内源性noggin对学习记忆过程中海马神经发生的调控作用

目的：探讨noggin对成年大鼠海马5溴-2脱氧尿苷(BrdU)表达与学习记忆相关性及长时程增强(long term potentiation,LTP)的影响。方法：侧脑室注射noggin反义寡核苷酸，BrdU标记结合免疫组化检测成年海马神经干细胞的增殖，刺激海马CA3区Schaffer侧支，在CA1锥体细胞层记录LTP。结果：侧脑室注射noggin反义寡核苷酸后，能明显抑制学习训练引起的海马齿回与颗粒细胞层BrdU免疫反应阳性细胞的增多效应，使齿回及颗粒细胞层BrdU阳性细胞数减少44．51％(t=82．57，P&;lt;0．01)和40.04％(t=68．54，P&;lt;0．01)。LTP结果显示noggin反义寡核苷酸明显抑制LTP的诱出率，并使群集性峰电位(population spike，PS)的增幅与场兴奋性突触后电位(field excitatory postsynaptic potential，fEPSP)斜率增加的百分率均较对照组显著减低(P&;lt;0．01)。结论：提示内源性noggin参与调控学习记忆过程中海马的神经发生。     

碱性成纤维细胞生长因子对海马伞切断大鼠海马神经的影响

目的了解碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对海马伞切断造成的阿尔茨海默病(AD)模型大鼠海马齿状回神经发生的影响,探讨bFGF治疗AD的前景。方法36只SD大鼠随机分成正常对照组(n=12)、AD对照组(n=12)和AD处理组(n=12)。AD处理组及AD对照组大鼠左侧海马伞切断制造AD模型;正常对照组注射生理盐水。AD处理组造模后每天侧脑室注射bFGF共7d;AD对照组及正常对照组同时间注射生理盐水。BrdU标记增殖细胞。TUNEL方法标记DNA片段,原位检测凋亡细胞。计数海马齿状回BrdU阳性细胞与凋亡细胞数。结果AD处理组大鼠与AD对照组大鼠相比,海马齿状回BrdU阳性细胞增加犤两组在颗粒细胞层阳性细胞分别为(163±37),(53±5)个/切片平面;海马门(28.5±5.5),(12.3±2.8)个/切片平面;分子层(10.7±2.2),(6.0±1.4)个/切片平面犦,差异有非常显著性意义(F=103.4,83.4,33.4,P<0.01),而凋亡细胞差异无显著性意义(P>0.05)。AD对照组大鼠与正常对照组大鼠相比,海马齿状回BrdU阳性细胞数及凋亡细胞差异均无显著性意义(P>0.05)。结论bFGF可刺激AD模型大鼠海马神经发生。     

老年大鼠学习能力与海马齿状回神经细胞增殖的关系

目的:了解老年大鼠学习能力减退与海马齿状回神经细胞增殖的联系,探讨阿尔茨海默病(AD)的发病机制。方法:Y迷宫筛选出老年学习能力减退组大鼠与正常对照组大鼠。以溴化脱氧核苷尿嘧啶(BrdU)标记海马齿状回增殖细胞。TUNEL方法标记DNA片段方法原位检测凋亡细胞。计数海马齿状回与海马门的BrdU阳性细胞与凋亡细胞数。结果:学习能力减退组大鼠与正常对照组大鼠相比,海马齿状回BrdU阳性细胞明显增加(P<0.01),而凋亡细胞差异无显著性(P>0.05)。海马门BrdU阳性细胞数及凋亡细胞差异均无显著性(P>0.05)。结论:学习能力减退老年大鼠海马齿状回神经细胞的增殖能力减退,提示海马齿状回的神经细胞增殖能力减退可能是AD等以学习记忆能力减退为主要临床表现疾病的病因之一。     

外源性碱性成纤维细胞生长因子对成年大鼠弥漫性脑损伤后海马齿状回神经前体细胞增殖影响的研究

目的 观察弥漫性脑损伤后成年大鼠海马齿状回神经前体细胞增殖水平动态变化的规律以及外源性碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对其的影响.方法 采用5-溴脱氧尿核苷 (5-bromodeoxyuridine, BrdU) 标记细胞有丝分裂、免疫组织化学方法观察成年大鼠弥漫性脑损伤后海马齿状回神经前体细胞增殖水平的变化规律以及侧脑室注射外源性bFGF对弥漫性脑损伤后齿状回神经前体细胞增殖变化的影响. 结果成年大鼠弥漫性脑损伤后齿状回BrdU免疫阳性细胞数在弥漫性脑损伤后4～8 d 时间点,差异有统计学意义(P < 0.01),其中第6天时达到峰值.弥漫性脑损伤大鼠侧脑室注射外源性bFGF后齿状回神经前体细胞增殖水平较对照组显著升高(P< 0.05). 结论 弥漫性脑损伤可诱导成年大鼠海马齿状回神经前体细胞增殖水平在一定的时间窗内上调,外源性bFGF可促进弥漫性脑损伤后齿状回神经前体细胞增殖水平的上调.     

大鼠海马CA2区GDNF mRNA表达与吗啡依赖和吗啡的关系

【目的】观察吗啡戒断大鼠侧脑室胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)反义寡脱氧核苷酸注射后对海马GDNF mRNA表达的影响。【方法】SD大鼠侧脑室立体定位,皮下注射吗啡建立吗啡依赖大鼠模型,侧脑室微注射GDNF有义和反义寡脱氧核苷酸,纳洛酮催促戒断,应用原位杂交方法检测海马GDNF mRNA的表达。【结果】侧脑室注射GDNF反义寡脱氧核苷酸能显著抑制大鼠吗啡戒断症状评分(P<0.05)。吗啡依赖大鼠海马CA2区GDNF mRNA表达较对照组显著增加(P<0.05),CA1和CA3区变化不明显;吗啡依赖大鼠纳洛酮(4mg/kg,ip)催促戒断后海马CA1、CA2和CA3区GDNF mRNA表达较依赖组有增加趋势,但均没有显著差异(P>0.05);吗啡依赖大鼠纳洛酮激发前24h侧脑室注射GDNF反义寡脱氧核苷酸能显著抑制吗啡依赖大鼠依赖和戒断后CA2区GDNF mRNA表达的增加(P<0.05),而CA1和CA3区与戒断组大鼠相应区域相比没有差异;吗啡依赖大鼠纳洛酮激发前24h侧脑室注射GDNF有义寡脱氧核苷酸与戒断组大鼠相比海马CA1、CA2和CA3区GDNF mRNA表达均没有显著性差异(P>0.05)。【结论】在转录水平,海马CA2区GDNF表达的变化在吗啡依赖和戒断中可能起重要作用。     

碱性成纤维细胞生长因子对海马伞切断大鼠海马神经的影响

目的 了解碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对海马伞切断造成的阿尔茨海默病(AD)模型大鼠海马齿状回神经发生的影响，探讨bFGF治疗AD的前景。方法 36只SD大鼠随机分成正常对照组(n=12)、AD对照组(n=12)和AD处理组(n=12)。AD处理组及AD对照组大鼠左侧海马伞切断制造AD模型；正常对照组注射生理盐水。AD处理组造模后每天侧脑室注射bFGF共7d；AD对照组及正常对照组同时间注射生理盐水。BrdU标记增殖细胞。TUNEL方法标记DNA片段。原位检测凋亡细胞。计数海马齿状回BrdU阳性细胞与凋亡细胞数。结果 AD处理组大鼠与AD对照组大鼠相比，海马齿状回BrdU阳性细胞增加[两组在颗粒细胞层阳性细胞分别为(163&;#177;37)，(53&;#177;5)个／切片平面；海马门(28．5&;#177;5．5)，(12．3&;#177;2．8)个／切片平面；分子层(10．7&;#177;2．2)，(6．0&;#177;1．4)个／切片平面]，差异有非常显著性意义(F=103．4，83．4，33．4,P&;lt;0．01)，而凋亡细胞差异无显著性意义(P&;gt;0．05)。AD对照组大鼠与正常对照组大鼠相比，海马齿状回BrdU阳性细胞数及凋亡细胞差异均无显著性意义(P&;gt;0．05)。结论 bFGF可刺激AD模型大鼠海马神经发生。     

神经肽Y2受体促进大鼠学习记忆的机制

目的:观察双侧海马插管注射神经肽Y2受体的反义寡核苷酸对大鼠海马c-fos基因mRNA和蛋白表达的影响,探讨Y2受体在学习记忆中可能的作用机制。方法:双侧海马插管注射Y2受体的反义、错义寡核苷酸或生理盐水,应用RT-PCR和免疫组化方法检测大鼠海马中c-fos基因在跳台法训练后的表达水平变化。结果:①反义组大鼠海马c-fos基因mRNA表达水平23.40±8.87明显低于生理盐水组60.38±15.52和错义组53.14±11.71,差异有显著性意义(F=22.54,P<0.001)。但错义组与生理盐水组之间大鼠海马c-fos基因的mRNA表达水平差异无显著性意义,(P>0.05)。②反义组大鼠海马c-Fos蛋白阳性细胞数在海马CA1,CA3和齿状回分别为16.33±6.18,27.00±9.72和109.67±23.44,均低于生理盐水组和错义组,而错义组与生理盐水组之间c-Fos蛋白表达水平差异无显著性意义。结论:神经肽Y2受体可能是通过调节c-fos基因的表达参与大鼠的记忆形成过程。     

成年新生神经元NMDA受体NR2B亚型基因条件性敲除模型建立

目的:建立成年神经发生中新生颗粒细胞N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体NR2B亚型基因条件性敲除模型。方法:运用逆转录病毒基因标记技术,结合Cre-1oxp重组酶系统,在ROSA26-LacZ基因报告小鼠体内研究逆转录病毒RSV-pGFP:T2aCre的Cre酶重组的发生以及其转化效率。在NR2Bfl/fl转基因小鼠中建立成年新生颗粒细胞NR2B基因敲除模型。结果:在逆转录病毒注射后14 d,观察到LacZ标记的神经元及β-gal和Cre免疫荧光双标阳性细胞,在海马齿状回颗粒下层、颗粒层以及hilus区表达;同时在嗅球颗粒层也可见LacZ表达。28 dCre转化效率高达98.3%。在NR2Bfl/fl转基因小鼠,14 d时分别在嗅球和齿状回的颗粒细胞层,观察到GFP和Cre同时标记的阳性新生颗粒细胞。结论:成年神经发生中起源于海马齿状回颗粒下层和侧脑室旁脑室管膜下区的新生颗粒细胞NR2B基因敲除模型建立。     

电针对大鼠海马兴奋性突触后电位长时程增强的作用

背景海马长时程增强(1ong-term potentiation,LTP)与行为学研究相结合,已被广泛用于包括中医药在内的改善学习记忆功能和治疗老年性痴呆的研究.目的观察电针对麻醉状态下正常和东莨菪碱引起的学习记忆减退模型大鼠海马兴奋性突触后电位(excitatory postsynaptic potential,EPSP)LTP的作用.设计随机对照研究.地点和材料SD大鼠40只,体质量270～310 g,单纯随机分成为对照组、电针组、模型组和模型+电针治疗组,每组10只.干预引导大鼠海马齿状回颗粒细胞层突触后兴奋性电位群(EPSPs),强直刺激大脑皮质前穿质区引起海马突触LTP反应;用东莨菪碱制备学习记忆障碍模型;电针(疏密波3～5 mA,30 min)大椎和双侧肾俞穴;观察电针对正常和模型大鼠海马LTP的影响.主要观察指标强直刺激前和强直刺激诱发后0,60,120 min LTP群发电位信号(PS),PS的EPSP潜伏期,PS锋值潜伏期,EPSP的斜率,PS锋值和PS锋面积(PSa).结果①电针对强直刺激诱发的海马突触LTP效应的作用强于对照组.与对照组比,EPSP潜伏期明显缩短[相对于强直刺激前的变化率对照组与电针组分别为(-7.8±2.6)%比(-14.4±7.7)%,差异有显著性意义(t=2.568 1,P＜0.05)];EPSP的斜率增加(t=2.436 4,P＜0.05);PS锋面积增大(t=2.750 8～2.990 9,P＜0.05),且维持时间长于对照组.②东莨菪碱可显著抑制强直刺激诱发的海马突触LTP,表现为EPSP潜伏期和PS锋值潜伏期延长,与对照组比较差异均有非常显著性意义(t=4.564 8～5,996 5,P均＜0.01);EPSP的斜率下降,PS锋值和PS锋面积变小.③电针能显着对抗东莨菪碱对海马突触LTP的抑制作用,与模型组比较各参数均有统计学意义.结论电针对强直刺激引起的海马突触LTP有一定的易化作用,并对东莨菪碱引起的学习记忆障碍有显著的对抗作用.     

去大脑皮质血管后对成年大鼠海马齿状回神经干细胞的影响

背景脑缺血、癫痫等损伤可刺激成年海马的齿状回颗粒细胞下层(subgranular zone,SGZ)神经干细胞增殖分化.去大脑皮质血管状态下引起碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblast growthfactor,bFGF)表达增多是否是刺激SGZ神经干细胞增殖的主要原因之一呢?目的探讨去皮质血管对成年大鼠海马齿状回SGZ神经干细胞增殖、分化的影响以及去大脑皮质血管状态下bFGF的表达情况.设计随机对照实验研究.地点和对象实验地点北京中医药大学基础医学院科学试验中心.成年Wistar雄性大鼠33只,随机分为正常组(15只)和模型组(18只).干预采用去Wister大鼠脑皮质血管脑缺血模型及免疫组织化学方法观测大鼠海马齿状回溴化脱氧尿核苷(bromodeoxyuridine,BrdU),Tuj-1,Vimentin,Nestin,增殖细胞核抗原(proliferation neuclesr antigen,PCNA),bFGF的表达情况.主要观察指标大鼠海马齿状回的BrdU,Tuj-1,Vimentin,Nestin,PCNA,bFGF的表达情况. 结果去大脑皮质血管后成年大鼠SGZ中BrdU,Tuj-1,PCNA阳性细胞的数目增多.模型组大鼠齿状回BrdU免疫阳性细胞数目[去在脑皮质15 d为(46.667±6.614)个/脑片,去大脑皮质30 d为(14.111±3.408)个/脑片]与正常组[9.556±1.236)个/脑片]比较,差异有显著性意义(P＜0.01).模型组大鼠齿状回Tuj-1阳性细胞数目[去大脑皮质15 d为(18.778±2.224)个/脑片,去大脑皮质30 d为(31.333±2.646)个/脑片]与正常组[(6.778±1.481)个/脑片]比较,差异有显著性意义(P＜0.01).齿状回bFGF表达上调,相反Vimentin阳性细胞减少.结论成年大鼠海马SGZ神经干细胞在脑缺血情况下,通过上调bFGF的表达,可能通过自分泌、旁分泌等方式作用于其受体,促进其自我更新和多向分化能力.