金线莲试管苗高效快繁技术研究

目的建立高效的金线莲组培快繁体系。方法以金线莲茎尖、茎节和叶片为外植体,研究不同植物生长调节剂处理对丛生芽诱导、继代培养及生根的影响。结果以茎节为外植体诱导效果最好;丛生芽诱导最适培养基为MS+1 mg/L6-BA+1 mg/L NAA;继代培养较佳培养基为MS+1 mg/L IBA+3 mg/L 6-BA;适宜的生根培养基为1/2MS+0.5 mg/L IBA+0.5 mg/L NAA。结论过上述技术应用,可实现金线莲的快速繁殖,增殖系数可达5.2。     

麻花秦艽休眠芽离体培养时的丛生芽发生途径研究

目的:以休眠芽为外植体,建立麻花秦艽丛生芽再生的实验技术体系,为麻花秦艽种苗工厂化离体快繁和种质资源离体保存提供理论依据和技术支撑。方法:以MS为基本培养基,添加不同浓度和种类的细胞分裂素和生长素,诱导休眠芽产生丛生芽。以1/2MS为基本培养基,添加不同浓度和种类的生长素诱导丛生芽生根。结果:MS+2.0 mg/L 6-BA+0.01 mg/L NAA+30 g/L蔗糖+7 g/L琼脂培养基是诱导休眠芽产生丛生芽及丛生芽继代的最佳培养基,丛生芽诱导率为93.3%,丛芽经继代培养后芽增殖系数为5.6。最佳生根培养基是1/2MS(无机盐减半)+2.0 mg/L IAA+0.5 mg/L IBA+15 g/L蔗糖+7 g/L琼脂,生根率达93.5%,再生植株生长健壮。结论:该试验建立了以休眠芽为外植体的麻花秦艽丛生芽再生植株的技术体系。     

党参休眠芽离体培养时的丛生芽发生途径研究

目的:以休眠芽为外植体,建立党参丛生芽发生途径的实验技术体系,为党参种苗工厂化离体快繁及党参种质资源的离体保存提供理论依据和技术支持。方法:以MS为基本培养基,添加不同浓度和种类的细胞分裂素和生长素,诱导休眠芽产生丛生芽。以1/2 MS为基本培养基,添加不同浓度和种类的生长素诱导丛生芽生根。结果:MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂7.5 g/L培养基是诱导休眠芽产生丛生芽及丛生芽继代培养的最佳培养基,丛生芽诱导率为50%。每个小芽丛经继代培养后可增殖12～18个新芽。最佳生根培养基是1/2 MS+IBA 2.0 mg/L+蔗糖15 g/L+琼脂7.5 g/L+活性炭1 g/L,生根率达85.7%,植株生长健壮。结论:建立了以休眠芽为外植体的党参丛生芽再生植株的离体培养体系。     

党参丛生芽诱导及不定根培养体系研究

目的:建立及优化党参丛生芽及不定根培养体系。方法:以山西壶关党参组培苗为实验材料,以MS为基础培养基,研究6-BA对党参丛生芽及NAA对党参不定根诱导的影响,探索党参丛生芽及不定根生长的最佳条件。结果:在固体MS培养基中6-BA浓度为0.3 mg/L时丛生芽诱导率最高,为90%,但丛生芽矮化现象严重;6-BA浓度为0.5 mg/L时,诱导率虽较低仅为62.5%,但丛生芽粗壮,生长良好;液体1/2 MS培养基中NAA浓度为0.5mg/L时,不定根生物量显著增加;采用液体培养基进行不定根继代培养,培养周期为24 d,较固体培养基的培养周期(49 d)缩短了1/2。结论:建立了党参丛生芽及不定根快繁体系,为党参的良种繁育及生物活性物质合成、分子调控机理研究奠定基础。     

老鸦瓣芽茎组织培养初步研究

目的 建立老鸦瓣芽茎愈伤组织诱导及丛生芽增殖体系。方法 以老鸦瓣冷藏芯芽产生的芽茎为外植体,MS为基本培养基,考察不同质量浓度6-BA、NAA对愈伤诱导、分化及丛生芽增殖的影响。结果 芽茎诱导愈伤的最佳培养基为MS＋6-BA 0.5 mg/L＋NAA 2.0 mg/L,愈伤诱导率78.54%,诱导出的愈伤组织在原培养基上继代培养增殖后即可进行芽分化;愈伤分化不定芽最佳培养基为MS＋6-BA 2.0 mg/L＋NAA 0.2 mg/L,芽诱导率为66.21%;丛生芽增殖培养基为MS＋6-BA 0.5 mg/L＋NAA 0.2 mg/L,增殖系数2.48。结论 筛选出芽茎诱导愈伤、分化不定芽及丛生芽增殖的培养基,初步建立了老鸦瓣芽茎组织培养体系。     

太子参快速繁殖研究

采用组织培养对太子参快速繁殖研究结果表明：选定茎尖为最佳外植体，适宜丛生芽诱导培养基为MS＋6－BA2.0mg/L NAA0.2mg/L和MS＋6－－BA4.0mg/L NAA0.4mg/L，适宜愈伤化培养基为MS＋2，4－D4.0mg/L Kt0.5mg/L和MS＋2，4－D3.0mg/L Kt 0.5mg/L,适宜生根培养基为1／2MS＋NAA 0.3mg/L.     

总序香茶菜的组织培养与快繁研究

目的对总序香茶菜进行组织培养和离体快速繁殖。方法以总序香茶菜带芽茎段为外植体,在附加有不同种类和不同浓度激素的MS培养基上进行培养。结果最佳芽诱导培养基:MS BA0.05～0.5mg/L NAA0.01～0.05mg/L;最佳芽增殖培养基:MS BA0.5mg/L NAA0.05mg/L(或IAA0.01mg/L);最佳生根培养基:MS NAA0.1mg/L 活性炭0.05%;最佳愈伤组织诱导与生长培养基为:MS 2,4-D1.0～2.0mg/L BA0.1～0.2mg/L。结论成功建立了快速无性繁殖系。     

美洲商陆组培快速繁殖

目的:探索美洲商陆组培快速繁殖技术.方法:以无菌苗作外植体.结果:初代培养的较粗壮茎段为快速繁殖的最佳外植体,初代培养基为MS NAA0.2 mg/L 6-BA1.0 mg/L;丛生芽最佳增殖培养基为MS NAA0.2 mg/L 6-BA2.0 mg/L,最适生根培养基为1/2MS NAA0.4 mg/L.结论:采用美洲商陆无菌苗茎段诱导丛生芽可提高繁殖系数,为大量种植提供种苗.     

华南忍冬离体快繁与植株再生的研究

目的 通过对华南忍冬离体培养快繁技术的研究,解决华南忍冬（山银花）产业化生产中种源质量参差不齐和短缺问题.方法 用茎尖为外植体,以MS为基本培养基,附加不同浓度的激素进行培养.结果 用MS+ 6BA 1.5 mg/L+ NAA0.5 mg/L诱导培养,40d可获得丛生芽,继代用MS+ BA 1.2 mg/L+ NAA 0.2 mg/L培养,增殖率达3.9％;在1/2MS+NAA 1.0 mg/L条件下,可获得的生根苗.结论 该试验结果为山银花药材优质种苗的产业化生产奠定了基础.     

番红花组织培养及快速繁殖研究

目的 为番红花的快速繁殖提供依据.方法 添加不同种类及不同浓度的激素,对番红花进行愈伤组织诱导、丛生芽诱导及球茎培养.结果 愈伤组织诱导的适宜培养基为MS+2.0 mg/L NAA+0.5 mg/L 6-BA;丛生芽诱导的适宜培养基为MS+0.5 mg/L NAA+2.0 mg/L 6-BA;在光照条件下,丛生芽可分化出小球茎.结论 利用组织培养技术能够实现番红花快速繁殖.     

金线莲UGPase基因克隆与表达及在多糖合成中的作用

目的克隆出金线莲Anoectochilus roxburghii尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(UDP-Glucose pyrophoshorglase,UGPase)基因全长,并对其表达量及酶活性与多糖积累量之间的相关性进行分析,以研究UGPase基因在金线莲多糖合成代谢途径中的调控作用。方法利用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,q RT-PCR)技术和RACE(rapid-amplification of cDNA ends)技术克隆金线莲中UGPase基因序列;以金线莲尖叶、无纹等7个品种组培期及种植期茎段部位为材料,采用qRT-PCR、ELISA试剂盒法及苯酚-硫酸法分别测定UGPase基因表达量、酶活和多糖含量,并对其进行相关性分析。结果克隆得到的序列全长1786 bp。开放阅读框为1425 bp,编码475个氨基酸。7个不同品种金线莲中UGPase基因表达量、酶活与多糖含量具有极显著正相关(相关系数分别为0.823、0.785)。结论成功克隆出金线莲UGPase全长基因,初步证明UGPase基因是参与金线莲多糖合成代谢的关键基因之一。     

基于不同栽培阶段金线莲的代谢组学分析

金线莲是传统的中药及保健品,其人工栽培分为组织培养和土壤栽培2个阶段,但后者对于金线莲保健功能成分的积累是否必要尚缺乏定论。该研究以组培至壮苗及组培壮苗后再经3个月土壤栽培的金线莲为试验材料,利用GC-TOF-MS和UPLC-Q-TOF-MS对其代谢成分进行非靶向分析,找出了2个栽培阶段的差异代谢成分。结果表明,初级代谢产物中的醇类及有机酸等,在组培苗中含量较高。而寡糖、核苷类、酯类及次级代谢产物中黄酮类、萜类化合物含量在栽培苗中有明显提高。黄酮类和多糖被认为是金线莲的主要活性成分,因此土壤栽培对其有益成分的积累十分必要,经土壤栽培金线莲药用价值更高。     

紫背金盘愈伤组织诱导与再生体系的建立

目的 建立紫背金盘Ajugae nipponensis愈伤组织诱导体系,筛选出具较高再生率的植株发生途径,旨在构建高效、稳定的再生体系。方法 MS为基本培养基,添加不同种类和浓度配比的植物生长调节剂,以茎尖、带芽茎段和花序为外植体进行实验。结果 花序是较适宜诱导愈伤组织的外植体,在MS+6-BA 0.1 mg/L+2,4-D 1.5 mg/L中可在1周内诱导出愈伤组织,2周后即分化出绿色小芽丛;丛生芽增殖的适宜培养基为MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L,愈伤组织芽丛再生率高达100%,再生系数为4.10,4周后增殖倍数5.0以上;生根的适宜培养基为1/2 MS+NAA 1.0 mg/L,3周后即可获得再生植株,生根率100%;生根苗移栽至排水良好的沙土中,成活率100%。结论 紫背金盘不同外植体均可诱导出愈伤组织,其中花序愈伤发生率最好,是最适宜的外植体;为保护紫背金盘野生资源和发展人工栽培奠定了良好基础,也为遗传转化研究提供重要的科学依据。     

瑞香狼毒不定芽生长过程黄酮类和香豆素类成分累积研究

目的 研究瑞香狼毒Stellera chamaejasme不定芽生长过程黄酮类和香豆素类成分的累积规律.方法 采用组织培养筛选不定芽诱导和生长的最适培养基;分别通过分光光度法、高效液相色谱法分析不定芽生长过程总黄酮和3种香豆素类成分伞形花内酯、瑞香素和东茛菪内酯的动态累积.结果 不定芽诱导最适培养基为MS+0.5 mg/L BA+0.5 mg/L NAA,培养4周后,平均每个顶芽诱导35个不定芽;不定芽生长最适培养基为MS+0.3 mg/L BA+0.1 mg/L NAA,培养4周后,芽平均株高为2.3 cm;生长在最适培养基的不定芽,其总黄酮的累积量在第5周达到最高,为0.218 g;3种香豆素类成分的量在整个不定芽生长中均表现随培养时间而增加,到第5周,质量分数均达到最高值,但均不及野生根中的量,而且质量分数高低顺序也发生变化.结论 瑞香狼毒不定芽中黄酮类和香豆素类成分累积最高为培养后的第5周.     

滇龙胆丛芽高效诱导与植株再生体系的建立

目的以滇龙胆Gentiana rigescens带叶茎尖、带芽茎段、叶片、根为外植体,建立滇龙胆高效、稳定的丛芽诱导体系,筛选出适宜的植株再生途径。方法以MS为基本培养基,在单因素实验的基础上,通过L16(45)正交及完全组合实验研究不同外植体和不同植物激素种类及其质量浓度对愈伤组织诱导、丛芽发生及植株再生的影响。结果带芽茎段为间接器官发生最佳材料,其在MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA 1.5 mg/L+KT 0.05 mg/L中培养10 d、节上腋芽开始萌发后,基部可诱导出再分化能力极强的愈伤组织,得愈率为97.73%;15 d后愈伤组织开始分化出绿色丛芽,分化率100%;30 d后不定芽分化系数达18.65,增殖系数可达63.58。带叶茎尖为直接器官发生最佳材料,其在MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 1.0 mg/L+KT 0.5mg/L中培养30 d后,增殖系数亦可达44.36。2种材料培养获得的试管苗茎细瘦弱,不利于生根培养,试管苗在MS+6-BA1.5 mg/L+NAA 1.5 mg/L+KT 0.05 mg/L+PP333 10 mg/L中培养60 d后可获得健壮度大为改善的复壮苗。复壮苗生根则在1/2MS+6-BA 0.1 mg/L+NAA 2.0 mg/L中进行,45 d后可获得生长健壮的再生植株,生根率100%。再生苗移栽成活率达95%以上。结论建立的滇龙胆无性快速繁殖体系,为保护滇龙胆野生资源、优质种苗繁育提供了有效途径,也为其遗传转化研究奠定了实验基础。     

獐牙菜的组织培养

目的 针对獐牙菜野生资源受到严重破坏的情况,系统地探讨了通过组织培养为手段进行人工繁殖的方法.方法 将种子接种于诱导培养基上,待其长成小苗后分别取其不带芽茎段、叶和带芽茎段作为外植体,在MS培养基上添加不同的激素配比,改变培养方式.结果 在所有的实验方案中,不带芽茎段是理想的外植体材料.较适宜的初代培养基为MS+BA 0.5 mg/L+蔗糖3.0%,增殖培养基为MS+BA 0.5 mg/L+IBA 0.1 mg/L+蔗糖3.0%,而根的诱导则是在1/2MS+NAA 0.5 mg/L+1.5%蔗糖的培养基上进行.结论 采用组织培养方式可进行獐牙菜的快速繁殖,为确保这一珍稀药用植物资源的保护和可持续利用提供有效途径.     

色氨酸及其衍生物对海南粗榧悬浮细胞合成三尖杉酯类碱的影响

目的研究L-色氨酸及其衍生物5-甲基-DL-色氨酸(5-MT)对海南粗榧悬浮细胞生长及三尖杉酯类碱合成的影响。方法在细胞培养第15天,向海南粗榧悬浮培养物中添加一定量的L-色氨酸或5-MT,测定细胞生长、产物量以及代谢途径中关键酶的活力。结果 L-色氨酸与5-MT都能促进三尖杉酯类碱的合成。添加5 mg/L 5-MT时,产物量最高(2.944 mg/L);添加10 mg/L L-色氨酸和5 mg/L 5-MT后,三尖杉酯类碱产量分别是对照(1.343 mg/L)的1.947、2.192倍;而悬浮细胞生物量分别比对照(2.406 g/L)降低了9.35%、18.04%。同时,3-脱氧-D-阿拉伯庚酮糖-7-磷酸合成酶活性分别比对照(0.67 U/mg)降低了12.4%、5.57%;苯丙氨酸解氨酶活性分别比对照(78.21 U/mg)增加了37.72%、28.02%;酚类物质积累比对照(0.36mg/mL)增加了19.14%、9.61%。结论 L-色氨酸及其衍生物5-MT能抑制代谢支路,促进代谢流向产物三尖杉酯类碱的方向。     

龙葵愈伤组织生长特性及次生代谢产物积累研究

目的 建立龙葵Solanumnigrum愈伤组织最优培养体系，研究愈伤组织在不同培养时间下各生理指标变化和澳洲茄碱、澳洲茄边碱的积累，为工业化制备澳洲茄碱和澳洲茄边碱奠定基础。方法 研究不同外植体及培养基对龙葵愈伤组织诱导的影响，采用响应面试验设计方法优化愈伤组织诱导的激素配比，运用考马斯亮蓝G-250法测定可溶性蛋白含量，TTC还原法测定细胞活力，邻苯二酚法测定多酚氧化酶（polyphenol oxidase,PPO）活性，氮蓝四唑光化还原法测定超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性，愈创木酚比色法测定过氧化物酶（peroxidase,POD）活性，硫代巴比妥酸显色法测定丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量，高效液相色谱法测定澳洲茄碱及澳洲茄边碱含量。结果 愈伤组织诱导最佳外植体为龙葵茎段，最适培养基为MS+1.43 mg/L NAA+2.15 mg/L 6-BA+2.48 mg/L KT，愈伤组织增殖最适培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA。愈伤组织鲜质量增长量呈“S”型趋势，20 d时细胞活力达到最高峰...     

利用气升式生物反应器培养铁皮石斛原球茎

目的:探明影响反应器内铁皮石斛原球茎生长及物质合成的因素,为铁皮石斛原材料的大量生产提供一种新方法.方法:利用3L气升式生物反应器,以组培原球茎为材料,研究了接种量、光照强度和通气量对原球茎增殖生长和多糖及石斛碱积累的影响.结果:当接种量为10g· L-1时,培养30 d后原球茎颜色深绿,生长健壮.多糖含量在接种量处理间无差异,但石斛碱含量有差异(接种量10g· L-1处理最高),多糖和石斛碱生产量在10g·L-1接种密度中最高.光照强度1600lx条件下原球茎生长最旺盛,光照对铁皮石斛原球茎多糖的积累起到促进作用,但对石斛碱的积累则有抑制作用,多糖含量和生产量在1 600,2 400 lx光照处理下好于暗条件处理;石斛碱的含量虽然在暗处理中最高,但因原球茎生长不佳,石斛碱的生产量在1 600 lx的光照强度处理中出现最大值.通气量为0.2(空气体积/培养体积/min)时原球茎生长健壮,颜色鲜绿,生长优于0.1,0.3处理,且多糖和石斛碱含量和产量均达最大值.结论:在工作体积为2L的气升式球型生物反应器内,接入10g·L-1原球茎外植体,光照强度调节为1 600 lx,通气量为0.2有利于原球茎生长和多糖及石斛碱的生产,铁皮石斛原球茎生物反应器培养是大量快速生产多糖和石斛碱的有效途径.