、91.3 0 % (2 1/2 3 )和10 0 .0 0 % (2 5 /2 5 )。hMLH 1表达与肝癌组织的临床分期有明显相关,hMLH1表达阳性的肝癌组织的细胞凋亡指数升高为(3 .5 62±0 .2 3 3 ) %。结论 hMLH1在肝癌组织中低表达,提示错配修复基因hMLH1功能缺陷在肝癌的发生、发展过程中起重要作用  相似文献   

12.
目的 检测小干扰RNA(siRNA)对肝癌耐药细胞株HepG2/阿霉素(ADM)多药耐药相关蛋白基因2(MRP2)及其蛋白产物的抑制作用,观察对多药耐药性的影响.方法 使用浓度梯度法制作HepG2耐ADM细胞株(HepG2/ADM),ADM浓度从0.1~2.0 m/L:设计合成针对MRP2的siRNA小片段,转染HepG2/ADM耐药细胞,24 h后通过实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western blot检测siRNA对MRP2基因mRNA和蛋白的抑制效果;噻唑蓝(MTT)比色法观察抑制MRP2基因表达后,HepG2/ADM细胞对化疗药物的敏感性变化,并计算各药物的半数抑制浓度(IC50).结果 HepG2/ADM对ADM、5-氟尿嘧啶(5-Fu)、长春新碱和奥沙利铂的IC50值分别为0.3204、3.8002、0.2014和0.1221;siRNA明显抑制了HepG2/ADM细胞MRP2基因mRNA和蛋白的表达(P<0.05);转染MRP2-siRNA后,HepG2/ADM细胞对ADM、5-Fu、长春新碱和奥沙利铂的IC50值明显减小,分别为0.1023、1.4417、0.0452和0.0268.结论 用siRNA沉默MRP2基因能够逆转HepG2/ADM细胞对化疗药物的耐药性,MRP2基因与HepG2/ADM肝癌细胞的多药耐药性相关,可通过沉默MRP2基因提高耐药细胞对化疗药物的敏感性.  相似文献   

13.
目的构建人原发性肝细胞癌(HCC)消减杂交文库,筛选差异表达基因。方法以癌组织为检测者(tester)、癌旁组织为参照者(driver),应用抑制性消减杂交(SSH)方法构建消减杂交cDNA文库,随机挑选56个阳性克隆进行鉴定、测序及同源性分析。结果文库获得130个阳性克隆,鉴定96%有200~1500bp插入片断。获得的35个基因中包括已知基因26个,功能未知基因5个,新基日4个。已知基因中包含酶、细胞信号转导、基因调控因子、转录调节因子、癌基因、抗凋亡因子及细胞的黏附与生长调节因子等相关基因。结论应用SSH方法成功构建HCC差异表达基因cDNA文库,筛选出低丰度和新基因在内的HCC差异表达基因。  相似文献   

14.
原发性肝癌组织中明胶酶A基因表达增强   总被引:5,自引:0,他引:5  
目的 了解基质降解对原发性肝癌的作用。方法  33例原发性肝细胞癌患者术中取癌组织及癌旁组织 ;提取组织总RNA ;用逆转录共扩增定量PCR方法测定明胶酶A (MMP2 )基因表达水平。结果 肝癌组织明胶酶A基因表达水平 (3 2 0± 0 34 )明显高于癌旁的肝硬化组织 (0 70±0 16 )及正常肝组织 (0 34± 0 0 7)。肝癌患者MMP2 基因表达水平与血清AFP浓度、肿瘤大小无关。结论 明胶酶A在原发性肝癌的进展中可能起重要作用。  相似文献   

15.
目的 通过对SEMA3B基因在原发性肝细胞癌(HCC)组织中表达的检测,探讨该基因与HCC发生机制的关系。方法 采用逆转录-聚合酶链反应(RT—PCR)方法检测35例HCC组织及癌旁肝组织SEMA3BmRNA表达水平。结果 (1)在所有受检的癌旁肝组织中,SEMA3BmRNA表达率为85.7%(30/35),明显高于癌组织的表达率20.0%(7/35),差异有统计学意义(P〈0.01);(2)合并有肝硬化(20/28)或者乙肝(19/28)的患者,其癌组织中SEMA3B基因的表达缺失率显著高于无肝硬化(8/28)或乙肝阴性(9/28)患者(P〈0.05);(3)SEMA3B基因的异常表达情况与年龄、性别的差异无统计学意义(P〉0.05),与HCC患者术前肝功能Child—Pugh分级评价和血清AFP的检测值高低无相关(P〉0.05);(4)SEMA3B的表达缺失率与TNM分期关系无统计学差异,低分化型癌组织中SEMA3B基因缺失率高于中、高分化型,但差异无统计学意义(P〉0.05)。此外,该基因的缺失与肿瘤大小无关(P〉0.05)。结论 SEMA3B基因在HCC组织中的高频表达缺失说明该基因的失活与HCC的发生密切相关。SEMA3B基因是定位于染色体3p21.3区域的与HCC相关的抑癌基因,并且可能在HCC的发生发展方面起重要作用。  相似文献   

16.
目的 探讨脆性组氨酸三联体基因蛋白(fragile histidine triad,FHIT)、纤黏连蛋白(fibronectin,FN)、张力蛋白同源基因蛋白(phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten,PTEN)在肝癌组织中的表达及与患者预后的关系.方法 应用免疫组化方法检测138例肝癌组织标本的FHIT,FN,PTEN的表达情况,分析表达与患者临床病理因素的关系.差异检验采用Log-rank检验.结果 FHIT,FN,PTEN在肝癌组织中的表达与癌旁组织比较差异有统计学意义(分别x2=5.968,7.380,4.962,均P<0.05),与肿瘤大小,分化程度,肿瘤数目,淋巴结转移,癌栓形成等比较差异有统计学意义(P<0.05),FHIT,FN表达阳性患者组较阴性患者组生存时间短(分别x2=4.443,9.867;均P<0.05),而PTEN表达阳性患者较阴性患者生存时间长(分别x2=4.199,P<0.05).结论 FHIT,FN,PTEN在肝癌组织中存在异常表达,FHTT,FN表达提示患者预后不良,PTEN表达提示患者预后较好.  相似文献   

17.
目的 克隆新的肝癌相关基因并探索其在肝癌发生发展中的作用机制。方法 采用mRNA差异显示技术,分析肝癌和癌旁组织差异表达基因谱,获得的差异表达基因片断作为探针,筛选胎盘cDNA文库,以获得全长cDNA序列。通过Northern印迹杂交的方法,分析所获得的新基因在42例肝癌组织中的表达情况,并分析其临床和病理学意义。结果 克隆了一个新的肝癌相关基因,命名为HCCA3,该基因的全长cDNA 1706 bp,编码一个264个氨基酸的蛋白质,在人类肝癌中广泛表达(78.6%,33/42),并与肝癌的浸润转移密切相关。结论 HCCA43是一个新的人类基因,在肝癌中的异常高表达可能对肝癌的发生发展具有重要的促进作用。  相似文献   

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