肝门部胆管癌神经浸润动物模型的建立

目的建立肝门部胆管癌神经浸润裸鼠模型。方法将培养的胆管癌细胞系QBC939细胞接种于裸鼠背部皮下,建立裸鼠背部皮下原代胆管细胞癌动物模型,取原代肿瘤组织接种于裸鼠腹腔近肝脏处,建立腹腔二代移植瘤模型,成瘤后行种植瘤组织解剖学和病理学观察。结果肝门部胆管癌背部皮下原代种植瘤成瘤率为100%（5/5）,未见神经浸润;腹腔二代移植瘤成瘤率为45%（9/20）,神经浸润率为22%（2/9）,神经浸润模型成功率为10%（2/20）。病理学观察显示为瘤细胞大小不一,形态多样,不规则;细胞分化程度低,胞浆减少,细胞核大,异形性明显,大小不等,可见核分裂像;无明显腺管样结构。结论肝门部胆管癌细胞具有较强的神经浸润性,应用QBC939细胞系建立肝门部胆管癌神经浸润裸鼠模型为研究肝门部胆管癌神经浸润方式及生物学特性创建了良好的实验平台。     

人胰腺癌细胞系MIA PaCa-Ⅱ神经侵袭原位移植瘤动物模型的建立

目的 建立人胰腺癌细胞系MIA PaCa-Ⅱ裸鼠胰腺原位移植瘤模型并观察神经侵袭情况,为研究胰腺癌神经侵袭的发生、发展提供实验依据和条件.方法 将人胰腺癌细胞系MIA PaCa-Ⅱ行裸鼠背部皮下接种.建立高转移特性胰腺癌裸鼠皮下移植瘤模型,然后将高转移性移植瘤组织接种于裸鼠胰腺被膜下,分别于4周、6周和8周处死裸鼠行移植瘤组织解剖和病理学检查.测量移植瘤大小和重量,并用HE和银染方法观察神经侵袭情况.结果 模型建立过程中,胰腺癌细胞系MIA PaCa-Ⅱ细胞裸鼠皮下接种成瘤率为100%(10/10),皮下移植瘤呈局限性生长,无脏器和神经转移.原位移植4周、6周和8周后,胰腺癌原位移植瘤成瘤率均为100%(10/10),神经转移率分别为50%(5/10)、80%(8/10)和60%(6/10),并可见多个脏器转移,以肝脏、肝门淋巴结、胃窦转移和腹膜播散多见.结论 成功建立了人胰腺癌细胞系MIA PaCa-Ⅱ裸鼠胰腺原位移植瘤模型并观察了神经侵袭情况,此模型为一较理想的"拟人"神经浸润转移模型,可用于胰腺癌体内嗜神经性机制的研究.     

利用裸鼠建立人肝门部胆管癌肝门移植模型

目的:应用肝门部胆管癌细胞系FRH及组织块法建立裸鼠人肝门部胆管癌肝门移植模型,观察肿瘤局部浸润和远处转移情况.方法:20只裸鼠取上腹部切口,显露肝门部,取裸鼠皮下移植瘤边缘直径约1mm组织块植入肝门部肝实质内.观察裸鼠生命体征的变化,定期处死裸鼠,取血查肝功,取肝门肿瘤、肝脏、胰腺、脾脏、胃肠、肺脏标本福尔马林液固定,苏木素-伊红染色后显微镜下观察,肝门移植瘤电镜观察.结果:20只模型全部建立成功,成瘤率100%,2周左右可触及肝门部有小结节,平均4周出现黄疸,6周左右裸鼠出现明显恶液质.解剖后发现肝门部肿瘤侵及胆囊、肝门血管和腹腔淋巴结.胰腺、脾脏、胃肠、肺脏未见转移灶.结论:肝门部胆管癌肝门移植模型成瘤率高,其转归接近临床,可用于肝门部胆管癌的实验研究.     

人肝门部胆管癌转移动物模型的建立及生物学特性研究

目的利用人肝门部胆管癌细胞系（FRH-0201）接种裸鼠脾脏，建立肝、肺转移模型。方法将FRH-0201细胞系（120代）接种于7只Balb／c裸小鼠脾脏。出现转移时，将转移瘤行组织病理学及超微结构观察。将转移的肿瘤行细胞培养，再次接种裸鼠脾脏，观察转移成瘤情况。结果脾脏局部成瘤率为100％（7／7），转移瘤发生率14．3％（1／7）。转移瘤细胞再次接种于裸小鼠脾脏，转移发生率100％。转移瘤电镜显示典型恶性细胞特征。转移瘤细胞染色体众数19条，主流范围18～44条。结论该实验所建立的肝门部胆管癌转移瘤，符合恶性肿瘤的特点，与人肝门部胆管癌生物学特性一致。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂对胆囊癌细胞系和肝外胆管癌细胞系HDAC1表达的影响

目的 观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂-曲古抑菌素(TSA)在体外和体内对胆囊癌细胞和肝外胆管癌细胞HDAC1表达的影响.方法 用TSA作用于胆囊癌细胞系(Mz-ChA-1)和肝外胆管癌细胞系(QBC939、KMBC、OZ),然后用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测HDAC1之mR-NA的表达变化,用Western blot检测其蛋白的表达变化.将这些细胞接种在裸鼠皮下建立胆囊癌和肝外胆管癌裸鼠种植瘤模型,用免疫组织化学方法 观察TSA在体内对裸鼠种植瘤组织中HDAC1蛋白表达的影响.结果 TSA可以减弱胆囊癌细胞系(Mz-ChA-1)和肝外胆管癌细胞系(QBC939、KMBC、OZ)HDAC1 mRNA和蛋白的表达;TSA作用前后的胆囊癌细胞系(Mz-ChA-1)和肝外胆管癌细胞系(KMBC)裸鼠成瘤组织中的各种蛋白的表达均无变化.结论 TSA在体外可以抑制胆囊癌和肝外胆管癌HDAC1的表达;TSA抑制HDAC1表达的作用可能受到体内环境的影响而消失.     

丙型肝炎病毒核心蛋白激活肝门部胆管癌细胞血管内皮生长因子的表达

目的 探讨丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白对肝门部胆管癌生长和转移的影响。方法 首先构建表达HCV核心蛋白的真核表达载体pcDNA3-HCVcore,再将含有 pcDNA3-HCVcore的载体和不含 pcDNA3-HCV core的空载体分别导入肝门部胆管癌细胞株 QBC939中,RT-PCR和免疫组织化学检测 VEGF mRNA和蛋白表达。结果 重组质粒 pcDNA3-HCVcore在 QBC939细胞中有稳定表达;表达 HCV核心蛋白的细胞QBC939的 VEGF在蛋白水平和 mRNA水平较转染空载体的细胞QBC939明显升高。结论 HCV核心蛋白能激活VEGF表达,可能对肝门部胆管癌的生长和转移具有促进作用。     

癌胚抗原相关细胞黏附分子-6在人肝门部胆管癌细胞株QBC939中的表达及其在侵袭转移中的作用

目的 观察癌胚抗原相关细胞黏附分子-6(CEACAM6)在人肝门部胆管癌细胞株QBC939中的表达,探讨其在侵袭转移中的作用.方法 实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测CEACAM6在QBC939细胞中的表达;构建CEACAM6的RNA干扰(RNAi)慢病毒载体,并感染QBC939细胞,Real-time PCR验证RNAi效果;Transwell侵袭试验检测QBC939细胞体外侵袭力的改变.结果 CEACAM6在QBC939细胞中高表达.成功构建CEACAM6基因RNAi慢病毒载体并转染QBC939细胞.和对照组比较,RNAi组CEACAM6 mRNA表达抑制率为93.1％ (P ＜0.05);Tran-swell实验提示RNAi后,侵袭细胞OD570 RNAi组(0.09 ±0.01)明显少于对照组(0.13 ±0.02),侵袭抑制率为69.2％ (P ＜0.05).结论 CEACAM6在QBC939细胞中高表达,其表达程度与肝门部胆管癌细胞侵袭转移能力呈正相关.     

胆管癌脱落细胞的形态学观察与生物学特性实验研究

目的观察人胆管癌细胞系QBC939细胞脱落过程形态学变化，研究其生物学特性。方法光镜、扫描电镜观察原位培养的人胆管癌细胞系QBC939及其脱落细胞的形态学变化，收集脱落细胞，保存在悬浮状态，分别在1、2、4、8、12和24h接种，计数其1h后贴壁细胞数并观察其生长情况。结果人胆管癌细胞系QBC939培养至第5天时，光镜可见大量的脱落细胞，扫描电镜可见培养细胞巢状结构中间细胞逐渐变圆，微绒毛逐渐减少，以至消失，在贴壁细胞的邻近面细胞膜也出现同样改变，脱落细胞接种1h后，可见细胞贴壁生长，各时间组其贴壁细胞数无显著差异。结论人胆管癌细胞系QBC939细胞具有抗脱落凋亡特性，体外培养QBC939细胞存在脱落-漂浮-种植-生长现象。     

5-氮-2-脱氧胞苷体内外抑制胆管癌细胞生长的研究

目的研究甲基化抑制剂 5 氮 2 脱氧胞苷在体内、体外对胆管癌细胞株生长的抑制作用。方法应用MTT法检测 5 氮 2 脱氧胞苷及其他抗肿瘤药物对胆管癌细胞株QBC939存活率的影响 ,应用流式细胞术观察细胞生长周期及凋亡率的变化。观察 5 氮 2 脱氧胞苷对裸鼠皮下移植肿瘤生长的影响。结果 5 氮 2 脱氧胞苷抑制胆管癌细胞QBC939的增殖 ,细胞周期阻滞于G1期 ,凋亡增加。以上作用与药物浓度及所用时间在一定范围内呈正相关。 5 氮 2 脱氧胞苷与其他肿瘤化疗药物协同可增强对胆管癌细胞的杀伤作用。经 5 氮 2 脱氧胞苷处理后 ,QBC939在裸鼠体内成瘤率下降 ,肿瘤体积缩小。结论 5 氮 2 脱氧胞苷诱导胆管癌细胞凋亡 ,抑制肿瘤生长 ,与其他肿瘤化疗药物有协同作用。     

人大肠癌裸小鼠直肠黏膜原位种植癌及转移模型的建立

目的 建立人大肠癌(HICC)组织块裸小鼠直肠黏膜原位种植癌及转移模型.方法 人结肠癌细胞株HCT-116注射接种于裸小鼠直肠黏膜下,获得直肠种植瘤.制备该肿瘤新鲜组织块,原位种植于直肠黏膜面,在2、4、6、8、10、12周取材,进行苏木素一伊红(HE)染色及CEA免疫组织化学检测,观察种植瘤成瘤率,生长情况及转移规律.结果 直肠黏膜组织块法原位种植2周后成瘤率达90%以上.肿瘤在6～12周成指数生长.种植4周见区域淋巴结(LN)部分转移,直肠上动脉LN转移率60%、系膜LN转移率20%;6周见腹主动脉旁LN转移,转移率40%;8周见区域LN均转移充分,分别为100%、80%、80%.10～12周见肝肺转移发生,分别为20%(1/5)、40%(2/5).LN转移发生在肿瘤指数生长之前.HE及CEA免疫组织化学证实LN、肝肺有癌细胞转移浸润.结论 裸小鼠直肠黏膜植块法能成功构建HICC原位模型.此模型操作简便、制模稳定、转移率高,且生物学行为更能模拟临床HICC发生、发展演变过程.     

人结肠癌裸鼠原位种植癌及转移模型的建立

目的 建立人结肠癌裸鼠原位种植瘤模型，为研究结肠癌的转移机制和抗转移治疗提供动物模型。方法 采用人结肠腺癌细胞株SWlll6接种于裸鼠皮下，形成稳定传代的皮下种植瘤。再取该肿瘤组织块原位种植于裸鼠结肠壁，建立类似于临床的结肠癌模型。观察原位种植肿瘤的成瘤率，生长情况，转移率和腹水出现率。结果 原位种植成瘤率为l00％(24／24)，区域淋巴结转移率l00％(24／24)，腹膜转移率为9l.7％(22／24)，肝转移率为75．0％(19／24)，腹水出现率为25．0％(6／24)。荷瘤裸鼠晚期出现消瘦和全身衰竭，中位生存期为l0周。结论 该实验的裸鼠原位种植转移模型的生物学行为与临床病程非常相似，为研究结肠癌转移机制和抗转移治疗提供理想的动物模型。     

α1-肾上腺素受体对胆管癌细胞增殖的影响

目的 探讨α1-肾上腺素受体对胆管癌细胞增殖的影响.方法 应用SABC免疫组织化学法检测2002年8月至2008年3月于西南医院行手术切除的36例人胆管癌组织和4例正常胆管组织中α1-肾上腺素受体的表达,并用去甲肾上腺素(NE)以及受体阻滞剂酚妥拉明、哌唑嗪处理胆管癌细胞,观察细胞的增殖变化.采用χ2检验分析结果.结果 发生胆管癌淋巴结转移的患者中α1-肾上腺素受体强阳性表达率为68%(17/25),明显高于未转移患者的9%(1/11),两者比较差异有统计学意义(χ2=10.604,P<0.05),且胆总管中、下段癌的α1-肾上腺素受体强阳性表达率为85%(11/13),高于肝门部胆管癌的30%(7/23),两者比较差异有统计学意义(χ2=9.753,P<0.05).NE促进胆管癌细胞的增殖,此作用呈浓度依赖性,随着时间的延长,促增殖作用逐渐减弱.该作用由α1-肾上腺素受体介导,在非选择性α-肾上腺素受体阻滞剂酚妥拉明及选择性α1-肾上腺素受体阻滞剂(哌唑嗪)存在的情况下可消除NE对胆管癌细胞的促增殖作用.结论 α1-肾上腺素受体的表达受淋巴结转移以及胆管癌部位影响,呈强阳性表达的α1-肾上腺素受体参与了胆管癌细胞增殖及转移过程.     

磁靶纳米化疗药物治疗胆管癌移植瘤的对比研究

目的: 比较纳米磁靶向性药囊与其他化疗药物治疗裸鼠人胆管癌移植瘤的效果并探讨其机制。方法:以在体外培养的人胆管癌细胞QBC939接种裸鼠。20d后将裸鼠随机分为4组（每组8只）：生理盐水对照组（A组），5-FU治疗组（B组），纳米磁靶向性药囊＋内磁化支架治疗组（C组），健择治疗组（D组）。记录各组各时段肿瘤体积变化和抑瘤率，绘制肿瘤生长曲线。于治疗后35d处死裸鼠，取肿瘤组织观察超微结构改变。结果:A,B,C,D组于治疗后35d肿瘤体积分别为（2 256.1±267.1）mm3，(2 096.5±237.9) mm3，（1 392.2±189）mm3，（1 534.9±115）mm3，其中C,D组与A,B组之间的肿瘤体积比较有明显差异（P<0.05）。B,C,D组抑瘤率为7.4%, 39.6%和33%。电境观察C组和D组均有凋亡细胞出现。结论:同等剂量下，纳米磁靶向性药囊治疗效果优于5-FU，但与健择无明显差异。     

High-malignancy orthotopic nude mouse model of human prostate cancer LNCaP.

BACKGROUND: An animal model of human prostate cancer LNCaP demonstrating high rates of spontaneous metastasis from the orthotopic site after tumor implantation would be very valuable for mechanistic and drug discovery studies. We previously developed microsurgical techniques to implant histologically intact tumor tissues orthotopically in nude mice in order to develop high metastatic mouse models of human cancer. METHODS: Intact tissue of the androgen-dependent human prostate cancer cell line, LNCaP, was implanted on the ventral lateral lobes of the prostate gland by surgical orthotopic implantation (SOI) in a series of 20 nude mice. Mice were autopsied, and histopathological examination of primary tumors and relevant organs was done to identify and quantitate micrometastasis. RESULTS: Eighteen of 20 animals transplanted with LNCaP by SOI had tumor growth. Mean primary tumor weight in the prostate was 9.24 g at time of necropsy. Sixty-one percent of the transplanted animals had lymph node metastasis. Forty-four percent had lung metastasis. Mean survival time was 72 days, indicating a high degree of malignancy of the tumor. CONCLUSIONS: The extensive and widespread lung metastasis as well as lymph node metastasis following orthotopic implantation of LNCaP in nude mice and the short survival time provide a high-malignancy nude model of the LNCaP human prostate tumor.     

纳米磁小体靶向药囊治疗人胆管癌细胞株移植瘤实验研究

目的:将纳米磁小体靶向药囊(TM5-FUNC)经尾静脉注射入胆管癌荷瘤裸鼠体内,通过埋植在移植瘤内的磁化支架所产生的磁靶向引导作用,TM5-FUNC选择性地聚集于裸鼠胆管癌移植瘤组织内;探讨此装置对人胆管癌的生长抑制作用。方法:建立人胆管癌裸鼠移植瘤模型,将裸鼠随机分成6组,通过尾静脉按分组方案给药,分别将TM5-FUNC 250mg/kg、200mg/kg和150mg/kg组列为高、中、低剂量组。计算各组裸鼠肿瘤体积、抑瘤率和肿瘤生长曲线。处死裸鼠后,将肿瘤标本置电镜下观察肿瘤组织超微结构改变情况。结果:结合内置支架的TM5-FUNC高、中剂量组的移植肿瘤体积在治疗后35d与对照组比较有显著差异(P<0.05);TM5-FUNC低剂量组的肿瘤体积与对照组比较则无明显差异(P>0.05)。其肿瘤的抑制率分别为:高剂量组39.6%、中剂量组14.6%、低剂量组7.9%。从高、中、低剂量TM5-FUNC干预组中可见,随着药物浓度的增高,肿瘤生长越缓,高剂量组肿瘤生长曲线变化最为缓慢,中剂量组次之,其余组曲线变化较为一致。电镜结果显示,TM5-FUNC对荷瘤裸鼠的肿瘤细胞有诱导凋亡作用,且随着药物浓度的增大,细胞凋亡的形态改变越为明显。结论:本课题组所研制的TM5-FUNC新剂型,在内磁场的导向作用下,能有效抑制人胆管癌裸鼠移植瘤的生长。     

裸鼠原位种植大肠癌肝转移三种建模方法的比较

目的 比较3种不同的人大肠癌裸鼠原位种植肝转移模型,建立稳定有效的人大肠癌裸鼠原位种植肝转移模型.方法 逐步传代法皮下成瘤传5代,采用84只BALB/C-nu/nu裸鼠,随机分为4组,结肠原位荷包缝合法和结肠原位纤维蛋白胶黏合法和结肠微注射1×106和1×105SW1116细胞法建立大肠癌裸鼠原位种植肝转移模型.各组裸鼠死亡后立即解剖观察原位以及肝脏、肺、脾脏、胰腺、肠系膜等脏器组织的转移并且进行苏木素-伊红(HE)染色进行镜下观察有无转移.结果 荷包缝合组和纤维蛋白胶组结肠原位种植肝转移成功率均为100%比微注射法50.0%和14.3%高,纤维蛋白胶法比其他两种方法所形成的结肠原位肿瘤和肝转移瘤均大而多.HE染色表明肝转移肿瘤性质与结肠原位种植瘤相同.结论 结肠原位纤维蛋白胶黏合法比较其他二种原位种植肝转移模型的手术成功率高,肝转移率高、操作简单.     

RhoC基因转染对人胆管癌QBC 939细胞增殖和侵袭性的影响

目的研究RhoC（ras homolog gene family，member C）基因对胆管癌QBC939细胞株增殖和侵袭能力的影响。方法以脂质体将RhoC cDNA真核表达载体转染人胆管癌QBC939细胞。应用克隆形成试验检测细胞增殖活性的变化，流式细胞仪检测转染前后细胞周期的变化，Boyden小室侵袭实验检测侵袭能力的变化。结果RhoC基因能促进胆管癌QBC939细胞增殖，流式细胞仪分析结果显示转染后细胞出现G1期细胞减少，侵袭实验显示转染后细胞侵袭能力较转染前有显著加强。结论RhoC基因能够促进胆管癌QBC939细胞株的体外增殖和侵袭能力。