雷帕霉素对人肝癌裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用

目的 探讨雷帕霉素对人肝癌裸鼠皮下移植瘤生长的影响及机制.方法 建立人肝癌裸鼠皮下移植瘤模型24只,随机分为对照组、RAPA小剂量组(每日1 mg/kg体重)、RAPA大剂量组(每日5 mg/kg体重).用药4周后观察肿瘤体积和重量、肿瘤组织切片行透射电镜检查、荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测肿瘤的血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)mRNA的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定裸鼠血VEGF、MMP-2浓度.结果 与对照组比较,雷帕霉素小剂量组和大剂量组均能抑制肿瘤生长[(0.42±0.17)cm3和(0.38±0.21)cm3比(0.78±0.25)cm3,P＜0.05];VEGF mRNA、MMP-2 mRNA的转录和翻译显著减少(P＜0.01).结论 雷帕霉素可以通过抑制肝癌细胞VEGF和MMP-2的mRNA转录和蛋白表达,抑制肿瘤生长,但不呈剂量依赖性.     

肝动脉结扎对转移性人肝癌裸鼠原位移植瘤乏氧的影响

目的 观察肝动脉结扎(HAL)对转移性人肝癌裸鼠原位移植瘤乏氧的影响.方法 采用24只BALB/C-nu/nu裸鼠,建立转移性人肝癌裸鼠原位移植模型;随机分为2组,A组于移植瘤术后2周进行HAL(n=12),B组假手术(Sham)作为对照(n=12).分别于干预术后2 d和4周各随机处死每组中6只荷瘤裸鼠,利用免疫组织化学显色(SP法)和Western blot检测移植瘤内哌莫硝唑(Pimonidazole)和缺氧诱导因子(HIF)-1α的阳性表达和染色强度,以及血管内皮生长因子(VEGF)蛋白水平和肿瘤组织微血管密度(MVD),并用肺连续切片法计数4周时荷瘤裸鼠肺转移灶.结果 与Sham组比较,HAL组移植瘤内Pimonidazole阳性细胞及HIF-1α表达水平在术后2 d显著增加(P<0.05),并且肿瘤组织和血清内VEGF水平[(922.5±59.3)比(349.6±46.5)ng/L,P<0.01]明显增加.术后4周,荷瘤裸鼠肺转移率较对照组增加(6/6比1/6,P<0.05),但此时乏氧细胞,VEGF表达和MVD则与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 HAL促进转移性人肝癌裸鼠原位移植瘤短期乏氧及VEGF表达,但不影响移植瘤长期乏氧效应.     

二烯丙基三硫化物对肝移植术后大鼠肝癌生长的抑制作用

目的 探讨二烯丙基三硫化物(DAIS)对肝移植术后大鼠肝癌皮下移植瘤生长的影响及其机制.方法 建立大鼠肝移植术后肝癌皮下移植瘤模型24只,随机分为对照组、DAIS Ⅰ组(每日1 mg/kg)、DAISⅡ组(每日15 mg/kg).用药2周后观察肿瘤体积和重量,生化法测定大鼠血清肝肾功能,荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测肿瘤的血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶(MMP)-2 mRNA的表达,肿瘤组织切片行透射电镜检查.结果 与对照组比较,DAIS能抑制肿瘤生长,对照组、DAIS Ⅰ组和DAIS Ⅱ组皮下移植瘤体积分别为(0.78±0.25)、(0.42±0.17)、(0.38±0.21)cm3(P<0.01);DAIS抑制肝癌细胞VEGF mRNA、MMP-2 mRNA的转录(P<0.01).DAIS对肝移植术后大鼠肝、肾功能无明显毒性作用(P>0.05);透射电镜下可见DAIS组肿瘤组织内有较多细胞凋亡现象.结论 DAIS可以抑制肝癌细胞VEGFmRNA和MMP-2 mRNA的转录,诱导肿瘤细胞凋亡,抑制肝移植术后皮下移植瘤的生长.     

酪丝缬肽对人肝癌裸鼠移植瘤的抗血管生成作用及其机制

目的 探讨三肽化合物酪丝缬肽(YSV)对人肝癌细胞SMMC-7721裸鼠移植瘤的抑制作用及其抗血管生成机制.方法 建立人肝癌SMMC-7721裸鼠移植瘤模型,免疫组织化学法观察YSV对肿瘤组织中微血管密度(MVD)的影响;应用血管生成相关基因芯片分析YSV对肿瘤组织血管生成相关基因的影响;应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)验证相关基因的表达情况,最后酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定血清中目的因子的含量.结果 YSV能显著抑制人肝癌SMMC-7721裸鼠移植瘤的生长,当给药剂量为320μg/kg·d~(-1)时效果最为显著,抑瘤率为60.66%.免疫组织化学法证实YSV能够降低肿瘤组织中微血管密度,YSV作用组MVD平均值36.0±11.6,对照组平均值为114.5±26.5.与生理盐水组比较,在113个候选基因中有18个基因下调2倍以上,其中血管内皮生长因子(VEGF)与白细胞介素(IL)-8基因下调最显著;RT-PCR法证实YSV能够抑制肿瘤组织中VEGF与IL-8在mRNA水平上的表达;ELISA亦证明YSV作用组血浆中因子VEGF及IL-8浓度降低.结论 YSV能显著抑制人肝癌SMMC-7721裸鼠移植瘤生长,通过抑制肿瘤组织中促血管生成因子的表达来发挥抗肿瘤活性.     

内皮抑素抑制膀胱癌皮下移植瘤生长及其机制的初步探讨

目的　探讨人内皮抑素对膀胱癌EJ细胞生长的作用及机制。　方法　 (1)体外实验观察内皮抑素对血管内皮细胞 (ECV30 4 )和膀胱癌EJ细胞生长的影响 ;(2 )EJ细胞移植入裸鼠皮下 ,观察内皮抑素对裸鼠皮下瘤生长情况的影响 ;(3)应用WesternBlot和RT PCR法观察皮下瘤组织中MMPs和TIMP 2的表达。　结果　 (1)内皮抑素具有抑制bFGF刺激后的内皮细胞ECV30 4及抑制EJ细胞增殖的作用 (P≤ 0 .0 5 ) ;(2 )治疗组皮下肿瘤质量 (0 .70± 0 .16 ) g ,对照组为 (1.14± 0 .2 1) g ,两组比较 ,差别有显著性意义 (P <0 .0 5 ) ;(3)人内皮抑素抑制裸鼠皮下膀胱癌瘤MMP 9mRNA表达 ,对MMP 2、TIMP 2、MT1 MMPmRNA表达无影响 ;(4)瘤组织中未检测到MMP 2、MMP 9和TIMP 2蛋白。　结论　人内皮抑素具有抑制膀胱肿瘤生长的作用 ,其作用机制与抑制MMP 9表达有关     

Endostatin抑制高转移性人肝癌皮下移植瘤的生长

目的　探讨Ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ 对高转移潜能肝癌ＬＣＩＤ２０ 生长的抑制作用。方法　ＬＣＩＤ２０ 组织植入裸鼠皮下,分别采用不同剂量的Ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ、顺铂以及二者联合治疗。每５ 天测量肿瘤的长短径。结果　２ ｍｇ·ｋｇ－ １·ｄ－ １ 的Ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ 对肿瘤生长无作用,４ ｍｇ·ｋｇ－１·ｄ－ １ 的Ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ 和１ ｍｇ·ｋｇ－ １·ｄ－ １的顺铂对肿瘤生长有抑制作用,而联合用药组对肿瘤生长的抑制更强。结论　足量血管形成抑制剂可抑制肝癌生长;与细胞毒性药物联合应用可提高疗效。     

血管内皮生长因子反义核酸对肝癌生长的抑制作用

目的　探讨血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）在实体肿瘤中的作用。方法　应用分子克隆技术构建人全长ＶＥＧＦｃＤＮＡ反义基因真核表达载体,并用脂质体法转入人肝癌细胞系（ＨｅｐＧ２） ,观察转染后肝癌细胞在裸鼠体内的生长及瘤体内微血管的通透性。结果　各组细胞在裸鼠体内的成瘤时间无明显差别,但反义核酸转染组肿瘤的生长速度及瘤体的重量均明显落后于其他组,肿瘤内血管的通透性也显著降低。结论　ＶＥＧＦ在实体肿瘤的生长过程中起着十分重要的作用。     

VEGF、KDR的表达对肝癌的血管生成、生长、转移的影响

目的　研究血管内皮生长因子 (VEGF)及其受体KDR(kinaseinsertdomaincontainingre ceptor)对肝细胞肝癌的血管生成、生长、转移等方面的影响。　方法　对 45例肝癌、2 1例肝硬化、8例正常肝标本进行了免疫组化、原位杂交染色 ,然后行图像分析 ,观察VEGF、KDR的表达与肝癌病理特点之间的关系 ,并进行统计学分析。　结果　肝细胞肝癌中VEGF高表达 ;并与肝癌的血管生成相关 ;VEGF的表达强度与表达率均与肝癌的转移、包膜形成相关 ;KDR不仅表达于血管内皮细胞 ,还表达于部分肝癌细胞。　结论　VEGF在肝癌的血管生成、癌细胞转移、包膜形成中可能起到重要作用 ,KDR在肝癌细胞的表达可能是一种自分泌行为。     

血管内皮生长因子和基质金属蛋白酶-9在肝细胞癌中的表达及其意义

目的研究血管内皮生长因子(VEGF)与基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在肝细胞癌中的表达,并探讨其与肝细胞癌复发、转移的关系.方法采用免疫组化ABC法对50例肝细胞癌组织和30例正常肝组织中VEGF及MMP-9蛋白的表达进行检测.结果VEGF和MMP-9在肝细胞癌组织中的表达阳性率分别为86.0%(43/50)和68.0%(34/50),明显高于正常肝组织中的表达阳性率53.3%(16/30)和33.3%(10/30).差异有统计学意义(P＜0.05);VEGF的表达与MMP-9的表达呈显著正相关(r＝0.98,P＜0.01),二者的协同表达与肝细胞癌的淋巴结转移及包膜形成有关(P＜0.05).结论VEGF和MMP-9在肝细胞癌的生长、侵袭和转移过程中起着重要作用,对预测肝细胞癌复发、转移有一定意义.     

雷帕霉素对人肝癌裸鼠原位移植瘤生长的抑制作用

目的探讨雷帕霉素对人肝癌裸鼠原位移植瘤生长的影响及其机制。方法建立人肝癌棵鼠肝原位移植瘤模型32只,随机分为空白对照组、FK506组、雷帕霉素常规剂量组和高剂量组。用药两周后观察肿瘤体积的变化,免疫组织化学法检测肝癌组织中增殖细胞核抗原(PCNA)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)的表达。结果对照组、FK506组、雷帕霉素常规剂量组、高剂量组平均肿瘤体积分别为:(310．15±40．16)、(605．59±116．23)、(99．19±15．27)、(151．61±27．81) mm3。与对照组相比,雷帕常规剂量组及高剂量组肿瘤体积明显缩小,PCNA、VEGF的表达均显著下调(P<0．01);FKS06组肿瘤体积与对照组相比明显增大,差异有统计学意义(P<0．01),PC- NA、VEGF的表达与对照组相比差异无统计学意义(P>0．01)。结论雷帕霉素具有显著抑制肝癌生长的作用,其机制可能是抑制了肝癌细胞的恶性增殖及VEGF的产生。     

TSP-1和VEGF在肝细胞癌新生血管生成中的作用

目的　研究血小板反应蛋白 1(TSP 1)和血管内皮生长因子(VEGF)的平衡在肝细胞 癌(HCC)新生血管生成中的作用。方法　采用免疫组织化学SABC法检测37例HCC及其癌旁肝 组织和6例正常肝组织中TSP 1、VEGF和CD34的表达情况,研究TSP 1和VEGF的表达与HCC 的临床病理资料及新生血管生成的关系。结果　37例HCC中TSP 1阳性率为62.2%(23/37),低 于相应的癌旁肝组织和正常肝组织(P<0.05)。HCC中VEGF的阳性率为97.3%(36/37),高于相 应的癌旁肝组织和正常肝组织(P<0.05)。有镜下静脉浸润的HCC组织中TSP 1的表达低于无镜 下静脉浸润者,而VEGF的表达则高于无镜下静脉浸润者(P<0.05)。等级相关分析显示,HCC中 VEGF的表达与CD34的表达呈正相关关系,(rs=0.333,P<0.05),而TSP 1的表达与CD34的表达 则呈负相关关系,相关系数(rs=-0.393,P<0.05)。结论　TSP 1低表达与VEGF过表达之间的 不平衡性是决定HCC组织中新生血管生成的关键因素之一。     

膜联蛋白A-10与基质金属蛋白酶-9、血管内皮生长因子在人肝细胞癌组织中表达的相关性及与临床病理特征的关系

目的 探讨膜联蛋白A10(ANXA10)在人肝细胞癌发生发展中的作用,及这些作用是否与已知的肝细胞癌侵袭转移相关的细胞因子基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、血管内皮生长因子(VEGF)有关.方法 应用免疫组织化学二步法检测80例患者肝细胞癌(HCC)和癌旁正常组织中ANXA10、MMP-9、VEGF的表达,分析ANXA10与MMP-9、VEGF之间相关性及ANXA10与肝癌临床病理特征的关系.结果 ANXA10在HCC中阳性率为65.0%(52/80);在癌旁肝组织中阳性率为91.3%(73/80),前者明显低于后者.ANXA10表达与患者的性别、年龄、肿瘤直径、肿瘤位置、肝硬化、临床T分期无明显相关(P>0.05),与分化程度显著相关(P<0.05).ANXA10与MMP-9之间显著相关(P<0.05);ANXA10与VEGF之间无明显相关(P>0.05).结论 ANXA10表达缺失或失活可能是恶变的人肝细胞的重要特征之一.     

Survivin在肝癌中的表达和意义及其与血管内皮生长因子的相关性

目的　检测肝细胞癌中凋亡抑制蛋白Survivin的表达 ,研究其与肝癌临床特征的关系 ;同时研究Survivin与血管内皮生长因子 (VEGF)表达的相关性 ,探讨Survivin在肝细胞癌发生发展及转移中的作用及机制。方法　采用免疫组织化学技术和蛋白印迹技术 ,检测 3 8例肝癌组织及癌旁非癌组织中Survivin和VEGF蛋白的表达。结果　 3 8例肝癌组织中 2 3例表达Survivin蛋白 ,其中 18例VEGF表达阳性 ,5例VEGF表达呈阴性或弱阳性 ;15例不表达Survivin蛋白者VEGF的表达 3例阳性 ,12例阴性或弱阳性。而在癌周非癌组织未检测到Survivin蛋白的表达。Survivin的表达与肝癌的发病年龄、性别、肿瘤大小、分化程度无关 (均为P >0 .0 5 ) ,而与肝癌的转移有关 (P <0 .0 5 )。结论　Survivin在肝细胞癌中的表达能促进肝癌的发生发展 ,并可能通过上调VEGF的表达而促进肝癌转移。     

肝癌组织中缺氧与血管内皮生长因子过度表达的关系

目的　研究肝细胞癌 (HCC)中血管内皮生长因子 (VEGF)过度表达与HCC组织中缺氧的关系。方法　通过免疫组织化学链霉亲合素 生物素 过氧化物酶复合体 (SABC)法检测 3 6例HCC组织及其相应癌旁肝组织和 6例正常肝组织中缺氧诱生因子 1α(HIF 1α)、VEGF和微血管密度(MVD)的表达 ,并对这些指标进行相关分析。离体实验中用缺氧诱导剂氯化钴刺激人肝癌细胞系HepG2 ,采用半定量逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)和免疫组织化学检测VEGF的表达情况。结果　 3 6例HCC组织中HIF 1α强阳性 3例 (8.3 % )、弱阳性 2 1例 (5 8.3 % )、阴性 12例 (3 3 .3 % ) ;VEGF强阳性 16例 (4 4 .4% )、弱阳性 16例 (4 4 .4% )、阴性 4例 (12 .2 % )。等级相关分析显示HCC中VEGF的表达与MVD的表达、HIF 1α的表达与VEGF的表达均具有正相关关系 (P <0 .0 1)。氯化钴可以以浓度和时间依赖性的方式诱导HepG2细胞中VEGF的转录。结论　HCC中存在的缺氧是HCC组织中VEGF过度表达的始动因素之一。     

环氧合酶-2和血管内皮生长因子共表达与肝细胞癌血管形成的关系

目的　探讨环氧合酶 (COX) 2与肝细胞癌血管形成的关系。方法　利用免疫组织化学、Westernblot方法检测 48例肝癌组织中COX 2和血管内皮生长因子 (VEGF)蛋白及逆转录 聚合酶链反应法 (RT PCR)检测COX 2和VEGFmRNA的共表达 ,对共表达COX 2和VEGF蛋白和mRNA的肝癌组织进行微血管记数。结果　免疫组织化学检测中 ,48例肝癌组织 3 6例共表达COX 2和VEGF蛋白。类似结果见于蛋白电泳分析。RT PCR显示 ,48例肝癌组织 3 6例共表达COX 2mRNA和VEGFmRNA。两者之间的表达明显相关 (γ =0 .845 )。共表达COX 2和VEGF蛋白和mRNA的肝癌组织中 ,平均微血管数 (5 6.8± 17.5 )个 ,明显高于阴性表达组。结论　COX 2可能与肝细胞癌的血管形成有关 ,且其作用之一可能是通过上调VEGF通道来发挥的     

L-精氨酸在人肝癌裸鼠肝脏移植瘤生长中的作用

目的 探讨L-精氨酸(L-arg)在人肝癌裸鼠肝脏移植瘤生长中的作用.方法 建立人肝癌裸鼠肝脏移植瘤模型,使用L-arg进行干预治疗,采用免疫组化方法 和图像分析技术检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,原位末端标记(TUNEL)法检测肿瘤细胞的凋亡情况.结果 (1)小剂量L-arg(0.5 g·kg~(-1)·d~(-1))组、大剂量L-arg(1g·kg~(-1)·d~(-1))组和对照组移植瘤重量分别为(985±76)mg、(328±35)mg、(586±56)mg;大剂量L-arg组移植瘤重量较对照组显著减少(P＜0.05);小剂量L-arg组移植瘤重量较对照组显著增加(P＜0.05).(2)大剂量L-arg组移植瘤PCNA的表达较对照组显著下调(P＜0.05),小剂量L-arg组和对照组比较无明显差异(P＞0.05).(3)大剂量L-arg组NO水平较对照组和小剂量组显著升高(P＜0.05),小剂量L-arg较对照组显著升高(P＜0.05).(4)大剂量L-arg组移植瘤凋亡指数(AI)明显高于对照组(P＜0.05);小剂量L-arg对移植瘤AI无明显影响(P＞0.05).结论 L-精氨酸对肝癌具有双重作用.小剂量L-精氨酸可促进肝癌生长;大剂量L-精氨酸抑制肝癌的生长.     

血管内皮生长因子和促血管生成素及其受体Tie2在肝细胞癌发生发展中的作用

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)和促血管生成素(Angiopietin)及其受体Tie2在启动肝细胞癌(HCC)血管生成中的调控机制及在HCC发生发展中的作用。方法新鲜HCC标本及癌旁肝组织38例,用实时定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法检测Ang-1、Ang-2、Tie2和VEGF在各组织标本中的表达,以CD34标记新生血管内皮并计数微血管密度(MVD),分析上述因子在HCC组织和非癌肝组织中的表达差异、相互作用及其与MVD、临床病理特征之间的关系。结果Ang-1、Tie2在HCC和非癌肝组织中的表达差异无统计学意义(0．194 7±0．086 2比0．232 6±0．109 8,1．601 6±0．900 7比1．340 0±0．703 7,P均>0．05),而VEGF和Ang-2在HCC组织的表达高于非癌肝组织(1．038 0±0．572 0比0.832 3±0．182 4,0．621 3±0.417 6比0．442 9±0．330 1,P均<0．05);VEGF、Ang-2、Ang-2／1都与MVD和临床病理特征相关(P<0．01),但与组织分化程度无关(P>0．05)。结论Ang-2／1的失衡表达及其与VEGF和Tie2的共同作用是启动肝组织血管生成并诱发HCC发生、发展的重要因素;这种因素在HCC中的持续作用进一步促进了肿瘤血管生成和恶性生物学行为。