胰岛素对大脑皮质损伤后胶质细胞和AchE纤维变化的影响

本实验采用SD大鼠56只,于顶皮质作一宽2mm的冠状切口,用尼氏染色和AchE阳性纤维染色,观察损伤后胰岛素对切口两侧胶质细胞变化的影响.结果:损伤组和损伤用药组损伤切口两侧的胶质细胞在1～2W内迅速增生和集聚;2～3W出现胶质瘢痕,4～8W内增生的胶质细胞减少,胶质瘢痕收缩成一条致密带,再生胆碱能纤维沿切口两侧生长,难以穿越瘢痕组织,胰岛素用药组皮质损伤切口两侧的胶质细胞增生虽较损伤组轻,但还不足以有效的抑制胶质瘢痕的形成.     

不同年龄大鼠大脑皮质损伤后的星形胶质细胞反应

对幼年（３月龄）、成年（１２月龄）与老年（２７月龄）三组雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠的躯感皮质进行针刺后，在１～２１ｄ时间内用光镜与电镜观察损伤后的星形胶质细胞反应，探讨年龄因素对星形胶质细胞反应的影响。结果表明：反应性星形细胞在水肿、细胞分裂、吞噬、肥大与胶质界膜形成等方面均表现出程度上和发生时间上的年龄差异。幼年大鼠的星形细胞不仅水肿更为显著且出现更早，并且表现出向变性与最后死亡以及向代偿性合成增强两个方向发展、三组动物的星形细胞分裂活动以术后３ｄ最明显，尤以幼年组更多见，并出现活跃的吞噬现象．     

衰老时人大脑皮质胶质细胞超微结构的研究

用电子显微镜对１０例老年人和７例成年人大脑额叶、顶叶和颞叶皮质胶质细胞进行了研究。发现老年组胶质细胞内脂褐素增多，卫星化增加，星形胶质细胞有胞质肥大，表面下复合器的情况增多，并有胶质细胞岛和衰老斑形成。     

胰岛素对皮质胆碱能纤维损伤后再生的促进作用

用ＳＤ２月龄大鼠５６只，建立皮质损伤模型。设胰岛素脑室内注射７组２８只，分别存活１，２，３，４，５，６，８周，及相应对照组２８只和正常组４只。用ＡｃｈＥ染色法观察损伤切口两侧纤维密度的变化。结果：对照组切口尾侧纤维样正常组大量丢失，嘴侧部分丢失，第３周开始升高，４周后嘴侧纤维超过正常值，同时尾侧也有较大幅度回升，５周后增加变缓。     

脊髓混合性胶质细胞机械损伤后的形态变化

目的 建立体外培养的脊髓胶质细胞机械损伤模型,观察机械性损伤刺激后,混合性胶质细胞内不同细胞的形态变化及其特性。方法 １４￣１５ｄ胎龄的小鼠脊髓制成细胞悬液后,在含１０％胎牛血清的ＤＭＥＭ培养液中培养４周,形成富含星形胶质细胞的平铺混合胶质细胞,用塑料滴头刮损后,在刮损缘的反应性胶质细胞增生,肥大,向刮损裸区内生长并发生细胞分裂。结果 增长的细胞沿刮损方向呈极性排列,可伸出纤长的突起,突起上有串珠     

胰岛素缺乏对皮质AchE阳性纤维损伤后再生的影响

用２ｍ龄ＳＤ大鼠２８只，建立皮质损伤模型，采用ＡｃｈＥ组织化学染色法，观察损伤切口两侧胆碱能纤维再生的变化。结果：损伤１周对照组切口两侧纤维较正常组大量丢失（Ｐ＜０．０１），４周后纤维密度较一周组增加（Ｐ＜０．０１），嘴侧纤维达到正常值。链尿菌素所致胰岛素缺乏的皮质损伤４周组纤维密度明显低于４周对照组（Ｐ＜０．０１或Ｐ＜０．０５），经胰岛素治疗的４周组，密度接近４周对照组；而损伤后胰岛素脑室内和腹腔内注射组纤维再生的密度明显高于４周对照组（Ｐ＜０．０１或Ｐ＜０．０５）。提示：正常情况大脑皮质胆碱能纤维损伤后具有一定的再生能力，体内胰岛素缺乏使纤维损伤后的再生受到损害，而体内注入超生理水平的胰岛素时，则有促进损伤后纤维再生的作用。     

低温对原代星形胶质细胞的胶质纤维酸性蛋白和微丝的影响

用荧光染色方法，观察了低温（２～２２℃）对原代培养的星形胶质细胞的胶质纤维酸性蛋白（ＧＦＡＰ）和微丝（ＭＦ）的影响。发现在低于２２℃中处理后，ＧＦＡＰ束和ＭＦ束变细，ＭＦ数量减少。处理时间越长，变化越明显。形态分化良好的细胞的ＧＦＡＰ束耐低温能力提高。结果表明，低温时ＧＦＡＰ束间联结断裂，而其本身无解聚；ＭＦ束间联结断裂，ＭＦ本身出现解聚。     

大鼠大脑皮质星形胶质细胞的体外培养及其促神经突起生长作用研究

取生后１周以内ＳＤ大鼠大脑皮质，用胰蛋白酶消化结合机械吹打使细胞分散，制成较大量的初细胞悬液。将初细胞悬液先行粘附处理３０ｍｉｎ以排除其中的成纤维细胞，再制成较小量的次细胞悬液。将之接种到预先涂有鼠尾胶原的培养瓶中，令其贴壁３～５ｈ，细胞密度约１×１０５个／ｃｍ２。补加培养液，继续培养。培养液为含２０％小牛血清的ＤＭＥＭ／Ｆ１２混合培养液。俟细胞铺满瓶底后传代。届时细胞悬液亦行３０ｍｉｎ的粘附处理。以０．５×１０５个／ｃｍ２的细胞密度种植于培养瓶中。传代后先培养４８ｈ；换成无血清培养液再培养４８ｈ并收集条件培养液。对部分传代细胞进行胶质原纤维酸性蛋白免疫细胞化学杂色鉴定，证明传代后的细胞中星形胶质细胞比例达９４．７１％。取条件培养液及单纯ＤＭＥＭ／Ｆ１２培养液各１份，分别与２份有血清培养液混合，制成实验组与对照组两种培养液，以悬滴法培养鸡胚背根节。４８ｈ后，比较两组背根节神经突起的平均长度。经统计学分析揭示，实验组背根节神经突起平均长度显著大于对照组者，说明星形胶质细胞具有明显的促神经突起生长作用。     

急性心功能不全时大脑皮质超微结构的变化

用电子显微镜对10例死于急性左心功能不全的患者大脑额叶、顶叶和颞叶皮质进行了研究.发现毛细血管周围星形胶质细胞的突起水肿,基膜破坏,内皮细胞质空泡化,线粒体变性,溶酶体堆积,毛细血管腔缩窄,紧密连接变性.神经元核内出现膜性包含物.神经细胞及胶质细胞内有纤维性包含物,线粒体变性,胞质空泡化以及脂褐素体沉积.突触的变性表现为突触前末梢肿胀,突触小泡集聚、融合、破坏.     

中枢神经系损伤后不同时期星形胶质细胞的变化

将神经毒６－羟多巴胺注入大鼠一侧中脑腹侧被盖区，用胶质原纤维酸性蛋白抗体对损伤鼠中脑切片进行免疫组织化学ＡＢＣ法检测，观察星形胶质细胞在受损伤１ｄ至３０ｄ的不同时期的变化，术后１￣３ｄ，针道所经处见到ＧＦＡＰ阳性反应的细胞纤维，其胞体增大，纤维短粗。术后１周，针道周围反应性胶质细胞增多，有些反应性胶质细胞发出长的突起横向延伸垂直于针道，损害区附近血管增生，紧贴血管外周的胶质细胞也出现反应性变化。术     

弥漫性轴索损伤后胶质细胞的反应性变化

目的 探讨大鼠弥漫性轴索损伤（DAI）后胶质细胞的反应性变化规律及与轴索继发损伤的相互关系。 方法 SD 成年大鼠随机分为对照组及DAI损伤1d、2d、3d、7d组,每组8只。参照Marmarou方法制做 DAI 模型,并对大鼠的脑干部位进行胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、离子钙结合适配器分子1（Iba1）、少突胶质细胞系转录因子2（Olig 2）、CC-1、NG2免疫组织化学染色及TUNEL染色,并且通过透射电子显微镜进一步观察脑干超微结构变化。 结果 DAI大鼠损伤后3d脑干Iba1标记的小胶质细胞细胞数目显著增多,一直持续至伤后7d,且激活的小胶质细胞呈肥大样形态学改变;DAI大鼠伤后1周内脑干GFAP标记的星形胶质细胞数目虽有所增多,但并没有统计学意义;CC-1标记的成熟少突胶质细胞在DAI后1d即开始明显降低,且随损伤时间的延长而进一步降低。DAI大鼠脑干TUNEL标记的凋亡细胞随损伤时间延长持续增多,与成熟少突胶质细胞的丢失成正相关。Olig2标记的少突胶质细胞系表达在DAI损伤后1周内各时间点均明显增高,于损伤后3d达峰值。NG2标记的少突胶质细胞前体细胞数量于损伤后3d和7d显著增多。透射电子显微镜结果示,DAI大鼠损伤呈现由髓鞘到轴索的特点,最早表现为髓鞘松解,轴索完整;且脱髓鞘会进一步促进轴索骨架崩解,最终导致轴索变性。 结论 成熟少突胶质细胞对DAI损伤具有选择易感性,髓鞘脱失是轴索继发损伤的重要因素。少突胶质细胞前体细胞增殖,并伴随小胶质细胞的激活。探索胶质细胞的动态变化将为进一步解释轴索继发损伤的病理生理学机制奠定基础。     

细胞外调节蛋白激酶在体外培养下大鼠大脑皮质星形胶质细胞的表达

目的:研究大鼠大脑皮质星形胶质细胞细胞外调节蛋白激酶(ERK)表达.方法:用生后2～3d SD大鼠,在无菌条件下取大脑皮质,制备细胞悬液,以GFAP鉴定星形胶质细胞;用免疫细胞化学方法研究星形胶质细胞ERK1表达.结果:星形胶质细胞的纯度达95%以上,ERK1免疫阳性物质呈棕黄色,分布于星形胶质细胞胞体与突起中.结论:培养的大鼠星形胶质细胞表达ERK1,其可能与星形胶质细胞信号转导有关.     

大鼠大脑皮质损伤后神经毡与少突胶质细胞反应的年龄性差异

针刺不同年龄大鼠大脑皮质后，于不同时间点观察神经毡及少突胶质细胞的反应。光镜与电镜下均发现，三个年龄组在针刺后早期都有神经毡的水肿，晚期逐渐恢复，但水肿的出现和消退均以幼年大鼠最早、最显著，同时伴有明显的成髓现象，少突胶质细胞肥大、核仁增大、细胞器和游离核糖体增多等。此外，变性区内仍保持结构正常的突触多见于成年及老年大鼠。上述结果表明，幼年大鼠神经组织对针刺损伤反应较敏感，其恢复速度却较快，而较老动物的胞突间连接比幼年者稳定。     

雷公藤内酯醇对大鼠大脑皮质内注射β-淀粉样蛋白后星形胶质细胞及胆碱能纤维的影响

目的:探讨雷公藤内酯醇(TP)对大鼠大脑皮质内注射β-淀粉样蛋白(Aβ)后星形胶质细胞及胆碱能纤维的影响.方法:采用GFAP免疫组织化学方法、AChE组织化学方法检测各组大鼠大脑皮质星形胶质细胞和胆碱能纤维的表达.结果:Aβ组大鼠大脑皮质GFAP阳性星形胶质细胞数量、平均面积和平均光密度明显高于对照组,用药组大鼠大脑皮质GFAP阳性星形胶质细胞数量、平均面积和平均光密度较Aβ组明显减少;Aβ组大鼠大脑皮质胆碱能纤维密度明显低于对照组,用药组大鼠大脑皮质胆碱能纤维密度较Aβ组明显升高.结论:TP能抑制Aβ诱导的星形胶质细胞的活化,减轻Aβ所致的胆碱能纤维损害.     

胶质细胞移植治疗脊髓损伤的研究进展

脊髓损伤具有高发生率、高致残率、高生存率、高消耗、青壮年多发等特点。其相关治疗的研究主要是从挽救神经元的迟发型损害和死亡，促进神经元的再生和组织移植替代等方面进行。由于哺乳动物中枢神经系统损伤后期内源性修复能力有限，所以细胞移植可能是更为可行的修复途径。目前细胞移植分为神经干细胞移植、胶质细胞移植、基因修饰的细胞移植等。胶质细胞通过广泛分布的凸起构成神经组织的支架，对神经元胞体和突起有支持作用。出生后保持一定的分裂能力．受到创伤刺激时进行分裂增殖，形成胶质瘢痕。星形胶质细胞一方面位于神经细胞的附近．另一方面附着于毛细血管的终足。参与物质运输和血脑屏障的形成。此外，星形胶质细胞可能在神经元生成、突触网络形成、神经元电活动以及特异性神经系统疾病等过程中发挥着调控作用。基于上述理论．国内外进行了一系列胶质细胞移植修复脊髓损伤的实验研究．现就相关研究进展综述如下。     

长期酒精暴露诱导胰岛素抵抗对视网膜胶质细胞的影响

目的:本文旨在探讨长期酒精暴露诱导胰岛素抵抗对小鼠视网膜胶质细胞的损伤以及IGF-1可能的作用。方法:选取野生型(wild type,WT)小鼠48只,酒精暴露建立动物模型,用血糖仪测定血糖浓度,用ELISA测定血胰岛素和IGF-1浓度,并计算胰岛素抵抗指数(homeostasis model assessment of insulin resistance,HOMAIR),利用免疫荧光染色观察视网膜胶质细胞的变化。结果:长期酒精暴露引起小鼠胰岛素抵抗(P<0.05),酒精暴露后出现视网膜胶质细胞的损伤如星形胶质细胞数量减少,Müller细胞GS染色减弱,呈剂量依赖性(P<0.05)。结论:长期酒精暴露可以诱导小鼠胰岛素抵抗和视网膜胶质细胞损伤,IGF-1浓度和胰岛素抵抗指数呈负相关,提示IGF-1可以作为胰岛素抵抗综合征的标志物。     

大鼠脊髓损伤后NGF及其受体TrkA在运动神经元及神经胶质细胞表达的变化

为探讨脊髓损伤后运动神经元及神经胶质细胞内神经生长因子(NGF)及其高亲和力受体(TrkA)表达的变化,用改良Allen重击法损伤SCI组动物T12脊髓,按伤后存活时间再将动物分为脊髓损1 d组、2 d组和5 d组。各组动物的脊髓切片经ABC法免疫组织化学染色,用光镜观察TrkA及NGF在脊髓前角运动神经元表达的变化和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及NGF免疫反应阳性胶质细胞的反应性增生程度,并进行图像分析。结果显示:脊髓损伤后前角运动神经元TrkA及NGF的表达随脊髓损伤后动物存活时间的延长逐渐上调;脊髓白质和灰质内尤其是皮质脊髓束内GFAP及NGF阳性胶质细胞明显增生;与此同时,室管膜细胞内亦可见明显的NGF免疫反应产物。上述结果表明,脊髓损伤可刺激脊髓前角运动神经元表达TrkA及NGF,通过自分泌维持受损神经元的存活;损伤部位反应性增生的胶质细胞亦可产生NGF,通过旁分泌作用于脊髓前角运动神经元或皮质脊髓束的轴突末梢,以维持运动神经元的存活及促进皮质脊髓束的再生;适时补充外源性神经营养素或改变损伤局部的微环境将有利于受损脊髓的修复和再生。