单纯疱疹病毒糖蛋白B的结构与功能区

单纯疱疹病毒1(HSV-1)是双链线性DNA包膜病毒,其DNA编码至少有11种特异型的糖蛋白,其中gB、gD、gH和gL是病毒复制、穿入、病毒胞间扩散和病毒囊膜与感染的细胞膜融合必须糖蛋白[1～5].gB是病毒囊膜的组成部分,是HSV-1感染晚期糖蛋白,在感染的细胞中,gB是跨膜蛋白,穿膜时是以二聚体和糖基化形式由胞外区穿向细胞膜,存在于感染细胞的胞膜上、内质网、高尔基复合体和核膜上.HSV-1 gB在疱疹病毒家族中是高度保守蛋白,各毒株间差异较小,且与所有的疱疹类病毒亚群有较大的同源性[6～9];gB是病毒复制必须的多功能蛋白,是宿主免疫反应的主要靶抗原,能诱导细胞免疫、体液免疫和细胞毒T淋巴细胞反应[10～14].鉴于gB蛋白的多种生物活性,近年来许多学者对gB的抗原和功能区进行大量研究.HSV-1 gB由UL27基因编码,全长2172bp,编码904氨基酸,由-30(有的是29)氨基酸序列组成的信号肽、-696氨基酸序列组成的在氨基端具有亲水性的胞外区、-69氨基酸序列组成的具有疏水性的跨膜区、-109氨基酸序列组成的羧基端具有极性胞内区[15].HSV-1 gB含有6个一致序列N-连接糖基化位点和10个半胱氨酸序列,在与gB同源序列中是高度保守序列,这些结构是整个分子内的重要结构[16].     

单纯疱疹病毒2型三万道尔顿糖蛋白的纯化及其特性研究(摘要)

本文应用抗单纯疱疹病毒2型(HSV-2)型特异性单克隆抗体(McAb)CH-A9作亲和层析,纯化出HSV-2 30,000道尔顿型特异性囊膜糖蛋白,其特性与文献报道的各种HSV囊膜糖蛋白均不相同。经ELISA间接法、HSV感染BHK细胞固定片和活细胞膜荧光染色证明,McAb CH-A9具有抗HSV-2型特异性,是针对HSV-2囊膜某一糖蛋白的。     

单纯疱疹病毒gB糖蛋白型共同性和型特异性抗原决定簇在体内的表达

单纯疱疹病毒(HSV)1型和2型基因编码合成的糖蛋白、在疱疹病毒感染疾病中具有潜在的临床意义。尤其是gB糖蛋自,已证明它是唯一的多功能分子,在病毒感染过程中可诱导病毒衣壳与细胞膜的融合,还可作为病毒中和反应和ADCC的主要的靶抗原。体外研究证明,gB糖蛋白既具有HSV型共同性又具有型特异性,用其制备的抗HSV-1或HSV-2型gB糖蛋白单克隆抗     

单纯疱疹病毒糖蛋白的特性及其临床意义

单纯疱疹病毒I型(HSV-1)有12种已命名的特异性的抗原糖蛋白,其中大部分具有诱导病毒原发感染的功能,是细胞免疫和体液免疫的主要靶标,也是预防和治疗HSV-1感染的亚单位疫苗或DNA疫苗的候选基因.本文综述了HSV囊膜糖蛋白的特性和其在复制循环中的作用以及其临床意义,为研制预防和治疗单疱病毒性角膜炎的糖蛋白联合疫苗提供了理论基础.     

单纯疱疹病毒2型30kD糖蛋白的鉴定及其编码基因的定位

用放射免疫沉淀试验和单纯疱疹病毒1型与2型(HSV-1/HSV-2)型间重组株作物理图谱的方法,鉴定出单克隆抗体(McAb)CH-A9靶抗原是一分子量约为30kD的糖蛋白,存在于HSV-2感染的BHK细胞膜上,其编码基因定位于长单一序列(UL)上,在0.490～0.564遗传单位之间,与已报道的HSV-2蛋白编码基因无重叠,因此g30kD可能是一种新的HSV-2糖蛋白。     

单纯疱疹病毒2型30kD糖蛋白的鉴定及其编码基因的定位

用放射免疫沉淀试验和单纯疱疹病毒1型与2型(HSV-1／HSV-2)型间重组株作物理图谱的方法，鉴定出单克隆抗体(McAb)CH-A9靶抗原是一分子量约为30kD的糖蛋白，存在于HSV-2感染的BHK细胞膜上，其编码基因定位于长单一序列(UL)上，在0.490～0．564遗传单位之间，与已报道的HSV-2蛋白编码基因元重叠，因此g30kD可能是一种新的HSV-2糖蛋白。     

HSV-1膜插入糖蛋白gB的氨基末端顺序及其合成

单纯疱疹病毒1型(HSV-1)的gB是病毒囊膜上的几种糖蛋白之一。它决定着病毒的感染性,可能是宿主免疫应答的重要靶抗原之一。 实验分别用HSV-1KOS株和F株感染HEP-2细胞,提取mRNA,在体外网织红细胞溶解系统中翻译,并加入外源性膜(狗胰脏微粒体膜,且用~(35)S-蛋氨酸标记感染细胞和微粒体),用免疫沉淀实验测产物分子量。用抗gB-1单克隆抗体系和层析纯化得到gB—1。     

宫颈癌HPV预防性疫苗研究进展

HPV是由DAN核心和蛋白衣壳组成的无包膜DNA病毒。衣壳直径约 55nm ,衣壳由主要衣壳蛋白L1和次要衣壳蛋白L2组成。L1结构保守 ,是主要的种特异性抗原 ;L2是型特异性抗原。L1和L2能诱生中和抗体 ,可预防HPV的感染。因此 ,目前HPV预防性疫苗的应用研究主要集中在病毒颗粒的外壳蛋白上。不同真核表达系统中表达的L1或L1 L2外壳蛋白可自我组装成VLP ,VLP具有良好的抗原性及免疫原性 ,被认为是最理想的预防性疫苗。     

体内表达单纯疱疹病毒糖蛋白gB的型共同性和型特异性抗原决定簇

单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)和Ⅱ型(HSV-2)基因组可编码合成几种抗原性不同的糖蛋白。这些糖蛋白表达于病毒感染细胞的表面,可刺激并与免疫监视的各种成分起反应。由于这些病毒诱导的抗原在原发性和复发性疱疹病毒病中,可能具有临床意义,因此,曾以极大的努力致力于其精确的免疫学特性鉴定。其中尤其重要的是,糖蛋白gB,     

日本脑炎病毒E蛋白基因酵母双杂交表达载体的构建

日本脑炎病毒 (ＪＥＶ)为黄病毒属成员 ,基因组为单股正链ＲＮＡ ,长约 11ｋｂ ,编码 3个结构蛋白和7个非结构蛋白〔1〕。其中 3个结构蛋白分别为衣壳蛋白Ｃ、膜蛋白Ｍ和囊膜蛋白Ｅ。Ｅ蛋白为该病毒外部的糖蛋白 ,由 50 0个氨基酸组成 ,相对分子质量(Ｍｒ)约为 530 0 0 ,具有多种生物学功能 ,包括受体结合活性和膜融合作用等 ,与病毒的致病性及组织亲嗜性密切相关〔2〕。酵母双杂交技术 ,是一种新近发展的研究蛋白质之间相互作用的方法。为研究ＪＥＶ的受体 ,我们将编码ＪＥＶ中具有受体结合活性的Ｅ蛋白的基因(约 1.5ｋｂ)克隆入酵母表达载…     

凋亡素选择性抗肿瘤的分子机制

凋亡素(apoptin)是一种来源于鸡贫血病毒(chicken anemia virus,CAV)的小分子量蛋白.CAV是一种无囊膜的DNA病毒,其基因组为2300 bp的单链环状DNA分子,含有3个完全或部分重叠的开放读码框,分别编码3个蛋白质:VP1、VP2和VP3[1].VP1为主要的衣壳蛋白,相对分子质量51 600.VP2为非结构蛋白,相对分子质量24 000,其具有双重性质的磷酸酶活性并且主要与VP1相互作用.VP1与VP2为CAV复制所必需[2].VP3亦称为凋亡素,相对分子质量13 600,能选择性诱导多种肿瘤细胞凋亡,如骨肉瘤、肝癌、黑色素瘤、肺癌、前列腺癌等,而不杀伤正常细胞[1,3-5].     

戊型肝炎病毒ORF3蛋白研究进展

戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)是戊型肝炎的病原体,是肝炎病毒科戊型肝炎病毒属的惟一成员,无包膜、正义、单链RNA病毒,病毒基因组全长约7.2 kb,由3个开放阅读框ORF1、ORF2和ORF3组成[1],其中ORF1编码与病毒复制、转录相关的酶等非结构蛋白[2-3],ORF2编码660 aa的病毒衣壳蛋白[4],ORF3编码小分子的磷蛋白.ORF2蛋白是公认的病毒抗原,是病毒的主要结构蛋白,对其研究的比较透彻[5].近年来,科学家们对于ORF3蛋白的研究逐渐增多,发现ORF3是一个多功能蛋白,是病毒感染、释放所必需,并参与细胞内的信号转导调控等生物过程[6].     

抗磷脂综合征患者脑脊液单纯疱疹1型病毒和巨细胞病毒抗体阳性病例分析

目的:报道4例与抗磷脂综合征(APS)患者脑脊液有关病毒抗体的阳性结果。方法:检测4例确诊APS患者脑脊液中单纯疱疹1型病毒(HSV-1)和巨细胞病毒(CMV)抗体,结合临床及影像学资料,分析其与APS发病的关系。结果:4例患者脑脊液HSV-1-IgG、CMV-IgG均为阳性,HSV-1-IgM、CMV-IgM均为阴性;例1、例2血清HSV-1-IgG、CMV-IgG阳性,例3、例4阴性;例1、2、3抗心磷脂抗体(aCL)血清水平12RU/ml;例4检出抗β2糖蛋白1(β2GP1)抗体。结论:初步提示HSV-1和CMV感染与APS可能存在相关性。     

巨细胞病毒型别多样性的研究与临床

1 巨细胞病毒的型别多样性及分型方法概述人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)属于疱疹病毒β亚科,为线状双链DNA病毒,其DNA链全长超过240kb,是最大的疱疹类病毒.虽然HCMV大部分的基因序列高度保守,但部分位点的基因存在不同程度的变异,如编码CXC趋化因子UL146、编码Ⅰ型膜糖蛋白的UL139和编码不同包膜糖蛋白的基因都高度可变.     

单纯疱疹病毒Ⅱ型DNA聚合酶的纯化与鉴定

单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)可以在受染细胞中诱导许多病毒特异性多肽的合成,其中少数具有特异性酶活性,例如HSV-2诱导的DNA聚合酶等。我们从HSV-2感染的Vero细胞中分离纯化了DNA聚合酶,并且对其特性进行了比较研究。     

Ⅰ型单纯疱疹病毒载体在中枢神经系统基因治疗中的应用

I型单纯疱疹病毒（HSV-1）是一种基因组为152kb的双链线状DNA病毒，由共价连接的长片断（L）和短片断（S）组成。HSV-1具有天然嗜神经性，可感染非分裂细胞，同时能进入感觉神经元突触末端并逆轴突到达胞体，然后在神经元中建立长期稳定静止的潜伏状态。     

Ⅱ型单纯疱疹病毒糖蛋白D在杆状病毒表达系统中的表达、纯化及免疫效果评价

目的:利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统对Ⅱ型单纯疱疹病毒(HSV-2)糖蛋白D(gD2)进行表达,纯化后评价其免疫效果,以探索HSV-2重组亚单位疫苗的研制。方法:提取HSV-2DNA作为模板,用聚合酶链式反应(PCR)扩增gD2基因,克隆至pFastBac HTA载体中,利用载体中的His基因标记gD2,通过Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达His-gD2融合蛋白,表达产物进行SDS-PAGE和Western-blot检验,用镍柱进行纯化,免疫小鼠评价其免疫原性。结果:HSV-2gD2在昆虫细胞Sf9中得到特异性表达,纯化后的重组蛋白诱导小鼠体内产生高水平的IgG抗体及中和抗体。结论:gD2基因在Bac-to-Bac杆状病毒表达系统中获得表达,表达产物表现出良好的免疫原性及中和活性,为发展HSV-2亚单位疫苗奠定了基础。     

肠道病毒71型抵抗Ⅰ型干扰素诱导的抗病毒作用

目的 研究肠道病毒71型(EV71)抵抗Ⅰ型干扰素(interferon,IFN)诱导的抗病毒作用.方法 将1000 U/ml的Ⅰ型干扰素(α,β)加入HeLa细胞后,去除上清中的干扰素,感染带有GFP的重组单纯疱疹病毒(HSV-1)和EV71,观察GFP的表达和PCR检测HSV-1核酸,判断Ⅰ型干扰素对HSV-1的作用.通过RT-PCR方法检测EV71 2A基因的表达从而判断EV71病毒的复制能力.结果 Ⅰ型干扰素(α,β)诱导HeLa细胞产生抗病毒蛋白而有效地抑制重组HSV-1 GFP的表达和核酸扩增.而EV71 2A的RT-PCR结果证实EV71可在Ⅰ型干扰素(α,β)作用后的HeLa细胞中有效增殖.结论 Ⅰ型干扰素(a,β)诱导产生抗病毒蛋白;EV71可在Ⅰ型干扰素(α,β)诱导产生抗病毒蛋白的HeLa细胞中有效增殖.     

McAb夹心法ELISA检测血清单纯疱疹病毒2型糖蛋白gC型特异性抗体

建立了检测单纯疱疹病毒2型(HSV-2)糖蛋白gC型特异性抗体的方法。用本法同免疫荧光血清分型,抗原竞争ELISA和微量中和实验(MNT)进行了比较,检测HSV-2抗体的感度均优于后3种方法。实验结果表明:本法特异、敏感、简便。不仅可用于区分人群中HSV感染型别的流行病学调查,也适用于HSV-2糖蛋白gC的特异性研究。     

汉坦病毒包膜糖蛋白的研究进展

汉坦病毒(Hantavirus,HV)是人类重要的致病病毒,主要引起肾综合征出血热和汉坦病毒肺综合征.HV基因组为分节段的单股负链RNA,由长(L)、中(M)、短(S)三个基因片段组成,分别编码L蛋白、包膜糖蛋白Gn、Gc和核衣壳蛋白N.其生物学活性主要来自Gn、Gc,本文系统阐述了包膜糖蛋白的基因结构和功能,对细胞融合与糖基化这两方面进行了重点叙述.