疏肝健脾方药含药血清对LPS刺激下大鼠肝细胞炎症损伤及TLR4/p38MAPK信号通路影响的研究

目的:研究疏肝健脾方药含药血清对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激下大鼠肝细胞炎症反应及TLR4(Toll样受体-4)/p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38MAPK)信号通路的影响。方法:体外培养并鉴定SD大鼠肝细胞,制备疏肝健脾方药含药血清,对肝细胞进行疏肝健脾方药、p38MAPK抑制剂等药物干预,酶联免疫法(ELISA)检测细胞上清液中白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量的表达,Western blot检测TLR4,p38MAPK,p-p38MAPK蛋白的表达。结果:可提取大鼠疏肝健脾方药含药或空白血清约2~3 m L,大鼠获得纯化后肝细胞1.5×108~2.0×108个,Typan blue染色测定细胞活力均在95%以上,免疫荧光法鉴定确定提取的为肝细胞。肝细胞培养上清的检测:LPS组较空白血清组IL-6,TNF-α水平均有显著升高(P<0.01)。与LPS组比较,药物干预组IL-6,TNF-α表达水平呈显著降低(P<0.01)。肝细胞的蛋白检测:与空白血清组比较,LPS组的p38MAPK,p-p38MAPK,TLR4蛋白表达均有显著升高(P<0.01);与LPS组比较,SB239063能显著下调p38MAPK的蛋白表达水平(P<0.01),疏肝健脾组亦有下调,但无显著差异;疏肝健脾组,SB239063组的p-p38MAPK的蛋白表达水平均下调显著(P<0.01);TLR4蛋白表达水平以疏肝健脾组下调具有显著性差异(P<0.01),SB239063组下调无显著统计学差异。结论:疏肝健脾方药可能通过TLR4/p38MAPK信号通路调控大鼠肝细胞炎症损伤,含药血清可能是其重要的作用途径之一。     

扶正化瘀方对脂多糖诱导的RAW264.7巨噬细胞M1型炎性极化JNK通路的影响

目的观察扶正化瘀方对脂多糖(LPS)诱导的M1型RAW264.7巨噬细胞一氧化氮合酶(i NOS)基因和一氧化氮(NO)分子过表达的影响,探讨其可能的抗炎机制。方法采用LPS刺激小鼠RAW264.7巨噬细胞,建立M1型巨噬细胞炎性细胞模型,分别给予扶正化瘀方50、100、200μg/mL和10 nmol/L JNK蛋白抑制剂SP600125进行孵育。Griess法检测炎症介质NO含量,RT-PCR检测炎症因子白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和i NOS基因表达,Western blot检测i NOS蛋白表达和MAPK信号通路中JNK、p38、ERK蛋白的磷酸化水平。结果与LPS比较,扶正化瘀方和SP600125均显著降低巨噬细胞中NO分泌(P0.01)和i NOS蛋白表达(P0.01),降低MAPK信号通路JNK蛋白的磷酸化水平(P0.05,P0.01);扶正化瘀方对炎症因子IL-6、TNF-α的基因表达及MAPK信号通路ERK、p38蛋白的磷酸化水平无明显影响。结论扶正化瘀方可能通过抑制JNK蛋白的磷酸化而抑制i NOS基因过表达,最终减少NO的生成,从而抑制RAW264.7巨噬细胞M1型极化,发挥抗炎作用。     

白及多糖对胃溃疡模型大鼠胃组织TNF-α、IL-1β、IL-6及JNK、p38 MAPK基因蛋白表达水平的影响

目的:探讨白及多糖对胃溃疡(GU)模型大鼠胃组织JNK、p38 MAPK基因、蛋白及其介导炎性因子TNF-α、IL-1β和IL-6表达水平的影响。方法:将60只SPF级Wistar大鼠随机分为空白组和模型组,模型组大鼠采用乙酸直接烧灼法复制GU模型,将GU模型大鼠按随机数字表法分为模型组、盐酸雷尼替丁0. 3 g/kg组和白及多糖0. 125、0. 25、0. 5 g/kg组,每组10只。各组灌胃相应药物或蒸馏水,连续15日。采用ELISA法检测各组大鼠胃溃疡病灶组织炎症因子TNF-α、IL-1β及IL-6含量,RT-PCR法检测胃溃疡病灶组织TNF-α、IL-1β、IL-6、JNK及p38 MAPK基因表达水平,WB法检测JNK及p38 MAPK蛋白表达水平。结果:与空白组比较,GU大鼠病理见胃底腺结构紊乱,胃黏膜上皮细胞脱落等,溃疡长度显著增加,胃组织炎症因子TNF-α、IL-1β及IL-6含量升高,基因表达显著上调,JNK及p38 MAPK基因及蛋白表达水平显著上调;与GU模型组比较,白及多糖0. 5 g/kg组大鼠病理见胃黏膜出现较多腺体,炎症细胞浸润、坏死层明显减少,组织病理学检查评分明显降低;白及多糖各剂量组TNF-α、IL-1β及IL-6含量明显降低,基因表达均下调,JNK及p38 MAPK基因及蛋白表达水平均下调,以白及多糖0. 5 g/kg组最显著。结论:白及多糖可通过下调JNK及P38 MAPK基因和蛋白表达水平,抑制炎症因子TNF-α、IL-1β及IL-6异常分泌而发挥保护胃黏膜的作用。     

血府逐瘀胶囊对子宫内膜细胞炎症模型影响的研究

目的:探讨血府逐瘀胶囊对子宫内膜细胞炎症模型影响的实验研究。方法:通过酶消化法获得原代子宫内膜细胞,脂多糖(LPS)诱导炎症模型,后实验随机分为5组,正常对照组,模型组(100μg·m L~(-1)LPS),血府逐瘀胶囊低、中、高剂量组(10、30、100μg·m L~(-1)血府逐瘀胶囊)。MTT法检测各组细胞活力,酶联免疫吸附法检测各组细胞中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL~(-1)β)、IL-6、IL-8蛋白含量,免疫印迹法检测各组细胞中基质金属蛋白酶-9(MMP-9),环氧化二酶(COX-2)蛋白表达量及p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)磷酸化水平,反转录聚合酶连锁反应检测p38 MAPK mRNA含量。结果:与正常组比较,模型组中细胞活力下降,TNF-α、IL~(-1)β、IL-6、IL-8、MMP-9及COX-2蛋白表达量都显著提高(P0.01),p38 MAPK磷酸化水平提高(P0.01),p38 MAPK mRNA表达量显著提高(P0.01);与模型组比较,血府逐瘀胶囊低、中、高剂量组中细胞活力下降,TNF-α、IL~(-1)β、IL-6、IL-8水平都显著降低(P0.01),p38 MAPK mRNA表达量显著降低(P0.01);血府逐瘀胶囊中、高剂量组中MMP-9及COX-2蛋白表达量及p38 MAPK磷酸化水平下调(P0.01)。结论:血府逐瘀胶囊能显著抑制LPS诱导的子宫内膜细胞炎症,与降低炎症因子表达及p38 MAPK信号通路有关。     

电针“内关”对心肌肥厚模型大鼠p38丝裂原激活蛋白激酶信号通路的影响

目的:探讨电针“内关”穴治疗心肌肥厚的作用机制.方法:SD大鼠40只用随机数字表法分为正常组、模型组、模型+p38抑制剂组、模型十电针组,每组10只.采用皮下注射盐酸异丙肾上腺素3 mg/(kg·d)建立心肌肥厚大鼠模型,模型+p38抑制剂组在造模基础上每日皮下注射0.3 mg/kg p38丝裂原激活蛋白激酶(p38 MAPK)特异性抑制剂SB 203580;模型十电针组电针“内关”穴,采用连续波,频率2 Hz,强度1 mA,通电20 min,1次/d,共14 d.其他两组不予治疗干预.放射免疫法技术检测心肌组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)含量,免疫印迹法检测p38MAPK、磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)含量.观察电针“内关”穴对TNF-α和IL-1β、p38 MAPK、p-p38 MAPK的影响.结果:与正常组大鼠比较,模型组大鼠TNF-α和IL-1β、p38 MAPK、p-p38 MAPK均显著升高(均P＜0.01);经抑制剂和电针处理后,模型+p38抑制剂组和模型十电针组大鼠TNF-α、IL-1β、p38 MAPK、p-p38 MAPK均明显降低,与模型组比较差异有统计学意义(均P＜0.05),与正常组比较差异亦有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01);模型+p38抑制剂组和模型十电针组之间比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论:电针“内关”可以明显抑制心肌肥厚p38 MAPK的磷酸化,这种保护作用可能通过抑制TNF-α、IL-1β等炎性因子的表达实现对p38 MAPK信号通路调节.     

补阳还五汤预先干预对大鼠脑死亡后心肺炎症细胞因子表达的抑制作用

目的观察补阳还五汤预先干预大鼠抑制其脑死亡后心、肺炎症细胞因子表达。方法雄性Wistar大鼠30只,体质量180~200g,随机分3组。对照组:正常大鼠麻醉后取心和肺;脑死亡模型组:诱导大鼠脑死亡;补阳还五汤组:脑死亡诱导前7d,连续每天1次给大鼠ig补阳还五汤水煎剂(1.8mL/100g,12.6g/kg)。大鼠脑死亡诱导成功,机械呼吸6h,若平均动脉压大于80mmHg,则取其心和肺。RT-PCR检测心、肺组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)mRNA表达,Western blotting检测心、肺组织TNF-α和IL-1β蛋白及磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38MAPK)蛋白表达。结果模型组心肺TNF-α、IL-1βmRNA和蛋白表达及p-p38MAPK蛋白表达比对照组显著增加(P0.01)。补阳还五汤组各指标比模型组显著降低(P0.05),但仍比对照组显著增加(P0.01)。结论补阳还五汤预先干预大鼠能显著抑制其脑死亡后心肺炎症细胞因子表达,可能与其在不同层面阻断p38MAPK信号通路关键靶点有关。     

肺康颗粒通过TLR4/ NF-κB信号通路干预COPD大鼠炎症的相关机制

目的观察肺康颗粒对Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)信号通路的影响,探讨其干预慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠炎症的机制。方法将60只SD大鼠随机分成6组:正常组,模型组,肺康颗粒低、中、高剂量组(10.11,20.22,40.44 g·kg~(-1),以生药量计),地塞米松组(1 mg·kg~(-1))。采用持续熏烟(20周)联合气管滴注脂多糖(LPS)法建立大鼠COPD模型。第5周开始,灌胃给予肺康颗粒进行干预,连续给药16周。采用苏木素-伊红(HE)染色观察COPD模型大鼠肺脏组织病理变化;检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞总数及其种类;酶联免疫吸附法(ELISA)测定大鼠BALF中炎症细胞因子IL-1β、TNF-α、IL-6及IL-17含量;qRT-PCR法检测肺组织中TNF-α、IL-6、TLR4 mRNA表达;Western Blot法检测肺组织细胞胞浆蛋白TLR4、p-IκB、IκB及胞核蛋白NF-κB p65的蛋白表达。结果与模型组比较,肺康颗粒各剂量组治疗后肺泡结构均有所恢复;肺康颗粒中、高剂量组的IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-17含量明显降低(P0.01);肺康颗粒各剂量组的白细胞总数明显降低(P0.01),肺康颗粒中、高剂量组的中性粒细胞及高剂量组的淋巴细胞亦明显减少(P0.05,P0.01);肺康颗粒中、高剂量组肺组织中TNF-α、IL-6 mRNA的表达量均明显下调(P0.05,P0.01),而TLR4 mRNA表达则明显上调(P0.01);肺康颗粒各剂量组的TLR4、IκB蛋白表达明显上调(P0.05,P0.01),胞核蛋白p65的表达明显下调(P0.01),肺康颗粒高剂量组的p-IκB蛋白表达亦显著下调(P0.01)。结论肺康颗粒可能通过TLR4/NF-κB信号转导通路干预炎症基因的表达,减轻COPD大鼠的炎症反应。     

糖痹康对糖尿病大鼠坐骨神经p38丝裂素活化蛋白激酶及血浆肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的观察中药复方糖痹康对糖尿病大鼠坐骨神经p38丝裂素活化蛋白激酶(p38 MAPK)及血浆肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响,探讨其神经保护及镇痛机制。方法 SD雄性大鼠60只,随机选取10只为正常组,其余大鼠采用高脂饲料和小剂量链脲佐菌素诱发2型糖尿病大鼠模型。成模后随机分为模型组、甲钴胺组和糖痹康低、中、高剂量组,每组10只。各给药组给予相应药物干预。16周后取大鼠一侧坐骨神经,放免法检测大鼠血浆TNF-α含量;Western blot检测大鼠坐骨神经p38、p-p38 MAPK蛋白表达。结果与正常组比较,模型组大鼠坐骨神经p38、p-p38蛋白表达及血浆TNF-α含量升高(P0.05,P0.01);与模型组比较,各给药组大鼠血浆TNF-α含量和坐骨神经p-p38蛋白表达显著降低(P0.05,P0.01),各给药组p38蛋白表达降低,但只有糖痹康高剂量组差异有统计学意义(P0.05)。结论糖痹康下调大鼠坐骨神经p38、p-p38 MAPK蛋白表达和血浆TNF-α含量,可能是其糖尿病周围神经病变神经保护及镇痛作用靶点之一。     

升降散改善脓毒症大鼠心肌损伤的机制研究

目的:中药升降散改善脓毒症大鼠心肌损伤的机制研究。方法:雄性成年SD大鼠随机分为正常组、模型组、升降散组和p38抑制组。采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制备脓毒症大鼠模型,术后4、8、12、24 h进行观察。升降散组和p38抑制组大鼠分别于术前2 h和术后12 h给予升降散灌胃和SB203580皮下注射。腹主动脉留取血标本和心脏组织作相关检测。观察和检测各时间节点:血清TNF-α水平,心肌TNF-αmRNA、i NOS mRNA和caspase-3表达,心肌病理变化。结果:(1)血清炎症因子:模型组大鼠血清TNF-α升高,升降散组各时间点TNF-α有所改善(P0.05),升降散组较p38抑制组TNF-α在4 h和12 h改善更明显。(2)心肌p38MAPK及相关因子:模型组大鼠心肌p-p38MAPK水平升高,升降散组各时间点p-p38MAPK水平均有所改善(P0.05)。模型组大鼠心肌caspase-3升高,p38抑制组在8h、12 h和24 h均有所改善(P0.05),升降散组在8 h和12 h有所改善(P0.05)。模型组大鼠心肌TNF-αmRNA和i NOS mRNA升高,升降散组和p38抑制组各时间点均有所改善(P0.05),升降散组24 h TNF-αmRNA下降优于p38抑制组(P0.05),升降散组和p38抑制组i NOS mRNA下降比较无差异(P0.05)。(3)心肌病理变化:脓毒症大鼠出现心肌细胞变性、肌浆浓缩、间质水肿等病理变化,升降散组和p38抑制组大鼠心肌病理变化有所改善。结论:升降散改善脓毒症心肌损伤的分子机制可能是其下调脓毒症早期大鼠心肌p-p38MAPK水平,降低TNF-αmRNA和i NOS mRNA表达,减少caspase-3水平,抑制过度炎症反应和细胞凋亡。     

鲜枸杞子提取物通过p38 MAPK信号通路抑制人肝癌细胞HepG2诱导小鼠恶病质的作用及机制

目的:探讨鲜枸杞子提取物(LBL)对人类肝癌细胞系HepG2诱导的小鼠恶病质模型的作用及其相关机制研究。方法:小鼠分为正常组,恶病质模型组,LBL低剂量组(LBL 5 mg·kg~(-1)),LBL高剂量组(LBL 25 mg·kg~(-1))。采用人肝癌细胞系HepG2成功建立小鼠恶病质模型,待小鼠的体质量明显下降时,连续灌喂生理盐水或不同剂量LBL 28 d后,记录各组小鼠的体质量,酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测血浆肌酸激酶(creatine kinase,CK),促炎因子白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β),白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6),肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的水平,采用免疫组织化学检测小鼠肌肉降解水平及p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)的表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测磷酸化p38 MAPK(phospho-p38 mitogen-activated protein kinase,p-p38 MAPK),炎症信号通路核转录因子-κB(nuclear factorκB,NF-κB)的表达。结果:与恶病质模型组比较,LBL低、高剂量组小鼠体质量明显下降(P0.05,P0.01),肌肉降解程度明显抑制(P0.05),CK水平显著下降(P0.01);LBL低、高剂量组小鼠血浆IL-1β,IL-6,TNF-α表达水平明显下调(P0.05,P0.01)。免疫组织化学结果显示,LBL低、高剂量组p38 MAPK蛋白表达降低(P0.05),Western blot结果进一步证实p-p38 MAPK,NF-κB蛋白表达降低(P0.01)。与LBL低剂量组比较,LBL高剂量组血浆肌酸激酶,p38 MAPK,p-p38 MAPK,NF-κB蛋白表达明显降低(P0.05,P0.01)。结论:鲜枸杞子提取物能够抑制人类肝癌细胞系HepG2诱导的小鼠恶病质模型的恶病质的进程,其作用机制可能与其下调促炎因子IL-1β,IL-6,TNF-α,从而抑制p38 MAPK,p-p38 MAPK,NF-κB的表达相关。     

HPLC研究柴胡和赤芍配伍的化学成分变化

目的：研究柴胡和赤芍配伍后的成分变化。方法：用HPLC法对单药煎液和两药共煎液的各峰进行检测和分析。结果：柴胡和赤芍配伍合煎后有六个化学成分的含量发生变化，并有一个新峰产生。结论：中药配伍并非是单味药的简单加和。     

附子甘草配伍研究进展

附子和甘草均为常用中药,临床上配伍应用非常广泛.将从"减毒"和"增效"2个方面综述近年来附子、甘草配伍研究所取得的进展.对近年研究成果的综合和分析提示,甘草所含的三萜皂苷和黄酮类化合物是其对附子发挥"减毒增效"作用的主要物质基础.附子配伍甘草减毒的机制可概括为煎煮过程、用药过程两个环节;而二者配伍的增效作用则主要表现为各自有效成分之间的协同作用.然而,二者配伍的具体物质基础和机制仍不完全清楚,甚至有相左的研究结果出现,因此还需要进一步深入研究.     

当归、黄芪和党参国家科技成果的研究分析

目的了解国内当归、黄芪和党参3种中药国家科技成果研究的基本现状,揭示其文献和研究内容等方面的特征,为今后相关研究提供借鉴。方法采用内容分析法,借助计算机的分类、统计功能,按成果的基本情况、成果的研究内容、成果的评价与应用等项目进行分类、统计分析。结果3种中药国家科技成果,甘肃、河北、山东等地排在前列,成果主要由高校、医院、科研院所等部门承担,成果课题的来源主要为地方计划和自选课题,成果研究内容主要分布在药物疗效、药物制剂、栽培、贮藏加工等领域。结论国家科技成果数据库（知网版）中,3种中药国家科技成果增幅缓慢,成果以应用技术研究为主,成果转化率低,数据库中一些成果项目的数据缺失较严重。     

人参,西洋参的荧光光谱鉴别

本文用荧光光谱法对人参和西洋参的样品和标准药材对照品进行了比较鉴别,为人参、西洋参的鉴别提供了一种新方法。     

不同比例制川乌配伍甘草对单酯型生物碱煎出量的影响

目的研究制川乌配伍甘草对制川乌中多种单酯型生物碱煎出量的影响,探索其变化规律,以指导制川乌与甘草的合理配伍。方法 HPLC法测定制川乌与甘草不同比例配伍时煎出液中单酯型生物碱的总量,并通过对比,分析不同配比对煎出量的影响。结果随着甘草配伍量的增加,煎煮液中单酯型生物碱总量逐渐降低,每种单酯型生物碱煎出量趋于单煎液煎出量的40%。结论甘草配伍制川乌时,甘草的使用量应是制川乌的一半以上,既可以保证煎出液中单酯型生物碱总量稳定可控,又可以防止制川乌毒性过大造成使用危险。     

川乌与白芍配伍前后乌头碱和芍药苷煎出量的测定

目的：考察川乌与白芍配伍前后主要化学成分乌头碱和芍药苷煎出量的变化，探讨两药配伍使用增效减毒作用的机制。方法：采用薄层扫描法、高效液相色谱法测定。结果：川乌与白芍配伍合煎，乌头碱的煎出量降低。芍药苷的煎出量增加。结论：川乌、白芍配伍前后有效成分煎出量的变化为两药配伍后药效的变化提供科学的依据。     

黄芪总皂苷和赤芍总苷协同抗血小板作用研究

目的:观察黄芪总皂苷和赤芍总苷(1:3)(简称芪芍双苷)的抗血小板作用。方法:芪芍双苷按100、200、400mg/kg三种剂量给药,进行了血小板聚集试验,测定了大鼠血浆中血小板α颗粒胰蛋白-14O(GMP-14O)含量及血栓素A_2(TXA_2)/前列环素(PGI_2)水平。结果:芪芍双苷三种剂量均能抑制 ADP诱导的血小板聚集,明显降低GMP-140含量,显著降低TXA_2/PGI_2比值。结论:芪芍双苷具显著抗血小板作用。     

赤首乌和白首乌的HPLC指纹图谱鉴定研究

目的建立赤、白首乌HPLC指纹图谱鉴定方法。方法用RP-HPLC(DAD)法,梯度洗脱,测定赤、白首乌、加工炮制品及其何首乌粉的指纹图谱,并作相似度比较分析。结果何首乌不同样品指纹图谱相似度较好,而何首乌与白首乌的指纹图谱具有明显区别,何首乌炮制前后、白首乌加工前后也有差异。结论HPLC指纹图谱具有重现性好、特征性强、方法简便等特点,可用于赤、白首乌药材的鉴别。     

黄芪、丹参、三七中多糖提取工艺考察

目的考察黄芪、丹参、三七醇提药渣中粗多糖提取工艺。方法采用正交试验,考察不同溶剂用量、提取时间、提取次数对多糖得率的影响,优选提取工艺;考察采用不同药液浓度、醇沉液浓度、沉淀时间所得多糖总量与纯度,优选沉淀工艺。结果优选出的多糖提取工艺为以10倍量水提取2次,每次1.5 h;优选出的沉淀工艺为药液浓度为1 g原药材/mL,醇沉浓度为80%,沉淀时间为4 h。结论优选出的工艺比较适合工业化生产的要求,具体的工艺技术参数将在中试研究中确定。     

赤芍与白芍的药理作用比较

目的:对赤芍和白芍的80%乙醇提取物及其脂溶性成分和水溶性成分进行药理活性比较,为阐明其药效物质奠定基础。方法:以二甲苯致小鼠耳肿胀法和醋酸致小鼠腹腔毛细血管渗出法比较赤芍和白芍的抗炎作用;以血液流变学指标和ADP诱导血小板聚集比较赤芍和白芍的活血化瘀作用。结果:赤芍与白芍的提取物及其脂溶性和水溶性成分均有不同程度的抗炎以及抑制血小板聚集作用,均有明显延长部分凝血活酶时间的作用,而均无明显延长凝血酶原时间的作用。结论:白芍总提物对抑制炎性水肿和炎性渗出均有很好的效果,而在抑制血小板聚集方面,赤芍总提物的作用明显优于白芍总提物。