高迁移率族蛋白B1诱导小鼠腹腔巨噬细胞凋亡的受体机制

目的 了解高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对小鼠腹腔巨噬细胞凋亡的影响及其受体机制.方法 分离培养小鼠腹腔巨噬细胞,在巨噬细胞中加入不同的刺激物,分为HMGB1组:加入10 μg/ml的HMGB1;HMGB1+抗晚期糖基化终末产物受体(RAGE)组:先加入RAGE多克隆抗体5μg/ml孵育2 h后,再加入HMGB1;HMGB1+重组鼠(rm)RAGE/Fc组:将10 μg/ml的HMGB1与10μg/ml的rmRAGE/Fc混合作用2 h后,再加入巨噬细胞;对照组:加入磷酸盐缓冲液.采用流式细胞仪检测细胞表面RAGE的表达强度.激光共聚焦显微镜观察细胞凋亡情况,流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 HMGB1组RAGE阳性细胞率(54±12)%明显高于对照组[(13±5)%,P＜0.01],其荧光强度(126±10)也显著高于对照组(34±8,P＜0.01).HMGB1+rmRAGE/Fc组、HMGB1+抗RAGE组凋亡细胞明显多于对照组,而HMGB1组晚期凋亡及坏死细胞明显多于其他3组.HMGB1组细胞凋亡率(39.5±2.3)%高于HMGB1+rmRAGE/Fc组[(17.3±3.6)%]、HMGB1+抗RAGE组[(14.8±4.8)%]及对照组[(5.4±2.3)%,P＜0.01].结论 HMGB1可诱导RAGE表达上调,RAGE是HMGB1诱导巨噬细胞凋亡的主要受体之一.     

HMGB1促进血管平滑肌细胞增殖与迁移的机制研究

目的:探讨高迁移率蛋白B1(HMGB1)促进血管平滑肌细胞(VSMC)增殖与迁移的机制。方法:检测人主动脉血管平滑肌细胞(HA-VSMC)与HMGB1孵育后增殖与迁移的活性、晚期糖基化终产物受体(RAGE)与P38MAPK表达改变,以及RAGE抗体、P38MAPK抑制剂SB203580预处理的影响。结果:HMGB1孵育后,HA-VSMC增殖与迁移活性、RAGE和P38MAPK的表达均明显增加(均P0.05),且均呈一定的浓度依赖性。用RAGE抗体和SB203580预处理后,HMGB1促进HA-VSMC增殖及迁移的作用均被明显抑制(均P0.05),RAGE抗体预处理后,HMGB1对P38MAPK表达的诱导作用明显抑制(P0.05)。结论:HMGB1可能通过与细胞表面RAGE受体结合,激活P38MAPK表达进而促进VSMC的增殖及迁移。     

高迁移率族蛋白B1对严重烧伤大鼠枯否细胞的影响及晚期糖基化终末产物受体的作用

目的 探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对严重烧伤大鼠枯否细胞(KC)分泌促炎性细胞因子的影响及晚期糖基化终末产物受体(RAGE)在该过程中的作用. 方法 将32只SD大鼠背部浸于98℃水中12 s,制成30％ TBSAⅢ度烫伤(以下称烧伤).伤后24 h,处死大鼠分离肝脏KC(32个样本),以每孔1×106个接种至24孔板中.(1)取部分细胞按随机数字表法分为2组,每组样本数为8.对照组,加入1 mL PBS液培养;HMGB1组,加入1 mL浓度为100 ng/mL HMGB1刺激.培养48 h后,采用蛋白质印迹法检测细胞表面RAGE的表达(结果以灰度值比值表示).(2)取部分细胞采用随机数字表法分为4组,每组样本数为8.对照组,加入1 mL PBS液培养;HMGB1组,加入1 mL浓度为100 ng/mL HMGB1刺激;HMGB1+抗RAGE抗体组,经1 mL浓度为20 μg/mL抗大鼠RAGE单克隆抗体孵育2h,加入1 mL浓度为100 ng/mL HMGB1刺激;HMGB1+重组大鼠RAGE/Fc嵌合体(rrRAGE/Fc)组,将0.5 mL浓度为100 ng/mL HMGB1与0.5 mL浓度为5μg/mL rrRAGE/Fc孵育2h后,作用于细胞.培养48 h后,采用ELISA法检测细胞培养上清液中TNF-α和IL-1β的含量,RNA印迹法检测细胞内TNF-α和IL-1β mRNA的表达水平(结果以灰度值比值表示).对数据进行单因素方差分析、t检验及LSD检验. 结果 (1)培养48 h后,HMGB1组细胞RAGE表达水平(1.036 ±0.101)明显高于对照组(0.191 ±0.024,t=-23.158,P=0.000).(2) HMGB1组、HMGB1+抗RAGE抗体组以及HMGB1+ rrRAGE/Fc组细胞培养上清液中TNF-α含量分别为(10.59±1.39)、(9.91±1.68)、(11.51±2.27) ng/mL,IL-1β含量分别为(2.49±0.33)、(2.08±0.32)、(2.42±0.42) ng/mL;细胞内TNF-α mRNA水平分别为0.311 ±0.009、0.301±0.047、0.326±0.016,IL-1βmRNA水平分别为0.237±0.021、0.244±0.041、0.245±0.013,3组间比较差异均无统计学意义(P值均大于0.05),均显著高于对照组[细胞培养上清液中TNF-α和IL-1β含量分别为(2.69±0.14)、(0.43±0.05) ng/mL,细胞内TNF-α和IL-1β mRNA水平分别为0.140±0.022、0.077±0.005,P值均小于0.01]. 结论 HMGB1可引起严重烧伤大鼠KC分泌促炎性细胞因子TNF-α和IL-1β,但RAGE在这一过程中未起主导作用.     

内质网应激对树突状细胞表面晚期糖基化终产物受体表达的影响

目的:晚期糖基化终产物受体(RAGE)与其配体结合在炎症及免疫反应中具有重要作用.本研究探讨内质网应激(ERS)在高迁移率族蛋白B1(HMGB1)诱导树突状细胞(DC)表面RAGE上调中的作用及意义.方法:分离正常BALB/c小鼠脾脏DC进行体外培养,给予HMGB1刺激后检测DC表面RAGE表达水平及细胞ERS相关分子...     

Toll样受体4在高迁移率族蛋白B1影响小鼠调节性T细胞免疫功能中的作用

目的 探讨腹腔注射高迁移率族蛋白B1(HMGB1)后不同基因型小鼠天然调节性T细胞(CD4~+CD25~+Treg)免疫功能的改变及其受体作用机制.方法 分别给C3H/HeN和C3H/HeJ[分别为Toll样受体4(TLR4)野生型(TLR4~(+/+))和天然突变型(TLR4~(-/-)]小鼠腹腔注射不同剂量HMGB1(0、10、20μg/只),饲养48 h后采用免疫磁珠法分离小鼠脾脏CD4~+CD25~+Treg.体外培养12 h后采用流式细胞仪检测CD4~+CD25~+Treg表达细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4(CTLA-4)表达强度,并应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测CD4~+CD25~+Treg生成白细胞介素(IL)-10量.结果 与对照组比较,20 μg HMGB1攻击后C3H/HeN小鼠CD4~+CD25~+Treg表达CTLA-4水平显著下降(78.70±11.42与60.76±7.64,P<0.01),同时细胞牛成IL-10量也明显降低[(96.89±6.25)ng/L与(47.11±4.25)ng/L,P<0.01];但不同剂量HMGB1攻击可引起C3H/HeJ小鼠CD4~+CD25~+Treg表达CTLA-4明显上调和生成IL-10量不同程度地增加(P<0.01).结论 HMGB1攻击可显著影响CD4~+CD25~+Treg介导的免疫状态,TLR4在HMGB1诱导CD4~+CD25~+Treg免疫活性过程中发挥了重要负向调控作用.     

大剂量免疫球蛋白对抑制性受体的免疫调控作用

目的通过观察大剂量免疫球蛋白(IVIG)作用前后某些免疫细胞表面抗体活化性受体(FcγRⅡa)和抑制性受体(FcγRⅡb)的表达，探讨IVIG免疫调节作用的机理。方法运用RTPCR、Western blot和FACS的方法来检测某些免疫效应细胞表面的FcγRⅡa和FcγRⅡb的表达，并观察IVIG作用前后两者的表达差异。结果FcγRⅡa主要表达于单核巨噬细胞，在B细胞和T细胞中没有表达。FcγRⅡb在检测的细胞中无表达。在组织淋巴瘤U937细胞中FcγRⅡa的表达量比较高。U937细胞在经过IVIG作用后，抑制性FcγRⅡb的表达逐渐升高，24h时表达达到最高。在IVIG作用后，FcγRⅡb的表达在蛋白水平也逐渐增高，与RT-PCR的结果一致；U937细胞表面的FcγRⅡb表达显著增高，表现为荧光强度峰值的增强和右移。用IVIG治疗的患者，单核巨噬细胞表面的FcγRⅡb的表达比正常人外周血单核巨噬细胞明显增加。结论IVIG的免疫调节作用可部分归因于增加某些免疫效应细胞表面抗体抑制性受体FcγRⅡb的表达。     

次黄嘌呤单核苷酸脱氢酶抑制剂对人外周髓样树突状细胞趋化、迁移和吞噬功能的影响研究

目的 探讨次黄嘌呤单核苷酸脱氢酶抑制剂(Inosine monophosphate dehydrogenase inhibitor,IMPDHI)对人外周髓样树突状细胞(Myeloid dendritic cells,MDC)趋化、迁移、吞噬功能的影响.方法 新鲜外周血单个核细胞来源于健康志愿者(N=15).实验组加入不同浓度IMPDHI,流式细胞仪分析MDC表面趋化因子受体表达水平.于transwell小室实验中,加入不同的化学因子,经Lin-1/CD11c/HLA-DR染色后,流式细胞仪计数,以迁移细胞的百分比表示迁移能力.分离树突状细胞抗原-1+(Blood dendritic cell antigen-1,BDCA-1+)细胞后,以甘露糖受体作为介导,流式细胞仪测定BDCA-1+细胞中FITC标记的右旋糖酐的荧光值表示吞噬能力.结果 (1)趋化、迁移功能:与对照组相比,实验组MDC的趋化因子受体CCR1表达水平明显升高(17.02±3.23～30.63±9.13,P＜0.05);CCR3表达水平(10.26±2.25～5.81±0.97,P＜0.05)和CCR7表达水平(9.56±1.84～5.18±0.60,P＜0.05)明显下降.实验组MDC对炎性化学因子CCL2、CCL3、CCL4、CCL7、CXCL12的趋化能力明显增强(P＜0.05),对淋巴器官性化学因子CCL19、CCL20、CCL21、CXCL11的趋化能力无明显改变(P＞0.05).(2)吞噬功能:实验组MDC的吞噬能力明显强于对照组(P＜0.05).结论 IMPDHI增强MDC吞噬抗原的能力,通过提高MDC炎性化学因子受体的表达水平和增强其对炎性化学因子的趋化能力,抑制MDC对淋巴器官的趋化、迁移能力.     

腺病毒介导G250基因转染树突状细胞激活免疫效应细胞治疗肾癌的实验研究

目的 探讨以腺病毒(Ad)载体介导肾癌相关抗原G250基因转染制备树突状细胞(DC)瘤苗.体外诱导自体T淋巴细胞特异性抗肾癌免疫效应. 方法 自健康人外周血中提取单核细胞,将贴壁细胞分为3组(Ad-G250基因转染组、G250蛋白致敏组、未致敏组),用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和诱导活化;3组DC细胞中分别加入自体T淋巴细胞,获得细胞毒性T淋巴细胞(CTL).RT-PCR检测G250在DC细胞内的转录情况;流式细胞仪检测DC表面标志分子和G250抗原蛋白的表达情况;四甲基偶氮唑盐法检测3组CTL对肾癌细胞株786-0和肺癌细胞株A549的杀伤活性. 结果 Ad-G250高效转染DC,G250阳性细胞率为(52.2±1.5)%,G250蛋白在DC:内成功表达:基因转染组DC中成功扩增出G250产物;Ad-G250转染的DC表面标志CD_(80)、CD_(83)、CD_(86)、CD_(1a)、HLA-DR表达高于其他2组.差异均有统计学意义(P<0.05).Ad-G250基因转染组、G250蛋白致敏组、未致敏组诱导的3组CTL对786-0靶细胞杀伤活性分别为(83.4±2.8)%、(79.6±2.4)%、(77.3±2.1)%,组间比较差异有统计学意义(F=69.172,P=0.000);3组CTL对A549靶细胞杀伤活性差异无统计学意义(F=0.373,P=0.693). 结论 以Ad为载体介导抗原基因转染DC,并诱导特异的CTL,技术上可行,所诱导的CTL杀伤活性强,有望成为一种肿瘤免疫治疗方法.     

不同机械牵张应力对大鼠肺泡巨噬细胞HMGB1表达的影响

目的 评价不同机械牵张应力对大鼠肺泡巨噬细胞高迁移率族蛋白1(HMGB1)表达的影响.方法 雄性SD大鼠,周龄8～12周,体重270～320 g,放血处死后,收集支气管肺泡灌洗液,分离、培养和传代肺泡巨噬细胞.将细胞接种于6孔培养板中,细胞浓度105/ml,培养48 h后,随机分为5组(n=6),对照组(C组)不施加机械牵张应力;S1-4组分别施加5%、10%、15%和20%机械牵张应力,牵张频率30次/min,牵张时间24 h.采用RT-PCR法测定HMGB1 mRNA表达;采用Western blot方法 测定HMGB1表达.结果 肺泡巨噬细胞给予机械牵张应力后,HMGB1及其mRNA表达随机械牵张应力的增大而上调(P<0.05或0.01).结论 大鼠肺泡巨噬细胞HMGB1的表达与机械牵张应力呈强度依赖性.     

超抗原SEA-Fab''偶联蛋白诱导肿瘤细胞凋亡的研究

目的 探讨超抗原(SAg)金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)与抗人胃癌细胞单克隆抗体Fab’偶联蛋白的抗肿瘤活性。方法 利用SEA-Fab’激活效应细胞诱导的靶细胞凋亡指数检测。分别在靶细胞Walker-256加入SEA-Fab’、SEA,另设PBMC Walker-256细胞作为对照,作用时间分别为8、36和72h,观察该偶联蛋白的超抗原活性和激活T细胞杀伤肿瘤细胞的作用。结果 凋亡指数检测各处理组之间差异有非常显著性(P<0.01)。其中,除了SEA-Fab’组与SEA组与效应细胞 靶细胞组之间差异有非常显著性(P<0.01),SEA-Fab’组与SEA组差异有非常显著性(P<0.01)。结论 SEA-Fab’偶联蛋白比单独SEA能更有效地激活T细胞的杀伤肿瘤细胞活性,以单克隆抗体为载体进行肿瘤导向治疗具有可行性。     

Tumors with EWSR1-CREB1 and EWSR1-ATF1 fusions: the current status

EWSR1-CREB1 and EWSR1-ATF1 are gene fusions of which one or both have now been consistently described in 5 histopathologically and behaviorally diverse neoplasms: angiomatoid fibrous histiocytoma, conventional clear cell sarcoma (of tendons and aponeuroses), clear cell sarcoma-like tumor of the gastrointestinal tract, hyalinizing clear cell carcinoma of the salivary gland, and primary pulmonary myxoid sarcoma. Some of the tumors in this group have been described only recently, and others have been the subject of recent genetic insights contributing to their characterization. These neoplasms are all rare; yet, the increasing frequency with which EWSR1-CREB1 and EWSR1-ATF1 fusions are being described in separate entities is noteworthy. The additional molecular mechanisms by which tumors with such variable morphologic, immunohistochemical, and clinical phenotypes are generated are yet to be understood. We review the clinicopathologic and molecular features of this group of neoplasms unified by the presence of EWSR1-CREB1 and EWSR1-ATF1 genetic fusions.     

重症急性胰腺炎治疗的发展

重症急性胰腺炎治疗的发展大体可以分为三个阶段。１　重症急性胰腺炎主治科别的讨论第一个阶段为重症急性胰腺炎的主治科别的讨论,即以内科治疗为好,还是以外科医治为好。这个阶段起始于１８８９年,Ｆｉｔｚ首先系统地描写了重症急性胰腺炎,在这阶段,出现两次反复,主治科由外科到内科,然后又由内科到外科,直到１９３８年,Ｎｏｒｄｍａｎｎ在德国外科大会上对重症急性胰腺炎作了总结报告,认为外科手术对重症急性胰腺炎有害无益。这样,重症急性胰腺炎进入了全面的内科保守治疗的时代,一直延续了３０年。到６０年代后期,由于Ｗａ…     

Plasma glutathione S-transferase pi 1-1 AND alpha 1-1 levels in patients with bladder cancer

PURPOSE: Transitional cell carcinomas of the human bladder and many gastrointestinal tumors often contain high amounts of the detoxification enzyme glutathione S-transferase pi (GSTP1-1). Elevated levels of GSTP1-1 have been found in serum and plasma from patients with gastrointestinal, lung or head and neck cancer. GSTP1-1 and glutathione S-transferase alpha (GSTA1-1) have been reported to be increased in 10 of 15 patients (67%) with bladder cancer. We evaluate the role of GSTP1-1 and GSTA1-1 as plasma tumor markers in 50 patients with bladder cancer before and after treatment. MATERIALS AND METHODS: Blood from patients with bladder cancer was sampled in ethylenediaminetetraacetic acid tubes. Plasma GSTA1-1 and GSTP1-1 were measured using the sensitive and specific sandwich enzyme-linked immunosorbent assay. RESULTS: Respective plasma GSTA1-1 and GSTP1-1 levels were above the upper normal reference limit in 2 (4%) and 14 (28%) of the 50 patients with bladder cancer. No significant decrease in plasma GSTA1-1 or GSTP1-1 was noted in matched pairs of plasma samples collected before and after treatment. CONCLUSIONS: In contrast to earlier reports, only a limited number of patients with bladder cancer had increased plasma GSTA1-1 or GSTP1-1, which did not decrease after tumor resection. These findings argue against the use of GSTP1-1 or GSTA1-1 as plasma markers for bladder cancer.     

Genetic polymorphisms of CYP1A1, CYP2E1, GSTM1, and GSTT1 associated with head and neck cancer

BACKGROUND: Alcohol intake and tobacco smoke, in addition to other environmental and genetic factors, have been associated with head and neck cancer. We evaluated the role of metabolic enzyme polymorphisms on the risk of head and neck cancer in a hospital-based case-control study. METHODS: CYP1A1MspI, CYP2E1PstI, GSTM1, and GSTT1polymorphisms were evaluated in 103 histologically confirmed head and neck cancer cases and 102 controls by means of polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism methods. RESULTS: GSTM1null increased the risk of head and neck cancer (odds ratio [OR], 2.2; 95% confidence interval [95% CI], 1.24-3.79), oral cancer (OR, 2.8; 95% CI, 1.28-5.98), and pharyngeal cancer (OR, 2.2; 95% CI, 1.08-4.63). CYP2E1PstI polymorphism indicated a risk for oral cancer (OR, 3.6; 95% CI, 1.29-11.56). The joint effect of GSTM1 null and CYP1A1 polymorphism increased the risk of head and neck cancer (OR, 2.4; 95% CI, 1.13-5.10). CONCLUSIONS: GSTM1 null alone or associated with CYP1A1 increased the risk of head and neck cancer; the CYP2E1PstI mutated allele increased the risk for only oral cancer.     

手术创伤中腹膜组织Sp1、COL1A1和TIMP-1的表达

目的　探讨人手术创伤腹膜组织中核转录因子Sp1激活 ,COL1A1和TIMP 1表达变化与腹膜纤维化之间的关系。方法　采用凝胶电泳迁移率改变分析法 (EMSA)检测手术创伤后不同时间的腹膜组织核转录因子Sp1的表达水平 ,WesternBlot检测COL1A1和TIMP 1蛋白表达 ,Masson染色观察腹膜组织中胶原纤维的变化。结果　Sp1在手术创伤后 0 .5h被活化 ,随着手术时间延长Sp1活性逐渐增强 ,至创伤后 4h时达高峰 ,同时创伤腹膜组织中的COL1A1和TIMP 1蛋白表达水平逐渐升高 ,存在差异显著性 (P <0 .0 1)。在手术创伤期内随手术时间的延长腹膜组织中胶原纤维增加。结论　核转录因子Sp1活化导致Ⅰ型胶原合成增加 ,细胞外基质降解减少 ,从而启动腹膜纤维化进程。