白介素-2对海马神经细胞的功能调控

采用形态学、电生理学和生物化学等方法，研究了重组人白介素-2(rhIL-2)对新生大鼠海马培养神经元生长发育、平均蛋白总量、膜电活动以及细胞内游离钙离子浓度的影响。结果显示．rhIL-2对海马培养神经元的突起生长、胞体发育以及发育过程中神经元的蛋白质合成具有明显的促进作用，并且在提高海马培养神经元存活、延长存活时间方面有较为显著的效应。细胞内记录结果显示．rhIL-2可改变海马神经元的膜兴奋性，该作用可被纳洛酮减弱。提示阿片受体可能参与介导rhIL-2的作用过程。另外，采用fura-2荧光探针标记法发现，rhIL-2能够通过胞外钙离子的流入和胞内钙库的释放提高海马神经元胞浆内游离钙离子的浓度。上述研究结果初步表明，细胞因子rhIL-2能够调控海马神经元的功能活动。     

β—淀粉样蛋白31～35对体外培养的隔区胆碱能神经元的作用

β－淀粉样蛋白是老年斑的主要成分。为探讨其在老年性痴呆患者基底前脑胆碱能神经元选择性溃变中的作用，运用ＭＴＴ自动比色微量分析法、胆碱酯酶组织化学染色及细胞形态学分析方法，研究“老化”的淀粉样蛋白片段３１～３５对体外培养的海马和隔区神经元的作用。结果表明：培养４８ｈ，淀粉样蛋白对海马神经元有毒性作用，减少神经元的存活，呈剂量依赖关系。培养１４ｄ，淀粉样蛋白减少了胆碱能神经元的存活率，抑制突起的延伸，促使神经元胞体和近侧突起的分支增加。表明淀粉样蛋白对隔区胆碱能神经元具有减少存活、抑制突起延伸和促进突起不正常生长的毒性作用。     

人重组白细胞介素—6可减少缺氧—复氧后大鼠海马培养神经？…

用原位末端标记（ＴＵＮＥＬ）法观察人重组白细胞介素－６（ｒｈＩＬ－６）对缺氧－复氧后大鼠海马培养神经元的ＤＮＡ损伤的影响。结果显示,海马神经元缺氧－复氧后ＤＮＡ损伤神经元百分率明显增高,经ｒｈＩＬ－６预处理的海马神经元缺氧－复氧后ＤＮＡ损伤神经元百分率明显低于对照组。本结果表明,缺氧－复氧能使体外培养海马神经元发生ＤＮＡ损伤,ｒｈＩＬ－６可减少缺氧－复氧后海马神经元的ＤＮＡ损伤。提示ｒｈＩＬ－６对     

bFGF和EGF对体外培养新生大鼠海马神经元促生长作用的研究

研究不同浓碱性成纤维细胞生长因子和表皮生长因子对新生大鼠海马神经元生长活性的影响。方法取新生大鼠海马组织进行原代体外分离培养，从细胞形态学方面及应用ＭＴＴ法观察ｂＦＧＦ和ＥＧＦ对大鼠海马神经元的影响。结果ｂＦＧＦ能明显促进体外培养大鼠海马神经元存活及突起生长，ＥＧＦ也能促进其存活，尤以促进突起生长更为明显；     

人重组白细胞介素-6可减少缺氧-复氧后大鼠海马培养神经元的DNA损伤

用原位末端标记（ＴＵＮＥＬ）法观察人重组白细胞介素－６（ｒｈＩＬ－６）对缺氧－复氧后大鼠海马培养神经元的ＤＮＡ损伤的影响。结果显示,海马神经元缺氧－复氧后ＤＮＡ损伤神经元百分率明显增高,经ｒｈＩＬ－６ 预处理的海马神经元缺氧－复氧后ＤＮＡ损伤神经元百分率明显低于对照组。本结果表明,缺氧－复氧能使体外培养海马神经元发生ＤＮＡ损伤,ｒｈＩＬ－６ 可减少缺氧－复氧后海马神经元的ＤＮＡ损伤。提示ｒｈＩＬ－６ 对海马神经元缺氧－复氧损伤可能具有一定保护作用。     

小剂量rhIL—2对实验性颅脑伤中神经功能的保护作用

目的：为探讨白细胞介素－２（ＩＬ－２）对脑损伤后神经功能恢复的作用效应及机理。方法：采用侧方液压大鼠脑损伤模型，观察侧脑室注射（ｉ．ｃ．ｖ．）小剂量ｒｈＩＬ－２对大鼠神经功能和组织病理变化的影响。实验选用雄性ＳＤ大鼠，伤后１～３天连续ｉ．ｃ．ｖ．ｒｈＩＬ－２，分３组（３０，６０，３００Ｕ），等量生理盐水治疗为对照组。体重测定，平衡试验，行走试验评价神经功能。结果：发现ｒｈＩＬ－２能明显改善大鼠脑伤后神经功能障碍，减缓体重丢失，促进运动功能和平衡功能恢复（Ｐ＜０．０１），尤以６０Ｕ治疗效果最显著；并且能缩小皮层空洞。６０Ｕ治疗伤后２周时的空洞为０．０７ｍｍ×０．１０ｍｍ，对照组为０．５１ｍｍ×１．００ｍｍ，相差显著（Ｐ＜０．０１），ｒｈＩＬ－２治疗组海马ＣＡ２，ＣＡ３区神经元较对照组死亡少。结论：小剂量ｒｈＩＬ－２具有显著的神经保护作用，参与脑创伤后的修复，具有潜在的临床应用价值。     

CRMP2在大鼠海马神经元中的表达分布及对神经元突起生长的影响

目的探讨脑衰反应调节蛋白2(CRMP2)在大鼠海马神经元中的表达分布及对神经元突起生长的影响。方法CRMP2及其模拟磷酸化质粒CRMP2-S522D、CRMP2-T555D,转入体外培养的SD大鼠海马神经元,转染72 h后,采用免疫印迹法和免疫荧光染色分析CRMP2、CRMP2-S522D、CRMP2-T555D在神经元中的分布差异以及对神经元突起分枝和突起长度的影响。结果 CRMP2及CRMP2-T555D在神经元胞体和突起均有分布,CRMP2-S522D则主要分布于胞体。CRMP2-T555D对神经元的突起长度和分枝数均没有明显影响;CRMP2-S522D对突起数目没有明显影响,但可以显著降低突起长度。结论 CRMP2的不同磷酸化形式在大鼠海马神经元中存在分布差异,并对神经元的突起长度产生影响。     

人重组白细胞介素—6对大鼠海马神经元Bcl—2表达？…

目的 观察重组人白细胞介素－６（ｒｈＩＬ－６）对体外培养大鼠海马神经元Ｂｃｌ－２表达的影响。方法 取培养３、７、１４、２１和２８天（ｄ）的两组（对照组和ｒｈＩＬ－６组）培养神经元,分别观察其生长发育和神经元活存数,并用抗Ｂｃｌ－２抗血清进行免疫组化染色,观察Ｂｃｌ－２免疫反应（Ｂｃｌ－２－ＩＲ）阳性和阴性神经元数目,计算Ｂｃｌ－２－ＩＲ阳性神经元所占百分率,并在图像分析仪上对Ｂｃｌ－２－ＩＲ神经元     

脑神经肽对人胚神经细胞生长发育及对小鼠急？…

目的和方法 应用体外培养的人胚背根神经节和大脑皮层神经元，研究了神经肽对神经组织和神经细胞生长发育的影响，还通过小鼠的急性脑缺血模型研究神经肽对急性脑缺血的作用。结果发现神经肽可使唤背根神经节突起的长度和密度增加，皮层神经元存活数增加，神经元分化率增高，胞体增大，突起延长，细胞生长加快。     

人重组白细胞介素—6对缺氧对后海马培养神经…

用免疫组化方法，观察缺氧诱导体外培养大鼠海马神经细胞Ｆｏｓ表达及人重组白细胞介素－６（ｒｈＩＬ－６＿的影响。结果显示，经ｒｈＩＬ－６卵育的海马神经细胞缺氧后Ｆｏｓ免疫反应一胸核的百分率和Ｆｏｓ反应阳性胸核的平均光密度均明显低于对照组，表明缺氧能诱导体外培养海马神经细胞Ｆｏｓ的表达，ｒｈＩＬ－６能抑制缺氧神经细胞Ｆｏｓ的表达。提示ｒｈＩＬ－６可能参与脑缺氧损伤的调控。     

BDNF，NT—3对体外培养的胚鼠脊髓AChE和NADPH—d阳性神经元生长发育的影响

利用AChE和NADPH d酶组织化学染色法研究了脑源性神经营养因子 (brain derivedneurotrophicfac tor ,BDNF)和神经营养因子 3(neurotrophin 3,NT 3)对离体培养的胚胎大鼠脊髓胆碱能神经元和一氧化氮能神经元生长发育的影响。结果显示 :BDNF处理组和NT 3处理组AChE阳性神经元数和NADPH d阳性神经元数均显著高于对照组 (P <0 .0 5 )。BDNF组AChE阳性神经元和NADPH d阳性神经元胞体平均直径、每细胞突起数和最长突起长度均显著高于对照组 (P <0 .0 5 )。NT 3组NADPH d阳性神经元的生长发育与对照组无明显差异 ,仅AChE阳性神经元的每细胞突起数和最长突起长度显著高于对照组 (P <0 .0 5 ) ,对胞体发育无影响。结果提示 :BDNF ,NT 3促进脊髓神经元的存活和生长发育 ,二者的作用具有选择性和特异性。     

BDNF,NT-3对体外培养的胚鼠脊髓AChE和NADPH-d阳性神经元生长发育的影响

利用AChE和NADPH-d酶组织化学染色法研究了脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)和神经营养因子-3(neurotrophin-3,NT-3)对离体培养的胚胎大鼠脊髓胆碱能神经元和一氧化氮能神经元生长发育的影响.结果显示:BDNF处理组和NT-3处理组AChE阳性神经元数和NADPH-d阳性神经元数均显著高于对照组(P＜0.05).BDNF组AChE阳性神经元和NADPH-d阳性神经元胞体平均直径、每细胞突起数和最长突起长度均显著高于对照组(P＜0.05).NT-3组NADPH-d阳性神经元的生长发育与对照组无明显差异,仅AChE阳性神经元的每细胞突起数和最长突起长度显著高于对照组(P＜0.05),对胞体发育无影响.结果提示:BDNF,NT-3促进脊髓神经元的存活和生长发育,二者的作用具有选择性和特异性.     

青霉素对体外培养鼠脑γ—氨基丁酸能神经元及胶质细胞的影响

经免疫细胞化学方法观察了分离培养４天，、１０天鼠大脑皮层、海马ＧＡＢＡ能神经元以及ＧＦＡＰ免疫反应阳性星形胶质细胞对大剂量致痫剂青霉素的反应。结果大剂量ＰＥＮ可引起培养海马及皮层γ－氨基丁酸能神经元数目明显减少，星形胶质细胞显著增生，且尤以海马胶质细胞增生明显。提示：（１）脑内尤其海马区星形胶南细胞增生与癫痫发生，发展有一定的关系。（２）传统致痫剂ＰＥＮ可能是通过抑制ＧＡＢＡ能神经元功能、刺激星形     

脑神经肽对人胚神经细胞生长发育及对小鼠急性缺血脑组织的影响

目的和方法应用体外培养的人胚背根神经节和大脑皮层神经元，研究了神经肽对神经组织和神经细胞生长发育的影响，还通过小鼠的急性脑缺血模型研究神经肽对急性脑缺血的作用。结果发现神经肽可使背根神经节突起的长度和密度增加，皮层神经元存活数增加，神经元分化率增高，胞体增大，突起延长，细胞生长加快。超微结构观察显示神经肽可增强细胞内的合成代谢和细胞间连接。脑神经肽可使小鼠脑组织水肿较轻神经元无明显空泡，细胞超微结构改变较轻微，脑组织LDH活性高于对照组。结论神经肽对神经组织具有营养作用，并对急性脑缺血也具有保护作用。     

降钙素基因相关肽对缺氧时大鼠海马培养神经元c—fos表达的影响

采用免疫组化（ABC）方法，观察缺氧诱导体外培养大鼠海马神经元c-fos的表达及降钙素基因相关肽（CGRP）的影响。结果显示，缺氧后海马神经元中Fos-免疫反应（Fos—IR）阳性胞核百分率随缺氧时间的延长而逐渐增多，图像分析的结果显示，缺氧后Fos—IR阳性胞核的平均失密度亦随缺氧时间的延长而逐渐增强。经CGRP孵育的海马神经元缺氧后Fos-IR阳性胞核的百分率和Fos-IR阳性胞核的平均光密度均明显低于非CGRP孵育组。本结果表明，缺氧能诱导体外培养海马神经元。c-fos的表达，神经肽CGRP能抑制缺氧海马神经元c-fos的表达。提示CGRP对海马神经元缺氧损伤可能具有一定保护作用。     

一氧化氮合酶抑制对戊四氮诱导大鼠点燃模型及该酶阳性神经元的影响

目的：探讨一氧化氮（ＮＯ）在癫痫发病中的作用。方法：ｉｐ４０ｍｇ．ｋｇ＾－１戊四氮３０ｍｉｎ前注射２５ｍｇ．ｋｇ＾－１的Ｎ＾Ｇ－硝基－左旋－精氨酸（Ｌ－ＮＮＡ），连续２２ｄ，观察两组的行为改变及点燃率，同时对３组动物海马，大脑皮质一氧化氮合酶（ＮＯＳ）阳性神经元的变化输入图像扫描仪，对其胞体平均灰度值进行比较。结果：Ｌ－ＮＮＡ可明显抑制戊四氮点燃模型；戊四氮点燃大鼠模型海马，大脑皮质神经元的ＮＯＳ活性显著增高。结论：ＮＯ参与了戊四氮点燃模型的形成。     

出生5 d大鼠海马神经元缺氧耐受性研究

目的建立出生5d大鼠海马神经元原代培养方法，并研究该神经元的缺氧耐受性。方法改进出生5d大鼠海马神经元原代培养方法，分离海马时分为充氧组与对照组，培养过程中倒置显微镜和细胞核因子（NF）免疫组织化学法观察细胞生长和形态。原代培养7d后，分别对出生5d大鼠海马神经元和出生1d大鼠海马神经元进行12h、24h的缺氧处理（0％02、5％C02、95％N2），MTT法检测细胞存活情况。结果（1）充氧组中培养的出生5d大鼠海马神经元生长状态要优于对照组中培养的神经元。（2）缺氧12h出生1d以及5d大鼠海马神经元存活率分别为（81．5±2．3）％和（89，4±2，2）％（P〈0．01）；缺氧24h二者存活率分别为（75．0±2．8）％和（85．0±2．2）％（P〈0．01）。5d海马神经元缺氧耐受能力优于1d大鼠海马神经元。结论海马神经元分离培养过程中充氧有利于神经元的原代培养，出生5d大鼠海马神经元缺氧耐受力强于出生1d大鼠海马神经元。     

L-多聚赖氨酸对原代海马神经元生长影响

目的 探讨不同相对分子质量的左旋(L-)多聚赖氨酸对新生鼠原代海马神经元生长的影响. 方法 采用针蕊挤压过网法制备游离新生鼠海马神经细胞悬液,将细胞分为3组,分别种植于未包被、相对分子质量70 000～150 000及相对分子质量150 000～300 000的L-多聚赖氨酸包被的培养板内.Neurobasal-A选择性培养基维持培养,观察不同阶段神经元的形态,神经元特异性烯醇化酶免疫荧光染色鉴定并计算纯度,观察不同相对分子质量的L-多聚赖氨酸对神经元生长特性的影响. 结果 神经元种植1h后开始贴壁;4d后神经元胞体透亮,结构完整,突触长出2～3支;8d后胞体成熟,突触增多,交织成网.神经元特异性烯醇化酶免疫荧光染色鉴定为阳性,神经元平均纯度为92.6％+4.62％.无L-多聚赖氨酸包被的孔内细胞少量存活;相对分子质量70 000～150 000的L-多聚赖氨酸包被的孔内细胞抱团样生长;相对分子质量150 000～300 000的L-多聚赖氨酸包被的孔内细胞生长成均匀的单层,较少有抱团现象. 结论 不同相对分子质量的L-多聚赖氨酸影响神经元的贴附和行为,相对分子质量150 000～300 000的L-多聚赖氨酸最适宜神经元的生长.     

人重组白细胞介素—6对培养的大鼠海马神经元缺氧—复氧后Jun表达的影响

近来的研究表明 ,Ｃ ｊｕｎ原癌基因为脑内即早反应基因 ,能被外界多种刺激因子诱导。低氧、缺血和某些药物等外源性刺激可诱导Ｃ ｊｕｎ表达[1] 。体外培养的交感神经元在去除神经生长因子的条件下可引起Ｃ ｊｕｎ表达增加 ,并证明Ｃ ｊｕｎ过度表达能导致神经元凋亡[2 ] 。但有关缺氧 复氧对体外培养海马神经元Ｊｕｎ表达影响的研究甚少。鉴于我们以前的工作证实人重组白细胞介素 6 (ｒｈＩＬ 6 )能增强海马神经元的抗缺氧能力[3 ] ,但ｒｈＩＬ 6能否影响缺氧 复氧后神经元的Ｊｕｎ表达尚不清楚 ,为此本实验用免疫组织化学方法 ,观察缺…     

神经节苷脂GM1拮抗剂对海马CA1区缺血神经元形态结构变化影 …

实验观察了神经节苷脂ＧＭ１拮抗剂－霍乱毒素对应激性高血压大鼠海马脑片体外人工缺血３０、６０、１２０ｍｉｎＣＡ１区神经元形态结构的影响。缺血３０ｍｉｎ时胞体变小，胞内小空泡形成，细胞器减少，少量的线粒体和内质网肿胀。核不规则，染色质分布不均，出现边集。随缺血时间的延长胞内细胞器破碎，残存细胞器结构不清，胞核固缩，部分裂解。而霍乱毒素则加重缺血３０、６０、１２０ｍｉｎＣＡ１区神经元形态学上的改变，具有