体外培养人肝癌细胞对阿霉素耐药机理及电镜形态研究

目的应用人肝癌细胞株SMMC-7721,研究多药耐药（MDR）的产生机理。方法通过不断提高培养液中阿霉素（ADM）的浓度,长期筛选培养,得到人肝癌多药耐药株SMMC-7721／ADM。用MTT法检测常用6种化疗药物对肝癌细胞敏感株SMMC-7721／S和耐药株SMMC-7721／ADM的毒性;用流式细胞技术检测肝癌细胞MDRI基因产物—P—精蛋白（P-gp）的表达以及细胞内柔红霉素（DNR）浓度。结果SMMC-7721／ADM细胞对阿霉素的敏感性下降了59.33倍,同时对表阿霉素（EPi）、柔红霉素（DNR）、丝裂霉素（MMC）也具有显著的交叉抗药性,对顾铂（CDDP）、氯甲喋吟（MTX）无抗药性。耐药株P-gp较敏感株有非常明显升高,耐药细胞内柔红霉素相对该区明显少于其敏感细胞。结论SMMC-7721／ADM对结构和作用不同的亲脂类化疗药物都表现出交叉抗药性。P-gp过度表达引起的细胞内药物浓度减少是SMMC—7721／ADM细胞抗药性的主要原因。     

多药耐药对肝癌细胞增殖、凋亡、侵袭活性、耐药机制及丝裂原活化蛋白激酶表达的影响

目的:通过化疗药物诱导建立多株人肝癌多药耐药细胞模型,探讨多药耐药获得对细胞增殖、凋亡、侵袭能力的影响,耐药机制及与丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路表达的相关性.方法:采用多柔比星( adriamycin,ADM)高浓度冲击和小剂量缓升2种方法诱导建立人肝癌细胞(HepG2、SMMC-7721和BEL-7402)耐药模型.比较耐药细胞株与亲本细胞株间的差异,主要包括采用生物发光法进行药物敏感实验并计算耐药指数;RT’-PCR法和免疫组织化学法检测相关耐药基因(p-糖蛋白、多药耐药相关蛋白1、肺癌耐药蛋白、乳腺癌耐药蛋白、蛋白激酶C、谷胱甘肽-S-转移酶-π和拓扑异构酶Ⅱ)mRNA及相应蛋白的表达.免疫组织化学法检测与细胞增殖活性相关的Ki-67和增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达:FCM法检测细胞周期、细胞凋亡率的改变Transwell小室法检测细胞体外侵袭能力的改变最后,分别采用RT-PCR和蛋白质印迹法检测MAPK信号通路中ERK1、ERK2、ERK5、JNK1、JNK2和p38a基因及相应蛋白的表达.结果:共建立6株ADM耐药细胞株;与亲本细胞株相比,耐药细胞株耐药指数均＞5,并对多种化疗药耐受性增强,多药耐药相关基因及蛋白的表达均上调2～10倍,以高浓度冲击法诱导的细胞中蛋白表达上调明显.耐药细胞中Ki-67及PCNA蛋白的表达量均升高20倍以上,细胞周期被阻滞在S期,体外侵袭能力增强1.3～2.5倍;ADM干预后,细胞凋亡率减少60％以上.MAPK信号通路中不同基因和蛋白表达量均有不同比例升高,以ERK1、ERK2升高明显.结论:ADM能够诱导多株人肝癌细胞产生多药耐药,导致细胞增殖活性升高、细胞周期改变、抗凋亡能力及侵袭能力增强.MAPK信号通路中相关蛋白表达的上调与细胞多药耐药有一定关系.     

人膀胱癌非经典型多药耐受性研究

目的：为了建立人膀胱癌耐阿霉素细胞系并研究它们的生物学特性及药物耐受性的机理。方法：采用人膀胱癌细胞系EJ,经递增阿霉素剂量的方法,历时1年,建立一株耐药亚株EJ／DOR,对其生物学特性及耐药机理进行了研究,并应用反转录PCR检测了MDR1、MRP和DNA TopoⅡ基因的表达。结果：EJ／DOR对阿霉素的相对耐受度较亲本细胞提高了14．3倍;对蒽环类、长春花属生物碱及DNA TopoⅡ靶制剂足叶乙甙有明显的交叉耐药性,但对顺铂、丝裂霉素无明显的交叉耐受性;耐药细胞对柔红霉素的细胞内聚集量显著减少;EJ／DOR并不表达MDR1基因,而MRP基因过表达,但细胞内DNA TopoⅡ基因表达低于亲本细胞。结论：细胞内DNA TopoⅡ基因表达下降及MRP基因过表达是EJ／DOR表现为多药耐受性亚型的主要原因,这种非P－gp介导的非经典型多药耐受性细胞为寻求包括阿霉素在内的化疗方案提供了良好的实验模型。     

人膀胱癌非经典型多药耐受性研究

目的：为了建立人膀胱癌耐阿霉素细胞系并研究它们的生物学特性及药物耐受性的机理。方法：采用人膀胱癌细胞系EJ,经递增阿霉素剂量的方法,历时1年,建立一株耐药亚株EJ／DOR,对其生物学特性及耐药机理进行了研究,并应用反转录PCR检测了MDR1、MRP和DNA TopoⅡ基因的表达。结果：EJ／DOR对阿霉素的相对耐受度较亲本细胞提高了14.3倍;对蒽环类、长春花属生物碱及DNA TopoⅡ靶刺剂足叶乙甙有明显的交叉耐药性,但对顺铂、丝裂霉素无明显的交叉耐受性;耐药细胞对柔红霉素的细胞内聚集量显著减少;EJ／DOR并不表达MDR1基因,而MRP基因过表达,但细胞内DNA TopoⅡ基因表达低于亲本细胞。结论：细胞内DNA TopoⅡ基因表达下降及MRP基因过表达是EJ／DOR表现为多药耐受性亚型的主要原因,这种非P-gp介导的非经典型多药耐受性细胞为寻求包括阿霉素在内的化疗方案提供了良好的实验模型。     

β-榄香烯逆转人乳腺癌MCF-7/ADM细胞对阿霉素耐药性的研究

目的　探讨 β 榄香烯 (β ELE)逆转人乳腺癌MCF 7/ADM细胞对阿霉素 (ADM)的耐药性。方法　采用MTT法测定β ELE对人乳腺癌MCF 7/ADM细胞药物敏感性的影响。经荧光分光光度法检测 β ELE对细胞内化疗药物ADM积累的影响 ,应用流式细胞术观察耐药细胞的凋亡抑制蛋白bcl 2改变。结果　β ELE对MCF 7/ADM的耐药性有明显逆转作用 ,非细胞毒性剂量 (6 μg/ml)及低毒剂量 (13μg/ml)的 β ELE逆转倍数分别为 1.4倍及 2 .2倍。β 榄香烯作用后 ,MCF 7/ADM的细胞内ADM浓度明显增加 (P <0 .0 1) ,bcl 2由 90 .2 %降至 70 .0 % (P <0 .0 5 )。结论　β ELE可部分逆转MCF 7/ADM细胞的耐药性 ,逆转机制与增加细胞内药物积累及降低bcl 2的表达有关。     

人恶性淋巴瘤细胞Raji长春新碱耐药株Raji/VCR的建立及其生物学特性

目的：建立人恶性淋巴瘤细胞Raji长春新碱（VCR）耐药株Raji/VCR并初步研究其生物学特性。方法：采用大剂量VCR间歇诱导法建立耐药株Raji/VCR。MTT法测定其对VCR、足叶乙甙(VP-16）和阿霉素（ADM）的药物敏感度,Real-time RT-PCR法测定细胞DMR1mRNA水平,流式细胞仪检测P-gp表达和细胞内柔红霉素（DNR）浓度。结果：历时近8月建成人恶性淋巴瘤多药耐药株Raji/VCR,其对VCR、ADM、VP-16的耐药倍数分别为8、5和3。Raji/VCR的DMR1mRNA及P-gp表达明显高于亲本细胞,而细胞内DNR浓度明显下降。结论：耐药株Raji/VCR具有多药耐药细胞的基本生物学特性,可用于肿瘤多药耐药的相关研究。     

Lewis肺癌耐药细胞的诱导及其耐药性的初步研究

目的：建立肺癌耐药动物模型，诱导耐ADM的Lewis肺癌细胞株，并鉴定其生长特性，细胞内药物的释放特性及耐药谱。方法：用渐进式给药法诱导建立耐ADM的Lewis肺癌细胞株，绘制生长曲线，计算倍增时间，用IPP图象分析系统观察比较耐细胞及其亲本细胞内ADM和Rh-B的荧光光密度，荧光分光光度计法测定细胞内ADM含量并绘制ADM释放曲线，MTT法测定细胞IC50，计算耐药指数。结果：经14个月的诱导培养获得了0．4μg/mlADM中稳定生长的Lewis肺癌细胞株－－13－8／ADM，其在动物体内的成瘤率为10／10；在0.15mg/l ADM和普通1640培养基中的倍增时间分别为22.0h，和21.8h；在4mg/lADM和Rh-B中培养后，耐药细胞及其亲本细胞内的荧光光度密度比分别为2．82：1和2．65：1，耐药细胞内的AMD含量仅为其亲本细胞的64．7％，但其药物释放速度无明显差异。L3－8／ADM细胞除对AMD耐药性，对DNR、VCR、MIT和CDDP也有不同程度的耐药性。结果：L3－8／ADM是一株典型的MDR细胞株，其耐药作用可能是由于胞膜的药物渗透受阻所致，本研究结果为肺癌耐药动物模型的建立打下了良好的基础。     

甲基莲心碱对耐阿霉素人乳腺癌细胞多药耐药性的逆转

目的研究甲基莲心碱逆转耐阿霉素人乳腺癌细胞多药耐药性(MDR)的作用及机制。方法采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞毒性;PI 染色流式细胞计数测定细胞凋亡;间接免疫荧光流式细胞术检测细胞 P-gp 的表达;HPLC 检测细胞内药物浓度。结果 Nef(1、5、10μmol·L~(-1))对人乳腺癌细胞(MCF-7/S)和耐阿霉素人乳腺癌细胞(MCF-7/ADM)无显著毒性作用。阿霉素(ADM)对敏感株 MCF-7/S 的 IC_(50)为0.13μg·mL~(-1)而对 MDR 细胞株 MCF-7/ADM 的 IC_(50)为11.63μg·mL~(-1),MCF-7/ADM 细胞较MCF-7/S 细胞对 ADM 耐药88倍,1、5、10μmol·L~(-1) Nef 能使 ADM 对 MCF-7/ADM 细胞的 IC_(50)从11.63μg·mL~(-1)依次下降至4.59、2.44、0.27μg·mL~(-1)。MCF-7/ADM 细胞对 ADM 具有凋亡抗性,Nef(1、5、10μmol·L~(-1))能克服 MCF-7/ADM 细胞对 ADM 的凋亡抗性。MCF-7/ADM 细胞较 MCF-7/S 细胞高表达 P-gp,Nef(10μmol·L~(-1))处理24h 后,MCF-7/ADM 细胞 P-gp 表达明显下降。ADM 作用3h 后,MCF-7/ADM 细胞内 ADM 的浓度比 MCF-7/S 细胞少2.8倍,Nef(10μmol·L~(-1))可使 MCF-7/ADM 细胞内 ADM 的浓度增加3.2倍,但并不增加 MCF-7/S 细胞内 ADM 的浓度。结论 Nef 具有逆转耐阿霉素人乳腺癌细胞 MDR 的作用,其作用机理与促进 MDR 细胞内 ADM 积累和下调 MDR 细胞 P-pg 表达有关。     

板蓝根组酸活性单体-5b逆转肝癌细胞耐药的实验研究

目的 :研究板蓝根组酸活性单体 5b对肝癌耐药细胞BEL 74 0 4 /ADM逆转作用及机制。方法 :利用BEL 74 0 4细胞的多药耐药模型BEL 74 0 4 /ADM ,应用MTT法、免疫组化法和高效液相色谱法(HPLC)观察板蓝根组酸活性单体 5b对BEL 74 0 4 /ADM多药耐药逆转。结果 :板蓝根组酸活性单体 5b能降低肝癌耐药细胞BEL 74 0 4 /ADM对ADM的耐药性 ,细胞MDR ,p gp的表达改变不明显 ,其细胞内ADM的含量明显增高。结论 :板蓝根组酸活性单体 5b能逆转肝癌耐药细胞BEL 74 0 4 /ADM对ADM的耐药性 ,其逆转作用可能与降低P gP药物外排功能、增加细胞内药物浓度有关。     

α—干扰素对肝癌多药耐药株SMMC—7221／AMD的逆转及其机制研究

目的：研究α－干扰素对人肝癌多药耐药细胞SMMC－7221／ADM的逆转作用。方法：用MTT法检测常用化疗药物对SMMC－7221／ADM的毒性。用流式细胞仪（FCM）检测SMMC－7221／ADM细胞的P－糖蛋白（P－gp)的表达及细胞内柔红霉素的相对浓度，结果：α干扰素可提高SMMC－7221／ADM细胞内化疗药物的浓度，增加阿霉素等化疗药物对SMMC－7221／ADM的毒性作用。结论：α－干扰素可逆转人肝癌多药耐药株SMMC－7221／ADM。     

ISOLATION AND CHARACTERIZATION OF AN ADRIAMYCIN－RESISTANT SUBLINE OF THE HUMAN GASTRIC ADENOCARCINOMA CELLLINE

ＩＳＯＬＡＴＩＯＮＡＮＤＣＨＡＲＡＣＴＥＲＩＺＡＴＩＯＮＯＦＡＮＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ－ＲＥＳＩＳＴＡＮＴＳＵＢＬＩＮＥＯＦＴＨＥＨＵＭＡＮＧＡＳＴＲＩＣＡＤＥＮＯＣＡＲＣＩＮＯＭＡＣＥＬＬＬＩＮＥＷａｎｇＹａｎｐｉｎｇ；王艳萍；ＸｕＧａｎｇ；徐刚（Ｉ...     

真核表达p27构建胃癌顺铂耐药细胞模型的研究

目的:构建p27真核表达载体并导入胃癌SGC-7901细胞获得稳定表达p27的稳定细胞株,以研究p27在胃癌SGC-7901细胞顺铂耐药中所发挥的功能。方法:以乳腺文库为模板,PCR扩增出p27编码区,并将其连接到pCDNA 3.0-Flag载体上,转染293T细胞后分别用定量PCR和Western blot检测其表达情况,并通过Western blot检测SGC-7901细胞过表达Flag-p27稳定细胞株是否构建成功。通过CCK-8药物敏感性实验检测p27在胃癌细胞顺铂耐药中所发挥的功能。结果:双酶切和测序结果表明,pCDNA 3.0-Flag-p27构建成功,并在293T中成功表达,胃癌SGC-7901细胞过表达Flag-p27细胞株建立成功,通过耐药曲线表明过表达p27可以引起SGC-7901细胞顺铂耐药。结论:成功构建了带Flag标签的p27真核表达载体,为进一步研究p27在胃癌耐药中的功能奠定了基础。     

环7肽库筛选胃癌耐药细胞特异性结合短肽

目的获得与胃癌耐药细胞株SGC7901/VCR特异结合的抑制耐药短肽,作为提高胃癌化疗效果的先导化合物。方法以SGC7901/VCR细胞为靶细胞,胃粘膜永生化上皮细胞GES,胃癌药敏细胞SGC7901为吸附细胞对噬菌体7肽库进行消减筛选,用细胞ELISA鉴定阳性噬菌体克隆并测序,利用竞争抑制试验确定阳性克隆的结合部位是否为外源性肽段。结果经4轮筛选,从随机挑选的30个噬菌体克隆中得到14个能特异性与SGC7901/VCR结合而不与胃癌药敏细胞结合的阳性克隆,确定其氨基酸序列分别为SY1和SY2(筛选所得安基酸序列正在专利申请中),含SY1为阳性克隆。结论用噬菌体环7肽库成功筛选到能特异性结合胃癌耐药细胞株的短肽,为肿瘤治疗或药物靶向治疗奠定基础。     

抑制核转录因子活化逆转胃癌细胞株耐药性研究

目的　探讨核转录因子（ＮＦ-κＢ）的活化在胃癌细胞株耐药性机制中的作用。方法　用阿霉素（ＡＤＭ）诱导培养胃癌细胞耐药亚株ＳＧＣ７９０１／ＡＤＭ,ＭＴＴ法检测ＡＤＭ对胃癌细胞株的细胞毒作用,流式细胞仪检测胃癌细胞株凋亡率的变化,免疫细胞化学染色法检测胃癌细胞株ＮＦ κＢ的活化情况。吡咯烷二硫代氨基甲酸脂（ＰＴＤＣ）抑制ＮＦ-κＢ活化,并检测ＡＤＭ对胃癌细胞株的细胞毒作用。结果　ＳＧＣ７９０１／ＡＤＭ的ＩＣ_５０为２.６３μｇ／ｍｌ,ＳＧＣ７９０１的ＩＣ_５０为０.２９μｇ／ｍｌ,ＳＧＣ７９０１／ＡＤＭ相对耐药度较亲本细胞提高了８.９倍。４８ｈ内ＳＧＣ７９０１和ＳＧＣ７９０１／ＡＤＭ胃癌细胞株发生的凋亡率随ＡＤＭ浓度增加而升高,随着作用时间延长而升高;１０μｇ／ｍｌＡＤＭ分别作用４８ｈ时ＳＧＣ７９０１和ＳＧＣ７９０１／ＡＤＭ胃癌细胞株发生的凋亡率为（４８.５３±１.０２）％和（１７.５３±１.０２）％。免疫细胞化学染色显示ＡＤＭ作用ＳＧＣ７９０１／ＡＤＭ胃癌细胞９ｈ后可检测到ＮＦ-κＢ核移位,最高达到６５％;ＡＤＭ作用ＳＧＣ７９０１胃癌细胞株１８ｈ后可检测到少量ＮＦ-κＢ核移位;所有的细胞株ＮＦ-κＢ核移位均于２４ｈ后减弱;ＰＴＤＣ抑制核转录因子活化后ＡＤＭ细胞毒效应增强（Ｐ＜０.０５）。结论　ＮＦ-κＢ活化所导致的胃癌细胞株凋亡率下降在胃癌细胞株耐药性机制中发挥一定作用,抑制ＮＦ-κＢ活化后可以逆转胃癌细胞株对ＡＤＭ耐药性。     

锌带基因ZNRD1在胃癌耐药细胞中的表达和功能

目的 探讨锌带基因ZNRD1在多药耐药胃癌细胞中的表达和作用。方法 应用Northern blot和半定量RT—PCR,观察锌带基因ZNRD1在胃癌细胞SGC7901及其长春新碱(VCR)诱导的耐药细胞SGC7901／VCR中的表达;将反义核酸转染SGC7901／VCR细胞,通过免疫组化检测转导细胞与非转导细胞ZNRD1蛋白的表达;以流式细胞仪检测细胞周期的变化,以MTT实验检测细胞生长曲线和对VCR、阿霉素(ADM)的药敏性。结果 胃癌耐药细胞SGC7901／VCR与非耐药细胞相比,ZNBDl基因的表达明显增高。转导株antiZNRDl—SGC7901／VCR细胞的ZNRD1蛋白水平明显低于非转导株,C1期细胞比例增加而S期比例减少,生长受到抑制,且对VCR、ADM的敏感性明显增高。结论 胃癌耐药细胞与非耐药细胞相比,ZNRDl基因处于高表达状态。反义核酸转染可有效阻断ZNRDl蛋白的表达,在一定程度上逆转人胃癌耐药细胞SGC7901／VCR的多药耐药性。     

miR-361-5p通过靶向CCND1逆转胃癌SGC-7901细胞奥沙利铂耐药性

目的:探讨miR-361-5p对胃癌SGC-7901细胞奥沙利铂(oxaliplatin,OXA)耐药性的影响及其作用机制.方法:采用qPCR法检测miR-361-5p在胃癌细胞MKN-45、MGC80-3、SGC-7901和OXA耐药细胞SGC-7901/OXA中的表达水平.利用脂质体转染技术分别将miR-361-5...     

NS-398对人胃癌细胞系SGC-7901增殖、凋亡和COX-2表达的影响

目的 探讨环氧合酶-2(COX-2)抑制剂NS-398对人胃癌细胞系SGC-7901增殖、凋亡及COX-2表达的影响,并进一步探讨其作用的可能机制.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测NS-398对SGC -7901细胞的杀伤抑制作用;免疫细胞化学法检测SGC-7901细胞内COX-2的蛋白表达情况;ELISA法检测NS-398作用于SGC-7901细胞后PGE2释放水平;流式细胞仪检测SGC-7901细胞的凋亡情况.结果 NS-398对胃癌SGC-7901细胞具有较强的抑制作用,且这种抑制作用随浓度和时间的增加而增强,呈剂量-时间双效应关系(P＜0.05);不同浓度NS-398作用下的SGC-7901细胞中,COX-2的表达明显减弱,且呈剂量梯度下降(P＜ 0.05);NS-398可抑制PGE2释放,并且这种抑制作用呈剂量效应关系,与对照组相比差异有统计学意义(P＜ 0.05);NS-398作用于SGC-7901细胞48 h后,细胞凋亡率升高,且呈剂量效应(P＜0.05).结论 NS-398通过COX-2依赖途径抑制SGC-7901细胞增殖并促进其凋亡.     

丙酮酸乙酯通过下调蛋白激酶B通路抑制人胃癌细胞侵袭转移的研究

目的探讨丙酮酸乙酯（EP）对人胃癌SGC-7901细胞侵袭转移的抑制效果及机制。方法噻唑蓝比色分析法 (MTT法)测定EP在胃癌SGC-7901细胞中的半数抑制浓度(IC50)。不同浓度EP加入到胃癌细胞后,实时定量PCR检测蛋白激酶B（Akt）的mRNA表达水平;Western blot检测Akt、p-Akt、基质金属蛋白酶-2 (MMP-2)和MMP-9的蛋白表达水平。划痕和Transwell实验评价胃癌细胞侵袭转移的能力。通过建立裸鼠皮下移植瘤模型,免疫组织化学进一步验证以上蛋白的表达水平。结果EP在胃癌SGC-7901细胞中的IC50为36.73 mmol/L。EP抑制Akt mRNA的表达及下调Akt、p-Akt、MMP-2和MMP-9的蛋白表达。划痕实验显示EP可抑制胃癌细胞的迁移运动能力;Transwell显示,与对照组（93.33±4.16）相比,EP 10 mmol/L组（75.34±4.73）、EP 20 mmol/L组（61.34±3.06）及EP 40 mmol/L组（39.00±3.00）的侵袭转移细胞数明显减少 (P均<0.001)。免疫组组织化学进一步证实了Western blot的检测结果。结论EP通过下调Akt通路抑制人胃癌细胞的侵袭和转移,对癌症具有一定的治疗效果。     

蜂胶黄酮 pinobanksin-3-acetate对胃癌SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响及机制

[目的]探讨蜂胶黄酮pinobanksin-3-acetate对体外培养的胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡及部分基因表达的影响.[方法]采用四甲基偶氮唑盐(MTr)显色法检测不同浓度PB3A作用不同时间对SGC-7901细胞生长所产生的影响,计算生长抑制率和IC50值;倒置显微镜观察PB3A干预后细胞的形态变化;Annexin V-FITC/PI双染色、流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot法检测PB3A(40、80μg/ml)干预24h后SGC-7901细胞FOS、GEM、RGS2、GADD45G及HSPA6的蛋白表达水平,利用Spearman进行候选基因相关性分析.[结果]PB3A可明显抑制SGC-7901细胞的增殖(P＜0.05),且抑制作用呈时间和剂量依赖性.随PB3A剂量的增多,SGC-7901细胞的凋亡率渐增,细胞的早期凋亡率从25.6％提高到50.2％.通过40μg/ml和80μg/ml PB3A干预胃癌SGC-7901细胞24h后与对照组相比,高浓度组GADD45G、HSPA6、GEM、RGSR及FOS蛋白表达有极显著性差异(P＜0.01),而低浓度组GADD45G、GEM和HSPA6蛋白表达有显著性差异(P＜0.05).[结论]PB3A在体外可明显抑制胃癌SGC-7901细胞增殖并诱导凋亡的作用,并呈剂量依赖性变化趋势.机制可能与其诱导GEM、RGSR、FOS及HSPA6蛋白的上调表达有关,以上基因可能相互协同导致肿瘤细胞增殖信号通路的抑制并促进胃癌细胞的凋亡.